生化檢測常識教學(xué)內(nèi)容

1、生化檢測常識生化檢測基本常識生化檢測基本常識 生化檢測是醫(yī)院檢驗科（或化驗室）常用的檢測手段，通常以人的血清為標(biāo)本，通過測量血清中各生化成份的含量，為臨床診斷提供依據(jù)。1.1標(biāo)本的獲得 一般要求病人空腹時采靜脈血（全血）。全血經(jīng)過離心機離心，分層為血清和血細(xì)胞，正常情況下，上層顏色淺且透明（血清），下層顏色深且不透明（血細(xì)胞）。有的血清較為特殊，或分層不明顯（融血），或血清不透明（脂血，呈牛奶狀）。第二章第二章 常規(guī)生化檢測項目簡介常規(guī)生化檢測項目簡介2.1生化項目的臨床意義生化項目的臨床意義 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）：）：又稱為谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）是衡量肝功能的重要指標(biāo)，

2、許多低端醫(yī)療機構(gòu)在做體檢時僅測此一項生化項目。正常人一般在40U/L以內(nèi)。干粉試劑復(fù)溶后為單試劑，液體試劑一般為雙試劑，應(yīng)用動力學(xué)法可計算結(jié)果。蛋白蛋白 蛋白：蛋白：通常測白蛋白（ALB）和總蛋白（TP），終點法。一般用單試劑，有的TP試劑為雙試劑，可用兩點終點法測。蛋白質(zhì)是血清的主要成份，大部份由肝細(xì)胞合成。通過蛋白的測定可以協(xié)助某些疾病的診斷。血糖血糖 血糖：血糖：血液中的葡萄糖簡稱血糖（GLU）。常用于糖尿病的診斷。正常人空腹血糖一般為3.96.1mmol/L。市場上單、雙試劑的商品化試劑盒都有，可用終點法（單試劑）或兩點終點法測量（雙試劑）。門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AS

3、T） 門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）：又稱為谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT），主要用于心肌和肝膽疾病及骨骼肌病的診斷。是肝功能測試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在40U/L以內(nèi)。同ALT一樣，無論單、雙試劑，用動力學(xué)法可計算結(jié)果。堿性磷酸酶（堿性磷酸酶（ALP） 堿性磷酸酶（堿性磷酸酶（ALP）：主要用于肝膽疾病及骨骼病的診斷。是肝功能測試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在240U/L以內(nèi)。用動力學(xué)法計算結(jié)果。-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT） -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）：）：主要用于肝膽疾病診斷。是肝功能測試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在50U/L以內(nèi)。用動力學(xué)法計算結(jié)果。膽紅素（

4、膽紅素（BiL） 膽紅素（膽紅素（BiL）：）：膽紅素的測定，能準(zhǔn)確反映黃疸的程度，判斷黃疸的類型。一般測量總膽紅素（TBil）和直接膽紅素（DBil）。甘油三酯（甘油三酯（TG 甘油三酯（甘油三酯（TG）：）：其含量測定是血脂分析的重要內(nèi)容之一?？偰懝檀迹偰懝檀迹–HOL） 總膽固醇（總膽固醇（CHOL）：）：是游離膽固醇和膽固醇酯的總稱，其測定對高脂蛋白血癥和冠心病的診斷及發(fā)病機理的研究有一定意義。高密度脂蛋白膽固醇（高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C） 高密度脂蛋白膽固醇（高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）：）：主要在肝臟中合成，是血清中顆粒數(shù)最多的脂蛋白。其含量是冠心病診斷的重要依據(jù)之一。

5、肌酐（肌酐（CREA） 肌酐（肌酐（CREA）：）：是肌酸代謝的最終產(chǎn)物，由腎臟排出。是腎功能的重要指標(biāo)之一。尿素（尿素（Urea） 尿素（尿素（Urea）：是蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物。血尿素測定是腎功能的最敏感指標(biāo)。載脂蛋白載脂蛋白A1(APOA1): 載脂蛋白載脂蛋白A1(APOA1): 是高密度脂蛋白的主要組成成分，臨床上主要用于腦血管病風(fēng)險度的估計。載脂蛋白載脂蛋白B(APOB): 載脂蛋白載脂蛋白B(APOB): 是低密度脂蛋白的主要組成成分，臨床上主要用于冠心病的風(fēng)險度的估計。肌酸激酶（肌酸激酶（CK） 肌酸激酶（肌酸激酶（CK）：）：肌酸激酶通常存在于動物的心臟、肌肉以及腦等組織的

6、細(xì)胞漿和線粒體中，是一個與細(xì)胞內(nèi)能量運轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶。可用于早期診斷急性心肌梗，常見肌病(如進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良發(fā)作期、病毒性心肌炎、多發(fā)性肌炎、擠壓綜合征等嚴(yán)重肌肉損傷)及腦血管疾病的診斷。-羥丁酸脫氫酶（羥丁酸脫氫酶（HBDH） -羥丁酸脫氫酶（羥丁酸脫氫酶（HBDH）：）：與肌酸激酶相同，用于診斷心肌梗死。 -淀淀粉酶（粉酶（AMY）：）：在臨床應(yīng)用方面，-淀粉酶活力升高與急性胰腺炎、胰腺管道阻塞、腹內(nèi)疾病、流行性腮腺炎及細(xì)菌性腮腺炎。 鈣、氯、鐵、鉀、鈉、鎂、磷：鈣、氯、鐵、鉀、鈉、鎂、磷：這7項都屬于離子組合，用于診斷人體中離子的含量。常用檢測項目表常用檢測

7、項目表序號項目名稱縮寫組合參考值白蛋白： ALB，肝功能3555g/L 總蛋白：TP，6080g/L堿性磷酸酶：ALP，15112U/L 門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶：AST（GOT），837U/L丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶：ALT（GPT），065U/L -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶：GGT，050U/L直接膽紅素：DB，06umol/L 總膽紅素：TB，018umol/L肌酐：CREA 腎功能：53115mol/L尿酸：UA，210430umol/L 尿素：UREA，2.56.4mmol/L 膽固醇：CHOL 血脂：3.66.5mmol/L甘油三酯：TG，0.451.81mmol/L 高密度脂蛋白：HDL，0.91.68m

8、mol/L低密度脂蛋白：LDL，2.73.1mmol/L 載脂蛋白：A1APOA，11.01.6g/L載脂蛋白：BAPOB，0.61.1g/L 脂蛋白：Lp（a），030mg/dL肌酸激酶：CK，心肌酶類21190U/L 肌酸激酶同工酶：CK-MB，025U/L-羥丁酸脫氫酶：HBDH，70180U/L 乳酸脫氫酶：LDH，114240U/L鈣：Ca離子，2.02.6mmol/L 氯：Cl，95105mmol/L鐵：Fe，930mol/L 鉀：K，3.55.5mmol/L 鎂：Mg，0.61.1mmol/L 鈉；Na，135145mmol/L磷；P，0.81.6mmol/L -淀粉酶：AMY，

9、其它100220U/L葡萄糖：GLU，3.95.8mmol/L生化儀參數(shù)測量原理3.1自動生化儀的分類自動生化儀的分類3.1.1連續(xù)流動式自動化分析儀連續(xù)流動式自動化分析儀也叫管道式分析儀，其特點是測定項目相同的各待測樣本與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)，是在同一管道中經(jīng)流動過程完成的。這類儀器一般可分為空氣分段系統(tǒng)式和非分段系統(tǒng)式。所謂空氣分段系統(tǒng)是指在吸入管道的每一個樣品、試劑以及混合后的反應(yīng)液之間，均由一小段空氣間隔開；而非分段系統(tǒng)是靠試劑空白或緩沖液來間隔每個樣品的反應(yīng)液。在管道式分析儀中，以空氣分段系統(tǒng)式最多，且較典型，整套儀器是由樣品盤、比例泵、混合管、透析器、恒溫器、比色計和記錄器幾個部件

10、所組成。管道內(nèi)的圓圈表示氣泡，氣泡可將樣品及試劑分隔為許多液柱，并起一定的攪拌作用。但氣泡影響比色，必須在比色前除去。將幾個單通道管道式分析儀結(jié)合起來，對一個樣品同時測定幾個項目。著名的有12通道分析儀，命名為順序多項自動分析儀（sequential multiple auto analyzer）簡稱SMA12/60。同時發(fā)展為SMAC，C為計算機（computer）的縮寫。這類大型分析儀至今仍有使用者。它對每個樣品可同時分析12個項目，每小時可分析60個樣品。后來發(fā)現(xiàn)不加入空氣泡，更有利于結(jié)果的檢測，發(fā)展為流動注射分析法（flow injection analysis）。試劑的流動仍用比例泵

11、驅(qū)動，樣品用轉(zhuǎn)動閥加入液流，反應(yīng)后比色檢測。3.1.2離心式生化分析儀 離心式分析儀是1969年以后發(fā)展起來的一種分析儀，由Anderson設(shè)計，其特點是化學(xué)反應(yīng)器裝在離心機的轉(zhuǎn)子位置，該圓形反應(yīng)器稱為轉(zhuǎn)頭，先將樣品和試劑分別置與轉(zhuǎn)頭內(nèi)，當(dāng)離心機開動后，圓盤內(nèi)的樣品和試劑受離心力的作用而相互混合發(fā)生反應(yīng)，最后流入圓盤外圈的比色槽內(nèi)，通過比色計進(jìn)行檢測。離心式分析儀主要由兩部分組成，一為加樣部分，二為分析部分。加樣部分包括樣品盤、試劑盤、吸樣臂（或管）、試劑臂（加液器）和電子控制部分（鍵盤和顯示器等）。加樣時轉(zhuǎn)頭置于加樣部分。加樣完畢后將轉(zhuǎn)頭移至離心機上。分析部分，除安裝轉(zhuǎn)頭的離心機外，還有溫控

12、和光學(xué)檢測系統(tǒng)，并有微機信息處理和顯示系統(tǒng)。13分立式生化分析儀 所謂分立式，是指按手工操作的方式編排程序，并以有節(jié)奏的機械操作代替手工，各環(huán)節(jié)用傳送帶連接起來，按順序依次操作。分立式分析儀與管道式分析儀在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別為：前者各個樣品和試劑在各自的試管中起反應(yīng)，而后者是在同一管道中起反應(yīng)；前者采用由采樣器和加液器組成的稀釋器來取樣和加試劑，而不用比例泵；前者一般沒有透析器，如要除蛋白質(zhì)等干擾，需另行處理。恒溫器必須能容納需保溫的試管和試管架，所以比管道式分析儀的體積要大。除此以外，其它部件與管道式的基本相似。分立式分析儀的基本結(jié)構(gòu)如下圖所示。Depout公司還推出一種袋式分析儀，即試管變?yōu)?/p>

13、塑料袋，反應(yīng)在袋內(nèi)進(jìn)行，也以袋作比色杯。這種袋只能一次性使用。3.1.3干片式分析儀 干片式分析儀是80年代問世的。首先Eastman kodak公司以其精湛的化學(xué)工藝造出了測定血清中血糖、尿素、蛋白質(zhì)、膽固醇等的干式試劑片。當(dāng)加上定量的血清后，在干片的前面產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用反射光度計檢測即可進(jìn)行定量。這類方法完全革除了液體試劑，故稱干化學(xué)法。Boehringer Mannheim公司推出了用全血的干征試劑。即將血細(xì)胞排除于濾膜之外，而血漿與試劑發(fā)生反應(yīng)后顯色檢測。3.1.4模塊式自動化系列7600系列全自動生化分析儀是日立公司于1998年開發(fā)出來的系列分析儀。它是由各種不同功能的模塊組合而成，

14、功能模塊包括有樣本投入部、電解質(zhì)測定的ISE模塊、常規(guī)實驗項目測定的D模塊、特殊實驗項目測定的P模塊、復(fù)查樣本緩沖部和樣本收納部。根據(jù)D模塊和P模塊數(shù)目組合成不同型號的分析儀。模塊組合式實驗室自動化系統(tǒng)包括：樣品前處理系統(tǒng)，樣品輸送系統(tǒng)和樣品后處理系統(tǒng)（生化分析，電解質(zhì)分析，血液分析等）。樣品前處理系統(tǒng)由能獨立工作，不同功能的各模塊以同一標(biāo)準(zhǔn)來連接，通過計算機控制運行。由樣品投入部，離心分離部，開栓部，在線分注部，非在線分注部，貼條碼部，蓋栓部，樣品分注收存部，標(biāo)本接收部等模塊構(gòu)成前處理系統(tǒng)，每一模塊既是系統(tǒng)的一部分，又是獨立的單元，可根據(jù)不同需要選擇使用，具有靈活性和擴展性。后處理系統(tǒng)有電解

15、質(zhì)分析系統(tǒng)，生化分析系統(tǒng)以及血液分析系統(tǒng)等。16全實驗室自動化分析系統(tǒng) 從檢驗標(biāo)本處理開始，即標(biāo)本的識別、傳輸、處理（分離血清等）、分注、分類（按項目分類）、檢測和收費的自動化流水作業(yè)，到分析后自動儲存標(biāo)本，檢驗結(jié)果的自動分析、報告與傳送，自動提示異常值或危險值，申請檢驗醫(yī)師隨時查詢檢驗結(jié)果的全過程實現(xiàn)自動化、網(wǎng)絡(luò)化。3.2分立式生化儀結(jié)構(gòu)分立式生化儀結(jié)構(gòu) 全自動生化分析儀一般由以下部分構(gòu)成：探針系統(tǒng)、攪拌和沖洗系統(tǒng)、恒溫系統(tǒng)、反應(yīng)盤、光路系統(tǒng)構(gòu)成。21探針系統(tǒng) 液面檢測技術(shù)：通過檢測阻抗或電容、電流的變化，感知到空氣和液面，可保證探針的感應(yīng)裝置至液面時會自動停止下降，即可增加速度也可減少污染

16、，防止堵塞。22攪拌和沖洗系統(tǒng) 攪拌系統(tǒng)是讓樣品和試劑混合后迅速分布均勻，保障測試正常進(jìn)行。常用的攪拌方法為沖入空氣、攪拌、振蕩等，但是都容易產(chǎn)生氣泡和外溢等問題。目前最好的方法是螺旋式攪拌棒附著特富龍涂層，一方面減少氣泡，另一方面減少攜帶和污染。清洗系統(tǒng)一般包括試劑針的內(nèi)外臂清洗、樣本針的內(nèi)外臂清洗、比色杯的清洗。 23恒溫系統(tǒng) 全自動生化儀一般都設(shè)有30和37度兩種溫度。目前常見的有水浴、空氣浴，最新的是恒溫液循環(huán)加溫方式。 水浴的優(yōu)點是溫度均勻、穩(wěn)定；缺點是升溫緩慢，開機預(yù)熱時間長，因水質(zhì)化（微生物、礦物質(zhì)沉積）影響測定，因此要定期換水和比色杯。 空氣浴的優(yōu)點是升溫迅速，無需保養(yǎng)；缺點是

17、溫度易受外界環(huán)境影響。 恒溫液循環(huán)加溫集干式空氣浴和水浴的優(yōu)點，即有水浴溫度穩(wěn)定、均勻的優(yōu)點，又有空氣浴升溫迅速、無需維護(hù)保養(yǎng)的優(yōu)點。24反應(yīng)盤 現(xiàn)在大多數(shù)采用硬質(zhì)玻璃比色杯（石英杯），其透光性好，易清潔，不易磨損。 25光路系統(tǒng) 光源：光源分為鹵素?zé)艉透邏洪W爍氙燈。相對而言鹵素?zé)魤勖L，價格低，是大部分生化儀的首先。3.3生化檢驗的原理和方法生化檢驗的原理和方法 臨床生化檢驗，主要在技術(shù)方面的應(yīng)用方面上探討生化檢驗新技術(shù)以及新的標(biāo)記物的選擇和評價，用于幫助診斷，又稱“診斷生化”。主要應(yīng)用于下列技術(shù)：光譜技術(shù)、電化學(xué)分析技術(shù)、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、離心技術(shù)、抗原抗體特異性反應(yīng)和標(biāo)記技術(shù)、核酸擴增

18、、雜交及序列分析技術(shù)等，其中生化分析儀主要運用了光譜技術(shù)中的吸收光譜法和比濁法。分別介紹如下31吸收光譜法 311光譜范圍和電子躍遷 波長從200nm400nm的電磁輻射，稱為紫外光，波長從400nm760nm的電磁輻射，稱為可見光。312吸收曲線 以波長（）為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)而繪制出的一條曲線稱為吸收曲線。在一段波長范圍內(nèi)，有最大吸收波長max和最小吸收波長min在最大吸收波長處測定可獲得最大的測定靈敏度。313吸光度的定義 一束強度為IO的平行單色光通過一個含有濃度為C的吸光物質(zhì)、厚度為L的吸收池時，如上圖，一些光子被吸收，光強從IO衰減為It，則該溶液的吸光度A等于：314Lam

19、ber-Beer定律A=CL其中為吸光系數(shù)，有兩種表示方法摩爾吸光系數(shù)和比吸光系數(shù)，摩爾吸光系數(shù)的意義為1摩爾濃度的溶液在厚度為1cm時的吸光度，比吸光系數(shù)的意義為濃度為1%（w/u）的溶液在厚度為1cm時的吸光度；C為溶液的濃度；L為吸收池的厚度（單位為cm，亦稱光徑）。Lamber-Beer定律的意義為：某溶液的吸光度等于該物質(zhì)的吸光系數(shù)、濃度C和光徑L（cm）的乘積，當(dāng)光徑不變時，濃度和吸光度成正比，這是生化分析儀利用吸收光譜法進(jìn)行定量測定的基礎(chǔ)，見下圖： Lamber-Beer定律成立的前提條件是：（1）被吸收光為單色平行光，（2）待測定溶液為稀溶液。除特種蛋白外的大部分臨床生化項目，

20、配以相應(yīng)的試劑，均可利用吸收光譜法在生化分析儀上進(jìn)行測定。如：酶類：包括ALT、AST、ALP、ACP、r-GT、a-HBDH、LDH、CK、CK-MB、a-AMY、等。底物/代謝產(chǎn)物類：包括TG、TC、HDL-C、LDL-C、UA、UREA、Cr、Glu、TP、Alb、T-Bil、D-Bil、NH4+、CO2等。無機離子類：包括Ca、P、Mg、Cl等。32比濁法321比濁法分兩類：透射比濁法和散射比濁法。 帶有小粒的懸浮液和膠體溶液都具有向四面八方散射入射光的性質(zhì)，當(dāng)一束平行光通過含有懸浮質(zhì)點的懸浮液或膠體溶液時，同時受到散射和吸收兩個因素的影響，使光的強度減弱。 在光源的光路方向上測量透射

21、光（實際上還包括散射光）強度與入射光強度比值，并通過該比值測定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點的溶度，稱為投射比濁法； 在光路的其他方向上測量散射光強度，從而測定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點的濃度，稱為散射比濁法。322測定原理透射比濁法 顆粒大小與光源波長接近，一束強度為I0的平行單色光通過一個含有懸浮質(zhì)點（顆粒大小與光源波長接近）的懸浮液或膠體溶液時，如上圖，其透射光強度I可用下式表示：I=IOe-LI=IOe-L式中,L為懸浮液或膠體溶液在光前進(jìn)方向上的長度，為濁度系數(shù)，與懸浮質(zhì)點的濃度C成線性關(guān)系。令=2.3KC，則：該式與Lamber-Beer 顆粒大小遠(yuǎn)小于光源波長定律相似，這是生化分析儀利用

22、投射比濁法進(jìn)行定量測定的基礎(chǔ)，該法可以與吸收光譜法共用一個檢測器，所以生化分析儀，不需增加任何部件，均可利用此法進(jìn)行測定。大部分特種蛋白，如載脂蛋白類（apoAI,apoB等）、補體類（C3，C4等）免疫球蛋白類（IgG,IgM等）等，配以相應(yīng)的試劑，可利用此法在生化分析儀上進(jìn)行測定。散射比濁法 一束強度為IO平行單色光通過一個含有懸浮質(zhì)點（顆粒大小遠(yuǎn)小于光源波長）的懸浮液或膠體溶液時，如上圖，與入射光垂直方向上，其散射光強度I可用下式表示：式中，n1,n2分別表示質(zhì)點與介質(zhì)的折射率，V表示單位體積內(nèi)的質(zhì)點數(shù)，r表示質(zhì)點半徑。可見散射光強度與懸浮質(zhì)點的濃度成正比，這是利用散射比濁法進(jìn)行定量測定

23、的基礎(chǔ)，因另需在光路垂直方向上增加一檢測器，目前只有極少數(shù)生化分析儀可利用散射比濁法進(jìn)行定量測定，而幾乎所有的特種蛋白分析儀、免疫分析儀等都能利用散射比濁法進(jìn)行定量測定。323方法學(xué)分析 （1）散射比濁法與透射比濁法：散射比濁法靈敏度高，線性范圍寬，但干擾因素多。（2）比濁法與吸收光譜法：比濁法特異性差，靈敏度低。3.4生化分析儀測定方法的分類及應(yīng)生化分析儀測定方法的分類及應(yīng)用度的計算用度的計算4.4.1終點法4.4.1概述 指經(jīng)過一段時間（一般為10分鐘左右）的反應(yīng)，整個反應(yīng)達(dá)到平衡，由于反應(yīng)的平衡常數(shù)很大，可認(rèn)為所有的被測定物已轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，反應(yīng)液的吸光度不在增加（或降低），吸光度的增加（或

24、降低）程度與被測定物的濃度成正比。如下圖：如圖所示：t1時刻加入試劑（體積為V），t2時刻加入樣本（體積為S），然后攪拌并反應(yīng)，之后測量反應(yīng)液的吸光度，在t3時刻反應(yīng)達(dá)到終點。T2 t3為測定時間。442反應(yīng)度R（Response）的計算 結(jié)果的計算包括三個部分：反應(yīng)度R（Response）的計算、定標(biāo)參數(shù)的計算和濃度（或活性）的計算。這里僅介紹R的計算，定標(biāo)參數(shù)的計算和濃度（或活性）的計算在后面專門討論。1）單試劑單波長終點法反應(yīng)度R=t3時刻吸光度- t2前一時刻吸光度 （體積校正因子)或R=t3時刻吸光度-單試劑空白吸光度。2）雙試劑單波長終點法t1時刻加入第一試劑（體積為V1），t2時

25、刻加入樣本（體積為S），之后攪拌，t3時刻加入第二試劑（體積為V2）并立即攪拌，t4時刻反應(yīng)打到終點。t3-t2為孵育時間，t4-t3為測定時間。反應(yīng)度R= t4時刻吸光度-雙試劑空白吸光度4.4.2一級動力學(xué)4.4.2概述 一級動力學(xué)是指在被測物參與反應(yīng)的條件下，在一定的反應(yīng)時間內(nèi)，反應(yīng)速度與反應(yīng)物濃度的一次方成正比，由于反應(yīng)物在不斷的消耗，因此整個反應(yīng)速度在不斷的減小，表現(xiàn)為吸光度的增加（或降低）速度越來越小，由于這類反應(yīng)達(dá)到平衡的時間很長，且平衡常數(shù)不算很大，必需在特定時間段內(nèi)進(jìn)行監(jiān)測，該段時間內(nèi)吸光度的增加（或）降低與被測定物的濃度成正比，見下圖。一級動力學(xué)法又被稱為初速率法、固定時間

26、法、二點動力學(xué)等。如圖所示：t1時刻加入試劑（體積為V），之后測量試劑空白的吸光度，t2時刻加入樣本（體積為S），t3時刻反應(yīng)穩(wěn)定，t4時刻停止對反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測；t2-t3為延遲時間，t3-t4為測定時間。4.2.2反應(yīng)度R的計算（單、雙試劑相同） 反應(yīng)度R=t4時刻吸光度t3時刻吸光度4.4.3零級動力學(xué)法4.4.31概述指反應(yīng)速度與被測定物濃度的零次方成正比，也就是與被測定物濃度無關(guān)，因此，在整個反應(yīng)過程中，反應(yīng)物可以勻速地生成某個產(chǎn)物，導(dǎo)致被測定溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度（A/min）與被測物的活性或濃度成正比。零級動力學(xué)法即通常所說的動力學(xué)法，也被稱為連續(xù)監(jiān)測法，主要用于酶活性的測定。實際上，由于底物濃度不可能足夠大，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，底物消耗到一定的程度后，反應(yīng)速度不再與酶活性成正比，因此，零級動力學(xué)法是針對于特定時間段而言的，各試劑商對這段時間有嚴(yán)格規(guī)定，見下圖中的t3-tn:t1時刻加入試劑（體積為V），t2時刻加如樣本（體積為S），t3時刻反應(yīng)穩(wěn)定，tn時刻停止對反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測；t3到tn之間的時間內(nèi)，吸光度勻速變化，變化的速率和反應(yīng)物的濃度成線性關(guān)系。t3-t2為延遲時間 ，tn-t3為測定時間。432反應(yīng)度R的計算（單、雙試劑相同） 其