大規(guī)模細胞培養(yǎng)與細胞工廠

1、細胞工廠 細胞工廠細胞工廠 產(chǎn)品與競爭產(chǎn)品與競爭 市場市場 應用應用內(nèi)容 一）動物細胞培養(yǎng)與細胞工廠 二）生物制品 三）疫苗 四）現(xiàn)代生物技術(shù)與基因工程 五）單克隆抗體與抗體藥物 六）干細胞與體細胞治療我們熟知的細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)1）無菌環(huán)境：超凈臺、安全柜2）生長環(huán)境：CO2培養(yǎng)箱3）營養(yǎng)環(huán)境：培養(yǎng)基4）貼壁環(huán)境：培養(yǎng)瓶（皿）等、貼壁環(huán)境：培養(yǎng)瓶（皿）等、細胞工廠細胞工廠動物細胞的形態(tài) 貼壁細胞：細胞的生長必須有可以貼附的支持物表面，依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長、增殖，當細胞在該表面生長后，一般形成兩種形態(tài)，即成纖維樣細胞型或上皮樣細胞型 懸浮細

2、胞：懸浮狀態(tài)生長，如淋巴細胞、Namalwa細胞 兼性貼壁細胞：中國倉鼠卵巢細胞、小鼠L929細胞 （一）貼附型：（一）貼附型：大多數(shù)培養(yǎng)細胞貼附生長，屬于貼壁依賴性細胞大多數(shù)培養(yǎng)細胞貼附生長，屬于貼壁依賴性細胞貼附貼附: :是大多數(shù)有機體是大多數(shù)有機體細胞細胞在體內(nèi)在體內(nèi)生存生存和和生長發(fā)育生長發(fā)育的的基本基本存在方式存在方式結(jié)果結(jié)果: : 基于貼附特性，使細胞與細胞之間相互結(jié)合形成組基于貼附特性，使細胞與細胞之間相互結(jié)合形成組織，有機體的絕大多數(shù)細胞必須織，有機體的絕大多數(shù)細胞必須貼附貼附于一于一固相表面固相表面才能才能生生存存和和生長生長。培養(yǎng)時：培養(yǎng)時：這些細胞被放到體外環(huán)境中以后這些

3、細胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要貼附于同樣需要貼附于某一固相表面才能生存和生長，因而某一固相表面才能生存和生長，因而屬于貼附型細胞屬于貼附型細胞貼附貼附(錨定或錨著錨定或錨著)依賴型依賴型(性性)細胞：細胞：唯有貼附于固相表面唯有貼附于固相表面才能生存的細胞才能生存的細胞貼附生長型細胞生長型細胞細胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)瓶、細胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)皿、6孔板、孔板、96孔板孔板細胞貼附材料與表面貼附的固相表面材料：貼附的固相表面材料：玻璃、塑料（聚苯乙烯）玻璃、塑料（聚苯乙烯）玻璃：本身具有親水性，適于細胞貼壁玻璃：本身具有親水性，適于細胞貼壁塑料：沒有親水性，不能使細胞貼壁，所以必須在塑

4、料：沒有親水性，不能使細胞貼壁，所以必須在 塑料表面進行親水性接枝（等離子處理）塑料表面進行親水性接枝（等離子處理）（二）懸浮型：（二）懸浮型：見于少數(shù)特殊的細胞，如某些類型的癌細胞及白血病細胞。見于少數(shù)特殊的細胞，如某些類型的癌細胞及白血病細胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這類細胞容易胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這類細胞容易大量繁殖。大量繁殖。概念：概念：培養(yǎng)時培養(yǎng)時不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長或以機械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長或以機械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長來源：來源：自血，脾或骨髓，血中白細胞癌腫細胞自血，脾或骨髓，血中白細胞癌腫細胞特點：特

5、點：在在懸浮中生長良好懸浮中生長良好細胞細胞圓形圓形，單個或小細胞團，單個或小細胞團優(yōu)點：優(yōu)點：生存空間大，生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便提供數(shù)量大，傳代方便( (不需消化不需消化) )，易于收獲，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài)可獲得穩(wěn)定狀態(tài)缺點：缺點：純化不方便，不能通過離心將死、活細胞分離純化不方便，不能通過離心將死、活細胞分離懸浮生長型細胞懸浮生長型細胞懸浮培養(yǎng)磁力攪拌器大規(guī)模細胞培養(yǎng)細胞工廠培養(yǎng)技術(shù)在大規(guī)模細胞培養(yǎng)中的應用.doc轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的缺點 轉(zhuǎn)瓶技術(shù)為傳統(tǒng)的貼壁細胞培養(yǎng)技術(shù)，細胞接種在旋轉(zhuǎn)的圓筒形培養(yǎng)器-轉(zhuǎn)瓶中，培養(yǎng)過程中轉(zhuǎn)瓶不斷旋轉(zhuǎn)，使細胞交替接觸培養(yǎng)液和空氣。 缺點：勞動強度大，占

6、地空間大，單位體積提供細胞生長的表面積小，細胞生長密度低，瓶間差異較難控制等，因而難以產(chǎn)業(yè)化或規(guī)?；a(chǎn)。 重要的是：轉(zhuǎn)瓶由于不是靜止培養(yǎng)，產(chǎn)品質(zhì)量經(jīng)常達不到要求或由于細胞易破碎而存在DNA毒性潛在危險，據(jù)稱國家準備淘汰轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)技術(shù)。 細胞工廠 用于大規(guī)模細胞培養(yǎng)與生產(chǎn)細胞工廠關(guān)鍵技術(shù)：貼壁處理：高真空等離子接枝表面處理（know-how: 接枝材料與接枝技術(shù)）材料性能：生物相容性（無細胞毒性）多層焊接技術(shù)：密封性與牢固性滅菌技術(shù)：Y射線輻照細胞工廠競爭 Nunc Corning DHS DHS 細胞工廠 DHS大規(guī)模細胞培養(yǎng)系統(tǒng) 單頁.pdfNunc Cell FactoryCorning

7、CellSTACK ChamberChoice of traditional surface treatment(TC), new Corning CellBIND Surface for enhanced cell attachment, or Ultra-Low Attachment Surface for reduced cell attachmentCorning CellSTACK Chamber三種細胞工廠的比較 材料：均為PS塑料 表面處理：各自的Know-how 頂層：DHS同Nunc, 便于顯微鏡觀察細胞生長情況 焊接工藝：Nunc采用超聲焊接，Corning采用特殊膠粘接，Corning的更加牢固（不易開裂），所以DHS采用Corning的粘接工藝 只有DHS是可以定制任意層的細胞工廠細胞工廠的使