《微生物的實驗室培養(yǎng)》課件-(新人教版選修1)

1、是一切肉眼看不見或看不清楚的微是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。小生物的總稱。一、微生物一、微生物微生物微生物病毒病毒細(xì)菌細(xì)菌放線菌放線菌真菌真菌原生動物原生動物是一切肉眼看不見或看不清楚的微是一切肉眼看不見或看不清楚的微小小生物生物的總稱。的總稱。一、微生物一、微生物 1.1.分類分類特點：小特點：小 簡簡 低低病病毒毒的的結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu) 2.2.病毒病毒病病 毒毒 SARS冠狀病毒、冠狀病毒、 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白質(zhì)病毒朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）病毒的增殖病毒的增殖細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌的外形與大小 3.3.細(xì)菌細(xì)菌 A. A. 球菌球菌 B. B. 桿菌桿菌 C. C. 弧菌弧菌

2、 常見的細(xì)菌三種典型形態(tài)常見的細(xì)菌三種典型形態(tài)ABC細(xì)菌的結(jié)構(gòu)細(xì)菌的結(jié)構(gòu)芽孢：芽孢：細(xì)菌形成的橢圓形的休眠體細(xì)菌形成的橢圓形的休眠體芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌。時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌。異養(yǎng)菌：異養(yǎng)菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌細(xì)菌的細(xì)菌的營養(yǎng)營養(yǎng)類型類型根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同

3、，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。同，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌：自養(yǎng)菌：光能自養(yǎng)型：光能自養(yǎng)型：光合細(xì)菌光合細(xì)菌化能自養(yǎng)型化能自養(yǎng)型：硝化細(xì)菌，鐵細(xì)菌，硫細(xì)菌硝化細(xì)菌，鐵細(xì)菌，硫細(xì)菌菌落菌落單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落。菌落是鑒定菌種的菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。重要依據(jù)。 4.4.放線菌放線菌結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)：單細(xì)胞原核生物單細(xì)胞原核生物分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）（2）繁殖）繁殖孢孢子子絲

4、絲|孢孢子子鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中中2/3是由放線菌產(chǎn)生的是由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用應(yīng)用: 5.5.真菌真菌酵母菌酵母菌酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生生 殖殖腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖微生物的實驗室微生物的實驗室培養(yǎng)條件：培養(yǎng)條件：（1）合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件）合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件（2）確保其他微生物無法混入）確保其他微生物無法混入一一. 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 1. 概念：概念： 按照微生物對按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的不同需求，配制出供其生

5、長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。固體培養(yǎng)基：菌落固體培養(yǎng)基：菌落液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長沉淀生長沉淀生長半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基：2. 種類：種類：（按物理形態(tài)分）（按物理形態(tài)分）液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 增菌、工業(yè)生產(chǎn)增菌、工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基應(yīng)用微生物純化（分離）、鑒定、計數(shù)和應(yīng)用微生物純化（分離）、鑒定、計數(shù)和菌種保存等方面菌種保存等方面 按照培養(yǎng)基用途分按照培養(yǎng)基用途分 選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基按照培養(yǎng)基的成分來分按照培養(yǎng)基的成分來分 合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基、天然培

6、養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基3. 成分：成分：思考：思考：各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都包括哪些成分？各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都包括哪些成分？水、無機鹽、碳源、氮源、（生長因子）水、無機鹽、碳源、氮源、（生長因子）+滿足微生物對滿足微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣的要求、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣的要求C碳源：如碳源：如CO2和糖類、脂肪酸等有機物，和糖類、脂肪酸等有機物，構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和分泌物，自養(yǎng)構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和分泌物，自養(yǎng)微生物需無機碳，異氧微生物需有機碳微生物需無機碳，異氧微生物需有機碳還能提供能量。還能提供能量。 氮源：如氮源：如N2、氨鹽、硝酸鹽和牛肉膏、氨鹽、硝酸鹽和牛肉膏

7、、蛋白胨等，主要用來合成蛋白質(zhì)、核酸蛋白胨等，主要用來合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代謝物等，無機氮源可為硝化細(xì)及含氮代謝物等，無機氮源可為硝化細(xì)菌提供能量。菌提供能量。 含有含有C、H、O、N的化合物既可以作為的化合物既可以作為碳源，又可以作為氮源，如氨基酸等。碳源，又可以作為氮源，如氨基酸等。C二二. 無菌技術(shù)無菌技術(shù)思考：思考：1. 什么是無菌技術(shù)？包括哪些方面？什么是無菌技術(shù)？包括哪些方面？2. 無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？（微生物污染外，還有什么目的？（P15旁欄思考）旁欄思考）3. 消毒和滅菌有何不同？

8、消毒和滅菌有何不同？4. 常用的消毒和滅菌方法有哪些？常用的消毒和滅菌方法有哪些？無菌技術(shù)：無菌技術(shù)：泛指培養(yǎng)微生物操作中，所有泛指培養(yǎng)微生物操作中，所有防防 止雜菌污染止雜菌污染的方法。的方法。無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。芽孢的壁很芽孢的壁很厚厚，對干旱、低溫、高溫，對干旱、低溫、高溫等等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。芽孢又芽孢又小小又又輕輕，可以隨風(fēng)飄散。，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌。時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌。3. 常

9、用的常用的消毒消毒方法：方法：煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外線或化學(xué)藥劑消毒法煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外線或化學(xué)藥劑消毒法常用的常用的滅菌滅菌方法：方法：灼燒滅菌灼燒滅菌干熱滅菌干熱滅菌 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 ：100kPa 121 15-30min判斷下列各項是否需要消毒或滅菌。如需要，選擇合適方法。判斷下列各項是否需要消毒或滅菌。如需要，選擇合適方法。（1）豆?jié){）豆?jié){ （2）游泳池）游泳池 （3）超凈工作臺超凈工作臺 （4）玻棒、試管、吸管、錐形瓶）玻棒、試管、吸管、錐形瓶 （5）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)皿）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)皿 （6）無菌水）無菌水 （7）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

10、（8）接種環(huán)、接種針接種環(huán)、接種針（9）實驗操作者的雙手）實驗操作者的雙手牛奶牛奶 接種室、接種箱或超凈工作臺接種室、接種箱或超凈工作臺 接種工具，接種環(huán)、接種針或其他金屬用具接種工具，接種環(huán)、接種針或其他金屬用具 玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿） 三三. 實驗操作實驗操作-大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 計算稱量溶化滅菌計算稱量溶化滅菌倒平板倒平板（二）純化大腸桿菌（二）純化大腸桿菌 最常用的接種方法有：最常用的接種方法有： 平板劃線法平板劃線法和和稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法（冷卻至（冷卻至50）涂布平板

11、的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第一想，第2 2步應(yīng)如何進行無菌操作？步應(yīng)如何進行無菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌無菌”。例如，。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。等。 1 1、臨時保藏法：、臨時保藏法： 對象：對象： 溫度：溫度： 缺點：缺點： 2 2、甘油管藏法：、甘油管藏法： 對象：對象： 溫度：溫度：

12、結(jié)果分析與評價結(jié)果分析與評價 課題延伸課題延伸（P20）頻繁使用的菌種頻繁使用的菌種 44（冰箱）（冰箱） 容易被污染或容易被污染或產(chǎn)生變異產(chǎn)生變異 長期保存的菌種長期保存的菌種 -20-20（冷凍箱）（冷凍箱） 接種環(huán)接種環(huán)接種針接種針倒平板倒平板討論討論1，2討論討論3，4平板劃線法平板劃線法討討論論2，31.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)：操作的第一步灼燒接種環(huán)： 每次劃線前灼燒接種環(huán)：每次劃線前灼

13、燒接種環(huán)：劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)：劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)： 避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物； 殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種

14、環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？次劃線的末端開始劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。劃線后，線條劃線后，線條末端末端細(xì)菌的數(shù)目比細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處線條起始處要要少少， 每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落單個細(xì)菌繁殖而來的菌落涂布器涂布

15、器1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時，才能左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？提示：可以用提示：可以用手觸手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手剛剛不燙手時，就可以進行時，就可以進行倒平板了。倒平板了。通過灼燒滅菌，通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中

16、，如果不小心將培養(yǎng)基濺在在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？微生物嗎？為什么？ 平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，表面的濕度也比較高， 將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 不要不要空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基