固相膜免疫測(cè)定_課件

1、催化的反響式為DH2+H2O2D+2H2O,何者習(xí)慣上被稱為底物 ( ) 經(jīng)與HRP反響后,再用H2SO4終止反響后呈 ( ) A.橙黃色 B.棕黃色 C.黃色 D.藍(lán)色3、目前ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物是A.OPD B.TMB C.5-ASA D.ABTS ABB雙抗體夾心法是 ( ) A.酶標(biāo)記特異抗體用于抗原的檢測(cè)B.先將待測(cè)抗原包被于固相載體C.標(biāo)記一種抗體可檢測(cè)多種抗原D.能用于半抗原的測(cè)定E.屬競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定5.捕獲法主要用于何種物質(zhì)的測(cè)定 ( )AA6、以下哪種方法用一種標(biāo)記物可檢測(cè)多種被測(cè)物 ( ) 雙抗體夾心法 競(jìng)爭(zhēng)法間接法 捕獲法E.放射免疫測(cè)定法7.關(guān)于ELISA竟?fàn)幏?

2、正確的選項(xiàng)是 ( )A.用于檢測(cè)抗原 B.被測(cè)物與酶標(biāo)記物的免疫活性各不相同 C.被測(cè)物多那么標(biāo)記物被結(jié)合的時(shí)機(jī)少 D.待測(cè)管的顏色比參照管的淡表示被測(cè)物量少E.結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與樣品中被測(cè)抗原量成正比CC1.每個(gè)親和素能結(jié)合多少個(gè)分子的生物素A.1 B.2 C.3 D.4 2.生物素分子中與親和素結(jié)合的主要部位是 ( ) A.噻吩環(huán) B.咪唑酮環(huán) C.苯環(huán) D.羰基 3.在用生物素標(biāo)記酶時(shí),酶活性會(huì)降低的是A.HRP B.葡萄糖氧化酶 C.-Gal D.AP ( )BD第十一章固相膜免疫分析技術(shù)掌握：免疫印跡試驗(yàn)熟悉：膠體金免疫技術(shù)的方法學(xué)種類與原理了解：膠體金與免疫金的制備、其他膜載

3、體免疫分析技術(shù)第二節(jié) 免疫層析試驗(yàn)免疫層析試驗(yàn)原理： 以NC膜等為固相載體，樣品溶液借助毛細(xì)作用在層析條上泳動(dòng)，同時(shí)樣品中的待測(cè)物與層析材料上待測(cè)物的受體抗原或抗體發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反響，層析過(guò)程中免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域，通過(guò)目測(cè)或儀器檢測(cè)標(biāo)記物，在短時(shí)間內(nèi)得到直觀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 毛細(xì)作用是指浸潤(rùn)液體在細(xì)管里升高的現(xiàn)象和不浸潤(rùn)液體在細(xì)管里降低的現(xiàn)象第二節(jié) 免疫層析試驗(yàn)免疫層析試驗(yàn)分為：膠體金免疫層析試驗(yàn)ICA熒光免疫層析試驗(yàn)GICA 二、 測(cè)定模式一膠體金免疫層析試驗(yàn)1、雙抗體夾心法測(cè)抗原2、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)小分子抗原3、間接法測(cè)抗體 膠體金免疫層析試驗(yàn)AGCB雙抗體夾心法

4、測(cè)大分子抗原陽(yáng)性，2個(gè)條帶膠體金免疫層析試驗(yàn)AGCB競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)小分子抗原陰性，2個(gè)條帶 三 技術(shù)要點(diǎn)操作要點(diǎn)：1將試劑條標(biāo)記線一端浸入待測(cè)標(biāo)本中2-5s,或在標(biāo)本加樣處加一定量待檢標(biāo)本,平放于水平桌面上2在5-20分鐘內(nèi)觀察結(jié)果結(jié)果判斷 夾心法：陰性:1條棕紅色指控條帶 陽(yáng)性:出現(xiàn)2條棕紅色條帶 無(wú)棕紅色條帶出現(xiàn)為試劑失效競(jìng)爭(zhēng)法：陰性:出現(xiàn)2條棕紅色條帶。陽(yáng)性:1條棕紅色指控條帶 第三節(jié) 免疫滲濾試驗(yàn)1 原理在硝酸纖維素膜為載體并包被了抗原或抗體的滲濾裝置中，依次滴加標(biāo)本、免疫金及洗滌液，因微孔濾膜貼置于吸水材料上故溶液流經(jīng)滲濾裝置時(shí)與膜上的抗原或抗體快速結(jié)合并起到濃縮作用，到達(dá)檢測(cè)目的。2 方

5、法類型雙抗體夾心法測(cè)抗原間接法測(cè)特異性抗體三、試劑盒組成和技術(shù)要點(diǎn) 滲濾裝置膠體金標(biāo)志物洗滌液Ag參照品技術(shù)要點(diǎn)：1、平放反響板，于小孔內(nèi)滴加含待測(cè)Ag標(biāo)本1-2滴，與膜上的Ab反響而結(jié)合在膜上2、于小孔內(nèi)滴加膠體金標(biāo)記Ab試劑1-2滴，使膠體金標(biāo)記Ab與結(jié)合在膜上的Ag反響3、于小孔內(nèi)滴加洗滌液2-3滴，待完全滲入，洗去未結(jié)合的膠體金標(biāo)記Ab。4、結(jié)果觀察： 陽(yáng)性 膜中央有淡紅色或紅色斑點(diǎn) 第四節(jié).斑點(diǎn)酶免疫吸附試驗(yàn) (Dot-ELISA)技術(shù)要點(diǎn)：1、抗原包被 NC膜吸附力強(qiáng)，包被后封閉。2、抗原抗體反響 抗原抗體反響后再加二抗3、確定酶結(jié)合物最正確稀釋度陰性樣品不顯色，陽(yáng)性顯色最強(qiáng)時(shí)的酶

6、結(jié)合物稀釋度4、顯色反響 pH值時(shí)反響最靈敏強(qiáng)陽(yáng)性藍(lán)黑色斑點(diǎn) 弱陽(yáng)性淡綠色半點(diǎn)方法學(xué)評(píng)價(jià)：1、NC吸附力強(qiáng)，靈敏度較ELISA高68倍；2、可同時(shí)檢測(cè)多種抗體；3、操作簡(jiǎn)便不需特殊儀器設(shè)備4、吸附抗原抗體或已有結(jié)果的NC膜可長(zhǎng)期保存，不影響期活性。 第五節(jié).免疫印跡試驗(yàn) immunoblot test ,IBT免疫印跡試驗(yàn)將凝膠電泳的高分辨率與抗原抗體反響的高特異性結(jié)合.又稱Western blot.是檢測(cè)蛋白質(zhì)特性、表達(dá)及分布的一種最常用的方法。蛋白免疫印跡試驗(yàn)重組免疫印跡試驗(yàn) 二 Western blot技術(shù)要點(diǎn) :1.抗原印跡與包被SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳電轉(zhuǎn)移 2.抗原抗體反響 間接

7、法3.檢測(cè)動(dòng)畫SDS抗原等蛋白樣品經(jīng)SDS處理后帶陰電荷，在聚丙烯胺凝膠中從陰極向陽(yáng)極泳動(dòng)，分子量越小，泳動(dòng)速度就越快。此階段別離效果肉眼不可見只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶 電轉(zhuǎn)移 將在凝膠中已經(jīng)別離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，選用低電壓100V和大電流1-2A，通電45min轉(zhuǎn)移即可完成。此分階段別離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見。 酶免疫定位 將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后，參加能形成不溶性顯色物的酶反響底物，使區(qū)帶染色。陽(yáng)性反響的條帶清晰可辨，并可根據(jù)SDS參加的分子量標(biāo)準(zhǔn)，確定各組分的分子量。 免 疫 印 跡 法 三方法學(xué)評(píng)價(jià)：1、特異性強(qiáng)2、吸附蛋白能力強(qiáng)