藥敏質(zhì)量控制

1、復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院抗生素研究所葉信予deb_藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制的目的保證細(xì)菌的鑒定和藥敏結(jié)果在臨床診斷和治療中的準(zhǔn)確性和可靠性 滿足疾病診斷和治療的要求，實(shí)事求是地反映檢驗(yàn)標(biāo)本的客觀存在與國(guó)際資料具有可比性室間質(zhì)控（external quality control）是由外部機(jī)構(gòu)控制實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量的客觀過程。內(nèi)容：病原菌鑒定、藥物敏感試驗(yàn) 目的：比較差異、改進(jìn)措施、確定培訓(xùn)需求、客觀 證據(jù)、支持實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可、增加實(shí)驗(yàn)室信心、 監(jiān)督工具國(guó)內(nèi)外權(quán)威機(jī)構(gòu)：國(guó)內(nèi)：衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心、上海臨床檢驗(yàn)中心 等國(guó)際：WHO/CDC 抗菌藥物敏感性試驗(yàn)質(zhì)控 英國(guó) 環(huán)球微生物學(xué)質(zhì)控 美國(guó) CAP質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控（intern

2、al quality control)保證檢驗(yàn)質(zhì)量的高水平實(shí)驗(yàn)室工作人員的素質(zhì)微生物檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)操作（細(xì)菌鑒定、藥敏試驗(yàn)）標(biāo)本取材、登記、采集檢測(cè)儀器的性能培養(yǎng)基、試劑質(zhì)量、保質(zhì)期標(biāo)準(zhǔn)菌株藥物敏感性試驗(yàn)測(cè)定抗菌藥物在體外對(duì)病原微生物有無(wú)抑制作用的方法世界衛(wèi)生組織推薦：常規(guī)的藥敏方法為紙片瓊脂擴(kuò)散法（K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法）科研方面主要為稀釋法，包括液體稀釋法（試管法、微量法）和瓊脂稀釋法分子生物學(xué)方法、酶試驗(yàn) K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法是一種定性試驗(yàn)：S、I、R操作簡(jiǎn)便，常規(guī)工作中最常應(yīng)用影響因素多存在一定局限性稀釋法肉湯稀釋法常量（大量）肉湯稀釋法（試管法）微量肉湯稀釋法瓊脂稀釋法 是一種定量方法，結(jié)

3、果精確操作繁瑣，要求嚴(yán)格E-test法定量方法操作簡(jiǎn)便，容易觀察價(jià)格昂貴分子生物學(xué)法測(cè)遺傳耐藥機(jī)制如PCR檢測(cè)葡萄球菌mecA基因等其他還有核酸雜交等方法 酶試驗(yàn)測(cè)生化耐藥機(jī)制。 如碘量法、酸量法、 Nitrocefin法等測(cè)-內(nèi)酰胺酶。ESBLs、AmpC酶檢測(cè)等。-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)陽(yáng)性：可快速預(yù)報(bào)嗜血桿菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉氏菌對(duì)青霉素、氨芐青和羥氨芐青霉素耐藥。葡萄球菌對(duì)青霉素及氨基、羧基和酰脲基青霉素類藥物的耐藥性。紙片瓊脂擴(kuò)散法如果僅僅基于抑菌環(huán)的有無(wú)，而不考慮抑菌環(huán)的大小，則無(wú)法檢測(cè)抗菌藥物的敏感性。只有將檢測(cè)方法和抑菌環(huán)直徑測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)化的方法相結(jié)合進(jìn)行試驗(yàn)，才能獲得可信的結(jié)果。必須采

4、用CLSI推薦的標(biāo)準(zhǔn)操作方法進(jìn)行試驗(yàn)，才能獲得可重復(fù)的結(jié)果。紙片瓊脂擴(kuò)散法的影響因素技術(shù)人員的操作培養(yǎng)基藥敏紙片接種物制備試驗(yàn)操作孵育條件、溫度和時(shí)間藥敏結(jié)果讀取質(zhì)控菌株技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)過訓(xùn)練能進(jìn)行檢驗(yàn)?zāi)苁炀毷褂脙x器有評(píng)價(jià)檢驗(yàn)結(jié)果有效性的能力細(xì)心、用心、責(zé)任心培養(yǎng)基水解酪蛋白瓊脂（M-H瓊脂）：最適用于常規(guī)藥敏測(cè)試非苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)基。原因：藥敏試驗(yàn)顯示了可接受的批間重復(fù)性。其含有影響磺胺、甲氧芐啶和四環(huán)素敏感性試驗(yàn)結(jié)果的抑制劑濃度低。能使絕大多數(shù)非苛養(yǎng)菌生長(zhǎng)良好。已積累了用此培養(yǎng)基進(jìn)行的敏感性測(cè)試的大量數(shù)據(jù)和經(jīng)驗(yàn)。培養(yǎng)基苛養(yǎng)菌：需加入營(yíng)養(yǎng)添加劑5%脫纖維羊血MH瓊脂含SR158生長(zhǎng)因子的HTM培養(yǎng)基

5、GC瓊脂基質(zhì)+1%規(guī)定的生長(zhǎng)添加劑培養(yǎng)基pH值：室溫條件下7.2-7.4之間。因此必須在凝固之后檢測(cè)檢測(cè)方法：浸漬足夠多的瓊脂完全掩蓋pH機(jī)電極的尖端少量的瓊脂在燒杯中凝固在pH機(jī)電極的尖端的周圍使用表面電極培養(yǎng)基pH值小于7.2，變化會(huì)顯著改變一些藥物的抑菌環(huán)大小氨基糖苷類、克林霉素、大環(huán)內(nèi)酯類及喹諾酮類抑菌環(huán)變小青霉素、四環(huán)素抑菌環(huán)變大pH值大于7.4，會(huì)出現(xiàn)相反的結(jié)果培養(yǎng)基胸苷或胸腺嘧啶：過量可以逆轉(zhuǎn)磺胺類和甲氧芐啶的抑制作用，從而產(chǎn)生更小、更不清楚的抑菌環(huán)，甚至沒有抑菌環(huán)的出現(xiàn)，可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的耐藥報(bào)告糞腸球菌ATCC 29212，用復(fù)方新諾明紙片測(cè)試，滿意結(jié)果為清晰、鮮明的抑菌環(huán)，直徑

6、20mm培養(yǎng)基二價(jià)陽(yáng)離子：鈣和鎂離子：影響氨基糖苷類和四環(huán)素對(duì)銅綠假單胞菌的藥敏結(jié)果。含量過高，抑菌環(huán)變小含量過低，抑菌環(huán)變大鈣離子含量的變化也會(huì)影響達(dá)托霉素的藥敏結(jié)果含量過低，抑菌環(huán)變小含量過高，抑菌環(huán)變大過量的鋅離子可使碳青霉烯類抑菌環(huán)變小培養(yǎng)基平板厚度一定要標(biāo)準(zhǔn) ，達(dá)到4mm厚度9cm平板傾注瓊脂量25-30ml；15cm平板需60ml左右同一平板內(nèi)的瓊脂要均一厚度濕度：使用時(shí)，瓊脂的表面應(yīng)是潮濕的，但不能有液滴出現(xiàn)在培養(yǎng)基的表面或平板蓋子上有效期：7天儲(chǔ)存溫度：2-8藥敏紙片可靠的供應(yīng)商：OXOID、BD紙片應(yīng)當(dāng)同時(shí)至少有一個(gè)分析說明的紙片批號(hào)和濃度的證書，并能提供用推薦的質(zhì)控細(xì)菌進(jìn)行

7、質(zhì)控的數(shù)據(jù)藥物含量必須符合CLSI規(guī)定的濃度藥敏紙片紙片的儲(chǔ)存：藥敏紙片的外包裝可以確保適當(dāng)?shù)臒o(wú)水條件紙片應(yīng)冷凍在-20或以下的冰箱內(nèi)，密封保存。除了因工作需要而少量冷藏外（最多冷藏一個(gè)星期），尤其是含-內(nèi)酰胺類藥物、不穩(wěn)定藥物（如亞胺培南、頭孢克洛、克拉維酸復(fù)合劑）一旦藥敏紙片從密封的包裝中取出，必須放置在一個(gè)完全密封干燥的容器中儲(chǔ)存藥敏紙片藥敏紙片的使用使用前從冰箱內(nèi)取出并除去密封包裝，平衡至室溫。這樣可以最大限度地減少熱空氣接觸冷的紙片時(shí)產(chǎn)生冷凝水只使用沒有超過制造商表明的有效期的紙片，丟棄過期的紙片藥敏紙片接種物制備濁度標(biāo)準(zhǔn)：0.5麥?zhǔn)蠞舛葮?biāo)準(zhǔn)，相當(dāng)(1-2)108個(gè)菌落形成單位(CF

8、U)/ml。接種物濃度過高，會(huì)導(dǎo)致某些-內(nèi)酰胺類藥物耐藥校準(zhǔn)方法肉眼觀察比濁：應(yīng)在足夠的光線下貼靠著有白色背景和對(duì)比黑線的比色卡比較接種管和0.5麥?zhǔn)蠞舛葮?biāo)準(zhǔn)管BaSO4濁度標(biāo)準(zhǔn)管：625nm處的吸光度值為0.08-0.10，每次使用需要充分震蕩，每個(gè)月更換商品化的乳膠懸浮液：每次使用之前上下顛倒混勻，有效期內(nèi)使用光學(xué)濁度儀接種物制備細(xì)菌生長(zhǎng)曲線遲緩期：菌體增大，代謝活躍，為細(xì)菌的分裂增值合成、儲(chǔ)備足夠的酶、能量及中間代謝產(chǎn)物，1-4h對(duì)數(shù)期：此期細(xì)菌形態(tài)、染色、生物活性都很典型，對(duì)外界環(huán)境因素的作用敏感，抗菌素作用對(duì)該時(shí)期的細(xì)菌效果最佳,8-18h穩(wěn)定期：此期細(xì)菌形態(tài)、染色、生物活性可出現(xiàn)改

9、變，并產(chǎn)生相應(yīng)的代謝產(chǎn)物衰亡期：生理代謝活動(dòng)趨于停滯接種物制備制備方法直接菌落懸浮法：最方便的方法。可用于大多數(shù)細(xì)菌。從16-18h培養(yǎng)的瓊脂平板（應(yīng)選用非選擇性培養(yǎng)基，如血平板）上挑取數(shù)個(gè)單個(gè)菌落直接接種到肉湯或生理鹽水制成菌懸液，調(diào)整菌懸液至0.5麥?zhǔn)?。接種物制備制備方法生長(zhǎng)法：無(wú)法用上述方法制備菌懸液的情況下選用。從瓊脂平板上選擇3-5個(gè)形態(tài)相同的單個(gè)菌落，用接種環(huán)或無(wú)菌拭子將菌落轉(zhuǎn)移至含有4-5ml合適的肉湯培養(yǎng)基的試管中，如胰蛋白酶大豆肉湯。在35孵育培養(yǎng)，直到達(dá)到或超過0.5麥?zhǔn)蠞舛龋ㄍǔ?-6h）濁度。用無(wú)菌生理鹽水或肉湯調(diào)整新鮮生長(zhǎng)的肉湯懸液的濁度到0.5麥?zhǔn)蠞舛?。試?yàn)操作接種

10、平板：調(diào)整好濁度的菌懸液最好在15min內(nèi)將無(wú)菌棉簽浸取，同時(shí)在管壁上出去棉簽上多余的液體用拭子劃線整個(gè)瓊脂表面，接種于表面干燥的MHA平板上，每次旋轉(zhuǎn)平板約60，以確保每次接種均勻分布，最后在瓊脂平板的邊緣涂抹一圈蓋子可半開3-5min，但不可超過15min，以便放置藥敏紙片前，使瓊脂吸收表面多余的水分試驗(yàn)操作放置紙片：將預(yù)先設(shè)定好并已經(jīng)平衡至溫度的藥敏紙片分置在已接種細(xì)菌的瓊脂表面每個(gè)紙片必須壓下以確保與瓊脂表面完全接觸。無(wú)論是單獨(dú)放置或使用紙片分配設(shè)備，紙片必須分布均勻，兩紙片圓心的距離不少于24mm最好在預(yù)期的產(chǎn)生小的抑菌環(huán)的紙片旁邊放置產(chǎn)生大的抑菌環(huán)的紙片，以避免重疊區(qū)紙片距離瓊脂邊

11、緣的距離同樣重要，如果太靠近邊緣，抑菌環(huán)可能不完整，建議距離平板邊緣15mm。藥敏紙片一旦與瓊脂表面接觸，就不可再移動(dòng)放置紙片后15min內(nèi)倒置平板進(jìn)行培養(yǎng)試驗(yàn)操作孵育溫度：（35 2）孵育條件：除嗜血桿菌、淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌和鏈球菌外，孵育不需要CO2CO2濃度變化會(huì)顯著改變一些藥物的抑菌環(huán)大小孵育時(shí)間：16-18h測(cè)試 苯唑西林或萬(wàn)古霉素對(duì)葡萄球菌屬，或萬(wàn)古霉素對(duì)腸球菌屬的敏感性，孵育時(shí)間必須達(dá)到24h細(xì)菌接種物準(zhǔn)備方法接種培養(yǎng)基紙片數(shù)量培養(yǎng)溫度()5%CO2培養(yǎng)時(shí)間（小時(shí)）100mm150mm一般需氧菌直接菌落懸浮法，生長(zhǎng)法MHA512352不需要16-18肺炎鏈球菌和其他鏈球菌直

12、接菌落懸浮法5%羊血MHA49352，不超過37需要20-24流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌直接菌落懸浮法含SR158因子的HTM49352需要16-18腦膜炎奈瑟菌直接菌落懸浮法5%羊血MHA25352，不超過37需要20-24淋病奈瑟菌直接菌落懸浮法GC瓊脂基質(zhì)+1%規(guī)定的生長(zhǎng)添加物49361，不超過37需要16-18平板結(jié)果判讀培養(yǎng)后的平板觀察細(xì)菌的涂布是否滿意接種是否正確產(chǎn)生的抑菌環(huán)是否均勻?yàn)閳A形菌苔是否融合生長(zhǎng)如果可見單個(gè)菌落，說明接種量過稀，必須重復(fù)試驗(yàn)平板結(jié)果判讀測(cè)量方法：用肉眼判讀，測(cè)量完全抑制區(qū)的直徑，包括紙片的直徑采用游標(biāo)卡或尺子在培養(yǎng)基的背面測(cè)量將培養(yǎng)基放在一個(gè)黑色不反光的

13、背景上，并用反射光觀察如使用血平板，應(yīng)除去蓋子并用反射光照射，在瓊脂的上方測(cè)量抑菌環(huán)抑菌圈直徑閱讀游標(biāo)卡尺抑菌圈直徑閱讀直尺平板結(jié)果判讀測(cè)量直徑?jīng)]有肉眼可見的明顯的生長(zhǎng)區(qū)即可認(rèn)為抑菌圈邊緣。只能在放大鏡下觀察到的細(xì)小菌落忽略不計(jì)。在一個(gè)明顯抑菌環(huán)內(nèi)有分散的菌落生長(zhǎng)時(shí)，應(yīng)該從原始菌落移種后重新測(cè)試。如分散的菌落依然在抑菌環(huán)內(nèi)生長(zhǎng)，則應(yīng)測(cè)量無(wú)菌落的抑菌環(huán)內(nèi)徑。變形桿菌屬細(xì)菌可遷徙生長(zhǎng)到某種抗菌藥物抑菌環(huán)內(nèi)，忽略明顯的抑菌環(huán)內(nèi)薄紗樣遷徙生長(zhǎng)。測(cè)量血平板上的抑菌環(huán)時(shí)，測(cè)量的是生長(zhǎng)抑菌圈，而不是溶血抑制圈。測(cè)量含甲氧芐啶和磺胺類藥物的抑菌圈時(shí)，忽略少量生長(zhǎng)，測(cè)量比較明顯的邊緣，以確定抑菌環(huán)的直徑。細(xì)菌藥

14、敏紙片孵育時(shí)間 觀察結(jié)果金黃色葡萄球菌苯唑西林和萬(wàn)古霉素24h用透射光（平板舉向光源）來檢查明顯抑菌環(huán)內(nèi)有無(wú)耐藥菌落的少量生長(zhǎng)，抑菌環(huán)內(nèi)任何區(qū)域出現(xiàn)可辨別的生長(zhǎng)都判為苯唑西林或萬(wàn)古霉素耐藥頭孢西丁16-18h讀取時(shí)使用反射光葡萄球菌屬利奈唑胺16-18h讀取直徑是用透射光，抑菌環(huán)內(nèi)任何區(qū)域出現(xiàn)可辨別的生長(zhǎng)都判為耐藥腸球菌屬萬(wàn)古霉素24h用透射光仔細(xì)檢查抑菌環(huán)內(nèi)是否有菌落生長(zhǎng)，出現(xiàn)任何菌落意味著耐藥結(jié)果解釋根據(jù)CLSI推薦的判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感性有判斷標(biāo)準(zhǔn)：敏感、中介、耐藥只有敏感的折點(diǎn)：敏感同屬細(xì)菌不同種判斷標(biāo)準(zhǔn)可能不同不可能出現(xiàn)的藥敏現(xiàn)象金葡菌：青霉素 S, 苯唑西林 R，萬(wàn)古

15、霉素 R腸桿菌科細(xì)菌：第三代頭孢菌素 R，第一、第二代頭孢菌素 S嗜麥芽窄食單胞菌：出現(xiàn)碳青霉烯類 S藥敏質(zhì)控目的藥敏試驗(yàn)過程的精密度（可重復(fù)性）和準(zhǔn)確度在試驗(yàn)中所作用的試劑的性能。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和結(jié)果判定操作者的工作情況。責(zé)任制造商：確保制造出合適的產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)室：確保試驗(yàn)很好地維護(hù)和執(zhí)行 方法標(biāo)準(zhǔn)菌株質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株使用精心挑選的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株實(shí)驗(yàn)在可接受的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)操作進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果可靠每個(gè)質(zhì)控菌應(yīng)從認(rèn)可的來源處獲得（美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌庫(kù) ，ATCC）適用于抗菌藥物和標(biāo)準(zhǔn)方法（CLSI推薦）質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株分類：日常檢測(cè)質(zhì)控菌株：確保檢測(cè)系統(tǒng)正常運(yùn)行，并且檢測(cè)結(jié)果在制定的范圍內(nèi)大腸埃希菌 ATCC 25922金黃色葡萄球

16、菌 ATCC 25923等補(bǔ)充的質(zhì)控菌株：用于評(píng)價(jià)某一特定情況下實(shí)驗(yàn)或者檢測(cè)系統(tǒng)的特性，或稱為備用質(zhì)控菌株嗜血桿菌 ATCC 10211肺炎克雷伯菌 ATCC BAA-1705等質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株檢測(cè)和儲(chǔ)存使用和檢測(cè)臨床分離株相同的材料和方法，按照標(biāo)準(zhǔn)紙片瓊脂擴(kuò)散法，來檢測(cè)質(zhì)控菌株合理儲(chǔ)存和維護(hù)，確保質(zhì)控菌具有可接受的性能儲(chǔ)存菌株：長(zhǎng)期貯存，可用Microbank,40% 甘油肉湯、脫纖維羊血或脫脂牛奶，于 -70 低溫度保存。 半儲(chǔ)存菌株：使用中的質(zhì)控菌應(yīng)貯存在胰大豆瓊脂（非苛養(yǎng)菌）或營(yíng)養(yǎng)豐富的巧克力瓊脂斜面（苛養(yǎng)菌）， 4-8 保存，每周傳代一次。 應(yīng)用菌株：每次使用前應(yīng)把半儲(chǔ)存菌株傳代到相應(yīng)的

17、平皿上使其獲得單個(gè)菌落。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株防止質(zhì)控菌株的變異保存菌株應(yīng)加保護(hù)液（脫脂奶粉或甘油）盡量減少轉(zhuǎn)種次數(shù)，一般不要超過6次孵育時(shí)間不要超過對(duì)數(shù)期避免菌種被污染不要從藥敏試驗(yàn)的瓊脂平板上取細(xì)菌使用 如果出現(xiàn)無(wú)法解釋的結(jié)果表明細(xì)菌的天然敏感性已經(jīng)改變，需要制備新的原代培養(yǎng)物質(zhì)控菌株生物特性紙片瓊脂擴(kuò)散法其他大腸埃希菌 ATCC 25922-內(nèi)酰胺酶陰性非苛養(yǎng)革蘭陰性菌腦膜炎奈瑟菌大腸埃希菌 ATCC 35218含質(zhì)粒編碼的TEM-1 內(nèi)酰胺酶（非ESBL）-內(nèi)酰胺/-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合物流感嗜血桿菌 ATCC 49247-內(nèi)酰胺酶陰性氨芐西林耐藥菌株嗜血桿菌嗜血桿菌 ATCC 49766氨芐西

18、林敏感嗜血桿菌（對(duì)某些-內(nèi)酰胺類更有代表性）肺炎克雷伯菌 ATCC 700603含SHV-18型ESBLESBL篩選和確證實(shí)驗(yàn)銅綠假單胞菌 ATCC 27853含誘導(dǎo)的AmpC 非苛養(yǎng)革蘭陰性菌評(píng)價(jià)每批MH培養(yǎng)基中陽(yáng)離子含量適合性金黃色葡萄球菌 ATCC 25923-內(nèi)酰胺酶陰性mecA 陰性非苛養(yǎng)革蘭陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌 ATCC 43300苯唑西林耐藥，mecA陰性頭孢西丁紙片肺炎鏈球菌 ATCC 49619青霉素結(jié)合蛋白改變導(dǎo)致青霉素中介肺炎鏈球菌其他鏈球菌腦膜炎奈瑟菌常用質(zhì)控菌株Q：沙門菌屬細(xì)菌在進(jìn)行紙片法藥敏試驗(yàn)時(shí)應(yīng)該選擇哪種ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株？A：1. 銅綠假單胞菌 ATCC 278

19、532. 金黃色葡萄球菌 ATCC 259233. 肺炎克雷伯菌 ATCC 7006034.大腸埃希菌 ATCC 352185. 大腸埃希菌 ATCC 25922（）Q：為什么大腸埃希菌ATCC 35218會(huì)出現(xiàn)氨芐西林耐藥，氨芐西林/舒巴坦敏感？A： 因?yàn)榇竽c埃希菌ATCC 35218會(huì)產(chǎn)生-內(nèi)酰胺酶，所以氨芐西林對(duì)其沒有抗菌作用而表現(xiàn)為耐藥，但舒巴坦為-內(nèi)酰胺酶的酶抑制劑，可抑制大腸埃希菌ATCC 35218產(chǎn)生的-內(nèi)酰胺酶，因此又恢復(fù)抗菌活性，因此氨芐西林/舒巴坦表現(xiàn)為敏感。質(zhì)控菌株的傳代及使用新儲(chǔ)存物或凍存物用合適的培養(yǎng)基與適宜的孵育條件進(jìn)行傳代培養(yǎng)（首次傳代）正確傳代培養(yǎng)、孵育和保存質(zhì)控菌株。用分離的單個(gè)菌落作為第1天道第7天的試驗(yàn)用質(zhì)控菌。每天準(zhǔn)備新的傳代培養(yǎng)物（從第1天試驗(yàn)用培養(yǎng)物分離）。相應(yīng)的菌株類型保存在適宜的溫度下。每天測(cè)試工作日使用新鮮的試驗(yàn)用培養(yǎng)物。重復(fù)試驗(yàn)至第3周和第4周。第4周后，丟棄傳代培養(yǎng)物并重新溶解新儲(chǔ)存物或凍存物中以獲取質(zhì)控菌株。備注：1.冷凍或凍干培養(yǎng)物傳代兩次后使用。2.進(jìn)行質(zhì)控試驗(yàn)，選擇從試驗(yàn)用培養(yǎng)物中分離的單個(gè)菌落。3.如果污染或疑有問題，準(zhǔn)備新的首次傳代物、測(cè)試用培養(yǎng)物，或者獲取新的凍存物。4.某些菌株有必要每?jī)芍苤匦聹?zhǔn)備新的傳代物（如銅綠ATCC 27853，肺鏈ATCC 49619）藥敏質(zhì)控頻率每日測(cè)試：連續(xù)檢測(cè)每種抗菌藥物/細(xì)