本科生畢業(yè)論文模板經(jīng)典(銀葉藍(lán)鐘花莖尖組織培養(yǎng)研究論文課件)

1、銀葉藍(lán)鐘花莖尖組織培養(yǎng)研究銀葉藍(lán)鐘花莖尖組織培養(yǎng)研究Study on Meristem Culture of Cyananthus argenteus Marq云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 園林園藝學(xué)院園林園藝學(xué)院2006級(jí)級(jí)摘摘 要要 以銀葉藍(lán)鐘花莖尖為外植體，以期篩選出誘導(dǎo)愈傷組織分化和叢生芽生根的最佳培養(yǎng)基。同時(shí)研究了銀葉藍(lán)鐘花組織培養(yǎng)中材料的消毒時(shí)間對(duì)消毒效果的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)基MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.05mg/L是愈傷組織誘導(dǎo)分化相對(duì)較好的培養(yǎng)基；培養(yǎng)基MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.6mg/L是銀葉藍(lán)鐘花生根培養(yǎng)較好的培養(yǎng)基。在以75%的酒精消毒30秒后

2、，用0.1%的升汞消毒8分鐘，對(duì)實(shí)驗(yàn)材料的消毒效果相對(duì)較好。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：銀葉藍(lán)鐘花；消毒時(shí)間；誘導(dǎo)率；玻璃化 ABSTRACT The meristem tip of Cyananthus argenteus Marq as explants to induce callus selected and multiple shoots the best medium for rooting. At the same time of Cyananthus argenteus Marq spent tissue culture material disinfection time disinfe

3、ctant effect. Design test results showed that the medium MS +6- BA3.0mg / L + NAA0.05mg / L is a relatively good differentiation of callus induction medium; medium MS +6- BA0.3mg / l + NAA0.6mg / L, is a suitable medium for rooting ，75% alcohol at 30 seconds after disinfection with 0.1% HgCl2 for 8

4、minutes, the experimental materials, sterilization was better.Key words: Cyananthus argenteus Marq; time of disinfecting ; inductivity; vitrification 銀葉藍(lán)鐘花莖尖組織培養(yǎng)研究銀葉藍(lán)鐘花莖尖組織培養(yǎng)研究前言前言材料與方法材料與方法結(jié)果及分析結(jié)果及分析討論討論結(jié)論結(jié)論系統(tǒng)概述系統(tǒng)概述前言 銀葉藍(lán)鐘花（Cyananthus argenteus Marq）又名總花藍(lán)鐘花，為桔?？疲–ampanulaceae）藍(lán)鐘花屬（Cyananthus Wall）植

5、物。藍(lán)鐘花屬是中國(guó)喜馬拉雅區(qū)系的典型植物。 藍(lán)鐘花屬是桔?？浦形ㄒ灰粋€(gè)子房完全上位的屬。從子房對(duì)花萼和花冠來(lái)說(shuō)均上位，其在本科中是一個(gè)比較特殊的成員，可能是該科中一個(gè)較為原始的類型。 銀葉藍(lán)鐘花，多年生草本，莖多條簇生，長(zhǎng)15-25cm，小枝纖細(xì)，葉互生，狹披針形，背面密被銀白色棉毛或剛毛。 具短柄，花單生于莖頂，花梗極短，花萼管狀，萼齒狹三角形，花冠管狀，藍(lán)紫色，裂片狹長(zhǎng)圓形。習(xí)性：生長(zhǎng)在海拔2900-3600m的干旱山坡、沙丘、或松林間沙地；其生長(zhǎng)的土壤類型為中性或偏堿性的沙壤土或灌叢草甸土；從野生環(huán)境來(lái)看，該種植物喜光，一般常見于路邊向陽(yáng)坡地，植株具有很好的抗旱能力。 銀葉藍(lán)鐘花花冠色彩

6、艷麗、花枝繁茂，花期時(shí)期僅見藍(lán)花花朵密被于枝十分漂亮，具有很高的觀賞價(jià)值，將其作為園林植物的開發(fā)前景廣闊。 目前，對(duì)該屬植物的研究尚少，僅限于系統(tǒng)學(xué)研究。 本實(shí)驗(yàn)探討了銀葉藍(lán)鐘花脫毒組織培養(yǎng)中消毒處理最佳時(shí)間，以及愈傷組織誘導(dǎo)分化和叢生芽誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基配方，以縮短培養(yǎng)周期和降低培養(yǎng)成本，為銀葉藍(lán)鐘花試管苗的大規(guī)模生產(chǎn)提供了科學(xué)的依據(jù)。材料與方法2.1 2.1 供試材料供試材料 材料取自云南農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所基地上栽培的銀葉藍(lán)鐘花。2.2 2.2 試驗(yàn)時(shí)間試驗(yàn)時(shí)間 實(shí)驗(yàn)于2009年4月到2010年5月在云南農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所內(nèi)進(jìn)行。 將采回的生長(zhǎng)良好的莖尖進(jìn)行消毒，接種到培養(yǎng)基中，觀察記錄

7、。 2.3 2.3 試驗(yàn)方式試驗(yàn)方式2.3.1 2.3.1 材料消毒處理材料消毒處理 用自來(lái)水沖洗材料，洗凈表面的塵土，置于超凈工作臺(tái)上，以75%的酒精消毒30秒時(shí)間，再用無(wú)菌水沖洗3次，將材料分組分別用0.1%升汞消毒6分鐘、8分鐘、10分鐘，再用無(wú)菌水沖洗4次。 2.3 2.3 試驗(yàn)方式試驗(yàn)方式2.3.2 2.3.2 初代培養(yǎng)初代培養(yǎng) 將消毒處理過的材料，接種到培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，添加以6-BA,NAA(雙因子)不同濃度組合的植物激素，調(diào)節(jié)PH到5.7-5.8。設(shè)計(jì)9個(gè)濃度梯度1-9（見表一），在每一種濃度梯度下接種十瓶。培養(yǎng)溫度為23，光照強(qiáng)度為3000lx,每日光照14

8、個(gè)小時(shí)。2.3 2.3 試驗(yàn)方式試驗(yàn)方式表一表一（6-BA6-BA與與NAANAA雙因子不同組合的九個(gè)濃度梯度）雙因子不同組合的九個(gè)濃度梯度）Table 1 (6-BA and NAA combinations of nine different two-factor concentration gradient)NAA與6-BA配合6-BA3.0(mg/L)6-BA4.0(mg/L)6-BA5.0(mg/L)NAA0.05(mg/L)NAA0.1( mg/L)NAA0.2( mg/L)統(tǒng)計(jì)公式： 愈傷組織誘導(dǎo)率=愈傷組織數(shù)/接種的外植體數(shù)100% 2.3.3 2.3.3 生根培養(yǎng)生根培養(yǎng) 以

9、初代培養(yǎng)長(zhǎng)出的叢生芽作為轉(zhuǎn)接材料。不需經(jīng)過表面消毒，直接將叢生芽從初代培養(yǎng)的愈傷組織上切下，接入以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，6-BA固定濃度為0.3mg/L,NAA配合濃度分別為為0.4，0.5，0.6mg/L(見表二)。調(diào)節(jié)PH到5.7-5.8。在每一個(gè)濃度梯度下接15瓶，每瓶接2個(gè)叢生芽10。培養(yǎng)溫度為23，光照強(qiáng)度為3000lx,每日光照14小時(shí)。2.3 2.3 試驗(yàn)方式試驗(yàn)方式表二表二 生根培養(yǎng)的濃度梯度生根培養(yǎng)的濃度梯度Table 2 The concentration gradient of rooting6-BA6-BA與與NAANAA配合配合NAA0.4(mg/L)NAA0.4(mg/

10、L)NAA0.5(mg/L)NAA0.5(mg/L)NAA0.6(mg/L)NAA0.6(mg/L)6-BA0.3(mg/L)6-BA0.3(mg/L)結(jié)果和分析3.1 3.1 消毒時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響消毒時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響 如表三所示，用相同的消毒方法，不同的消毒時(shí)間處理材料，分別是6分鐘、8分鐘、10分鐘。10天后觀察消毒結(jié)果。消毒6分鐘的材料存活率為50%，其污染較為嚴(yán)重，為50%；消毒時(shí)間為8 分鐘的材料存活率為80%，死亡的材料變褐，但污染率為10%；消毒處理10 分鐘的材料全部死亡，發(fā)現(xiàn)變?yōu)楹稚?，材料?yán)重受到損傷，但未見到受污染。由于材料莖尖外部葉片茸毛較多且長(zhǎng)期暴露在空氣中，帶

11、菌較多，消毒較困難。增加消毒時(shí)間會(huì)將外植體殺死，減少消毒時(shí)間，污染率會(huì)升高。 試驗(yàn)結(jié)果表明，75%的酒精消毒30秒時(shí)間，再用無(wú)菌水沖洗三次，0.1%的升汞消毒8分鐘，用無(wú)菌水沖洗4次，相對(duì)效果較好。表三表三 消毒時(shí)間及效果消毒時(shí)間及效果Table 3 the effect of disinfection timeTable 3 the effect of disinfection time消毒時(shí)間接種數(shù)成活數(shù)成活率%污染率%6分鐘301550508分鐘3024801010分鐘300003.2 3.2 銀葉藍(lán)鐘花愈傷組織的誘導(dǎo)和分化銀葉藍(lán)鐘花愈傷組織的誘導(dǎo)和分化 在9個(gè)濃度梯度下接種的外植體都有

12、愈傷組織的產(chǎn)生，并且都不同程度的分化出叢生芽。如表四,五所示，濃度、這三組愈傷組織誘導(dǎo)率較高，分別為80%、75%、70%，而且、兩組愈傷組織體積較大，生長(zhǎng)旺盛；濃度這一組產(chǎn)生的愈傷組織體積較小，結(jié)構(gòu)致密。濃度、這三組誘導(dǎo)率較低，都為15%，愈傷組織體積小，葉片顏色較淺。 同時(shí)也觀察到出現(xiàn)玻璃化的現(xiàn)象。其中在濃度、三組中分化的叢生芽也都有不同程度的玻璃化現(xiàn)象出現(xiàn)，即這一組的玻璃化程度最高。植物生長(zhǎng)激素配比不協(xié)調(diào)，細(xì)胞分裂素濃度過高則容易產(chǎn)生玻璃化現(xiàn)象12。在這一組中，6-BA濃度相對(duì)較高，可能是使其玻璃化程度較高的原因。所以，綜合比較，本實(shí)驗(yàn)中以濃度，即MS+0.05mg/L NAA+3.0m

13、g/L 6-BA為銀葉藍(lán)鐘花愈傷組織誘導(dǎo)分化的最佳培養(yǎng)基。 表四表四 6-BA6-BA與與NAANAA配合對(duì)銀葉藍(lán)鐘花愈傷組織誘導(dǎo)分化的影響配合對(duì)銀葉藍(lán)鐘花愈傷組織誘導(dǎo)分化的影響 濃度濃度3.3 3.3 銀葉藍(lán)鐘花生根培養(yǎng)銀葉藍(lán)鐘花生根培養(yǎng) 選取初代培養(yǎng)中長(zhǎng)勢(shì)較好的叢生苗接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。一般是2-3cm。30天后，觀察根的長(zhǎng)勢(shì)，記錄如表六所示。結(jié)果表明，在這3個(gè)濃度梯度下，以培養(yǎng)基MS+0.3mg/L 6-BA+0.6mg/L NAA為較好的生根培養(yǎng)基，生根率達(dá)80%，且根的愈傷化程度較輕，根粗，根量適中。 討論4.1 4.1 不同消毒時(shí)間對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)分化的影響 由于材料莖尖

14、茸毛多，消毒劑不易滲透，莖尖容易污染，延長(zhǎng)消毒時(shí)間莖尖又會(huì)褐變死亡，在消毒液中加入吐溫（一種乳化劑）也沒有很大作用13。本實(shí)驗(yàn)中分別采取用0.1%的升汞消毒處理6分鐘、8分鐘、10分鐘，再用無(wú)菌水消毒四次作為對(duì)比。消毒時(shí)間如果為6分鐘，由于消毒不充分而導(dǎo)致材料的污染加劇；消毒10分鐘，發(fā)現(xiàn)材料有變黑的斑塊，刀片切口處嚴(yán)重受傷成黑色。對(duì)材料造成不可逆的傷害。試驗(yàn)結(jié)果表明，以75%的酒精消毒30秒，再用無(wú)菌水沖洗三次，0.1%升汞消毒8分鐘，用無(wú)菌水沖洗四次，未使材料受到傷害，且保證污染率較低，消毒效果較好。 4.2 4.2 試驗(yàn)中玻璃化現(xiàn)象試驗(yàn)中玻璃化現(xiàn)象 在植物生長(zhǎng)激素不協(xié)調(diào)，細(xì)胞分裂素濃度過

15、高的情況下會(huì)有玻璃化現(xiàn)象的產(chǎn)生12。本試驗(yàn)采用了NAA和6-BA兩種外源激素的不同濃度配比誘導(dǎo)銀葉藍(lán)鐘花愈傷組織產(chǎn)生和分化。在9個(gè)不同的NAA和6-BA植物激素濃度配比下對(duì)愈傷組織進(jìn)行誘導(dǎo)分化，都有不同程度的玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生。而在叢生苗誘導(dǎo)生根時(shí)，玻璃化現(xiàn)象明顯減少。造成玻璃化現(xiàn)象的可能原因有2個(gè)：銀葉藍(lán)鐘花內(nèi)源激素的干擾、人為原因造成培養(yǎng)基中的外源激素配比不協(xié)調(diào)。本試驗(yàn)表明在不排除實(shí)驗(yàn)材料的內(nèi)源激素影響條件下，NAA和6-BA的濃度比為1/60是誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生和分化相對(duì)較好的濃度配比；在誘導(dǎo)生根培養(yǎng)時(shí)NAA和6-BA的濃度比為2/1，為較好的濃度配比。 4.3 NAA4.3 NAA與與6-B

16、A6-BA配合對(duì)生根培養(yǎng)的影響配合對(duì)生根培養(yǎng)的影響 試驗(yàn)結(jié)果表明，NAA與6-BA的濃度比為2/1是銀葉藍(lán)鐘花較好的生根培養(yǎng)基。根據(jù)高的生長(zhǎng)激素和細(xì)胞分裂素濃度比能夠促進(jìn)生根14，若NAA/6-BA的比例大于2，則可提高銀葉藍(lán)鐘花的生根率。結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：以本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：以75%75%的酒精消毒的酒精消毒3030秒，再用無(wú)秒，再用無(wú)菌水沖洗三次，菌水沖洗三次，0.1%0.1%升汞消毒升汞消毒8 8分鐘，用無(wú)菌水沖洗分鐘，用無(wú)菌水沖洗四次，未使材料受到傷害，且保證污染率較低，消四次，未使材料受到傷害，且保證污染率較低，消毒效果較好；培養(yǎng)基毒效果較好；培養(yǎng)基MS+6-BA3.0mg/L+NAA

17、0.05mg/LMS+6-BA3.0mg/L+NAA0.05mg/L是愈傷組織誘導(dǎo)分化相對(duì)較好的培養(yǎng)基；培養(yǎng)基是愈傷組織誘導(dǎo)分化相對(duì)較好的培養(yǎng)基；培養(yǎng)基MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.6mg/LMS+6-BA0.3mg/L+NAA0.6mg/L是銀葉藍(lán)鐘花生根培養(yǎng)是銀葉藍(lán)鐘花生根培養(yǎng)較好的培養(yǎng)基。較好的培養(yǎng)基。 參考文獻(xiàn) 1 洪德元，馬黎明.藍(lán)鐘花屬的系統(tǒng)學(xué)研究.植物分類學(xué)報(bào)，1991,29（1）:25-51 2 洪德元，桔?？频牡乩矸植迹宏P(guān)于分布中心問題.植物分類學(xué)報(bào)，1995,33（6）：521-5363中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所.云南植物志（第5卷）.藍(lán)鐘花屬M(fèi).北京：科學(xué)出版社.4解瑋佳，云南特有植物銀葉藍(lán)鐘花的引種栽培.江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2008,20（8）：33-345康隸善，中國(guó)植物志（第73卷）.藍(lán)鐘花屬(M).北京：科學(xué)出版社，1985.5-286鞏振輝 申書興 植物組織培養(yǎng).化學(xué)工業(yè)出版社 2007年8月第一版.7石曉東 高潤(rùn)梅 植物組織培養(yǎng). 中國(guó)農(nóng)業(yè)科技出版社 . 2006年5月第一版.8中國(guó)組培網(wǎng) http:/9印度 M.K 拉茲丹 肖尊安 譯 植物組織培養(yǎng)導(dǎo)論 化學(xué)工業(yè)出版社