第八章、熒光分光光度法

1、較高激發(fā)態(tài)較高激發(fā)態(tài)基基 態(tài)態(tài)吸收能吸收能量受激量受激光輻射光輻射退激退激分子在退激過程中以光輻射形式釋放能量分子在退激過程中以光輻射形式釋放能量熒光熒光熒光分析法熒光分析法磷光磷光磷光分析法磷光分析法 采用高靈敏度的檢測系統(tǒng)可大大提高采用高靈敏度的檢測系統(tǒng)可大大提高靈敏度，檢測限熒光分析法比分光光度法靈敏度，檢測限熒光分析法比分光光度法低低24個數(shù)量級個數(shù)量級激發(fā)激發(fā)發(fā)射熒光發(fā)射熒光強(qiáng)強(qiáng)強(qiáng)強(qiáng)光照激發(fā)光照激發(fā)去激發(fā)光去激發(fā)光 * * n基態(tài)單重態(tài) 第一激發(fā)單重態(tài) 單重態(tài)分子具有抗磁性，激發(fā)態(tài)的平均壽命約為單重態(tài)分子具有抗磁性，激發(fā)態(tài)的平均壽命約為10-8基態(tài)單重態(tài)基態(tài)單重態(tài) 第一激發(fā)三重態(tài)第一

2、激發(fā)三重態(tài) 自旋平行自旋平行三重態(tài)分子具有順磁性，激發(fā)態(tài)的平均壽命約為三重態(tài)分子具有順磁性，激發(fā)態(tài)的平均壽命約為10-41ST1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光S0S1S2VR：振動馳豫：振動馳豫IC：內(nèi)部轉(zhuǎn)換：內(nèi)部轉(zhuǎn)換ISC：系間竄躍：系間竄躍發(fā)光T1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光 熒光熒光圖圖5-1 分子熒光光譜產(chǎn)生過程示意圖分子熒光光譜產(chǎn)生過程示意圖S0S1S2VR：振動馳豫：振動馳豫IC：內(nèi)部轉(zhuǎn)換：內(nèi)部轉(zhuǎn)換ISC：系間竄躍：系間竄躍T1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光 熒光熒光 磷光磷光圖圖5-1 分子熒光、磷光光譜產(chǎn)生過程示意圖分子熒光、磷光光譜產(chǎn)生過程示意

3、圖S0S1S2VR：振動馳豫：振動馳豫IC：內(nèi)部轉(zhuǎn)換：內(nèi)部轉(zhuǎn)換ISC：系間竄躍：系間竄躍VR發(fā)熒光的分子數(shù)發(fā)熒光的分子數(shù)激發(fā)態(tài)分子總數(shù)激發(fā)態(tài)分子總數(shù)ifffKKK 0.11 205 278 0.29 286 3100.46 365 400苯苯萘萘蒽蒽 350菲菲線狀環(huán)結(jié)構(gòu)比非線狀線狀環(huán)結(jié)構(gòu)比非線狀結(jié)構(gòu)的熒光波長長結(jié)構(gòu)的熒光波長長 芳香族化合物因具有共軛的不飽和體系，芳香族化合物因具有共軛的不飽和體系，多數(shù)能發(fā)生熒光多數(shù)能發(fā)生熒光 多環(huán)芳烴是重要的環(huán)境污染物，可用熒光多環(huán)芳烴是重要的環(huán)境污染物，可用熒光法測定法測定 3，4 - 苯并苯并芘是強(qiáng)致癌物芘是強(qiáng)致癌物ocoo-oo-coo-oo-熒光素

4、：氧橋把兩熒光素：氧橋把兩個環(huán)固定在一個平個環(huán)固定在一個平面上，具有平面結(jié)面上，具有平面結(jié)構(gòu)，強(qiáng)熒光物質(zhì)構(gòu)，強(qiáng)熒光物質(zhì)酚酞：無氧橋把兩酚酞：無氧橋把兩個環(huán)固定，不能很個環(huán)固定，不能很好的共平面，為非好的共平面，為非熒光物質(zhì)熒光物質(zhì)反式：平面構(gòu)型 強(qiáng)熒光體順式：非平面構(gòu)型 非熒光體C=CHHC=CHHNOHNOHMOHO_OHH+_例：例： 苯酚苯酚離子化后，離子化后，熒光消失熒光消失pH1有有熒光熒光pH13無熒光無熒光例：例： 苯酚苯酚有熒光有熒光無熒光無熒光OHO_另外，表面活性劑也會影響熒光強(qiáng)度和特性熒光池?zé)晒鈴?qiáng)度檢測器IIA0lg將上式展開! 3)3 . 2(! 2)3 . 2(3 .

5、 2320AAAIIff! 3)3 . 2(! 2)3 . 2(3 . 2320AAAIIff當(dāng)當(dāng)A0.05時，時，光源第一單色器液池檢測器第二單色器檢測器放大器及記錄器與分光光度計(jì)有兩點(diǎn)不同與分光光度計(jì)有兩點(diǎn)不同兩個單色器兩個單色器檢測器與激發(fā)光互成直角檢測器與激發(fā)光互成直角應(yīng)用最廣泛的一種光應(yīng)用最廣泛的一種光源，可發(fā)射源，可發(fā)射250800nm很強(qiáng)的連續(xù)光源很強(qiáng)的連續(xù)光源I固定固定獲得方法：先把第二單色器的波獲得方法：先把第二單色器的波長固定，使測定的長固定，使測定的I I固定固定獲得方法：先把第一單獲得方法：先把第一單色器的波長固定，使激色器的波長固定，使激發(fā)的發(fā)的圖吸收峰熒光峰磷光峰xCxC)(1QCKIIf后前猝滅劑加入前的熒光強(qiáng)度猝滅劑加入后試液的熒光強(qiáng)度常數(shù)猝滅劑濃度)()()(QCMCMQCKf 比較CsCxIIfsfx00ffsffxfsfxIIIICsIICsCx熒光強(qiáng)度減去空白后若有試劑空白，測得的CHHOHOHONNNNHCHCHCH OHCH22OOH CH C33缺VB2會得口角炎、舌炎、唇炎、脂溢性皮炎維生素維生素B2熒 光 形 成 機(jī) 制單重態(tài)第二激發(fā)態(tài)第一激發(fā)態(tài)三重態(tài)熒光磷光內(nèi)轉(zhuǎn)換體系