血型鑒定、交叉配血中若干1

1、值班人員血庫上崗前培訓值班人員血庫上崗前培訓 孫利衛(wèi)生部規(guī)定衛(wèi)生部規(guī)定l血型“正反“鑒定lRh“”鑒定l交叉配血能檢測出部分不完全抗體l血型不規(guī)則抗體篩查試驗和定性鑒定l標本保存天以上l資料保存年基礎概念基礎概念l抗原是能與特異性抗體或免疫細胞在體內、外發(fā)生反應的物質，并常?？梢鹛禺愋悦庖邞?。l抗體是指體內免疫系統(tǒng)所產生的蛋白質，為對某種抗原引起反應所形成，且能與該抗原或相近的抗原發(fā)生特異性反應。l不完全抗體在生理鹽水中與相應的紅細胞不產生可見反應(不凝集),需通過其它介質(膠體、酶、抗人球蛋白血清等）才能出現(xiàn)可見的抗體。l不規(guī)則抗體 是指抗A和抗B以外的血型抗體基礎概念基礎概念l血型早期

2、 僅指存在于紅細胞上表面抗原的差異，現(xiàn)在包刮白細胞、血小板表面抗原的差異。l血型可分ABO、RH、MNSs等血型系統(tǒng)，共有9系統(tǒng)共有400多種抗原。l亞型：指雖然屬同一血型抗原，但結構和性能上有一定差異l血型抗體：IgG IgM IgA IgD IgE 天然IgM 免疫 IgG前兩者最多見?；A概念基礎概念lABO血型系統(tǒng)：1900年卡爾蘭德斯坦那發(fā)現(xiàn)l 根據(jù)紅細胞上是否有A和B抗原將人類分四種血型。l A型：紅細胞含有A抗原，血清（漿）中有B抗體。lB型：紅細胞含有B抗原 ，血清（漿）中有A抗體。lAB型：紅細胞含有A、B抗原，血清（漿）中無AB抗體。lO 型：紅細胞上無A、B抗原，血清（漿

3、）中有A、B抗體?；A概念基礎概念l血型物質：每個人專有的血型抗原物質。主要存在于紅細胞，廣泛存在于其他組織和體液中。兩種形式醇溶性水溶性l意義鑒定血型鑒定抗體性質可測臟器和組織血型l 嘉嘉 興興 市市 第第 一一 醫(yī)醫(yī) 院院l （嘉興醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院）l 臨臨 床床 輸輸 血血 申申 請請 單單l No：000000l預定輸血日期： 年 月 日 時 肯定輸血肯定輸血手術備用手術備用酌情備用酌情備用l受血者姓名： 性別：（男/女） 年齡： l病案號： 科別： 病區(qū)： 床號： l臨床診斷： 輸血目的： l繼往輸血史（有/無） 孕 產 受血者屬地：（本市/外埠 ） l預定輸血成分（類型）： 預定

4、輸血量： l受血者：lABO血型： Rh(D)血型： l血紅蛋白： ， HCT： ，血小板： lALT： U/L，HBsAg： ， Anti-HCV： lAnti-HIV1/2： ，梅毒： l 申請醫(yī)師簽名： l 主治醫(yī)師審核簽名： l 申請日期： 上/下午 時l采血者簽名： 收樣本者（血庫）簽名： l l注：請醫(yī)師逐項認真準確填寫，請于輸血日前送輸血科/血庫。l l受血者姓名： 受血者姓名： No：000000l病案號 ： 病區(qū)： 床號 病案號： 病區(qū)： 床號： l血型： No：000000 血液類型： 申請量： l 血型鑒定血型鑒定衛(wèi)生部臨床輸血技術規(guī)范規(guī)定：正反鑒定標準抗血清、標準血球、

5、必須符合國家標準正鑒定-用已知標準抗血清定血球 反鑒定-用已知標準血球定血漿或血清l手工試管法（具體操作見操作規(guī)程)l操作要點:取兩支小試管，各加被檢者2-5%紅細胞懸液200微升+分別用抗A、抗B標準抗血清在不同的管子中加2滴，用離心1000-1500轉/分，3分鐘后，在顯微鏡下看結果。 血型鑒定血型鑒定l卡式微量凝膠法(具體操作見操作規(guī)程)l 操作要點：被檢者1%紅細胞懸液，前四孔加50微升，后兩孔加血漿50微升，(前2孔是正定型，第3孔是D，第4孔是對照，第5、6是反定型）放專用的離心機離心5分鐘，沉底部的是陰性，在上層或中層算陽性。l注意觀察：l1、正反結果是否一致，l2、D孔紅細胞是

6、否沉降，在上層或中層結果是陽性,紅細胞沉底部陰性者（需進一步用手工法，單克隆抗D試劑確定，操作方法：2-3%紅細胞懸液+2滴單克隆抗D試劑，放置37水域15分鐘，用1500轉/分，離心3分鐘，在顯微鏡下看結果，凝集為陽性，無凝集為陰性。） 血型鑒定及影響因素血型鑒定及影響因素l凝膠微柱法專用儀器試劑標準化微機化l質量控制l正反定型結果不一致l技術失誤假陰性假陽性l血清問題l被檢者紅細胞問題 免球致敏 遺傳或獲得性表面異常多凝集 血型鑒定影響因素血型鑒定影響因素 異?；?亞型中弱抗原l近期輸血 呈混合外觀凝集l嵌和體血型l疾病因素導致抗原減弱 白血病 MDSl血型特異物質過高 卵巢囊腫血型物質

7、高l獲得性B 由革蘭陰性桿菌的作用 紅C有類Bl多凝集、全凝集細菌感染 血型鑒定影響因素血型鑒定影響因素l血漿置換l異常血漿蛋白l不規(guī)則抗體存在l低丙種球蛋白血癥 不凝集 弱凝集l藥物等因素 右旋糖酐激素青霉素l年齡因素血型鑒定血型鑒定l正反定性不一致的解決辦法：l重復試驗l洗滌被測紅細胞l換試劑或方法測l用相關亞型試劑l相關試驗加以鑒別 吸收試驗 放散試驗h血型鑒定血型鑒定l衛(wèi)生部要求：鑒定h陰陽性l試管法 抗血清滴被檢2-3紅細胞懸液滴混勻 1500轉/分 離心2分鐘 凝集為陽性。陰性：要求37水浴15分鐘，離心檢測。l卡式凝膠微柱l弱D者：受血者劃定h陰性，供血者劃定h陽性。抗人球蛋白試

8、驗抗人球蛋白試驗l測定: 不完全抗體l卡式凝膠微柱法l又分為l間接法 測患者血清中不完全抗體l直接法 測患者紅細胞上有無不完全抗體l配受檢者1%紅細胞懸液，取50微升，加入到抗人球打蛋白卡中，放專用離心5分鐘，紅細胞在上層或中層是陽性。不規(guī)則抗體篩查試驗和性質鑒定不規(guī)則抗體篩查試驗和性質鑒定200年，衛(wèi)生部臨床輸血技術規(guī)范第十七條規(guī)定：交叉配血不合時，對有輸血史、妊娠史或短期內需要接受多次輸血者。l不規(guī)則抗體篩查試驗 1 2 3 標準抗原l血型抗體性質鑒定 標準 紅細胞譜1-10l測定:是指抗A和抗B以外的血型抗體(完全抗體與不完全抗體)血型不規(guī)則抗體的檢測血型不規(guī)則抗體的檢測l卡式微量凝膠法

9、（具體操作規(guī)程見操作卡）l操作要點：取被檢者血清（血漿）每孔加50微升（共三孔），+標準不規(guī)則抗體篩查約1%紅細胞懸液50微升，放置專用37箱15分鐘，取出放專用離心機，離心5分鐘，紅細胞沉底部為陰性，在上層或中層是陽性。交叉配血試驗交叉配血試驗l受血者血清與供血者血球 主側l受血者血球與供血者血清 次側 l卡式凝膠微柱法 （抗球蛋白卡交叉配血卡）l操作要點：血標本離心3000轉/分，5分鐘，配檢者和供血者0.5-1%的紅細胞懸液， 主孔（側）加受血者血漿（血清）50微升與加供血者血球50微升，次側（孔）加受血者血球50微升與供血者血漿（血清）50微升，放37專用箱15分鐘，取出，用專用離心機

10、離心5分鐘，觀察結果：紅細胞在上層或中層為凝集（陽性），紅細胞兩孔紅細胞均沉底部為陰性，表示：供受者相容相合。 注意注意l在交叉配血中，如發(fā)現(xiàn)某孔弱凝集（凝膠層中有拖帶），必需復檢，（包刮：供、受兩者血型鑒定，原方法、凝聚胺交叉配血法、）。確認安全，才可發(fā)出。l如，在卡式交叉配血中出現(xiàn)，次側不合，首先復檢受、供血者的血型，ABO和RHD血型相同，應加做抗人球蛋白試驗，如患者陽性，與臨床聯(lián)系，說明，患者血球上有不完全抗體，建議臨床改輸洗滌紅細胞，并馬上向市血站約出洗滌紅細胞。l如出現(xiàn)正反鑒定不一致，必須重新鑒定，并用手工試管法進行正反血型鑒定，以試管法為準，如仍然不一致，馬上反饋給主任處理。交叉

11、配血注意點交叉配血注意點l標本是關鍵 核對 采集 l操作 規(guī)范l決不放過疑點 弱凝集 溶血現(xiàn)象l輸血基本原則：ABO、Rh“”血型相同，配血相合可輸 l標本保存 7天以上例如卡式凝膠微柱法（博迅）例如卡式凝膠微柱法（博迅）凝聚胺原理凝聚胺原理l紅細胞表面帶有大量的負電荷，以避免其產生自發(fā)性聚集，當紅細胞懸浮在電解質時，陽離子會被紅細胞的負電荷所吸引，此時紅細胞則被擴散的雙層離子云所圍繞，而形成Zeta電位， Zeta電位決定紅細胞之間的排斥作用。l凝聚胺技術首先利用底離子溶液（LIM），降低介質的離子強度，減少紅細胞周圍的陽離子云，以促進紅細胞和血清（血漿）中的抗體結合。l其后，加入凝聚胺（P

12、olybrene）溶液，它是一種高價陽離子多聚物，肝素中和劑，溶解后能產生很多正電荷，可以中和紅細胞表面帶有的負電荷，使紅細胞Zeta電位降低，縮短紅細胞之間的距離，使紅細胞產生非特異性的凝聚。最后，加入懸浮液（Resuspending），Resuspending具有中和凝聚胺（Polybrene）陽離子的作用，使正常的紅細胞非特異性凝聚散開，試驗結果為陰性，但如果紅細胞被應的抗體致敏，則會被凝聚胺凝結，凝集就不會散開，試驗結果為陽性。 凝聚胺法凝聚胺法l1、取3支試管分別標記（主、次、混）l2、5%紅細胞制備：取25ul樣本壓積紅細胞懸浮于500ul生理鹽水中。l3、主側：受血者血漿2滴+5

13、%供血者紅細胞1滴。l4、次側：供血者血漿2滴+5%受血者紅細胞1滴。l5、將主側管和次側管所加的所有成分都加入混合管中。l6、主側管、次側管、混合管中各加入低離子介質溶液600ul,混合均勻，室溫放置1分鐘。l7、再分別向3管中加入凝聚胺溶液2滴混合均勻，室溫放置15秒鐘。l8、置離心機內3400rpm/15秒，倒去上清液，使管底保留約0.1ml的液體。l9、目測管內有無紅細胞凝集塊，若沒有凝塊，則必須重做。l10、向紅細胞已發(fā)生凝集的試管內加入2滴復懸液，輕輕混勻，顯微鏡下觀察結果（紅細胞凝塊散開為陰性反應，示血交叉配型相合；若紅細胞仍凝集成塊為陽性反應，示血交叉配型不合?？梢鹧鍖W問題

14、的一些臨床疾病可引起血清學問題的一些臨床疾病 lDAT陽性 l多凝集現(xiàn)象 lA/B抗原表達減弱 lABO異常 l獲得性B抗原 lKell血型系統(tǒng)抗原抑制 l溶血 l溫性自身抗體 l冷性自身抗體 可引起血清學問題的一些臨床疾病可引起血清學問題的一些臨床疾病l串錢狀凝集 lABO同種抗體缺乏或減弱 l免疫性ABO抗體 l自身（同種）抗N lHLA抗體 lABO同種抗體的缺乏或減弱 藥物的使用與血型血清學疑難問題藥物的使用與血型血清學疑難問題 假凝集 串錢狀凝集 混合外觀紅細胞 ）獲得額外抗原 DAT陽性 意外的同種抗體 、 意外的ABO同種抗體 、 血漿血漿l發(fā)血漿注意l1、無血型的，必須進行正反

15、血型鑒定并且需復檢血型確認。同型發(fā)血漿。l2、患者紅細胞上有不完全抗體存在，一般情況下，不發(fā)血漿。如患者確實需要血漿，需用凝聚胺交叉配血后，相合、相容可發(fā)。l3、因市血站給我院是少漿血和血漿是1：1供給，故血漿緊缺，一般情況下，單要血漿，我們只能供給1-2包，除臨床說明患者病情危急，我們盡量滿足臨床。血小板血小板l收到血小板輸血單，無血型的，必須進行正反血型鑒定并且需復檢血型確認。l馬上向是血站要或預約好，并且在單子上注明，已約、幾月幾日。l發(fā)機采血小板與血漿一樣，只要同型輸注。l如手工血小板必須進行交叉配血，相合、相容才可發(fā)血小板。住院收費程序l選擇“住院病人信息管理系統(tǒng)”l選擇“住院部工作

16、系統(tǒng)” l用戶部門選擇“血庫”，用自己的帳號登陸 l選擇“醫(yī)技科室自己記帳” l選擇“檢查治療記帳輸入” l輸入病人的病區(qū)和床號，在“助記碼”一欄輸入要收費的項目的拼音首字母，然后按回車，選擇收費的項目，在“數(shù)量”一欄輸入相應的數(shù)量，然后回車。例如“冰凍血漿”輸入“BDXJ”，拼音不分大小寫。Rh(D)陰性患者輸Rh(D)陽性血兩難選擇：不輸血：生命危險，“行政不作為”輸血：中央臺醫(yī)療糾紛官司報道：天津某醫(yī)院年輕女性RH（D）陰性，因車禍，急診輸RH(D)陽性血，（2002年）現(xiàn)在，告，法院判：醫(yī)院輸,負擔60%-。2008年齊魯醫(yī)學院附屬醫(yī)院，一位年輕女子 Rh(D)陰性患者等了6小時，Rh(D)陰性血還是沒有等到，后患者死亡。？“兩利相存取其重，兩害相存取其輕”？患者急需輸血搶救生命，血型難定，怎么辦？沒有同型血，怎么辦？Rh(D)陰性患者輸血，找不到Rh(D)陰性血，怎么辦？交叉配血不合，怎么辦？l疑難血型（A1HA，亞型）鑒定花費時