臨檢培訓(xùn)基因擴(kuò)增技術(shù)在遺傳病基因診斷中的應(yīng)用臨檢培訓(xùn)班

1、臨檢培訓(xùn)基因擴(kuò)增技臨檢培訓(xùn)基因擴(kuò)增技術(shù)在遺傳病基因診斷術(shù)在遺傳病基因診斷中的應(yīng)用臨檢培訓(xùn)班中的應(yīng)用臨檢培訓(xùn)班第二頁(yè)，共84頁(yè)。中心法則中心法則 復(fù) 轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄 翻譯翻譯 DNADNA RNARNA 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 蛋白蛋白 制制 反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄 糖蛋白糖蛋白 脂蛋白脂蛋白 酶類酶類 激素激素 細(xì)胞因子細(xì)胞因子 第三頁(yè)，共84頁(yè)?；蛑亟M技術(shù)基因重組技術(shù) 基因探針技術(shù)基因探針技術(shù) 基因重組藥物 基因診斷 基因治療 PKUPKU 尿毒癥（口服尿毒癥（口服artificial cells)artificial cells)第四頁(yè)，共84頁(yè)?；蛟\斷基因診斷 運(yùn)用基因探針， PCR技術(shù)等探測(cè)特定靶基因的存在

2、與否，或是否有基因突變等缺陷，從而對(duì)疾病或病原體感染作出診斷叫基因診斷。 基因型 表 型 基 臨 血 生 細(xì) 影 病 因 床 清 化 菌 像 理 診 學(xué) 學(xué) 學(xué) 學(xué) 學(xué) 斷 診 診 診 診 診 診 斷 斷 斷 斷 斷 斷第五頁(yè)，共84頁(yè)?；蛟\斷的特點(diǎn)基因診斷的特點(diǎn)靈敏度高（早期）靈敏度高（早期）特異性強(qiáng)特異性強(qiáng)操作簡(jiǎn)便操作簡(jiǎn)便取材大多不受組織器官限制取材大多不受組織器官限制可進(jìn)行早期診斷，癥狀前診斷及產(chǎn)前診斷可進(jìn)行早期診斷，癥狀前診斷及產(chǎn)前診斷檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)病毒等微生物時(shí)不需培養(yǎng)檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)病毒等微生物時(shí)不需培養(yǎng)第六頁(yè)，共84頁(yè)。聚合酶鏈反應(yīng)聚合酶鏈反應(yīng)Polymerase Chain React

3、ionPolymerase Chain Reaction（PCRPCR） Kary B. Mullis1984 年問(wèn)世, 成為分子生物學(xué)和生命科學(xué)發(fā)展史上的里程碑1993 榮獲諾貝爾獎(jiǎng) Mendocin 128號(hào)公路附近一棵七葉樹(shù)下的突發(fā)奇想專利官司之戰(zhàn): DuPont 與Cetus對(duì)薄公堂第七頁(yè)，共84頁(yè)。 PCR PCR 原理示意圖原理示意圖第八頁(yè)，共84頁(yè)。PCRPCR技術(shù)的應(yīng)用技術(shù)的應(yīng)用一、在分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用、在分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用二、遺傳病的基因診斷和產(chǎn)前基因診斷：二、遺傳病的基因診斷和產(chǎn)前基因診斷： 血友病、血友病、 地中海貧血、地中海貧血、DMD、PKU等等等等三、細(xì)菌、

4、支原體、衣原體、立克次體等三、細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體等四、病毒四、病毒五、白血病、腫瘤五、白血病、腫瘤六、骨髓移植、器官移植供體配型選擇六、骨髓移植、器官移植供體配型選擇七、法醫(yī)學(xué)七、法醫(yī)學(xué)八、動(dòng)植物學(xué)八、動(dòng)植物學(xué)九、古人類學(xué)、古生物學(xué)九、古人類學(xué)、古生物學(xué) 第九頁(yè)，共84頁(yè)。第十頁(yè)，共84頁(yè)。第十一頁(yè)，共84頁(yè)。 PCR原理示意圖第十二頁(yè)，共84頁(yè)。熱變性：從外周血白細(xì)胞或絨毛、羊水細(xì)胞提取的DNA約1ug，在含有適當(dāng)緩沖液、引物、dNTPs（dATP、dCTP、dGTP及dTTP）等的反應(yīng)混合物中，在94下熱變性4分鐘，使之解為單鏈。 第十三頁(yè)，共84頁(yè)。退火：然后置反應(yīng)混合物于5

5、5，使引物與解為單鏈的DNA上互補(bǔ)序列雜交在一起，稱之為退火。并迅速加入2單位耐熱的Taq DNA聚合酶，混勻、離心10秒鐘。為防止在整個(gè)PCR過(guò)程中，水份的蒸發(fā)影響PCR效果，通常加入35ul石蠟油封蓋液面。 第十四頁(yè)，共84頁(yè)。引物延伸：置上述反應(yīng)混合物于70水浴中1-2分鐘，在DNA聚合酶催化作用下，以dNTPs為原料（底物），從引物的3端A開(kāi)始, 沿著53的方向，合成每條模板的互補(bǔ)鏈，此稱引物延伸。結(jié)果，DNA拷貝數(shù)增加了一倍。 第十五頁(yè)，共84頁(yè)。接著，將上述熱變性退火引物延伸（稱為一個(gè)循環(huán)）反復(fù)進(jìn)行30-35次。只是熱變性的時(shí)間縮短為1分鐘左右。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，DNA拷貝數(shù)便增加一

6、倍（2）。因此，如進(jìn)行n次循環(huán)，則拷貝數(shù)將增加2n倍！進(jìn)行25個(gè)循環(huán)，則拷貝數(shù)將增加225倍，即上百萬(wàn)倍。在瓊脂糖凝膠電泳上可看到特異性長(zhǎng)度的擴(kuò)增帶?？梢?jiàn)PCR之所以高速擴(kuò)增的關(guān)鍵是因?yàn)槊看涡潞铣傻腄NA鏈在后來(lái)的循環(huán)中都可以作模板，猶如滾雪球，數(shù)量迅速增加。 第十六頁(yè)，共84頁(yè)。如果引物5端有幾個(gè)與模板DNA不配對(duì)的堿基，仍可能與模板DNA退火、延伸，對(duì)PCR效果影響不大。這一特點(diǎn)，可使PCR產(chǎn)物兩端帶上限制酶的Linker，或造成DNA順序的缺失、插入、堿基替代等。大大增大了PCR技術(shù)的應(yīng)用范圍。 第十七頁(yè)，共84頁(yè)。影響PCR效果的重要因素及注意事項(xiàng)：PCR技術(shù)的原理似乎非常簡(jiǎn)單明了，P

7、CR反應(yīng)的操作也并不復(fù)雜；但要取得好的結(jié)果和良好的可重復(fù)性并非易事。必須徹底弄通其分子生物學(xué)的奧妙之處，并把握其各種影響因素，規(guī)范操作。以下列出影響PCR擴(kuò)增效果的主要因素 第十八頁(yè)，共84頁(yè)。引物設(shè)計(jì)一定要科學(xué)合理，序列的特異性要高。長(zhǎng)度一般在18-25個(gè)堿基，Tm值可按公式（G+C總數(shù)x4）+（A+T總數(shù)x2）（）估算。盡可能避開(kāi)4個(gè)以上G或C等相同堿基串聯(lián)重復(fù)。盡可能避免引物內(nèi)部形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)或引物之間形成二聚體（Dimer）的可能性。G、C與A、T的比例盡可能1:1左右。同一反應(yīng)管中的引物（甚至同一個(gè)Lab的所有引物）Tm值設(shè)計(jì)的相同。 第十九頁(yè)，共84頁(yè)。引物在反應(yīng)體系中的濃度要經(jīng)過(guò)優(yōu)

8、化。雙重PCR及多重PCR對(duì)各引物濃度間的比例要求更嚴(yán)。 基因組DNA制備液純度要好。其用量也并非越多越好。 各種試劑小量分裝保存，避免多次凍融。dNTP濃度要優(yōu)化。 第二十頁(yè)，共84頁(yè)。退火溫度參考Tm值進(jìn)行優(yōu)化。其對(duì)PCR的成敗，非特異產(chǎn)物的出現(xiàn)與否關(guān)系最大。Taq DNA聚合酶的廠牌、批號(hào)和用量均要合適。對(duì)擴(kuò)增難度較大的PCR，Mg2+濃度要適當(dāng)增加。操作者的手法也有影響，要在實(shí)踐中總結(jié)提高技術(shù)。 第二十一頁(yè)，共84頁(yè)。熒光定量PCR行HLA-DrB1位點(diǎn)分型法的建立及與血清學(xué)方法的比較第二十二頁(yè)，共84頁(yè)。HLA分型技術(shù)HLA（人類白細(xì)胞抗原）MHC區(qū)基因（主要組織相容性復(fù)合物基因區(qū)）

9、 高度多態(tài)性的基因區(qū)第二十三頁(yè)，共84頁(yè)。HLA分型技術(shù)一、淋巴細(xì)胞微量細(xì)胞毒試驗(yàn)一、淋巴細(xì)胞微量細(xì)胞毒試驗(yàn) 1964年，年，Paul Terasaki, LA, USA二、二、DNA分型法分型法 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 1. 血樣不要求新鮮血樣不要求新鮮; 2. 白血病患者白血病患者WBC表面抗原被破壞表面抗原被破壞, 只只 能用能用DNA分型法分型法; 3. 結(jié)果更準(zhǔn)確可靠結(jié)果更準(zhǔn)確可靠第二十四頁(yè)，共84頁(yè)。HLA分型技術(shù)nDNA-RPLP, 1982nPCR/SSOnPCR/反向斑點(diǎn)雜交nPCR/SSCPnPCR/SSPnPCR/SBTnR-Q-PCR/SSPnPCR/dHPLC等第二十五頁(yè)，共8

10、4頁(yè)。 在序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-SSP）技術(shù)基礎(chǔ)上，將熒光定量PCR（FQ-PCR）技術(shù)與SSP結(jié)合起來(lái)，建立了自動(dòng)化程度更高的熒光定量PCR- HLA分型技術(shù)，完成了46例尸腎供受者的HLA-DBR1分型。 FQ-PCR不需走電泳，減少了污染的機(jī)會(huì)，提高了自動(dòng)化程度。同時(shí)又開(kāi)展了以DNA測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)的HLA分型（SBT）技術(shù)。第二十六頁(yè)，共84頁(yè)。三、主要方法： 1、HLA血清學(xué)分型。 2、常規(guī)PCR-SSP反應(yīng)。 3、SBT分型法： (1)PCR擴(kuò)增DRB1片段。 (2)用ABI-373型自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序。 (3)測(cè)序數(shù)據(jù)分析及分型。第二十七頁(yè)，共84頁(yè)。 結(jié)果和討論一、進(jìn)行PC

11、R-SSP法HLA-DRB1位點(diǎn)分型：第二十八頁(yè)，共84頁(yè)。第二十九頁(yè)，共84頁(yè)。第三十頁(yè)，共84頁(yè)。4、熒光定量PCR技術(shù)原理： 第三十一頁(yè)，共84頁(yè)。圖3、熒光定量PCR中反應(yīng)前的模板濃度與Ct值成反比第三十二頁(yè)，共84頁(yè)。n圖4、15 R-II號(hào)樣本熒光定量分型結(jié)果第三十三頁(yè)，共84頁(yè)。n圖5、SSP分型結(jié)果與上述一致第三十四頁(yè)，共84頁(yè)。FQ-PCR分型的優(yōu)點(diǎn)： (1)熒光定量分型法省去了電泳分析、UVP成像的操作，簡(jiǎn)化步驟，提高自動(dòng)化程度，減少了工作量。 (2)判讀結(jié)果與擴(kuò)增由儀器同時(shí)完成，節(jié)省了PCR后處理的時(shí)間，結(jié)果更客觀。 (3)將引物的特異性和探針的特異性結(jié)合，提高了準(zhǔn)確性。

12、第三十五頁(yè)，共84頁(yè)。(4)只需在反應(yīng)前打開(kāi)離心管一次，即可完成所有的操作，減少了污染的機(jī)會(huì)，進(jìn)一步提高了特異性和靈敏性。(5)本FQ-PCR HLA DRB1配型較常規(guī)FQ-PCR減少了合成的熒光探針數(shù)量。(6)可得出起始模板拷貝數(shù)定量結(jié)果。第三十六頁(yè)，共84頁(yè)。基因擴(kuò)增技術(shù)在遺傳病基因診斷中的應(yīng)用特點(diǎn)：PCR技術(shù)一問(wèn)世，首先就應(yīng)用于珠蛋白生成障礙性貧血等遺傳病的基因診斷。不但要查特定基因是否存在，而且要查出相應(yīng)功能基因的缺陷：突變？缺失？插入？倒位？等等。采用的技術(shù)更復(fù)雜、多樣，與檢測(cè)病毒、細(xì)菌的要求不完全相同。實(shí)驗(yàn)室的驗(yàn)收。第三十七頁(yè)，共84頁(yè)?；驍U(kuò)增技術(shù)在遺傳病基因診斷中的應(yīng)用技術(shù)：

13、PCR/凝膠電泳 PCR/RFLP PCR/SSCP PCR/ASO(Allile-specific oligoprobe) PCR/sequencing ASA(Allile-specific Amplification) m-PCR(multiplex PCR) F-Q-PCR(Real-Time PCR)第三十八頁(yè)，共84頁(yè)。 血友病甲基因診斷劉敬忠，梁燕，王立榮，肖白，朱章菱，周艷，劉亮，張晶 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽(yáng)醫(yī)院 北京基因診斷實(shí)驗(yàn)室 北京朝陽(yáng)醫(yī)院法醫(yī)物證司法鑒定所第三十九頁(yè)，共84頁(yè)。甲型血友病因子基因倒位的研究及檢測(cè)新技術(shù)： 血友病甲（HA）是常見(jiàn)的X-連鎖遺傳性出血性疾病

14、，是由于凝血因子（F）基因缺陷所致。約半數(shù)重型HA的患者，是由于F基因第22內(nèi)含子（IVS22）發(fā)生基因倒位所致。迄今，國(guó)際上檢測(cè)這種基因倒位都是用Southern印跡雜交技術(shù)。雖然這種技術(shù)能夠準(zhǔn)確的查出這種基因倒位，但操作步驟多，流程長(zhǎng)，出結(jié)果慢，難度大，需要DNA樣品量大以及操作放射性同位素標(biāo)記的探針等。我們從1996年開(kāi)始在國(guó)際上率先研究利用長(zhǎng)距離DNA擴(kuò)增技術(shù)（LD-PCR），替代Southern雜交進(jìn)行F基因倒位的診斷。經(jīng)過(guò)近二年的努力終獲成功，并進(jìn)行了推廣應(yīng)用。主要完成了以下幾方面工作：第四十頁(yè)，共84頁(yè)。第四十一頁(yè)，共84頁(yè)。自行設(shè)計(jì)合成了長(zhǎng)距離PCR的四個(gè)引物P、Q、A、B。預(yù)

15、期擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度P/Q為12Kb，A/B為10Kb，P/B及A/Q為11Kb。第四十二頁(yè)，共84頁(yè)。 四引物及三引物L(fēng)D-PCR體系的比較第四十三頁(yè)，共84頁(yè)。 系統(tǒng)優(yōu)化了引物濃度，酶用量，deaza-dGTP的比例，DMSO濃度，基因組DNA的質(zhì)量和用量，退火及延伸溫度、時(shí)間，低濃度瓊脂糖凝膠電泳條件及操作方法等。使10-12Kb DNA擴(kuò)增及檢測(cè)倒位終獲成功。這充分體現(xiàn)了該成果的科學(xué)性和先進(jìn)性第四十四頁(yè)，共84頁(yè)。不同量模板不同量模板DNADNA對(duì)對(duì)LD-PCR LD-PCR 的影響的影響1-51-5號(hào)的號(hào)的DNADNA量分別為量分別為0.250.25，0.50.5，0.750.75，1.0

16、1.0，1.25g1.25g第四十五頁(yè)，共84頁(yè)。不同量不同量deaza-dNTPdeaza-dNTP對(duì)對(duì)LD-PCRLD-PCR的影響的影響1-51-5號(hào)號(hào)dNTPdNTP濃度分別為濃度分別為200200，300300，400400，500500，600M600M第四十六頁(yè)，共84頁(yè)。 53份重型HA患者及家系成員DNA標(biāo)本，分別用經(jīng)典的Southern印跡雜交和本LD-PCR技術(shù)在雙盲條件下進(jìn)行F基因倒位檢測(cè)。兩者得出的診斷結(jié)論完全一致。表明用LD-PCR技術(shù)診斷該基因倒位，檢出攜帶者的特異性和靈敏度均達(dá)到百分之百。而且具有操作步驟較簡(jiǎn)便，需DNA量少，出結(jié)果快，不需操作放射性同位素標(biāo)記探

17、針，在無(wú)法取得先癥者患兒血樣的情況下，也可直接查攜帶者是否攜帶倒位基因，如果是可直接做產(chǎn)前診斷等優(yōu)點(diǎn)。第四十七頁(yè)，共84頁(yè)。雙盲實(shí)驗(yàn)（53份DNA）結(jié)果證明：LD-PCR可獨(dú)立用于重型HA基因倒位的檢測(cè)第四十八頁(yè)，共84頁(yè)。應(yīng)用實(shí)驗(yàn)成功的LD-PCR技術(shù)，對(duì)來(lái)自北京、天津、江蘇、湖北、廣西、四川、山東、福建等省市的108 個(gè)重型HA患者及數(shù)目不等的家系成員進(jìn)行了檢測(cè)，共查出F基因倒位47例，占44%，與國(guó)際上用Southern雜交技術(shù)查出的基因倒位引起的HA約占重型HA的40-50%一致。另外，檢出30余位倒位基因攜帶者，為將來(lái)開(kāi)展產(chǎn)前基因診斷，杜絕新的HA患兒出生打下了基礎(chǔ)，對(duì)優(yōu)生、提高人口

18、素質(zhì)有重要意義。第四十九頁(yè)，共84頁(yè)。第五十頁(yè)，共84頁(yè)。14個(gè)個(gè)DNA標(biāo)本標(biāo)本LD-PCR電泳結(jié)果電泳結(jié)果M：DNA/Hind酶解產(chǎn)物，三條帶分別為酶解產(chǎn)物，三條帶分別為23.1kb，9.4kb，6.6kb第五十一頁(yè)，共84頁(yè)。第五十二頁(yè)，共84頁(yè)。美國(guó)Steve.S.Sommer去年與我們同期發(fā)表了一篇類似技術(shù)方法的摘要文章。但我們較他們有兩個(gè)顯著不同特點(diǎn)：一是我們強(qiáng)調(diào)了運(yùn)用P、Q和B這三個(gè)引物就完全可以滿足診斷的需要，省去一個(gè)引物A，減少一條10Kb擴(kuò)增帶。這條10Kb帶是多余的，且使11Kb及12Kb帶出現(xiàn)的難度增大。二是我們研究成功方法后，立即迅速應(yīng)用于患者及其家系的診斷和攜帶者檢出

19、，現(xiàn)已達(dá)一百余家系，產(chǎn)生了很大社會(huì)效益和一定的經(jīng)濟(jì)效益，并開(kāi)始向兄弟單位推廣應(yīng)用。第五十三頁(yè)，共84頁(yè)。 HA8家系家系 PCR/Bcl酶解分析結(jié)果酶解分析結(jié)果M: pBR322/Msp；0:-2（酶解前）擴(kuò)增帶長(zhǎng)（酶解前）擴(kuò)增帶長(zhǎng)374bp，圖中圖中211bp和和163bp為酶解后產(chǎn)物為酶解后產(chǎn)物 M 3 1 2 1 2 0 第五十四頁(yè)，共84頁(yè)。 HA15家系家系 St14位點(diǎn)位點(diǎn)VNTR多態(tài)基因連鎖分析結(jié)果多態(tài)基因連鎖分析結(jié)果M: X174/Hae M 12321第五十五頁(yè)，共84頁(yè)。HA18家系內(nèi)含子家系內(nèi)含子13（A）和內(nèi)含子）和內(nèi)含子22（B）可變串聯(lián)重復(fù)數(shù)目多態(tài)性分）可變串聯(lián)重復(fù)

20、數(shù)目多態(tài)性分析結(jié)果析結(jié)果A為內(nèi)含子為內(nèi)含子13中（中（CA）重復(fù)分型結(jié)果：）重復(fù)分型結(jié)果：-1為為21/-，-2為為21/20，-2為為22/20，-1為為21/-，-1為為21/21，她是攜帶者；，她是攜帶者；B為內(nèi)含子為內(nèi)含子22中（中（GT）（AG）重復(fù)分型結(jié)果：）重復(fù)分型結(jié)果：-1為為26/-，-2為為26/26，-2為為27/26，-1為為26/25，-1為為25/- 1 2 2 1 1 1 2 2 1 1第五十六頁(yè)，共84頁(yè)。血友病乙的基因診斷，攜帶者檢出和產(chǎn)前診斷劉敬忠 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽(yáng)醫(yī)院 北京基因診斷實(shí)驗(yàn)室 北京朝陽(yáng)醫(yī)院法醫(yī)物證司法鑒定所第五十七頁(yè)，共84頁(yè)。血友病乙

21、的基因診斷，攜帶者檢出和產(chǎn)前診斷第五十八頁(yè)，共84頁(yè)。缺失型-地中海貧血基因診斷技術(shù)的改進(jìn)劉敬忠，周桔，王立榮，周艷 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽(yáng)醫(yī)院 北京基因診斷實(shí)驗(yàn)室 北京朝陽(yáng)醫(yī)院法醫(yī)物證司法鑒定所第五十九頁(yè)，共84頁(yè)。第六十頁(yè)，共84頁(yè)。臨床診斷Barts（-/-/-）n基因型n臨床分型靜止型靜止型（- -/）-SEA-3.7-4.2標(biāo)準(zhǔn)型標(biāo)準(zhǔn)型（-/-/）HbH病病（-/-/-）第六十一頁(yè)，共84頁(yè)。 問(wèn)題：PCR技術(shù)可重復(fù)性差, 難度大， 結(jié)果判斷復(fù)雜， 引物設(shè)計(jì)有待改進(jìn) 措施：1、重新設(shè)計(jì)引物 2、改進(jìn)和優(yōu)化PCR反應(yīng)體系 酶、deaza-dGTP、DMSO、 退火溫度、gradien

22、t gel等 第六十二頁(yè)，共84頁(yè)。A B C A B C GE S1 S2 S3 M1 1 2 3 4 5 6 M2 7 8 9 M2 10 11 12 M31.2%/2.0%濃度梯度瓊脂糖凝膠1，4，正常（/）；2，5，-3.7/；3，6，-3.7/-SEA；7，/；8，-4.2/；9，12，-4.2/-SEA；10，/；11，-SEA/-SEA；12，9，-4.2/-SEA1.58Kb287 bp173 bp1.9 Kb1.7 Kb第六十三頁(yè)，共84頁(yè)。根據(jù)本試劑盒三個(gè)根據(jù)本試劑盒三個(gè)PCR反應(yīng)產(chǎn)物的電泳圖譜反應(yīng)產(chǎn)物的電泳圖譜作出基因診斷作出基因診斷第六十四頁(yè)，共84頁(yè)。單管四重PCR試

23、劑盒檢測(cè)-珠蛋白的基因三種缺失類型及引物設(shè)計(jì)示意圖 第六十五頁(yè)，共84頁(yè)。10種DNA的四重PCR圖譜M N -3.7/aa -4.2/aa -3.7/-3.7 -4.2/-4.2-3.7/-4.2-/-3.7/-4.2/-aa/-all M運(yùn)運(yùn) 用用 單單 管管 四四 重重 PC R檢檢 測(cè)測(cè) 導(dǎo)導(dǎo) 致致 -地地 中中 海海 貧貧 血血 的的 -珠珠 蛋蛋 白白 基基 因因 3種種 缺缺 失失-3.7(-3.7),右 缺 ； -4.2(-4.2),左 缺 ;-(-SE A),東 南 亞 缺 失 ;M : D N A /EcoR I+H indK b1.91.61.50.8第六十六頁(yè)，共84頁(yè)

24、。25個(gè)海南黎族人DNA的擴(kuò)增圖譜第六十七頁(yè)，共84頁(yè)。 20個(gè)廣西、廣東-地貧68標(biāo)本的多重PCR擴(kuò)增圖第六十八頁(yè)，共84頁(yè)。根據(jù)圖譜作出診斷 擴(kuò)增帶電擴(kuò)增帶電電泳圖電泳圖 及診斷及診斷序號(hào)序號(hào) 0.8Kb 1.6Kb1.9Kb1.5Kb診診 斷斷1-+-正常正常(/);但不排除但不排除/T的可能性的可能性2-+-3.7攜帶者攜帶者(-3.7/)3-+-4.2攜帶者攜帶者(-4.2/) 4-+-3.7純合子純合子(-3.7/-3.7) 5-+-4.2純合子純合子(-4.2/-4.2) 6-+-+-3.7/-4.2雙重雜合子雙重雜合子 7+-SEA/- -SEA巴氏水腫胎兒巴氏水腫胎兒 8+-SEA /-3.7 (缺失型缺失型HbH病病) 9+-+-SEA /-4.