濕熱滅菌詳解

1、滅菌工藝的驗證 方法設(shè)計方法設(shè)計 裝載類型裝載類型 工藝類型工藝類型 工藝研發(fā)工藝研發(fā) 性能確認性能確認 連續(xù)控制連續(xù)控制工藝研發(fā)階段工藝確認階段非產(chǎn)品非產(chǎn)品特異性滅菌特異性滅菌工藝（過度工藝（過度殺來滅法）殺來滅法）產(chǎn)品特異性產(chǎn)品特異性滅菌工藝滅菌工藝蒸汽不可蒸汽不可穿透型物品穿透型物品（液體型）（液體型）蒸汽可穿透蒸汽可穿透型物品型物品飽和蒸汽型飽和蒸汽型預(yù)真空式預(yù)真空式重力式重力式空氣超壓型空氣超壓型蒸汽蒸汽/空氣空氣混合方式混合方式過熱水方式過熱水方式確定參數(shù)確定參數(shù)升溫階段升溫階段保溫階段保溫階段降溫階段降溫階段物理學(xué)方法物理學(xué)方法溫度分布溫度分布熱穿透熱穿透生物學(xué)方法生物學(xué)方法日常

2、放行日常放行工藝評估工藝評估系統(tǒng)系統(tǒng)適用性適用性再確認再確認變更控制變更控制目錄1.濕熱滅濕熱滅菌的介紹紹1. 濕熱滅菌工藝的驗證實際上是對產(chǎn)品、滅菌設(shè)備和裝載方式的驗證。驗證活動包括：對照滅菌設(shè)備設(shè)計的滅菌參數(shù)來校對核滅菌器的性能；建立某產(chǎn)品及裝載方式的滅菌程序的有效性和重現(xiàn)性；估計滅菌過程中產(chǎn)品可能發(fā)生的變化。1.濕熱滅濕熱滅菌工藝藝程序的開發(fā)開發(fā)2.目前，國內(nèi)已開發(fā)應(yīng)用的濕熱滅菌工藝有：采用附加排氣系統(tǒng)的飽和蒸汽滅菌工藝、采用附加真空系統(tǒng)的飽和蒸汽工藝、采用附加空氣加壓系統(tǒng)的飽和蒸汽滅菌工藝。濕熱滅菌條件有滅菌釜內(nèi)熱分布均一。要求從產(chǎn)品達到滅菌溫度時起。直至加熱結(jié)束。整個過程中溫度都能夠

3、保持在+-0.5攝氏度的波動范圍之內(nèi)；檢查每種滅菌物裝載方式的熱分布是否一致；滅菌釜內(nèi)部及滅菌物的溫度不得低于預(yù)訂的滅菌工序所規(guī)定的溫度；確定滅菌釜抽真空所需要的時間，滿足熱分布的要求；確定滅菌物達到滅菌溫度的時間確定滅菌后可以將設(shè)備冷卻至四十攝氏度以下所需的時間濕熱滅菌的標準滅菌時間不小與81.濕熱滅濕熱滅菌工藝藝程序的開發(fā)開發(fā)2.熱敏感性物品產(chǎn)品特定性滅菌工藝過度殺滅菌法滅菌工藝物品類型排除空氣？需要過壓空氣蒸汽穿透型液體型是否是否是否是否已安裝預(yù)真空裝置預(yù)真空式滅菌工藝重力沉降式滅菌工藝任何濕熱滅菌工藝可直接與水接觸過熱水滅菌工藝蒸汽-空氣混合型滅菌工藝2.濕熱滅濕熱滅菌設(shè)備設(shè)備的確認認

4、3.對于濕熱滅菌設(shè)備，應(yīng)具備以下條件：設(shè)備能夠承受內(nèi)部滅菌工藝所需的蒸汽壓力，同時為保證滅菌腔室內(nèi)蒸汽分布的均一性濕熱滅菌設(shè)備的門，應(yīng)設(shè)計有防止在蒸汽壓力下門被打開的安全裝置在內(nèi)腔室內(nèi)部和夾套上分別設(shè)置輸水裝置濕熱滅菌設(shè)備應(yīng)具有較強的溫度控制能力具有熱風(fēng)干燥功能的設(shè)備，還應(yīng)設(shè)置滅菌腔室內(nèi)對外的進氣通道，該通道應(yīng)設(shè)置截流微生物的呼吸過濾器濕熱滅菌設(shè)備應(yīng)安裝有一系列的計量儀器裝置。3.濕熱滅濕熱滅菌工藝藝（性能）驗證驗證4.一臺濕熱滅菌設(shè)備在安裝確認以及運行確認以后，需要進行性能驗證。濕熱滅菌設(shè)備的性能驗證則由使用單位完成。驗證實驗應(yīng)根據(jù)設(shè)定的滅菌程序，證實待滅菌品運行的可靠性及滅菌程序的重現(xiàn)性。

5、驗證實驗包括：滅菌柜的熱分布實驗、各種待滅菌品在滿載方式下的熱穿透實驗等。3.濕熱滅濕熱滅菌工藝藝（性能）驗證驗證4.（一）、熱分布實驗 根據(jù)設(shè)定的滅菌工藝，對瓶內(nèi)藥液進行升溫、保溫、降溫的整個過程中，滅菌柜內(nèi)部任何一點的溫度都應(yīng)達到工藝規(guī)定的溫度。局部藥液溫度過高，將會導(dǎo)致藥液變色，有效成分降解。局部藥液溫度過低或靜止時間過長，可產(chǎn)生顆粒沉淀或滅菌不徹底等不良效果。3.濕熱滅濕熱滅菌工藝藝（性能）驗證驗證4.熱分布實驗分兩步進行，即空載熱實驗和裝載熱實驗。實驗中采用的各個參數(shù)及裝載方式應(yīng)與正常生產(chǎn)相同。1.熱電隅校正 校正的目的是通過測量標準熱電隅的誤差值，修正熱分布實驗的結(jié)果。用于校正的主

6、要儀器有溫度干井、基準水晶溫度計、標準熱電隅、多點溫度記錄儀，中心工作站等。2.空載熱分布實驗 滅菌柜不放置滅菌產(chǎn)品，即為空載?？蛰d熱分布實驗的目的是檢查并確認滅菌器在預(yù)定的滅菌條件下，空載運行時滅菌柜內(nèi)的溫度均勻性符合產(chǎn)品工藝要求，確認滅菌器控制用傳感器位于滅菌柜內(nèi)的冷點位置。3.裝載熱分布實驗 裝載熱分布實驗的目的是保證藥品在滅菌柜中的熱分布均勻性和合理的產(chǎn)量。裝載熱分布實驗是將待滅菌產(chǎn)品以不同裝載方式裝在滅菌柜中，采用至少十只標準熱電隅做溫度探頭，通過驗證接口固定在滅菌柜內(nèi)不同位置，其中一支標準電熱隅固定在溫度控制和記錄的傳感器旁，其余標準熱電隅至于腔室各處，并要求各支標準熱電隅的感溫點

7、懸空。3.濕熱滅濕熱滅菌工藝藝（性能）驗證驗證4.(二)熱穿透試驗熱穿透試驗的目的是確定滅菌柜裝載中的“最冷點”，并確認該點在預(yù)定的滅菌條件中獲得足夠的無菌保證值。熱穿透試驗是將待滅菌產(chǎn)品已滿載方式裝在滅菌柜中，標準熱電偶插于待滅菌產(chǎn)品中心部位，按裝載熱分布試驗規(guī)程進行。在預(yù)定的滅菌條件下連續(xù)滅菌3次，按表記錄不同位置的標準滅菌時間F。值，將每次試驗中的“最低F。值”與平均F。值相比較，差值應(yīng)2.5。并通過熱穿透試驗結(jié)果的分析，確定滅菌柜裝載中的“最冷點”以及“冷點位置”能獲得足夠的無菌保證值。3.濕熱滅濕熱滅菌工藝藝（性能）驗證驗證4.確認蒸汽滅菌的效果試驗確認蒸汽滅菌的效果試驗往往使用生物

8、指示劑法，又稱微生物挑戰(zhàn)性試驗。該試驗是將一定量脂肪嗜熱芽孢桿菌或生孢梭菌的耐熱孢子接種入待滅菌產(chǎn)品中，在設(shè)定滅菌條件下進行滅菌。如對輸液劑的蒸汽滅菌效果試驗，接種的樣品不少于20瓶，樣品置于“冷點”，隨同生產(chǎn)品種一起在稍低于設(shè)定F。值下進行滅菌。樣品在30-35或50-60條件下培養(yǎng)、計數(shù)，如微生物殘存率小于106，則證明該滅菌條件可滿足產(chǎn)品的F。值。以上試驗至少進行3次。 3.濕熱滅濕熱滅菌工藝藝（性能）驗證驗證4.試驗操作步驟如下1、生物指示劑紙上活菌數(shù)和或芽孢數(shù)的確認（1）使用無菌操作方法打開5個生物指示劑小瓶，將5條芽孢紙片轉(zhuǎn)移至一個無菌研缽中，加入0.5ml生理鹽水，研碎紙片，制成

9、芽孢混懸液。（2）分別吸取1ml芽孢混懸液，加入已有9ml鹽水的試管中，將試管標明1號和2號。（3）將1號試管放置于80水浴中加熱處理15min（4）用鹽水將上訴兩管做連續(xù)10倍稀釋（10-1,10-2,10-3）（5）吸取熱處理組（1號）和未處理組（2號）后兩個稀釋度（10-2,10-3）混懸液1ml，分別加入兩個無菌平皿中，然后倒入15-20ml冷卻至50左右的TSA（胰蛋白胨大豆瓊脂）培養(yǎng)基，混合后冷卻。（6）倒置平皿，在56下培養(yǎng)48h（7）培養(yǎng)結(jié)束后，技術(shù)每個平皿碟上的菌落數(shù)，然后算出生物指示劑紙片上平均實際活菌數(shù)和活芽孢數(shù)。3.濕熱滅濕熱滅菌工藝藝（性能）驗證驗證4.（8）如果每條

10、紙片上的平均活菌數(shù)不小于制造商標明的平均數(shù)的95，同時紙片上的活芽孢數(shù)也不小于活菌數(shù)的一般，則該生物指示劑可以使用。2、將各生物指示劑置于熱電偶旁。3、按照滅菌柜驗證規(guī)程運行一個滅菌周期。4、滅菌結(jié)束后，待滅菌柜冷卻，打開柜門，立即取出所有生物指示劑送微生物實驗室培養(yǎng)5、壓碎生物指示劑中的安瓿瓶，按同樣操作方法將一個未經(jīng)滅菌處理的生物指示劑作為陽性對照，56下培養(yǎng)48h6、結(jié)果觀察及分析（1）分別在培養(yǎng)24h后及48h檢查生物指示劑是否有顏色變化，如果呈黃色（陽性顯示）則表明有細菌生長，如果沒有顏色變化，則表明已獲得了足夠的無菌保證值。（2）陽性對照生物指示劑必須在24h內(nèi)出現(xiàn)顏色變化4.濕熱滅濕熱滅菌實驗實驗介紹紹5.實驗試劑實驗安裝4.濕熱滅濕熱滅菌實驗實驗介紹紹5.