真核生物復(fù)制

1、ORC：Origin Recognition Complex5、真核生物復(fù)制的起始、真核生物復(fù)制的起始“Licensing mechanisms”S期期 DNA合成合成MCM：微染色體支持蛋白：微染色體支持蛋白（一）（一） 原核生物原核生物DNADNA鏈的延伸鏈的延伸延伸延伸反應(yīng)反應(yīng)：在在RNARNA引物的引物的OHOH端由端由DNADNA聚合酶聚合酶IIIIII，按堿基互補(bǔ)按堿基互補(bǔ)規(guī)則延伸。規(guī)則延伸。前導(dǎo)鏈的延長前導(dǎo)鏈的延長： 3 355方向這條鏈做模板鏈的方向這條鏈做模板鏈的新鏈合成可以隨著復(fù)制叉向前移動，連續(xù)合成新鏈合成可以隨著復(fù)制叉向前移動，連續(xù)合成（5 5 3 3）。 5 5 3

2、3 方向這條鏈做模板鏈的新鏈合成則不方向這條鏈做模板鏈的新鏈合成則不能隨著復(fù)制叉向前移動能隨著復(fù)制叉向前移動進(jìn)行進(jìn)行連續(xù)合成，只能分連續(xù)合成，只能分段合成一小段，這一小段新合成的段合成一小段，這一小段新合成的DNADNA鏈稱岡鏈稱岡奇片段。每一段新合成的一小段中奇片段。每一段新合成的一小段中有有RNARNA，由由RNARNA酶水解，酶水解，DNADNA聚合酶聚合酶I I補(bǔ)平，補(bǔ)平，最后由連接最后由連接酶酶連接。連接。1 1) DNA) DNA聚合酶不能從頭合成新鏈，只能在聚合酶不能從頭合成新鏈，只能在3 3- -OHOH羥基端延長。復(fù)制羥基端延長。復(fù)制起始起始時的時的3 3- -OHOH羥基端

3、是羥基端是RNARNA。2) 2) 按照堿基互補(bǔ)原則合成新鏈。按照堿基互補(bǔ)原則合成新鏈。3 3) ) 兩條鏈同時復(fù)制，新鏈的延伸方向是兩條鏈同時復(fù)制，新鏈的延伸方向是5 533，一條鏈連續(xù)合成，稱主導(dǎo)鏈，另一條鏈不連，一條鏈連續(xù)合成，稱主導(dǎo)鏈，另一條鏈不連續(xù)合成，稱隨從鏈（后隨鏈）。續(xù)合成，稱隨從鏈（后隨鏈）。4) 復(fù)制以雙向進(jìn)行，復(fù)制正在進(jìn)行的部位稱復(fù)制以雙向進(jìn)行，復(fù)制正在進(jìn)行的部位稱復(fù)制叉（復(fù)制叉（Replication forkReplication fork）, , 復(fù)制叉從起始復(fù)制叉從起始點沿著點沿著DNADNA移動。移動。1、前導(dǎo)鏈的延伸前導(dǎo)鏈的延伸 PolPol 合成一段新鏈合成

4、一段新鏈 在在RFCRFC和和PCNAPCNA協(xié)助下，協(xié)助下， PolPol PolPol 轉(zhuǎn)換轉(zhuǎn)換 由由Pol Pol 完成全部前導(dǎo)鏈的合成完成全部前導(dǎo)鏈的合成2 2、后隨鏈的延伸、后隨鏈的延伸型：細(xì)菌 滾環(huán)式滾環(huán)式 X174 D型型 線粒體線粒體DNAA protein: Phage 編碼編碼滾環(huán)可形成多聯(lián)體滾環(huán)可形成多聯(lián)體裸露閉環(huán)雙鏈狀裸露閉環(huán)雙鏈狀 D型復(fù)制型復(fù)制 H鏈：富含鏈：富含G L鏈：富含鏈：富含CDNA聚合酶聚合酶 對于對于線性線性DNA復(fù)制例如復(fù)制例如 噬菌體等比較簡噬菌體等比較簡單，復(fù)制到單，復(fù)制到分子末端終止。分子末端終止。 對于對于環(huán)狀環(huán)狀的大腸桿菌的大腸桿菌DNA復(fù)

5、制和真核生復(fù)制和真核生物的物的DNA復(fù)制就比較復(fù)雜。復(fù)制就比較復(fù)雜。 復(fù)制叉到達(dá)終止區(qū)，完成復(fù)制前，復(fù)制暫停。兩個子復(fù)制叉到達(dá)終止區(qū)，完成復(fù)制前，復(fù)制暫停。兩個子代代DNA纏繞在一起，需要分開。纏繞在一起，需要分開。 大腸桿菌：大腸桿菌： 有復(fù)制起始點，也有復(fù)制終止點。有復(fù)制起始點，也有復(fù)制終止點。 細(xì)菌復(fù)制終止區(qū)含有多個約細(xì)菌復(fù)制終止區(qū)含有多個約22bp的終止子的終止子(terminator)位點，位點，E. coli 有有7個終止子位點。個終止子位點。 Tus: Terminus utilization substance 線性線性DNA在復(fù)制完成后，其末端由于引物在復(fù)制完成后，其末端由于

6、引物RNA的水解而可能出現(xiàn)縮短，需要在的水解而可能出現(xiàn)縮短，需要在端粒酶端粒酶（telomerase）的催化下，進(jìn)行延長反應(yīng)。）的催化下，進(jìn)行延長反應(yīng)。5 3 3 5 5 3 3 5 端粒端粒DNA： 端粒和端粒酶發(fā)現(xiàn)大事記端粒和端粒酶發(fā)現(xiàn)大事記 19391939年，年，Barbara McClintockBarbara McClintock發(fā)現(xiàn)玉米細(xì)胞的染色體斷裂發(fā)現(xiàn)玉米細(xì)胞的染色體斷裂末端容易融合末端容易融合19721972年，年，James WatsonJames Watson提出染色體復(fù)制的末端隱縮問題提出染色體復(fù)制的末端隱縮問題19781978年，報道年，報道四膜蟲四膜蟲的端粒序列的

7、端粒序列19821982年，端粒的發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致人工染色體的發(fā)明年，端粒的發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致人工染色體的發(fā)明19841984年，報道年，報道酵母酵母的端粒序列的端粒序列19851985年，報道年，報道四膜蟲四膜蟲的端粒酶活性的端粒酶活性19891989年，報道年，報道四膜蟲四膜蟲端粒酶的端粒酶的RNARNA亞基亞基19941994年，報道年，報道酵母酵母端粒酶的端粒酶的RNARNA亞基亞基19951995年，報道年，報道酵母酵母端粒酶活性端粒酶活性19961996年，純化了年，純化了四膜蟲四膜蟲端粒酶的催化亞基端粒酶的催化亞基, ,遺傳篩選到遺傳篩選到酵母酵母端粒酶的催化亞基端粒酶的催化亞基19971997年

8、，證明了年，證明了四膜蟲四膜蟲和和酵母酵母端粒酶的催化亞基端粒酶的催化亞基端粒酶(telomerase) 依賴RNA的DNA聚合酶,其實質(zhì)是一種逆轉(zhuǎn)錄酶。 能識別特定的端粒重復(fù)序列,以自身RNA的部分序列(5-CUAACCCUAAC- 3)為模板,合成新的端粒重復(fù)序列,使端粒延長，保持染色體的完整 不需要DNA 模板 已知的惡性腫瘤特異性最強(qiáng)的標(biāo)志，永生細(xì)胞 生殖細(xì)胞，造血干細(xì)胞，ips等非腫瘤細(xì)胞 端粒的縮短與衰老端粒酶以自身的RNA為模板，在3端合成DNA序列:RNA引物引物端粒酶的爬行模型端粒酶的爬行模型母鏈藉非標(biāo)準(zhǔn)堿基配對回折母鏈藉非標(biāo)準(zhǔn)堿基配對回折DNA聚合酶聚合酶端粒合成完成端粒合

9、成完成進(jìn)一步加工進(jìn)一步加工 上上世紀(jì)之初發(fā)現(xiàn)腫瘤世紀(jì)之初發(fā)現(xiàn)腫瘤RNARNA病毒病毒。 6464年，年，TeminTemin報道了抑制報道了抑制DNADNA合成的放線菌素合成的放線菌素D D能抑制雞肉瘤能抑制雞肉瘤RNARNA病毒的繁殖病毒的繁殖。 據(jù)此提出雞肉瘤據(jù)此提出雞肉瘤RNARNA病毒的繁殖須經(jīng)過形成病毒的繁殖須經(jīng)過形成DNADNA的階段。的階段。v7 70 0年年Temin Temin 和和Baltimore Baltimore 兩個實驗室同時兩個實驗室同時從從( (雞雞) )勞氏肉瘤病毒和小白鼠白血病病毒等致病勞氏肉瘤病毒和小白鼠白血病病毒等致病RNARNA病毒中病毒中發(fā)現(xiàn)，在逆轉(zhuǎn)

10、錄病毒病毒顆粒中存發(fā)現(xiàn)，在逆轉(zhuǎn)錄病毒病毒顆粒中存在著一種以在著一種以RNARNA為模板合成為模板合成DNADNA的酶，稱為的酶，稱為RNARNA指導(dǎo)的指導(dǎo)的DNADNA聚合酶。聚合酶。 遺傳信息從遺傳信息從RNARNA流向流向DNADNA，即以即以RNARNA為模板合成為模板合成DNADNA稱為逆向轉(zhuǎn)錄，因此催化這一反應(yīng)的酶又稱為逆向轉(zhuǎn)錄，因此催化這一反應(yīng)的酶又稱稱逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶。 由逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組中由逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組中polpol基因編碼。是一種基因編碼。是一種多功能酶多功能酶。 有以有以RNARNA為模板和以為模板和以DNADNA為模板合成為模板合成DNADNA的的DNADNA聚聚合酶

11、活性合酶活性。 需要需要RNARNA或或DNADNA做引物；做引物； 有有核糖核酸酶核糖核酸酶H H的活性（在逆轉(zhuǎn)錄酶的的活性（在逆轉(zhuǎn)錄酶的C C端），端），能從能從3 355和從和從5 533水解水解RNARNA，使使RNARNA與與DNADNA的的雜交體分離。雜交體分離。1 1 用于合成用于合成cDNA. cDNA. 建立建立cDNAcDNA文庫文庫( (cDNA cDNA Library)Library)，獲得基因或探針。獲得基因或探針。2 2 與與PCRPCR連用連用 RT-PCRRT-PCR互補(bǔ)互補(bǔ)DNA（complementary DNA, cDNA） DNADNA復(fù)制是細(xì)胞增殖的

12、一個關(guān)鍵事件，因此，復(fù)制是細(xì)胞增殖的一個關(guān)鍵事件，因此，DNADNA復(fù)制與細(xì)胞分裂是互相協(xié)調(diào)、互相調(diào)控的。復(fù)制與細(xì)胞分裂是互相協(xié)調(diào)、互相調(diào)控的。 無論原核還是真核細(xì)胞中無論原核還是真核細(xì)胞中DNADNA復(fù)制都只發(fā)生在細(xì)胞復(fù)制都只發(fā)生在細(xì)胞周期中特定時期，在一個細(xì)胞周期中，周期中特定時期，在一個細(xì)胞周期中，DNADNA必須也必須也只能只能復(fù)制一次復(fù)制一次。1、起始體起始體 （ orisomeorisome，起始復(fù)合物，蛋白質(zhì)，起始復(fù)合物，蛋白質(zhì)- -ori Cori C復(fù)合物）的裝配復(fù)合物）的裝配 參與形成參與形成orisomeorisome的組分：的組分：Dna A, Hu, IHF，F(xiàn)is，

13、Dpi， Ici A， Cnu，Hha，Rob，Seq A，Arc A相互作用相互作用 ：Fis, IHF 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié) DnaA-ATP與與oriC oriC 的結(jié)合，的結(jié)合，HUHU調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)DnaA, IHF DnaA, IHF 結(jié)合到結(jié)合到oriC, oriC, 并增強(qiáng)并增強(qiáng)DnaADnaA解鏈能力。解鏈能力。2 2、防止復(fù)制再次起始、防止復(fù)制再次起始(1) Dna A(1) Dna A活性的抑制活性的抑制 Dna A-ADP Dna A-ATPDna A-ADP Dna A-ATP無活性無活性 RIDA RIDA 有活性有活性 RIDA：regulatory inactivation of

14、 DnaA ori C(2) 降低游離形式的降低游離形式的Dna A水平水平Dna A結(jié)合位點結(jié)合位點 dat A區(qū)區(qū)在復(fù)制后極短時間內(nèi)降低在復(fù)制后極短時間內(nèi)降低 Dna A 水平水平可以結(jié)合可以結(jié)合300分子的分子的Dna A(3)(3)隔離隔離 ori Cori C ori CGATCCTAG甲基化甲基化未甲基化未甲基化摸板鏈摸板鏈新合成鏈新合成鏈Seq A 特異識別特異識別,并結(jié)合于半甲基化并結(jié)合于半甲基化ori C 的的GATC序列序列,使使ori C被隔離被隔離,防止復(fù)制再次發(fā)生防止復(fù)制再次發(fā)生1 1、DNADNA復(fù)制起始的調(diào)控復(fù)制起始的調(diào)控2 2、細(xì)胞周期監(jiān)控點機(jī)制、細(xì)胞周期監(jiān)控點

15、機(jī)制主要調(diào)控復(fù)制的起始1 1、復(fù)制起始點的選擇復(fù)制起始點的選擇 復(fù)制起始點數(shù)量的調(diào)控復(fù)制起始點數(shù)量的調(diào)控 真核細(xì)胞有多個復(fù)制起始點，起用多少起真核細(xì)胞有多個復(fù)制起始點，起用多少起始點決定于始點決定于S S期的長短。期的長短。 S S期短，起始點多。期短，起始點多。S S期長，起始點少。期長，起始點少。 遺傳性起始點：遺傳性起始點： DNADNA上的起始元件上的起始元件 功能性起始點：功能性起始點： 實際起始點實際起始點 遺傳性起始點多于功能性起始點遺傳性起始點多于功能性起始點 酵 母 ： 自 主 復(fù) 制 序 列 （酵 母 ： 自 主 復(fù) 制 序 列 （ a u t o n o m o u s

16、l y a u t o n o m o u s l y replicating sequeences, ARS)replicating sequeences, ARS) 酵母細(xì)胞酵母細(xì)胞3 3號染色體上有號染色體上有1414個遺傳性復(fù)制起始個遺傳性復(fù)制起始點，只有點，只有6 6個功能性復(fù)制起始點。個功能性復(fù)制起始點。 將將Ura4Ura4基因處的強(qiáng)復(fù)制起始點突變后，在其附基因處的強(qiáng)復(fù)制起始點突變后，在其附近的弱復(fù)制起始點就成為強(qiáng)復(fù)制起始點。近的弱復(fù)制起始點就成為強(qiáng)復(fù)制起始點。 Ura4Ura4：乳清苷酸脫羧酶乳清苷酸脫羧酶 CHOCHO細(xì)胞核細(xì)胞核 蟾蜍卵細(xì)胞抽提物蟾蜍卵細(xì)胞抽提物 損壞損壞C

17、HOCHO細(xì)胞核或細(xì)胞核或 裸露裸露DNADNA 非隨機(jī)起始，同正常非隨機(jī)起始，同正常 隨機(jī)起始隨機(jī)起始CHOCHO細(xì)胞細(xì)胞 復(fù)制起始點的選擇與細(xì)胞核或染色體結(jié)構(gòu)密切相關(guān)復(fù)制起始點的選擇與細(xì)胞核或染色體結(jié)構(gòu)密切相關(guān)（1 1）復(fù)制的允許機(jī)制（）復(fù)制的允許機(jī)制（Licensing modelLicensing model） （2）蛋白激酶的調(diào)控）蛋白激酶的調(diào)控 蟾蜍卵細(xì)胞蟾蜍卵細(xì)胞 Licensing controlLicensing control 復(fù)制復(fù)制外源細(xì)胞核外源細(xì)胞核復(fù)制后，復(fù)制后，Licensing Factor失活，失活的失活，失活的Licensing Factor不能再次啟動復(fù)制

18、。核不能再次啟動復(fù)制。核膜破裂后（細(xì)胞分裂后），新的膜破裂后（細(xì)胞分裂后），新的Licensing Factor進(jìn)入核，啟動下一周期進(jìn)入核，啟動下一周期的的DNA復(fù)制。復(fù)制。真核細(xì)胞復(fù)制起始絕對必須的蛋白激酶：真核細(xì)胞復(fù)制起始絕對必須的蛋白激酶： CDK 和和 Cdc7-Dbf4激酶激酶(1)、前復(fù)制起始復(fù)合物前復(fù)制起始復(fù)合物的形成的形成 組成成分：組成成分：ORC(Origin Recognition Complex) 含含6種種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)，Cdc6，RLF （Replication Licensing Factor, 復(fù)制允許因子）。復(fù)制允許因子）。(2)、CDK激活激活前前復(fù)制起始復(fù)

19、合物復(fù)制起始復(fù)合物 復(fù)制前復(fù)合物復(fù)制前復(fù)合物受蛋白激酶的調(diào)控，或變成受蛋白激酶的調(diào)控，或變成起始復(fù)合物起始復(fù)合物，起始復(fù)制，或在復(fù)制過程中轉(zhuǎn)變成起始復(fù)制，或在復(fù)制過程中轉(zhuǎn)變成復(fù)制后復(fù)合物復(fù)制后復(fù)合物，就，就再也不能啟動復(fù)制。再也不能啟動復(fù)制。 CDK（CyclinDependent), Cdc7-Dbf4激酶，激酶， 蛋白激酶蛋白激酶A，蛋白磷酸蛋白磷酸酶酶2A，都參與復(fù)制的起始，在不同階段起作用。都參與復(fù)制的起始，在不同階段起作用。前復(fù)制起始復(fù)合物前復(fù)制起始復(fù)合物（pre-replicative complexpre-replicative complex，pre-RC) pre-RC) （

20、在遺傳性復(fù)制起始點裝配）（在遺傳性復(fù)制起始點裝配） CDKCDK起始復(fù)合物（起始復(fù)合物（Replicative Complex,RC) Replicative Complex,RC) （在功能性復(fù)制起始點形成）（在功能性復(fù)制起始點形成）在在G1G1期向期向S S期過渡期間，期過渡期間，CDKCDK活性很高?；钚院芨摺?CDKCDK同時又是防止在同一細(xì)胞周期中同時又是防止在同一細(xì)胞周期中DNADNA復(fù)制再復(fù)制再次發(fā)生的因素次發(fā)生的因素, ,阻止復(fù)制起始復(fù)合物的組裝。阻止復(fù)制起始復(fù)合物的組裝。 CDKCDK對某些起始因子磷酸化對某些起始因子磷酸化, ,調(diào)控其在細(xì)胞內(nèi)水調(diào)控其在細(xì)胞內(nèi)水平。平。 識別

21、識別DNADNA損傷或損傷或DNADNA復(fù)制阻斷，通過復(fù)雜復(fù)制阻斷，通過復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，阻斷細(xì)胞周期，啟動修復(fù)機(jī)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，阻斷細(xì)胞周期，啟動修復(fù)機(jī)制，恢復(fù)基因組的完整性，修復(fù)后再進(jìn)入細(xì)胞制，恢復(fù)基因組的完整性，修復(fù)后再進(jìn)入細(xì)胞周期。周期。在長期進(jìn)化過程在長期進(jìn)化過程中，細(xì)胞形成一中，細(xì)胞形成一套保證細(xì)胞周期套保證細(xì)胞周期中中DNA復(fù)制和染復(fù)制和染色體分配質(zhì)量的色體分配質(zhì)量的檢查機(jī)制，即細(xì)檢查機(jī)制，即細(xì)胞周期檢查點胞周期檢查點(1) G1 S S期檢查點期檢查點查看查看DNADNA有無損傷有無損傷 DNA damage checkpointDNA damage checkpoint 細(xì)

22、胞周期暫時減慢或停止。細(xì)胞周期暫時減慢或停止。查看查看DNADNA復(fù)制的進(jìn)度復(fù)制的進(jìn)度 DNA replication DNA replication checkpointcheckpoint 限制限制DNADNA復(fù)制速度復(fù)制速度(2) G2 M 管理染色體的正確分配管理染色體的正確分配 Spindle Spindle assembly checkpointassembly checkpointDNA 損傷類型和產(chǎn)生原因點突變 DNA聚合酶復(fù)制錯誤產(chǎn)生堿基自發(fā)的突變：堿基自發(fā)的突變：甲基化分析甲基化分析缺失或插入 核苷酸的缺失或插入 堿基的缺失化學(xué)修飾 氧化，甲基化，烷化DNA分子交聯(lián) 順鉑，

23、順鉑，絲裂酶素絲裂酶素DNA分子斷裂DNA單鏈斷裂DNA雙鏈斷裂：射線，重金屬， 病毒整合，DNA重排核苷酸修復(fù) dGTP氧化產(chǎn)生8氧代dGTP 8oxodG 8氧代dGTP三磷酸脂酶 水解 該酶突變：A：TC：G突變高10010000倍dGTP直接修復(fù)O6甲基鳥嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT） 光修復(fù)光修復(fù)3. 堿基切除修復(fù)DNA轉(zhuǎn)葡糖基酶轉(zhuǎn)葡糖基酶 4. 核苷酸切除修復(fù)5. 錯配修復(fù)DNA鏈斷裂的修復(fù)非同源末端連接 non-homologous end-joining同源重組修復(fù)同源重組修復(fù) homologous recombination7. 大腸桿菌SOS修復(fù)Lex A， Rec A修

24、復(fù)完成后，修復(fù)完成后，DinI蛋白抑制蛋白抑制RecA作用作用 Yeast two hybrid （1）G1期期checkpoint，確保，確保DNA損傷不被復(fù)制。這一階段損傷不被復(fù)制。這一階段，DNA損傷激活蛋白激酶損傷激活蛋白激酶ATM，ATR和和cABL，導(dǎo)致，導(dǎo)致P53的磷酸化，并進(jìn)一步上調(diào)的磷酸化，并進(jìn)一步上調(diào)P21 WAF1表達(dá)水平。表達(dá)水平。P21可以結(jié)合可以結(jié)合cyclin-CDK從而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期。同時從而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期。同時DNA損傷誘導(dǎo)損傷誘導(dǎo)Cdc25A的泛素化和降解，從而阻止細(xì)胞周期進(jìn)行；的泛素化和降解，從而阻止細(xì)胞周期進(jìn)行； （2）S期期checkpoint，主要是當(dāng)，

25、主要是當(dāng)DNA損傷在損傷在G1期沒有能夠進(jìn)期沒有能夠進(jìn)行修復(fù)時防止行修復(fù)時防止DNA復(fù)制；復(fù)制； （3）G2期期checkpoint，主要功能是當(dāng)細(xì)胞在，主要功能是當(dāng)細(xì)胞在S期晚期或者期晚期或者G2期期DNA受到損傷時，阻止細(xì)胞分離，從而防止受到損傷時，阻止細(xì)胞分離，從而防止DNA損傷傳遞損傷傳遞到子代細(xì)胞中；到子代細(xì)胞中； （4）M期期checkpoint，細(xì)胞在，細(xì)胞在M期染色質(zhì)將發(fā)生固縮形成紡期染色質(zhì)將發(fā)生固縮形成紡錘體結(jié)構(gòu)，在后期姐妹染色體發(fā)生分離。當(dāng)染色體受到損傷錘體結(jié)構(gòu)，在后期姐妹染色體發(fā)生分離。當(dāng)染色體受到損傷時，細(xì)胞停滯在時，細(xì)胞停滯在M期，染色體重新恢復(fù)到染色質(zhì)，從而使細(xì)期，染色體重新恢復(fù)到染色質(zhì)，從而使細(xì)胞有機(jī)會對胞有機(jī)會對DNA損傷進(jìn)行修復(fù)后再進(jìn)入損傷進(jìn)行修復(fù)后再進(jìn)入M期。期。 DNA損傷損傷ATM/ATR絲絲/蘇氨酸激酶蘇氨酸激酶CHK1，CHK2，P53等等抗凋亡基因抗凋亡基因 凋亡相關(guān)基因凋亡相關(guān)基因線粒體膜通透性升高，細(xì)胞線粒體膜通透性