微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 上課用

1、專題專題2 :2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物包括哪五類：微生物包括哪五類：真菌真菌原生動物原生動物特點(diǎn)：特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單, ,個體多數(shù)十分微小個體多數(shù)十分微小. .通通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu). .且體內(nèi)一般不含有葉綠且體內(nèi)一般不含有葉綠素素. .不能進(jìn)行光合作用不能進(jìn)行光合作用. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物基礎(chǔ)知識微生物基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識：一、基礎(chǔ)知識：（一）培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成

2、培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。（1 1）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)基基、液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基和和半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定等。基用于菌種分離、鑒定等。（2 2）按功能來分，可分為）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒別培鑒別培養(yǎng)基養(yǎng)基。（3 3）按成分來分，可分為）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基和和合成培合成培養(yǎng)基養(yǎng)基。1.1.培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需

3、求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基（凝固劑，（凝固劑，瓊脂瓊脂） 用于微生物的用于微生物的分離、計(jì)數(shù)、鑒定分離、計(jì)數(shù)、鑒定 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基（無瓊脂）（無瓊脂） 常用于常用于工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)分類培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基據(jù)物理性質(zhì)分據(jù)物理性質(zhì)分天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基據(jù)化學(xué)成分分據(jù)化學(xué)成分分選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基據(jù)用途分據(jù)用途分常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于觀察微生物的常用于觀察微生物的運(yùn)動、鑒定菌種運(yùn)動、鑒定菌種用于微生物的分離、計(jì)數(shù)用于微生物的分離、計(jì)數(shù)常用于工業(yè)生

4、產(chǎn)常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于分類、鑒定常用于分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。例如，在培養(yǎng)基中加入青霉素，以抑制細(xì)菌、例如，在培養(yǎng)基中加入青霉素，以抑制細(xì)菌、放線菌的生長，從而分離到酵母菌和霉菌。又放線菌的生長，從而分離到酵母菌和霉菌。又如，在培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可以抑制多如，在培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可以抑制多種細(xì)菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生種細(xì)菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長。長。根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)

5、，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以鑒別不同種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以鑒別不同種類的微生物。例如，在培養(yǎng)基中加入伊紅和美類的微生物。例如，在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán)，可以用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在藍(lán)，可以用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌：如果有大腸桿菌，其代謝產(chǎn)大腸桿菌等細(xì)菌：如果有大腸桿菌，其代謝產(chǎn)物就與伊紅和美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并物就與伊紅和美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。帶有金屬光澤。固體培養(yǎng)基：菌落固體培養(yǎng)基：菌落液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長沉淀生長沉淀生長半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：無動力無動力

6、 有動力有動力( (彌散彌散) )( (是否運(yùn)動是否運(yùn)動) ) 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基加入加入青霉素青霉素的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入加入高濃度食鹽高濃度食鹽的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源不加氮源的的無氮培養(yǎng)基無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物鑒定培養(yǎng)基：鑒定培養(yǎng)基：鑒定所培養(yǎng)生物的類型鑒定所培養(yǎng)生物的類型2、培養(yǎng)基配制原則、培養(yǎng)基配制原則： （1）目的要明確目的要明確：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的

7、等確定配制培養(yǎng)基的種類，因?yàn)椴煌奈⒛康牡却_定配制培養(yǎng)基的種類，因?yàn)椴煌奈⑸飳ε囵B(yǎng)物質(zhì)的需求不同。生物對培養(yǎng)物質(zhì)的需求不同。 （2）營養(yǎng)要協(xié)調(diào)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。和比例。 （3）pH要適宜要適宜：各種微生物適宜生長的：各種微生物適宜生長的pH范范圍不同。圍不同。 細(xì)菌細(xì)菌pH為：為：6.5-7.5； 放線菌放線菌pH為：為：7.5-8.5； 真菌真菌pH為：為：5.0-6.0。3、培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成、培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成 不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有：不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有： 水、碳源、水、碳源、和和氮源、無機(jī)鹽氮源、無機(jī)鹽等等 另外還需要滿足微生

8、物生長對另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊特殊營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì),例如例如:生長因子生長因子(即細(xì)菌生長即細(xì)菌生長必必需，需，而自身不能合成的化合物而自身不能合成的化合物,如維生如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 碳源、氮源、生長因子的比較碳源、氮源、生長因子的比較（二）無菌技術(shù)（二）無菌技術(shù)1.1.無菌技術(shù)的概念無菌技術(shù)的概念 無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。有防止雜菌污染的方法。成功地培養(yǎng)微生物的關(guān)鍵。成功地培養(yǎng)微生物的關(guān)鍵。 無菌

9、技術(shù)無菌技術(shù)包括：包括：（1）對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行）對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行 清潔清潔和消毒和消毒 ；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行 滅滅菌菌 ；（3）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在 酒精燈酒精燈火焰附近火焰附近 旁進(jìn)行；旁進(jìn)行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與）避免已滅菌處理的材料用具與 周圍物品周圍物品 相接觸。相接觸。 （）（）消毒定義：消毒定義：指使用較為指使用較為溫和溫和的物理或化學(xué)方法的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分一部分對人體有對

10、人體有害的微生物害的微生物。（。（不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子）2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 使用使用強(qiáng)烈強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的所有的微生物，微生物，包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子，而達(dá)，而達(dá)到到完全無菌完全無菌之過程。之過程。 滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。普通也是最重要的技術(shù)。（2 2）滅菌的定義：）滅菌的定義：消毒與滅菌的比較消毒與滅菌的比較1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-7

11、5 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒爾滅等進(jìn)行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線消毒紫外線消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌接種環(huán)、接種針、接種環(huán)、接種針、試管口試管口2 2、干熱滅菌：干熱滅菌：160-170 160-170 下加下加熱熱1-2h1-2h。3 3、高壓蒸氣滅菌：高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-30min.

12、15-30min.(2)滅菌的方法：滅菌的方法： 最常用的滅菌方法是最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌，它可以，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。破壞。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌高溫干熱滅菌。為了。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只塞，也

13、可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。 培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)皿是由培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)皿是由正反兩平面板互扣正反兩平面板互扣而成而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。而設(shè)計(jì)的。 1.1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。菌。如果需要，請選擇合適的

14、方法。（1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒）需要消毒。1 1、器具的滅菌、器具的滅菌2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接種、微生物接種6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng)7 7、菌種的保存、菌種的保存三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作 （ 一一.）

15、制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1 1計(jì)算、稱量計(jì)算、稱量2 2溶化溶化3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 64 4過濾：這一步可以省去。過濾：這一步可以省去。5 5分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。三角燒瓶容積的一半為宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步驟操作步驟 8 8滅菌滅菌: : 將將5050mlml培養(yǎng)基培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中

16、，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為鍋，在壓力為100100kPakPa、溫度為溫度為121121，滅菌，滅菌15153030minmin。將將培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在熱滅菌箱內(nèi)，在160160170 170 下滅菌下滅菌2 2h h。 9 9倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50 50 左右時，在酒精燈附左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）近倒平板。（倒平板操作見課本）2 2d d后觀察平后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種板，無雜菌污染才可用來接種. . 10 1

17、0無菌檢查：無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培的溫室中培養(yǎng)養(yǎng)24482448小時，以檢查滅菌是否徹底。小時，以檢查滅菌是否徹底。 1. 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？基的溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。時，就可以進(jìn)行倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過

18、火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。生物污染培養(yǎng)基。3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表

19、面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。（二）、純化大腸桿菌（二）、純化大腸桿菌接種方法有：接種方法有：平板劃線法平板劃線法和和稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法: :通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作基表面連續(xù)畫線的操作, ,將聚集的菌鐘逐步稀將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面釋分散到培養(yǎng)基的表面. .

20、 在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后, ,可以分離到可以分離到由一個細(xì)胞繁由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體, ,這就是這就是菌落菌落. .菌落：菌落：n單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。n菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落菌落細(xì)菌的菌落特征細(xì)菌的菌落特征因種而異因種而異 霉菌的菌落霉菌的菌落特征特征因種而異因種而異菌落菌落接種環(huán)接種環(huán)接種針接種針 1.1.為什么在操作的第一步以

21、及每次劃線之前為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增

22、加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。感染操作者。 2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時，在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：

23、劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。的菌落。涂布器涂布器 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步應(yīng)如何進(jìn)行無步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌無菌

24、”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。在酒精燈火焰周圍等等。31培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照對照，若有菌，若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。32在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白白色，色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。33培養(yǎng)培養(yǎng)12h和和24h后的菌落大小后的菌落大小不同不同（相同、（相同、不同）；菌落分布位置不同）；菌落分布位置相同相同（相同、不同）。原（

25、相同、不同）。原因是時間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積因是時間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大；菌落的位置不動，但菌落數(shù)增多。越大；菌落的位置不動，但菌落數(shù)增多。34在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了3種特征不同的菌落，原種特征不同的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等。因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等。n結(jié)果分析與評價結(jié)果分析與評價（P20）四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無菌落生長，后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制

26、備。說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)， (在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊)則說明接種操作是符則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，( (在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了了3種特征不同的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感

27、染種特征不同的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等。等。)則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。因，再次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。

28、1 1、臨時保藏法、臨時保藏法對象：對象：溫度：溫度： 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 2 2、甘油管藏法：、甘油管藏法： 對象：對象： 溫度：溫度：頻繁使用的菌種頻繁使用的菌種 44（冰箱）（冰箱） 容易被污染或容易被污染或產(chǎn)生變異產(chǎn)生變異 長期保存的菌種長期保存的菌種 -20-20（冷凍箱）（冷凍箱） n課題延伸課題延伸本課題知識小結(jié)本課題知識小結(jié): :【典例解析典例解析】 例例1 1關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A.A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽除水以外的無機(jī)物

29、只提供無機(jī)鹽 D.D.無機(jī)氮源也能提供能量無機(jī)氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于針對微生物的具體情況分析。對于A A、B B選項(xiàng)，它的表達(dá)是選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如同時是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C C選項(xiàng)，除水以外的無機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化選項(xiàng)，除水以外的無機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作為自養(yǎng)，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機(jī)鹽；而型微生物的碳源和無機(jī)鹽；而NaClNaCl則只能提供無機(jī)鹽。對則只能提供無機(jī)鹽。對于于D D選項(xiàng)，無機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如選項(xiàng)，無機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3NH3可可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。為硝化細(xì)菌提供能量和氮源