最新小鼠腹腔巨噬細胞吞噬試驗精品課件講課講稿

1、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬試驗原原 理（體外法）理（體外法） 巨噬細胞具有吞噬異物的功能，將巨噬細胞與被吞巨噬細胞具有吞噬異物的功能，將巨噬細胞與被吞噬物噬物( (雞紅細胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等雞紅細胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等) )共同溫共同溫育，染色，在油鏡下計數(shù)吞噬異物的巨噬細胞的吞噬百育，染色，在油鏡下計數(shù)吞噬異物的巨噬細胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，以此判斷巨噬細胞的吞噬功能，從而分率和吞噬指數(shù)，以此判斷巨噬細胞的吞噬功能，從而評價機體的免疫狀態(tài)。評價機體的免疫狀態(tài)。 本實驗擬檢測小鼠腹腔巨噬細胞對白色念珠菌的吞噬本實驗擬檢測小鼠腹腔巨噬細胞對白色念珠菌的吞噬功能。功能。（3）吞噬細胞

2、與菌混合培養(yǎng)）吞噬細胞與菌混合培養(yǎng) 取巨噬細胞取巨噬細胞0.5ml加白色念珠菌懸液加白色念珠菌懸液0.5ml，置，置37溫育溫育30min。 取取1滴混合液置玻片上加蓋玻片，在高倍鏡下觀察滴混合液置玻片上加蓋玻片，在高倍鏡下觀察計數(shù)。計數(shù)。高倍鏡下觀察計算：高倍鏡下觀察計算：吞噬率吞噬率=(吞噬白色念珠菌的巨噬細胞數(shù)吞噬白色念珠菌的巨噬細胞數(shù)/100個巨噬個巨噬 細胞細胞)100吞噬指數(shù)吞噬指數(shù)=100個巨噬細胞中吞噬白色念珠菌總數(shù)個巨噬細胞中吞噬白色念珠菌總數(shù) /100個巨噬細胞個巨噬細胞 *(吞噬指數(shù)式中巨噬細胞為陽性吞噬細胞吞噬指數(shù)式中巨噬細胞為陽性吞噬細胞)注注 意意 事事 項項1、菌

3、與細胞混合后充分混勻非常重要。對于此實驗，菌、菌與細胞混合后充分混勻非常重要。對于此實驗，菌與吞噬細胞之比與吞噬細胞之比10：1時吞噬作用容易觀察和計數(shù)。但時吞噬作用容易觀察和計數(shù)。但是吞噬效果好，能真正反映實際情況又可被檢測的比是吞噬效果好，能真正反映實際情況又可被檢測的比例為例為1：1。 2、菌和細胞在搖床中作用的時間不超過、菌和細胞在搖床中作用的時間不超過30 min，如果在，如果在37 C 條件下作用時間過長，被吞噬的菌很快會被裂解，條件下作用時間過長，被吞噬的菌很快會被裂解，也就不能計數(shù)為吞噬了菌的細胞。也就不能計數(shù)為吞噬了菌的細胞。 3、滴片時加入的細胞數(shù)依細胞的大小而定，如果使用

4、的、滴片時加入的細胞數(shù)依細胞的大小而定，如果使用的吞噬細胞是細胞系，細胞體積較大，那么加入的細胞吞噬細胞是細胞系，細胞體積較大，那么加入的細胞數(shù)就相應(yīng)的少一點。數(shù)就相應(yīng)的少一點。血球計數(shù)板計數(shù)法血球計數(shù)板計數(shù)法 血球計數(shù)板是由一塊厚玻片特制而成，其中央有血球計數(shù)板是由一塊厚玻片特制而成，其中央有兩個計數(shù)室。每個計數(shù)室劃分出兩個計數(shù)室。每個計數(shù)室劃分出9個大方格（見下圖），個大方格（見下圖），每格面積每格面積1mm2，加蓋玻片后的深度為，加蓋玻片后的深度為0.1mm。因此，。因此，每大方格容積為每大方格容積為0.1mm3。 四角的大方格，又分為四角的大方格，又分為16個中方格，適用于白細個中方格

5、，適用于白細胞計數(shù)。中央大方格以雙線等分為胞計數(shù)。中央大方格以雙線等分為25個中方格。每個個中方格。每個中方格又分中方格又分16個小方格，通常我們?nèi)∷慕堑膫€小方格，通常我們?nèi)∷慕堑?個中方格個中方格和中間的和中間的1個中方格來計數(shù)紅細胞。個中方格來計數(shù)紅細胞。 首先用吸管吸取少許稀釋后的單細胞懸液，從蓋首先用吸管吸取少許稀釋后的單細胞懸液，從蓋片端滴一小滴（不宜過多），液體自行向內(nèi)滲入，靜置片端滴一小滴（不宜過多），液體自行向內(nèi)滲入，靜置數(shù)分鐘后，再放在微鏡下觀察計數(shù)。數(shù)分鐘后，再放在微鏡下觀察計數(shù)。 計數(shù)時，若細胞位于小方格的線上，應(yīng)遵循計數(shù)時，若細胞位于小方格的線上，應(yīng)遵循“數(shù)數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則，以減少誤差。的原則，以減少誤差。計數(shù)應(yīng)重復(fù)計數(shù)應(yīng)重復(fù)3次，取其平均值。次，取其平均值。數(shù)完畢后，依下式計算：數(shù)完畢后，依下式計算： 每每1mL白細胞懸液細胞數(shù)（白細胞懸液細胞數(shù)（4個中方格細胞總數(shù)個