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文檔簡介
1、 微生物體積小,生產(chǎn)速度快,易于大規(guī)模微生物體積小,生產(chǎn)速度快,易于大規(guī)模生產(chǎn),從微生物中制取各種酶已經(jīng)成為發(fā)生產(chǎn),從微生物中制取各種酶已經(jīng)成為發(fā)酵工業(yè)當中的一個新興的領(lǐng)域。酵工業(yè)當中的一個新興的領(lǐng)域。 自然界的土壤中有可能分布著能夠產(chǎn)生蛋自然界的土壤中有可能分布著能夠產(chǎn)生蛋白酶和淀粉酶的芽孢桿菌。通過土樣稀釋、白酶和淀粉酶的芽孢桿菌。通過土樣稀釋、加熱土壤懸浮液殺死非芽孢桿菌、平板分加熱土壤懸浮液殺死非芽孢桿菌、平板分離就有可能分離到芽孢桿菌的單菌落。離就有可能分離到芽孢桿菌的單菌落。有產(chǎn)蛋白酶能力的芽孢桿菌能水解酪素生成酪氨酸,在含有酪素的平板上菌落的周圍出現(xiàn)透明的水解圈。有產(chǎn)淀粉酶能力的
2、芽孢桿菌則能將淀粉水解生成小分子的糊精和葡萄糖,在淀粉平板上菌落周圍出現(xiàn)水解圈,但是用肉眼不易分離,滴加碘液后沒有水解的淀粉程藍色,而水解圈無色。 蛋白酶活力單位的測定方法:蛋白酶活力單位的測定方法: 取取5毫升用毫升用pH8硼酸緩沖液配制的硼酸緩沖液配制的06.%酪蛋白溶液于試酪蛋白溶液于試管中,置于管中,置于40度水浴中預熱度水浴中預熱2min后加入后加入1:20以以pH8硼硼酸緩沖液稀釋的酶液(即取酸緩沖液稀釋的酶液(即取1毫升蛋白酶發(fā)酵液,加入毫升蛋白酶發(fā)酵液,加入19毫升的緩沖液)毫升的緩沖液)1ml, 40度水浴精確保溫度水浴精確保溫10min。時。時間到后,各管立即加入間到后,各
3、管立即加入0.4mol/L三氯醋酸三氯醋酸5ml,以終止,以終止反應(yīng)。繼續(xù)水浴中保溫反應(yīng)。繼續(xù)水浴中保溫20min,使殘余蛋白質(zhì)沉淀后離,使殘余蛋白質(zhì)沉淀后離心分離或過濾。取濾液用心分離或過濾。取濾液用751分光光度計在分光光度計在275nm處測處測定其吸收度。定其吸收度。 空白實驗空白實驗2測定方法同上,唯在加酪蛋白測定方法同上,唯在加酪蛋白之前先加之前先加0.4mol/L三氯醋酸三氯醋酸5ml,使酶失活,在加酪蛋,使酶失活,在加酪蛋白。白。 計算:在計算:在40度下每度下每1min水解酪蛋白產(chǎn)生水解酪蛋白產(chǎn)生1Ug酪氨酸,定酪氨酸,定義為一個蛋白酶活力單位。義為一個蛋白酶活力單位。 具體的操作步驟自己查找資料擬定。具體的操作步驟自己查找資料擬定。 淀粉酶活力單位的測定:淀粉酶活力單位的測定:-Wohlgemuth Hagihara 改良法改良法-具體方法自己擬定。具體方法自己擬定。 一一 . 實驗報告以論文形式提交實驗報告以論文形式提交 二二. 1、你所設(shè)計的實驗流程是否合理?實驗中有無疏漏和失、你所設(shè)計的實驗流程是否合理?實驗中有無疏漏和失誤誤? 2、實驗中的酶活力檢測是否出現(xiàn)負結(jié)果?如有,請分析、實驗中的酶活力檢測是否出現(xiàn)負結(jié)果?如有,請分析原因原因
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