Agilent氣質聯用儀軟件定量方法圖示解析

1、AgilentTechnologiesInnovatingHPWay實驗室練習6：數據定量分析在這個實驗中，您將建立具有三個濃度級別的校正數據庫,并將其保存為方法的一部分。該方法用于未知物的定量計算。在這個實驗中：獲取所需信息以設置校正方法建立一個5個濃度級別的含內標的校正數據庫定量一個未知化合物對以下化合物進行定量：73內標目標化合物TributylphosphateAcetamide,N-phenylphenacetincaffein積分精確定量的重要因素之一是正確積分。1) 通過選擇File/LoadDataFile調用C:MSDCHEM1DATAVOADATACLWV020.D文件，選

2、擇Method/LoadMethod.調用DEFAULT.M方法。2) 選擇Chromatogram/SelectIntegrator及RTEIntegrator單擊OK。OK對積分來說只是臨時選擇?，F在讓我們對caffein設定積分參數。3) 選擇Chromatogram/ExtractIonChromatograms.完成圖1所示的需要輸入的項目(注意時間范圍)單擊OK。圖14)現在編輯RTE的缺省積分參數。選擇Chromatogram/MSSignalIntegrationParameters.完成圖2所示的要輸入的項目。須知當欲在最小峰面積(minimumpeakarea)中添入大于1

3、00的數之前必須選中AreaCounts選項框。圖25) 單擊OK接受所做的改變?，F在通過選擇Chromatogram/Integrate用這些參數做積分。注意離子194被積分，而離子67沒有被積分。讓我們降低最小面積來解決這一問題。6) 選擇Chromatogram/MSSignalIntegrationParameters.完成圖3中所示的各項內容。圖37)單擊Save.和OK輸入積分文件名字VOLATILE.P，單擊OK。圖48) 在積分參數框中單擊OK返回離子質量色譜。在Chromatogram/Integrate用降低后的最小峰面積參數做積分。注意此時離子67和194都被積分了。現在

4、我們建立并保存了積分參數，它將被用于定量數據庫。9) 選擇Chromatogram/DrawChromatogram查看當前數據文件的TIC圖。實驗室練習6：數據定量分析建立校正曲線：建立校正曲線：無論SCAN和SIM方式，用提取離子質量色譜做校正和定量比用總離子流色譜峰要好，因為能提高信噪比。用提取離子定量比用TIC精度更高。TIC則用于開始設置校正參數時確定保留時間。1) 選擇Calibrate/SetUpQuantitation.。2) QuantitationDatabaseGlobals對話框會顯示出來。完成圖5中所需填入的內容。圖5注意標有NOTICE處用了RTE積分參數文件。3)

5、完成后單擊OK。EditCompounds框(圖6)會顯示出來:77EditCompoundsKbeforeCompoundNarnedenotesISTD打沾H百Ei匸洋1ExitIH已Ip圖64)單擊InsertAbove,圖7會顯示出來：圖7注意:必須首先輸入內標。所有在內標之后輸入的化合物都用它定量，直到遇到下一個內標。5）將7-13分鐘范圍內的色譜圖放大在窗口中。對準窗口2中10.7分鐘處雙擊鼠標右鍵。在屏幕上會出現什么信息？注意保留時間（箭頭在X軸的位置）被填寫在QuantSetup窗口。同時所指定保留時間的質譜顯示在窗口1。6）輸入化合物名稱。填入化合物名稱。第二個化合物是Tri

6、butylphosphate大約在10.7分鐘。注意如果使用氘代內標時區(qū)分定量，化合物是靠信號而不是保留時間，因為內標和要定量的化合物共流出，因此峰會重疊。ISTD選項被選中。7）將箭頭移到窗口將箭頭放在M/Z93上同時擊鼠標左右鍵。會發(fā)生什么？8）用同樣方法輸入一個或幾個特征離子。對于Tributylphosphate,特征離子是135。9）全部輸入之后，在QuantSetup窗口底部擊Save鍵。這就完成了需要在定量數據庫中添加單個化合物的任務。10）重復以上步驟，把表1中每個化合物輸入定量數據庫。（注意Tributylphosphate已經輸入了。）化合物名稱內標近似的保留時間目標離子特

7、征離子TributylphosphateYes10.799155、211Acetamide,N-phenyl8.593135phenacetin11.1108109、179、137caffein12.2194109、67表111）最后一個化合物輸入并保存之后，在定量設置欄目擊Exit。EditCompounds畫面（圖9）再次顯現。注意此時化合物的列出順序。定量化合物永遠在內標之后（不管保留時間?。┯?個化合物列于表中。如有遺漏，點擊遺漏的化合物，然后單擊InsertAbove.。當定量設置欄再次出現時輸入化合物名字，保留時間，目標/特征離子。然后單擊Save并單擊Exit。一旦4個化合物全部

8、輸入，單擊Exit退出編輯化合物對話框（圖9）。12）系統提示目前的文件尚未定量。單擊Yes對文件定量。我們已經添加了化合物信息，現在要添加校正信息。13）UpdateCalibration對話框（圖8）如下：圖814）在UpdateCalibration選項框中，為該校正級別輸入一個標識。缺省值是數字（如“1”）但也可以輸字母（如“Low”）。為該級別輸入化合物濃度（20）注意已經填入了ISTD濃度。我們在哪里輸入過這個量？15）單擊DoUpdate鍵。定量更新程序會提取指定離子并對其進行RTE積分。該信息存放在定量數據庫中。EditCompounds畫面（圖9）顯示出來。EditCompo

9、uinidsInriRYRftl.TimfiCnmnnnnfiNamp7.910*Brcmochloromethane23-56匕LHUVinylLhloride10.130Chlcroform13.200*l-Difluorbenzene13.10CBromadichlcromethane15.980LLS-TrlchloroethanebefaireCurmpQuriiitJNdmicdenotesISTDInsertAboveDelete16）單擊View鍵查看三頁定量信息。在第3頁對錯誤的值進行編輯。17）Next鍵用來查看第二個化合物的條目。單擊OK離開該畫面，而單擊Exit退出Ed

10、itCompounds面板回到數據分析?，F在我們擁有了含一個級別的校正數據庫。下一步是為校正數據庫添加第二個濃度級別。實驗室練習6：數據定量分析建立多濃度級別校正數據庫實驗室練習6：數據定量分析建立多一濃度級別校正數據庫建立多一濃度級別校正數據庫1) 調用數據文件C:MSDCHEM1DATAVOADATACLWV050D。2) 選擇Calibrate/Update./UpdateOneLevel/OK系統將提示該數據文件未定量，單擊Yes進行定量。3) 下一步進入UpdateCalibration對話框。將濃度改為50,將校正級別改為2,單擊DoUpdate.自動為數據庫插入新濃度級別。4)

11、Exit退出editcompounds界面。從這一標準校正曲線更換保留時間和離子比例，會改寫原來用光標輸入的和這一標準的微小差別。5) 選擇Calibrate/Update./UpdateOneLevel/OK填寫圖10所示各項內容，單擊DoUpdate。圖106)按照1)至5)步驟輸入下列濃度級別。不必再次輸入保留時間和離子比例。數據文件和化合物濃度列于表2中：數據文件濃度濃度級別號CLWV100.D100ppm3CLWV150.D150ppm4CLWV200.D200ppm5表2內標濃度與前兩個標樣相同(50ppm)。7) 5個濃度級別輸入之后，單擊View以便檢查濃度是否正確。8) 選擇

12、第一個化合物，單擊Plot看它的標準曲線，包括其校正因子和相關系數。出現什么信息？由于畫內標化合物的曲線是無意義的，您不可能畫出內標化合物的校正曲線，為什么內標化合物曲線是無意義的？9) 在Compound窗口單擊Next(如必要擊OK保存更改)畫面，化合物#2以校驗該化合物的第二個濃度級別的數據。在Plot窗口單擊Print打印(這是獲得方法文件的較好途徑)。10) 打印之后擊OK,改變線性擬合方式取得最佳平均響應因子(AvgofResponseFactors)，再做曲線。反復用LinearRegr，Force(0,0)擬合包括原點在內的各點，加以比較。重新設置擬合方式AvgofRespon

13、seFactors。對本次分析何種擬合方式更可靠，為什么？11) 查看過三頁化合物信息之后，選OK然后Exit退出該窗口。該校正數據庫當前存儲在計算機RAM中，所以下一步是使其永久保存于硬盤中。校正數據庫作為方法的一部分保存。12) 選擇Method/SaveMethod.。13) 為新方法命名為CLASSVOA.M。建立了新方法，原來的方法(DEFAULT.M)未改變。我們常用現有的方法作為模板建立新方法。方法自動存儲在缺省地址C:MSDCHEMnMETHODS這里n是儀器編號。#使用自動定量設置建立多濃度級別校正數據庫使用自動定量設置AutoQuantSetup（自動定量設置）提供了一種給

14、定量數據庫創(chuàng)建化合物列表的半自動方法。下列指南可引導您使用AutoQuantSetup（自動定量設置）的全部步驟。該指南使用化學工作站隨附的演示文件。在該指南中使用default.m和evaldemo.d之前，請先復制一份。1. 在DataAnalysis（數據分析）中，加載示范方法C:MSDCHEM1METHODSDEFAULT.M和示范數據文件C:MSDCHEM1DATAEVALDEMO.D。2. 在Spectrum/SelectLibrary（譜圖/選擇譜庫）下選擇DEM0.L。3. 選擇Calibrate/AutoQuantSetu（校準/自動定量設置）。4. 出現Quantitati

15、onDatabaseGlobals（全局定量數據庫）對話框時，進行如下更改：校準標題鍵入AutoQuantTutorial使用RTEINT選中該對話框來使用RTE積分器（不選則使用化學工作站積分器）。單擊OK（確定）。5. 出現Dodecane（十二烷）的ChooseCompoundName（選擇化合物名稱）對話框時，單擊Skip（跳過）。為了示范，您可以先跳過這個化合物，以后再把它添加到數據庫中。6. 接下來出現Biphenyl（聯苯）。保持缺省名稱，單擊Add（添加）。7. 接著出現4-Chlorobiphenyl（4-氯聯苯）。保持缺省名稱，單擊Add（添加）。8. 接著出現Methyl

16、palmitate（十六酸甲酯）。要將它指定為內標，單擊ISTD（內標）。單擊ISTD同時把化合物添加到數據庫中。9. 當軟件提示Quantitatenow?（現在定量？）時，單擊Yes（是）。文件量化后，出現UpdateCalibration（更新校準）對話框。10. 選擇AddNewLevel（添加新校準級），輸入如下內容：CalibLevelID=50CmpdConc=50ISTDConc=50然后單擊DoUpdate（執(zhí)行更新）。11. 顯示EditCompounds（編輯化合物）對話框時，注意十六酸甲酯處于列表頂端的正確位置，在其名稱旁邊有一個星號說明它是內標。12. 單擊Exit（

17、退出）關閉對話框，或單擊View（査看）檢查第1頁、第2頁和第3頁中的各化合物參數。13. 要了解怎樣向定量數據庫中插入化合物，請選擇AutoQuantSetup（自動定量設置）。14. 選擇InsertCompoundsinDatabase（在數據庫中插入化合物），單擊OK（確定）。15. 出現QuantitationDatabaseGlobals（全局定量數據庫）對話框時，不要更改參數。單擊OK（確定）。軟件會再次開始鑒定峰。出現ChooseCompoundName（選擇化合物名稱）對話框。16對話框中出現Dodecan（十二烷）時，保持缺省名稱并單擊Add（添加）。出現EditCompo

18、und（編輯化合物）對話框。17. 選中Biphenyl（聯苯），選擇一個插入點并單擊InsertAbove（插入上文）。18. ChooseCompoundNames（選擇化合物名稱）對話框中留存的3個化合物已經存在定量數據庫中，因此單擊Skip（跳過）。跳過這3個化合物后，軟件將問您是否StopNow?（現在停止?）單擊Yes（是）。這一特點在對大量化合物進行數據庫操作時非常有用。19. 系統問您是否希望定量數據庫時，單擊Yes（是）。20. 出現UpdateCalibration（更新校準）對話框時，選擇Recalibrate（重新校準）并對Responses（響應）和RetentionTimes（保留時間）字段選擇替換。單擊DoUpdate（進行更新）。21. 出現EditCompounds（編輯化合物）對話框時，單擊View（査看）并檢