乳腺癌HER2FISH檢測判讀及報告

1、乳腺癌HER2FISH僉測-檢測意義、建議及標本準備HER2與孚L腺癌乳腺癌是女性惡性腫瘤中發(fā)病率最高的一種，正以每年3%4%的速度急劇上升，已成為女性的第一殺手。臨床上大約20-35%的浸潤性乳腺癌存在HER2基因的擴增及蛋白的高表達。HER2基因（又名HER2/neu,c-erbB-2）位于17q12,是表皮生長因子受體（HER）家族成員之一，HER家族在細胞生理過程中發(fā)揮重要的調節(jié)作用。HER2編碼相對分子量185KD的跨膜受體樣蛋白，具有酪氨酸激酶活性。HER2是重要的乳腺癌預后判斷因子，HER2陽性（過表達或擴增）的乳腺癌，其臨床特點和生物學行為有特殊表現，治療模式也與其他類型的乳腺

2、癌有很大的區(qū)別。HER2檢測方法有免疫組化（IHC）和熒光原位雜交（FISH）等。2014年NCCN乳腺癌臨床實踐指南和乳腺癌HER2檢測指南2014版均強調：FISH是檢測HER2基因狀態(tài)的金標準。一.檢測意義1 .判斷預后：HER2陽性的乳腺癌浸潤性強，無病生存期短，預后差。2 .指導治療：HER2基因擴增的乳腺癌患者對內分泌治療藥物（如他莫昔芬）產生耐藥。HER2基因擴增的乳腺癌患者對CMF方案不敏感，宜采用大劑量慈環(huán)類藥物和紫杉醇類藥物方案；HER2基因擴增的乳腺癌患者明顯受益于Herceptin（赫賽汀，2001年FDA批準上市）等靶向藥物治療。二.檢測建議IHC和FISH檢測HER

3、2的狀態(tài)一致性很高，但也存在著差異，數據統計如下表1和表2示，對于IHC2+樣本必須要用FISH進一步確認結果；0、1+或3+,根據條件，可再做FISH驗證。Fgwr*1PT&temE,即andGeneAmplilk0llnIHC-FISH陽性率（%）陰性陽性0892565.91+51421129.12+32741555.93+7466089.9表1:(2004)HER2AmplificationRatiosbyFluorescenceInSituHybridizationandCorrelation表2:2007年衛(wèi)生部科教司牽頭組織全國73家三級以上醫(yī)院歷時2年完成熒光原位雜交技術（FIS

4、H）withImmunohistochemistryinaCohortof6556Breast用于乳腺癌患者Her-2檢測的臨床研究”課題，檢測標CancerTissues.ClinicalBreastCancer本達3368例因此，2014年NCCN乳腺癌臨床實踐指南和乳腺癌HER2檢測指南（2014版）均建議先進行HER2蛋白的IHC檢測，IHC2+樣本進行ISH（FISH、DISH或CISH）檢測。，HER2HHER2toning0fvaficfabaidMCMutreltaxiMEftitiISHifum-orcmdtrmwtntfNCeftSH(Ifntwipeclmtii-flva

5、lflbta).HGR2mungbywIKlVMaingfaiprobwffiHfotngvHERJcqpy2nHtSOgM國ISHHMuttnflubutwilldiMkprabtZe*mb20或眾多信號連接成簇時可不計數，視為基因擴增；8 .若為臨界值，則需要再計數20個細胞核中的信號或由另外一個觀察者重新計數，如仍為臨界值，則應在FISH檢測報告中注明，或換其它方法或其它蠟塊重新檢測；9 .若HER2基因擴增在不同癌細胞中存在異質性時，應在另一癌區(qū)域再計算2030個癌細胞核中的紅、綠信號值，報告其最大值，并加以注釋；10 .判讀時可以將乳腺組織中的正常細胞（如成纖維細胞、血管內皮細胞、淋

6、巴細胞、正常乳腺上皮細胞）的HER2信號和CSP17信號作為內對照。1拙膽核靛分量曼，他自1年在里區(qū)域內.數：可卜珊膽枝內為兩十根色.兩個封色(n法也內；植的n色信號和兩個溫色侍號,一個佛色信號擴不計致”間核中看，f比日曲q兩仃的摑弛州口域巡行直通.商粵倍號座區(qū)域內.(1%)計數為：四中橙色信號和M個導也格號，個阻色信號幢費開.二-）計放為:個帽色仁丐和兩個母色匕修”個蹴型恪號被裂升.睢的燃號也被裂開.H曲為：曲小粒色信號和小愫色信）計改為:三個和色仁號和一個釉色心號”或）計題為：叫個IR色行號和睛個盤色信號口一綠色牌斜，CEP17=相色探鼾，LSIHEH-?neii一些常見信號類型及計數方法

7、摘自乳腺癌HER-2基因檢測試劑盒（FISH法）說明書一AbbottMoleularInc.四.結果判讀在清晰的腫瘤區(qū)域，按以上計數要求在至少20個核內計數GSPHER2（紅色）和CSP17（綠色）信號，分別記錄GSPHER2和CSP17的信號總數，再計算平均每個細胞HER2拷貝數、平均每個細胞CSP17拷貝數以及GSPHER2和CSP17比值。A.若HER2/CSP172.0,且平均HER2拷貝數/細胞4.0,HER2陰性；B.若HER2/CSP172.0,且平均HER2拷貝數/細胞6.0,但A4.0寸,HER2結果不確定；C.若HER2/CSP17A2.0或HER2/CSP176.0HER

8、2陽性。乳腺癌HER2檢測指南2014版使用經過酷亞的班搜鐘1EH方法進行HERZ檢律檀潤瘙）I一一對照出現假期結果I.一-平均HERE拷貝數，幅腮4.0ISH-桂乳腺癌HER2檢測指南2014版注：a：對于HER2/CSP17比值）2.0但平均HER2拷貝數/細胞4.0的病例是否應該視為FISH陽性目前尚存爭議，建議對這部分病例在報告中加以備注，提示目前的爭議，建議臨床醫(yī)師參考免疫組織化學檢測結果并與患者進行必要的溝通；b:見于均質、連續(xù)的浸潤細胞，且占浸潤癌的10%以上五.HER2FISH判讀標準的變化乳腺癌HER2檢測指南2009版判讀標準：A.若HER2/CSP171.8,HER2陰性

9、；B.若HER2/CSP17A1.8且2.2HER2陽性。新舊判讀標準的比較：2014版新標準的截斷值為2.0,2009版老標準的截斷值為1.8和2.2;2014版新標準不只是HER2/CSP17的比值，需結合HER2基因的拷貝數進行判讀；2009版則僅根據HER2/CSP17的比值進行判讀，不考慮HER2基因拷貝數。新舊判讀標準銜接中可能出現的問題：2014版新標準出現HER2檢測結果不確定的情況會比2009版標準更少；2014版新標準判讀陰陽性結合了HER2基因的拷貝數，有些2009版標準判讀結果為陰性的標本，如果HER2基因拷貝數6.02014版新標準則判為陽性。乳腺癌HER2檢測指南2

10、009版與乳腺癌HER2檢測指南2014版乳腺癌HER2FISH僉測-報告及結果解釋一.報告要求乳腺癌HER2檢測指南2014版要求檢測報告包括如下內容：患者信息（包括姓名、性別、年齡、門診/住院號）、送檢醫(yī)師姓名、送檢日期、標本信息（包括病理號和蠟塊號卜標本部位和類型、探針信息、檢測方法、是否使用圖像分析、對照設置情況、樣本量是否適合評估、判讀結果（包括評估的細胞數量、平均HER2拷貝數/細胞、平均CSP17拷貝數/細胞、平均HER2拷貝數/平土勻CSP17拷貝數白比值）、檢測結論（如陽性、不確定、陰性、無法判讀）。這里強調兩個概念：17號染色體計數和HER2異質性。1. 17號染色體數目：

11、FISH雙探針檢測系統中加入CSP17探針的目的是為了在檢測HER2基因的同時檢測17號染色體數目，從而區(qū)分17號染色體的非整倍體與HER2基因擴增。近年來的研究顯示17號染色體多倍體與CSP17多信號點（著絲粒區(qū)多點）是不同的概念。17號染色體多倍體較罕見，而部分乳腺癌中17號染色體上存在HER2基因和著絲粒區(qū)的共同擴增。越來越多的學者認為，與GSPHER2/CSP17比值相比，HER2拷貝數對于HER2基因擴增的判斷更為重要。因此在HER2FISH檢測結果中除報告GSPHER2/CSP17比值外，還應分別報告HER2拷貝數和CSP17的數值。2. HER2基因的異質性：浸潤性乳腺癌中HER

12、2表達或擴增可存在異質性。雖然HER2基因異質性的臨床意義目前仍不明確，但它可導致IHC與ISH檢測、原發(fā)灶與轉移灶、穿刺標本與手術切除標本的檢測結果不一致。在ISH計數之前，應觀察整張切片或使用IHC確定可能存在HER2擴增的區(qū)域。需要強調的是，即使存在異質性，但只要擴增細胞連續(xù)、均質，且占浸潤癌10%以上，就應明確報告為ISH陽性。在報告中可補充報告不同細胞群（10%）的計數彳1（包括計數的細胞總數、HER2拷貝數、CSP1嚶值、GSPHER2/CSP17比值），并報告擴增細胞群占所有浸潤癌細胞的比例。2 .常見結果及解釋FISH陰性（HER況擴增），17號二倍體。GSPHER2心SP17

13、（紅色/綠色）2.0。FISH臨界，17號多倍體（HER2基因伴隨多拷貝）。GSPHER2心SP17（紅色/綠色）2.0，但平均每個細胞HER2貝數為4.9個，介于4.0-6.0之間。FISH陽性，17號多倍體。GSPHER2心SP17（紅色/綠色）2.0，但平均每個細胞HER2貝數為6.8個，大于6.0。FISH陽性，17號染色體二倍體。GSPHER2心SP17（紅色/綠色）FISH陽性，17號染色體多倍體。GSPHER2/CSP17（紅色/綠色）FISH陽性，17號染色體單倍體。GSPHER2/CSP17（紅色/綠色）2.0o2.0。2.0,平均每個細胞HER2貝數為2.0個，平均每個細胞

14、CSP1褚貝數為1.0個。注：對于HER2/CSP17比值2.0但平均HER2拷貝數/細胞4.0的病例是否應該視為FISH陽性目前尚存爭議，建議對這部分病例在報告中加以備注，提示目前的爭議，建議臨床醫(yī)師參考免疫組織化學檢測結果并與患者進行必要的溝通3 .報告模板參考1.參考模板一fBH檢扁型果：1.免我金所同婦J總導反便口照顯1HE覆alSFF借況：二轉狀升布一點狀分布：刑嗝J.過JhL出出指工釣：上.HLR-2LSF17比值;話加HHcir曾胃;七MHFRIjr聊口可語陰性HER?鑼督F耳H結髀IfU2.參考模板二玷果判迎：用于千古的臚盟at慢至個倍導呈點狀升而；HER,信甩70個CSJ17號操祁個即扁值-092信號早露腓飾和后第魚W后性艙體狀況：口里體一就多信蘆結果：I.HER-：基因元獷案.亡即“捷斯二型：l.OSd工17年祟隹體為二信，九HER-2判讀計數