紫外吸收光譜法分析應用課件

1、紫外紫外- -可見分子吸收光譜法可見分子吸收光譜法(UV-VIS spectrometry)(UV-VIS spectrometry)第一節(jié)第一節(jié) 概述概述一、分子吸收光譜分析的發(fā)展概況一、分子吸收光譜分析的發(fā)展概況可見可見- -紫外紫外- -紅外紅外目視比色目視比色- -光電比色光電比色- -分光光度分光光度光聲光譜光聲光譜- -長光程吸收光譜長光程吸收光譜- -傳感器傳感器二、分子吸收光譜的分類和特征二、分子吸收光譜的分類和特征q紫外紫外-可見可見電子光譜電子光譜 Ee =1 - 20 eVq紅外紅外振動光譜振動光譜0.05-1q遠紅外遠紅外轉動光譜轉動光譜0.005-0.05電磁波區(qū)域電

2、磁波區(qū)域電磁波可分為高頻、中頻及低頻區(qū)。高頻對應放射線（電磁波可分為高頻、中頻及低頻區(qū)。高頻對應放射線（g g射線，射線，C C射線），涉及原子核，內層電子；而中等頻率指射線），涉及原子核，內層電子；而中等頻率指紫外紫外-可見光，近紅外、中紅外和遠紅外光，涉及外層電可見光，近紅外、中紅外和遠紅外光，涉及外層電子能級的躍遷，振動及轉動。低頻指電波（微波，無線子能級的躍遷，振動及轉動。低頻指電波（微波，無線電波），涉及轉動，電子自旋，核自旋等。電波），涉及轉動，電子自旋，核自旋等。 光的本質是電磁輻射，光的基本特性是光的本質是電磁輻射，光的基本特性是波粒二象性波粒二象性(wave and corp

3、uscle duality)。 光的波動性是指光可以用互相垂直的、以正弦波振蕩的電光的波動性是指光可以用互相垂直的、以正弦波振蕩的電場和磁場表示。場和磁場表示。電磁波具有速度、方向、波長、振幅和偏振面等。電磁波具有速度、方向、波長、振幅和偏振面等。光可有自然光、偏振光（線偏振或園偏振）、連續(xù)波、調光可有自然光、偏振光（線偏振或園偏振）、連續(xù)波、調制波、脈沖波等。制波、脈沖波等。 電磁輻射的特性電磁輻射的特性物質具有能量，是誘電體。物質與光的作用可看成是光物質具有能量，是誘電體。物質與光的作用可看成是光子對能量的授受，即子對能量的授受，即 hn=E1-E0，該原理廣泛應用于光譜，該原理廣泛應用于

4、光譜解析。解析。電磁輻射與物質的作用本質是物質吸收光能后發(fā)生躍遷。電磁輻射與物質的作用本質是物質吸收光能后發(fā)生躍遷。躍遷是指物質吸收光能后自身能量的改變。躍遷是指物質吸收光能后自身能量的改變。因這種改變是量子化的，故稱為躍遷。因這種改變是量子化的，故稱為躍遷。不同波長的光，能量不同，躍遷形式也不同，因此有不不同波長的光，能量不同，躍遷形式也不同，因此有不同的光譜分析法。同的光譜分析法。 電磁輻射與物質的相互作用電磁輻射與物質的相互作用譜圖的三要素譜圖的三要素一般進行光譜分析時，要同時注意譜圖的位置（能量）、一般進行光譜分析時，要同時注意譜圖的位置（能量）、強度（躍遷幾率）、波寬這三個要素，才能

5、得出正確的結強度（躍遷幾率）、波寬這三個要素，才能得出正確的結論。論。遠紫外遠紫外紫外紫外可見可見紅外紅外遠紅外遠紅外10200nm200380nm380780nm0.7550m50250 m分子外層價電子躍遷分子外層價電子躍遷分子外層價電子躍遷分子外層價電子躍遷分子外層價電子躍遷分子外層價電子躍遷分子中原子的振動分子中原子的振動分子的轉動分子的轉動遠紫外吸收遠紫外吸收紫外吸收紫外吸收可見吸收可見吸收紅外吸收紅外吸收遠紅外吸收遠紅外吸收光譜類型光譜類型分子運動形式分子運動形式波波 長長光譜區(qū)域光譜區(qū)域分子內部運動分子內部運動 價電子運動、分子內原子在平衡附近的振動、價電子運動、分子內原子在平衡

6、附近的振動、分子作為整體繞其重心的轉動。分子作為整體繞其重心的轉動。分子能級分子能級 電子能級、振動能級、轉動能級電子能級、振動能級、轉動能級分子總能量分子總能量 E=Ee+Ev+Er當分子吸收一定能量的電磁輻射時，分子由較當分子吸收一定能量的電磁輻射時，分子由較低的能級低的能級E1 躍遷到較高的能級躍遷到較高的能級E2，吸收輻射的，吸收輻射的能量與分子的這兩個能級的能量差相等。能量與分子的這兩個能級的能量差相等。 E=E2-E1=h=hc/ 由于三種能級之間的差值很小，不能區(qū)分開，由于三種能級之間的差值很小，不能區(qū)分開，得到的得到的分子光譜為帶光譜分子光譜為帶光譜。由于三種能級躍遷所由于三種

7、能級躍遷所需要能量不同需要能量不同，所以需要，所以需要吸收吸收不同波長的電磁輻射不同波長的電磁輻射使產生躍遷，所產生使產生躍遷，所產生的光譜應在不同的光學區(qū)域。的光譜應在不同的光學區(qū)域。 eeE Ea b cRoRoRoVoV1EoE1E電子能級電子能級V振動能級振動能級R轉動能級轉動能級分子在吸收過程中發(fā)生電子能級躍遷的同時伴隨振動分子在吸收過程中發(fā)生電子能級躍遷的同時伴隨振動能級和轉動能級的能量變化。能級和轉動能級的能量變化。原子對電磁輻射的吸收只涉及原子核外電子能量的變原子對電磁輻射的吸收只涉及原子核外電子能量的變化，是一些分離的化，是一些分離的特征銳線，特征銳線，而分子的吸收光譜是由成

8、而分子的吸收光譜是由成千上萬條彼此靠得很緊的譜線組成，看起來是千上萬條彼此靠得很緊的譜線組成，看起來是一條連續(xù)一條連續(xù)的吸收帶。的吸收帶。溶液中相鄰分子間的碰撞導致分子各種能級的細微變溶液中相鄰分子間的碰撞導致分子各種能級的細微變化，也會引起譜帶的進一步加寬和匯合。當分子由氣態(tài)化，也會引起譜帶的進一步加寬和匯合。當分子由氣態(tài)變?yōu)槿芤簳r，一般會失去振動精細結構變?yōu)槿芤簳r，一般會失去振動精細結構 分子的電子光譜的特點：分子的電子光譜的特點：q在波長范圍內按一定強度分布的譜帶在波長范圍內按一定強度分布的譜帶帶光譜帶光譜q 波長位于波長位于紫外紫外-可見區(qū)可見區(qū)物質的紫外吸收光譜決定于分子中物質的紫外

9、吸收光譜決定于分子中價電子的躍遷價電子的躍遷，因此分子，因此分子的組成不同，特別是價電子性質不同，則產生吸收光譜也不的組成不同，特別是價電子性質不同，則產生吸收光譜也不用。用。三、分子吸收光譜的特點三、分子吸收光譜的特點q可進行分子的定性和定量分析可進行分子的定性和定量分析q可用于一些物理化學常數(shù)的測定（如平可用于一些物理化學常數(shù)的測定（如平衡常數(shù)等）衡常數(shù)等）q儀器結構簡單、價格便宜儀器結構簡單、價格便宜q應用范圍廣泛（無機離子、有機化合物、應用范圍廣泛（無機離子、有機化合物、生物大分子分析等）生物大分子分析等）一、吸收光譜與分子結構一、吸收光譜與分子結構1、有機化合物的吸收光譜、有機化合物

10、的吸收光譜根據(jù)分子軌道理論，分子中的電子軌道有根據(jù)分子軌道理論，分子中的電子軌道有 n、 和和 三種三種 * *n第二節(jié)第二節(jié) 紫外紫外-可見分子吸收光譜的理論基礎可見分子吸收光譜的理論基礎反鍵軌道非鍵軌道成鍵軌道 *躍遷躍遷 能量很大能量很大 吸收光譜在真空紫外區(qū)吸收光譜在真空紫外區(qū) 多為飽和烴多為飽和烴甲烷甲烷125 nm乙烷乙烷135 nmn * 躍遷躍遷 所需能量小于所需能量小于 *躍遷（躍遷（150-250 nm） 含有未共用電子對（含有未共用電子對（n電子）原子的飽和化合物都可發(fā)生電子）原子的飽和化合物都可發(fā)生躍遷的摩爾吸光系數(shù)比較小，一般在躍遷的摩爾吸光系數(shù)比較小，一般在100-

11、3000 L / mol cm化合物化合物 max maxH2O1671480CH3OH184150CH3Cl173200(CH3)2O1842520 * 和和 n * 躍遷躍遷 * 和和 n * 躍遷能量低（躍遷能量低（200 nm） 含有不飽和鍵的有機分子易發(fā)生這類躍遷含有不飽和鍵的有機分子易發(fā)生這類躍遷 C=C C=C ; N=N ; C=O 有機化合物的紫外有機化合物的紫外-可見吸收光譜分析多以這兩類可見吸收光譜分析多以這兩類躍遷為基礎躍遷為基礎 * 比比 n * 躍遷幾率大躍遷幾率大 100-1000 倍倍 *躍遷吸收強，躍遷吸收強， 104 n * 躍遷吸收弱，躍遷吸收弱， 500

12、生色團生色團 含有含有 鍵不飽和官能團，能進行鍵不飽和官能團，能進行n * 、 * 含碳碳雙、三鍵，碳氧雙鍵，氮氮雙鍵基團。含碳碳雙、三鍵，碳氧雙鍵，氮氮雙鍵基團。助色團助色團 基團本身無色，但能增強生色團顏色基團本身無色，但能增強生色團顏色為含有為含有n電子，電子， n *，且能與，且能與 電子作用，產生電子作用，產生n 共軛。共軛。-OH、-NH2、-SH、-SO3H紅移和紫移紅移和紫移 因取代基或溶劑的改變，使吸收帶的最大吸收因取代基或溶劑的改變，使吸收帶的最大吸收波長發(fā)生移動。向長波長方向移動為紅移，向短波長方向移動波長發(fā)生移動。向長波長方向移動為紅移，向短波長方向移動為紫移。為紫移。

13、CH4 * 150210nmCH3I n* 259 nmCH2I2 n* 292nmCHI3 n* 349nm生生色色團團 max(nm) max(l/moL.cm)躍躍遷遷類類型型1758000 *1909000 *280190160202000n *n * *20441 n *20550 n *500240109000 n *34024010n *n *CCCCCOCOOH COORCSNN影響紫外影響紫外-可見光譜的因素可見光譜的因素 共軛效應：共軛效應： 電子共軛體系增大，波長紅移、電子共軛體系增大，波長紅移、吸收增強；吸收增強； 取代基影響取代基影響：能夠引起能夠引起 電子永久性轉移

14、的取電子永久性轉移的取代基使波長紅移（助色團）；代基使波長紅移（助色團）； 溶劑影響：溶劑影響：一般情況下分子的激發(fā)態(tài)極性大于一般情況下分子的激發(fā)態(tài)極性大于基態(tài)，因此溶劑極性增大有利于激發(fā)態(tài)穩(wěn)定，基態(tài)，因此溶劑極性增大有利于激發(fā)態(tài)穩(wěn)定，能量降低，波長紅移。能量降低，波長紅移。OHCCH3ONO2HOHOO2NHONO2max185nm204nm210nm270nm240nm270nm328nm278.5nm273.5nm317.5nmmax取代基的影響：取代基的影響：在光的作用下，有機化合物都有發(fā)生極化的在光的作用下，有機化合物都有發(fā)生極化的趨向，既能轉變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)。當共軛雙鍵的兩端有容易使電子

15、趨向，既能轉變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)。當共軛雙鍵的兩端有容易使電子流動的基團流動的基團(給電子基或吸電子基給電子基或吸電子基)時，極化現(xiàn)象顯著增加。時，極化現(xiàn)象顯著增加。給電子基為帶有未共用電子對的原子的基團。如給電子基為帶有未共用電子對的原子的基團。如-NH2, -OH等。未共用電子對的流動性很大，能夠和共軛體系中的等。未共用電子對的流動性很大，能夠和共軛體系中的 電電子相互作用引起永久性的電荷轉移，形成子相互作用引起永久性的電荷轉移，形成p- 共軛，降低了共軛，降低了能量，能量， max紅移。吸電子基是指易吸引電子而使電子容易流紅移。吸電子基是指易吸引電子而使電子容易流動的基團。動的基團。共軛體系中引入

16、吸電子基團，也產生共軛體系中引入吸電子基團，也產生 電子的永久性轉移，電子的永久性轉移， max紅移。紅移。 電子流動性增加，吸收光子的吸收分數(shù)增加，吸電子流動性增加，吸收光子的吸收分數(shù)增加，吸收強度增加。給電子基與吸電子基同時存在時，產生分子內收強度增加。給電子基與吸電子基同時存在時，產生分子內電荷轉移吸收，電荷轉移吸收， max紅移，紅移， max增加。增加。 給電子基的給電子能力順序為：給電子基的給電子能力順序為： -N(C2H5)2-N(CH3)2-NH2-OH-OCH3-NHCOCH3-OCOCH3-CH2CH2COOH-H 吸電子基的作用強度順序是：吸電子基的作用強度順序是： -N

17、+(CH3)3-NO2-SO3H-COH-COO-COOH-COOCH3-Cl-Br-I 除了有機化合物的除了有機化合物的 *和和n *躍遷吸收帶以外，當外來躍遷吸收帶以外，當外來輻射照射某些有機或無機化合物時輻射照射某些有機或無機化合物時,可能發(fā)生一個電子從體可能發(fā)生一個電子從體系具有電子給予體特性部分系具有電子給予體特性部分(稱為給體稱為給體,donor)轉移到該體轉移到該體系的另一具有電子接受體特性的部分系的另一具有電子接受體特性的部分(稱為受體，稱為受體，acceptor)，這種電子轉移產生的吸收譜帶，這種電子轉移產生的吸收譜帶，稱為電荷轉移稱為電荷轉移吸收帶。吸收帶。電荷轉移吸收帶涉

18、及的是給體的一個電子向受體的一個電電荷轉移吸收帶涉及的是給體的一個電子向受體的一個電子軌道上的躍遷，激發(fā)態(tài)是這一內氧化還原過程的產物。子軌道上的躍遷，激發(fā)態(tài)是這一內氧化還原過程的產物。電荷轉移過程可表示如下：電荷轉移過程可表示如下： 式中式中D與與A分別代表電子給體與受體。下面是能產生電分別代表電子給體與受體。下面是能產生電荷轉移吸收帶的一些化合物。荷轉移吸收帶的一些化合物。 -NR2是電子給體，是電子給體，苯環(huán)是電子受體。苯環(huán)是電子受體。 苯環(huán)是電子給體，氧苯環(huán)是電子給體，氧是電子受體是電子受體。 電荷轉移吸收帶的一個特點是吸收強度大，電荷轉移吸收帶的一個特點是吸收強度大， max 104l

19、/mol cm因此含有這類結構的分子測定靈敏度高，該原理已被廣泛應用因此含有這類結構的分子測定靈敏度高，該原理已被廣泛應用于分子識別的主體分子設計中。于分子識別的主體分子設計中。 2、無機化合物的吸收光譜、無機化合物的吸收光譜某些無機金屬離子也會產生紫外某些無機金屬離子也會產生紫外-可見吸收。如含可見吸收。如含d電子的電子的過渡金屬離子會產生配位體場吸收帶。依據(jù)配位場理論，過渡金屬離子會產生配位體場吸收帶。依據(jù)配位場理論，無配位場存在時，無配位場存在時， 能量簡并；當過渡金屬離子處于配位體形成的負電場中時，能量簡并；當過渡金屬離子處于配位體形成的負電場中時，5個簡并的個簡并的d軌道會分裂成能量

20、不同的軌道。不同配位體場，軌道會分裂成能量不同的軌道。不同配位體場，如八面體場、四面體場、正方平面配位場等使能級分裂不如八面體場、四面體場、正方平面配位場等使能級分裂不等。等。 xydxzdyzd22yxd2zdd-d 電子躍遷電子躍遷絕大多數(shù)過渡金屬離子都具有未充滿的絕大多數(shù)過渡金屬離子都具有未充滿的 d 軌道，軌道，按照晶體場理論，當它們在溶液中與水或其它配體生成按照晶體場理論，當它們在溶液中與水或其它配體生成配合物時，配合物時，受配體配位場的影響，原來能量相同的受配體配位場的影響，原來能量相同的 d軌軌道發(fā)生能級分裂，產生道發(fā)生能級分裂，產生 d-d 電子躍遷。電子躍遷。配體配位場越強，

21、配體配位場越強，d 軌道分裂能越大，吸收波長越軌道分裂能越大，吸收波長越短。短。（f - f 躍遷與此類似）躍遷與此類似）沒有配位場沒有配位場八面體配位場八面體配位場dxy dxx dyzdx2 dx2-y2 E一般配位體場吸收帶在可見區(qū)，一般配位體場吸收帶在可見區(qū)， maxmax約約0.1-100 l/mol cm0.1-100 l/mol cm，吸收很弱。因此配位體場吸收帶對定量分析用處不大。吸收很弱。因此配位體場吸收帶對定量分析用處不大。鑭系及錒系離子鑭系及錒系離子5f電子躍遷產生的電子躍遷產生的f電子躍遷吸收譜帶出現(xiàn)電子躍遷吸收譜帶出現(xiàn)在紫外在紫外-可見區(qū)。由于可見區(qū)。由于f軌道為外層

22、軌道所屏蔽，受溶劑性質軌道為外層軌道所屏蔽，受溶劑性質或配位體的影響很小，故譜帶窄。或配位體的影響很小，故譜帶窄。 少數(shù)無機陰離子，如少數(shù)無機陰離子，如NO3-( max=313 nm)、CO32-( max =217 nm)、NO2-( max =360 、280 nm)、N3-( max =230 nm)、CS32-( max =500 nm)等也有紫外等也有紫外-可見吸收?？梢娢铡?例如：例如：H2O 配位場配位場 NH3 配位場配位場Cu 2+ 水合離子水合離子 794 nm淺藍色淺藍色Cu 2+ 氨合離子氨合離子663 nm深藍色深藍色小結：小結：分子結構分子結構光譜特征光譜特征定

23、性分析定性分析q不同結構的分子由于不同結構的分子由于共軛程度不同共軛程度不同，分子吸收的特征，分子吸收的特征不同；不同；q相同共軛結構的分子骨架，因相同共軛結構的分子骨架，因助色團助色團的加入或改變，的加入或改變，導致光譜位移和吸收系數(shù)變化；導致光譜位移和吸收系數(shù)變化；q相同配體，因相同配體，因過渡金屬離子過渡金屬離子不同，導致配位場的變化不同，導致配位場的變化或電荷轉移躍遷，或配體共軛結構的變化，光譜發(fā)生變或電荷轉移躍遷，或配體共軛結構的變化，光譜發(fā)生變化化IoIbSdx二、吸收定律（定量分析的基礎）二、吸收定律（定量分析的基礎）IxdIxdIxIx吸收光強入射光強吸收率任一截面的吸收率任一

24、截面的吸收率A = b c吸收定律吸收定律二、吸收定律的適用性與限制二、吸收定律的適用性與限制1、吸收定律具有加和性，即、吸收定律具有加和性，即mmAAAbiiciA 21122221111lglgIIbcAIIbcAooiIiIAo lgiiIAo lg特別是存在非吸收線特別是存在非吸收線(或吸收很小或吸收很小,雜散光雜散光)和濃度較大時，和濃度較大時，I變得變得 很小。很小。I i= 常數(shù)吸收定律或比爾定律，其成立條件是待測物為均一的稀溶液、吸收定律或比爾定律，其成立條件是待測物為均一的稀溶液、氣體等，無溶質、溶劑及懸濁物引起的散射；入射光為單色平氣體等，無溶質、溶劑及懸濁物引起的散射；入

25、射光為單色平行光。行光。比爾定律在有化學因素影響時不成立。比爾定律在有化學因素影響時不成立。解離、締合、生成絡合物或溶劑化等會對比爾定律產生偏離。解離、締合、生成絡合物或溶劑化等會對比爾定律產生偏離。比爾定律在有儀器因素影響時也不成立。比爾定律在有儀器因素影響時也不成立。非單色光對比爾定律產生偏離。非單色光對比爾定律產生偏離。雜散光雜散光(非吸收光非吸收光)也會對比爾定律產生影響。也會對比爾定律產生影響。 其他影響因素包括溶劑、光效應等也應考慮。其他影響因素包括溶劑、光效應等也應考慮。 三、紫外三、紫外-可見吸收光譜的靈敏度可見吸收光譜的靈敏度 = 0.4343 N aiai = 1x10-1

26、5 cm2吸光分子的截面積吸光分子的截面積 N = 6.02x 1023因為因為 為摩爾吸光系數(shù)為摩爾吸光系數(shù) ai 的單位是的單位是 cm2 （cm3 是是 ml,變成變成L除除1000）所以所以 = 0.4343 N ai = 0.4343 x 6.02x 1023 x 1x10-15/ 1000 = 105若若1%吸收吸收A=0.0044b = 1C=A 0.0044 b 100000= 4.4 x 10-8 (M)此即為方法的理論靈敏度此即為方法的理論靈敏度第三節(jié)第三節(jié)紫外紫外-可見分光光度計可見分光光度計一、基本結構一、基本結構光源光源單色器單色器狹狹縫縫樣品室樣品室檢測器檢測器、光

27、源、光源氫燈、氘燈、鎢燈氫燈、氘燈、鎢燈常用的光源有熱輻射光源和氣體放電光源。常用的光源有熱輻射光源和氣體放電光源。q利用固體燈絲材料高溫放熱產生的輻射作為光源的是熱利用固體燈絲材料高溫放熱產生的輻射作為光源的是熱輻射光源。如鎢燈、鹵鎢燈。兩者均在可見區(qū)使用輻射光源。如鎢燈、鹵鎢燈。兩者均在可見區(qū)使用,鹵鎢燈鹵鎢燈的使用壽命及發(fā)光效率高于鎢燈。的使用壽命及發(fā)光效率高于鎢燈。q氣體放電光源是指在低壓直流電條件下氣體放電光源是指在低壓直流電條件下,氫或氘氣放電所氫或氘氣放電所產生的連續(xù)輻射。一般為氫燈或氘燈產生的連續(xù)輻射。一般為氫燈或氘燈,在紫外區(qū)使用。這種在紫外區(qū)使用。這種光源雖然能提供至光源雖

28、然能提供至160nm的輻射的輻射,但石英窗口材料使短波輻但石英窗口材料使短波輻射的透過受到限制射的透過受到限制(石英石英200nm,熔融石英熔融石英185nm),而大于而大于360nm時時,氫的發(fā)射譜線疊加于連續(xù)光譜之上氫的發(fā)射譜線疊加于連續(xù)光譜之上,不宜使用。不宜使用。2、單色器、單色器單色器的作用是使光源發(fā)出的光變成所需要的單色光。單色器的作用是使光源發(fā)出的光變成所需要的單色光。通常通常由入射狹縫、準直鏡、色散元件、物鏡和出射狹縫構成。由入射狹縫、準直鏡、色散元件、物鏡和出射狹縫構成。入射狹縫用于限制雜散光進入單色器，準直鏡將入射光束變入射狹縫用于限制雜散光進入單色器，準直鏡將入射光束變?yōu)?/p>

29、平行光束后進入色散元件。后者將復合光分解成單色光，為平行光束后進入色散元件。后者將復合光分解成單色光，然后通過物鏡將出自色散元件的平行光聚焦于出口狹縫。出然后通過物鏡將出自色散元件的平行光聚焦于出口狹縫。出射狹縫用于限制通帶寬度。棱鏡和光柵分光原理射狹縫用于限制通帶寬度。棱鏡和光柵分光原理與原子吸收與原子吸收類似類似。3、檢測器、檢測器簡易分光光度計上使用光電池或光電管作為檢測器。目前最常簡易分光光度計上使用光電池或光電管作為檢測器。目前最常見的檢測器是見的檢測器是光電倍增管光電倍增管其特點是在紫外其特點是在紫外- -可見區(qū)的靈敏度高，響應快。但強光照射會可見區(qū)的靈敏度高，響應快。但強光照射會

30、引起不可逆損害，因此高能量檢測不宜，需避光。引起不可逆損害，因此高能量檢測不宜，需避光。一般單色器都有出口狹縫。經光柵分光后的光是一組以角度分一般單色器都有出口狹縫。經光柵分光后的光是一組以角度分布的布的 1, 2等的光線通過旋轉光柵角度使某一波長的光經物鏡聚等的光線通過旋轉光柵角度使某一波長的光經物鏡聚焦到出口狹縫。焦到出口狹縫。二極管陣列檢測器二極管陣列檢測器不使用出口狹縫不使用出口狹縫,在其位置上放一系列二極在其位置上放一系列二極管的線形陣列管的線形陣列,則分光后不同波長的單色光同時被檢測。二極則分光后不同波長的單色光同時被檢測。二極管陣列檢測器的特點是響應速度快。但靈敏度不如光電倍增管

31、管陣列檢測器的特點是響應速度快。但靈敏度不如光電倍增管，因后者具有很高的放大倍數(shù)。，因后者具有很高的放大倍數(shù)。 4、樣品室、樣品室1 cm5 cm石英石英 玻璃玻璃二、紫外二、紫外-可見分光光度計可見分光光度計紫外紫外- -可見分光光度計，按其光學系統(tǒng)可分為可見分光光度計，按其光學系統(tǒng)可分為單波長與雙波長分光光度計單波長與雙波長分光光度計單光束與雙光束分光光度計單光束與雙光束分光光度計 1、單光束儀器、單光束儀器S1HW紅藍S2單光束儀器中，分光后的單色光直接透過吸收池，交互測定單光束儀器中，分光后的單色光直接透過吸收池，交互測定待測池和參比池。待測池和參比池。單光束儀器的缺點：單光束儀器的缺

32、點： 操作麻煩：操作麻煩：空白空白IO樣品樣品I任一波長任一波長 不能進行吸收光譜的自動掃描不能進行吸收光譜的自動掃描光源不穩(wěn)定性影響測量精密度光源不穩(wěn)定性影響測量精密度2、雙光束儀器、雙光束儀器IOI雙光束儀器中，從光源發(fā)出的光經分光后再經扇形旋轉鏡雙光束儀器中，從光源發(fā)出的光經分光后再經扇形旋轉鏡分成兩束，交替通過參比池和樣品池。分成兩束，交替通過參比池和樣品池。雙光束儀器的特點和不足：雙光束儀器的特點和不足： 測量方便，不需要更換吸收池測量方便，不需要更換吸收池 補償了儀器不穩(wěn)定性的影響補償了儀器不穩(wěn)定性的影響 實現(xiàn)了快速自動吸收光譜掃描實現(xiàn)了快速自動吸收光譜掃描 不能消除試液的背景成分

33、吸收干擾不能消除試液的背景成分吸收干擾單光束儀器中，單光束儀器中，分光后的單色光直接透過吸收池，交互測分光后的單色光直接透過吸收池，交互測定待測池和參比池。定待測池和參比池。儀器結構簡單，適用于測定特定波長的吸收，進行定量。儀器結構簡單，適用于測定特定波長的吸收，進行定量。而雙光束儀器中，從光源發(fā)出的光經分光后再經扇形旋轉而雙光束儀器中，從光源發(fā)出的光經分光后再經扇形旋轉鏡分成兩束，鏡分成兩束，交替通過參比池和樣品池，測得的是透過樣交替通過參比池和樣品池，測得的是透過樣品溶液和參比溶液的光信號強度之比。品溶液和參比溶液的光信號強度之比。雙光束儀器克服了單光束儀器由于光源不穩(wěn)引起的誤差，雙光束儀

34、器克服了單光束儀器由于光源不穩(wěn)引起的誤差，并且可以方便地對全波段進行掃描。并且可以方便地對全波段進行掃描。 3、雙波長儀器、雙波長儀器切光器 1 2儀器既可用作雙波長分光光度計又可用作雙光束儀器儀器既可用作雙波長分光光度計又可用作雙光束儀器當用作單波長雙光束儀器時當用作單波長雙光束儀器時,單色器出射的單色光束為遮光單色器出射的單色光束為遮光板所阻擋，單色器板所阻擋，單色器1出射的單色光束被斬光器分為兩束斷續(xù)出射的單色光束被斬光器分為兩束斷續(xù)的光，交替通過參比池和樣品池，最后由光電倍增管檢測信的光，交替通過參比池和樣品池，最后由光電倍增管檢測信號。號。當用作雙波長儀器時當用作雙波長儀器時,由兩個

35、單色器分出的不同波長由兩個單色器分出的不同波長1和和2的兩束光，由斬光器并束，使其在同一光路交替通過吸收池，的兩束光，由斬光器并束，使其在同一光路交替通過吸收池，由光電倍增管檢測信號。由光電倍增管檢測信號。雙波長儀器的主要特點是可以降低雜散光雙波長儀器的主要特點是可以降低雜散光,光譜精度高。光譜精度高。 單光束和雙光束單光束和雙光束分光光度計，就測量波長而言，都是分光光度計，就測量波長而言，都是單波長的。由一個單色器分光后，讓相同波長的光束單波長的。由一個單色器分光后，讓相同波長的光束分別通過試樣池和測量池，測得試樣池和測量池吸光分別通過試樣池和測量池，測得試樣池和測量池吸光度之差。度之差。

36、雙波長雙波長由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經過兩由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經過兩個單色器，同時得到兩個不同波長（個單色器，同時得到兩個不同波長（1和和2）的單色光。）的單色光。由斬光器并束，使其在同一光路交替通過吸收池由斬光器并束，使其在同一光路交替通過吸收池,由光由光電倍增管檢測信號。電倍增管檢測信號。雙波長儀器的主要特點是可以降低雜散光雙波長儀器的主要特點是可以降低雜散光,光譜精度高。光譜精度高。不僅能夠測量高濃度試樣，多組分混合試樣，還能測不僅能夠測量高濃度試樣，多組分混合試樣，還能測定混濁試樣。定混濁試樣。消除消除光譜重疊干擾光譜重疊干擾A 1 = Aa 1 + Ai 1

37、A 2 = Aa 2 + Ai 2 Ai 1 = Ai 2 A = Aa 2 - Aa 1 =（ a 1 - a 2）bCa消除了共存組分的干擾消除了共存組分的干擾雙波長儀器能否消除背景干擾？雙波長儀器能否消除背景干擾？A 1 = lg I0/ I1 = 1bC + AbA 2 = lg I0/ I2 = 2bC + Ab式中式中 Ab 為背景吸收或干擾物質的吸收為背景吸收或干擾物質的吸收若波長選擇合適，若波長選擇合適， 1和和 2處處 Ab相同相同A1 = 11C1 + 12C2 + 13C3 A2 = 21C1 + 22C2 + 23C3A3 = 31C1 + 32C2 + 33C3 ij

38、為在波長為在波長i測定組分測定組分j的摩爾吸光系數(shù)的摩爾吸光系數(shù)Ai 為為在波長在波長i測得該體系的總吸光度測得該體系的總吸光度解上聯(lián)立方程可求出待測物濃度解上聯(lián)立方程可求出待測物濃度C1、C2、C3分光光度計的校正分光光度計的校正 波長校正波長校正 可采用輻射光源法校正。常用氫燈可采用輻射光源法校正。常用氫燈(486.13, 656.28 nm)、氘燈氘燈(486.00, 656.10 nm)或石英低壓汞燈或石英低壓汞燈(253.65, 435.88, 546.07 nm)校正。校正。鐠釹玻璃在可見區(qū)有特征吸收峰，也可用來校正。鐠釹玻璃在可見區(qū)有特征吸收峰，也可用來校正。 苯蒸汽在紫外區(qū)的特

39、征吸收峰可用于校正。在吸收池苯蒸汽在紫外區(qū)的特征吸收峰可用于校正。在吸收池內滴一滴液體苯，蓋上吸收池蓋，待苯揮發(fā)后繪制苯蒸汽內滴一滴液體苯，蓋上吸收池蓋，待苯揮發(fā)后繪制苯蒸汽的吸收光譜。的吸收光譜。 吸光度校正吸光度校正以重鉻酸鉀水溶液的吸收曲線為標準值校正。將以重鉻酸鉀水溶液的吸收曲線為標準值校正。將0.0303克重鉻酸鉀溶于克重鉻酸鉀溶于1 升的升的0.05mol/l 氫氧化鉀中，以氫氧化鉀中，以1cm 吸吸收池，收池，25C測定吸收光譜測定吸收光譜。 定性分析定性分析用于有機物的鑒定、同分異構體的鑒別、物質結構用于有機物的鑒定、同分異構體的鑒別、物質結構的測定。物質的紫外吸收光譜基本上的

40、測定。物質的紫外吸收光譜基本上是分子中生色是分子中生色團、助色團的特性，而不是它的整個分子的特性。團、助色團的特性，而不是它的整個分子的特性。化合物純度鑒定化合物純度鑒定鑒定未知試樣鑒定未知試樣推斷分子結構推斷分子結構第四節(jié)第四節(jié)紫外紫外-可見分光光度法的應用可見分光光度法的應用判斷異構體：判斷異構體：紫外吸收光譜的重要應用在于測定共軛分子。共紫外吸收光譜的重要應用在于測定共軛分子。共軛體系越大，吸收強度越大，波長紅移。軛體系越大，吸收強度越大，波長紅移。 如：如： 和和 前者有紫外吸收，后者的前者有紫外吸收，后者的 maxmax200nm200nm。同樣，。同樣，CHCH3 3COCHCOC

41、H2 2CHCH2 2COCHCOCH3 3的最大吸收波長要短于的最大吸收波長要短于CHCH3 3CHCH2 2CO-COCHCO-COCH2 2CHCH3 3。下面兩個酮式和烯。下面兩個酮式和烯醇式異構體中，烯醇式結構的摩爾吸光系數(shù)要遠大于酮式，也醇式異構體中，烯醇式結構的摩爾吸光系數(shù)要遠大于酮式，也是由于烯醇式結構中有雙鍵共軛之故。是由于烯醇式結構中有雙鍵共軛之故。CHCH2 2COCHCOCH2 2COOCCOOC2 2H H5 5 CHCH3 3C(OH)=CHCOOCC(OH)=CHCOOC2 2H H5 5酮式酮式( ( maxmax =275 nm, =275 nm, =100)

42、 =100) 烯醇式烯醇式( ( maxmax =245 nm, =245 nm, =18,000)=18,000)判斷共軛狀態(tài)：判斷共軛狀態(tài)：可以判斷共軛生色團的所有原子是否共平可以判斷共軛生色團的所有原子是否共平面等。如二苯乙烯（面等。如二苯乙烯（ph-CH=CH-ph）順式比反式不易共）順式比反式不易共平面，因此反式結構的最大吸收波長及摩爾吸光系數(shù)要大平面，因此反式結構的最大吸收波長及摩爾吸光系數(shù)要大于順式。于順式。 順式順式: lmax =280 nm, e =13,500; 反式反式: lmax =295 nm, e =27,000 已知化合物的驗證：已知化合物的驗證：與標準譜圖比對

43、，紫外與標準譜圖比對，紫外-可見吸收光譜可見吸收光譜可以作為有機化合物結構測定的一種輔助手段。可以作為有機化合物結構測定的一種輔助手段。 了解共軛程度、空間效應、氫鍵等；可對飽和與不飽和了解共軛程度、空間效應、氫鍵等；可對飽和與不飽和化合物、異構體及構象進行判別。化合物、異構體及構象進行判別。 紫外紫外可見吸收光譜中有機物發(fā)色體系信息分析的一般可見吸收光譜中有機物發(fā)色體系信息分析的一般規(guī)律是：規(guī)律是： 若在若在200200750nm750nm波長范圍內無吸收峰，則可能是直鏈烷波長范圍內無吸收峰，則可能是直鏈烷烴、環(huán)烷烴、飽和脂肪族化合物或僅含一個雙鍵的烯烴等。烴、環(huán)烷烴、飽和脂肪族化合物或僅含

44、一個雙鍵的烯烴等。 若在若在270270350nm350nm波長范圍內有低強度吸收峰波長范圍內有低強度吸收峰( (1010100Lmol100Lmol-1-1cmcm-1-1),),（n n躍遷），則可能含有一個簡單非躍遷），則可能含有一個簡單非共軛且含有共軛且含有n n電子的生色團，如羰基。電子的生色團，如羰基。 若在若在2 20 0300nm300nm波長范圍內有中等強度的吸收峰則波長范圍內有中等強度的吸收峰則可能含苯環(huán)?？赡芎江h(huán)。 若在若在210210250nm250nm波長范圍內有強吸收峰，則可能含有波長范圍內有強吸收峰，則可能含有2 2個共軛雙鍵；若在個共軛雙鍵；若在2602603

45、00nm300nm波長范圍內有強吸收峰，則波長范圍內有強吸收峰，則說明該有機物含有說明該有機物含有3 3個或個或3 3個以上共軛雙鍵。個以上共軛雙鍵。 若該有機物的吸收峰延伸至可見光區(qū)，則該有機物可若該有機物的吸收峰延伸至可見光區(qū)，則該有機物可能是長鏈共軛或稠環(huán)化合物。能是長鏈共軛或稠環(huán)化合物。定量分析定量分析基本原理：朗伯基本原理：朗伯-比爾定律比爾定律 A= C L單組分作單組分作 AC曲線曲線多組分根據(jù)吸光度具有加和性的特點測定多組分根據(jù)吸光度具有加和性的特點測定單組分定量分析單組分定量分析 紫外紫外-可見吸收光譜是進行定量分析最廣泛使用的、最有可見吸收光譜是進行定量分析最廣泛使用的、最

46、有效的手段之一。尤其在醫(yī)院的常規(guī)化驗中，效的手段之一。尤其在醫(yī)院的常規(guī)化驗中，95%的定量分的定量分析都用此法。其用于定量分析的優(yōu)點是：析都用此法。其用于定量分析的優(yōu)點是：可用于無機及有機體系?？捎糜跓o機及有機體系。 一般可檢測一般可檢測10-4-10-5 mol/l的微量組分，通過某些特殊方的微量組分，通過某些特殊方法法(如膠束增溶如膠束增溶)可檢可檢10-6-10-7 mol/l的組分。的組分。 準確度高，一般相對誤差準確度高，一般相對誤差1-3%，有時可降至百分之零點，有時可降至百分之零點幾。幾。 分析條件的選擇分析條件的選擇溶劑的選擇溶劑的選擇所選擇的溶劑應易于溶解樣品并不與樣品作用，

47、且在測定波所選擇的溶劑應易于溶解樣品并不與樣品作用，且在測定波長區(qū)間內吸收小，不易揮發(fā)。長區(qū)間內吸收小，不易揮發(fā)。可用于測定的最短波長可用于測定的最短波長(nm) 常見溶劑常見溶劑200蒸餾水，乙腈，環(huán)己烷 220甲醇，乙醇，異丙醇，醚 250二氧六環(huán)，氯仿，醋酸 270N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，乙酸乙酯，四氯化碳 (275) 290苯，甲苯，二甲苯 335丙酮，甲乙酮，吡啶，二硫化碳(380) 下表為某些常見溶劑可用于測定的最短波長下表為某些常見溶劑可用于測定的最短波長測定濃度的選擇測定濃度的選擇溶液吸光度值在溶液吸光度值在0.2-0.8范圍內誤差小范圍內誤差小(A=0.434時誤差最

48、小時誤差最小)，因此可根據(jù)樣品的摩爾吸光系數(shù)確定最佳濃度。因此可根據(jù)樣品的摩爾吸光系數(shù)確定最佳濃度。即吸光度即吸光度A=0.4343時，吸光度測量誤差最小。將吸光度值時，吸光度測量誤差最小。將吸光度值控制在控制在0.2-0.8之間，光度測量誤差較小。之間，光度測量誤差較小。 TAIITologdTTTdTddA434. 0)(ln434. 0)(lg三、測量誤差三、測量誤差dTTTcdcdTTTdTTAAdA)log434.0()log434.0()434.0(22)log(log)(log434. 0)log()log(434. 0TTTTTdTTTTTdT)log1(434. 0)(TTd

49、TAdA,0loglogTe2)log(loglog434. 0TTTedT只有當0)(AdA則測量誤差最小，此時- logT = log e = 0.434 = A即吸光度為0.434時，濃度測量才具有最小相對誤差。一、絡和物組成的測定一、絡和物組成的測定摩爾比法摩爾比法等摩爾系列法等摩爾系列法斜率比法斜率比法平衡移動法平衡移動法應應 用用摩爾比率法測定絡和比：摩爾比率法測定絡和比：mM+nR MmRn配制：不同配制：不同CR/CM的系列溶液：如的系列溶液：如CR/CM=1，2，3，n分別測吸光度：分別測吸光度：A1, A2 ,A3An, 作作A CR/CM曲線曲線摩爾比法摩爾比法設有絡合反

50、應設有絡合反應mM + nY = MmYn，固定一個組分，固定一個組分(如如M)的濃的濃度不變，改變另一組分度不變，改變另一組分(如如Y)的濃度，求得一系列的濃度，求得一系列Y/M比，比，在絡合物在絡合物MmYn的最大吸收波長處測定吸光度的變化。則開的最大吸收波長處測定吸光度的變化。則開始時，隨始時，隨Y/M的增加，溶液吸光度線性增加，到達絡合物的增加，溶液吸光度線性增加，到達絡合物的組成比后，繼續(xù)增加的組成比后，繼續(xù)增加Y/M，會有三種不同情況：，會有三種不同情況： 吸光度達到飽和，不再增加。說明試劑吸光度達到飽和，不再增加。說明試劑Y無吸收，吸光度無吸收，吸光度的增加只是絡合物的單獨貢獻。

51、如的增加只是絡合物的單獨貢獻。如Fe(III)-鈦鐵試劑絡合物。鈦鐵試劑絡合物。 吸光度出現(xiàn)一轉折點后繼續(xù)增加。說明試劑吸光度出現(xiàn)一轉折點后繼續(xù)增加。說明試劑Y在絡合物的在絡合物的lmax處稍有吸收。如處稍有吸收。如Zn-PAN絡合物。絡合物。PAN：1-(2-吡啶基偶吡啶基偶氮氮)-2-萘酚。萘酚。 吸光度出現(xiàn)一轉折點后呈直線下降。說明分步生成了摩爾吸光度出現(xiàn)一轉折點后呈直線下降。說明分步生成了摩爾吸光系數(shù)小于絡合物吸光系數(shù)小于絡合物e的高次絡合物。如的高次絡合物。如Bi-二甲酚橙絡合物。二甲酚橙絡合物。圖代表了第一種情況。曲線轉折點對應的摩爾濃度比圖代表了第一種情況。曲線轉折點對應的摩爾濃

52、度比Y/M = n:m，即為該絡合物的組成比。，即為該絡合物的組成比。摩爾比法測定絡合物的組成比。摩爾比法測定絡合物的組成比。 若絡合物穩(wěn)定性差，絡合物解離使吸光度下降，轉折若絡合物穩(wěn)定性差，絡合物解離使吸光度下降，轉折不明顯，據(jù)此可以測定絡合物不穩(wěn)定常數(shù)。不明顯，據(jù)此可以測定絡合物不穩(wěn)定常數(shù)。設：絡合物解離度為設：絡合物解離度為 ，不解離時轉折處濃度為，不解離時轉折處濃度為 CCMmRn = (1- )CCM = m CCR = n C則絡合物不穩(wěn)定常數(shù)為則絡合物不穩(wěn)定常數(shù)為 = A0 - AA0K = CMmCRn (m C)m(n C)n mmnn m+n Cm+n-1CMmCRn(1-

53、 )C1- =二、酸堿離解常數(shù)的測定二、酸堿離解常數(shù)的測定HBH+B-Ka =H+B-HB(1)pKa=pH+lgHBB-設：設：b=1cmA=A HB +AB-A= HB（c- B-) + B-B- = HBc+B- ( B- HB)同樣由（同樣由（2）得：）得： A= HBHB+ B-(c-HB) = B-c+HB ( HB- B-)B- = HBA - HB c B-則：則：A=A HB +AB-= HBHB+ B-B- (2)HB= B-c-A B- HB(3)(4)將（將（3）（）（4）代入（）代入（1）中：）中： Ka =H+B-HBC=HB+B-Ka=H+(A - HB c) B

54、-c-AA HB= HB cAB-= B-c定義：定義：A -AHBKa= H+AB-ApKa=pH+lgA -AHBAB-A第五節(jié) 分光光度測定方法普通分光光度法普通分光光度法示差分光光度法示差分光光度法雙波長分光光度法雙波長分光光度法導數(shù)分光光度法導數(shù)分光光度法一、普通分光光度法一、普通分光光度法以一定的標準溶液滴定待測物溶液，測定滴定中溶液的吸光以一定的標準溶液滴定待測物溶液，測定滴定中溶液的吸光度變化，通過作圖法求得滴定終點，從而計算待測組分含量度變化，通過作圖法求得滴定終點，從而計算待測組分含量的方法稱為分光光度滴定。的方法稱為分光光度滴定。一般有直接滴定法和間接滴定法兩種。前者選擇

55、被滴定物、一般有直接滴定法和間接滴定法兩種。前者選擇被滴定物、滴定劑或反應生成物之一摩爾吸光系數(shù)最大的物質的滴定劑或反應生成物之一摩爾吸光系數(shù)最大的物質的 maxmax為吸為吸收波長進行滴定。滴定曲線有如下幾種形式。間接滴定法需收波長進行滴定。滴定曲線有如下幾種形式。間接滴定法需使用指示劑。使用指示劑。光度滴定與通過指示劑顏色變化用肉眼確定滴定終點的普通光度滴定與通過指示劑顏色變化用肉眼確定滴定終點的普通滴定法相比，準確性、精密度及靈敏度都要高。光度滴定已滴定法相比，準確性、精密度及靈敏度都要高。光度滴定已用于酸堿滴定、氧化還原滴定、沉淀滴定和絡合滴定。用于酸堿滴定、氧化還原滴定、沉淀滴定和絡

56、合滴定。 1.1.分光光度滴定分光光度滴定 2.2.單組分的測定單組分的測定 通常采用通常采用 A-C 標準曲線法定量測定。標準曲線法定量測定。3.3.多組分的同時測定多組分的同時測定 若各組分的吸收曲線互不重疊，則可在各自最大吸收若各組分的吸收曲線互不重疊，則可在各自最大吸收波長處分別進行測定。這本質上與單組分測定沒有區(qū)別。波長處分別進行測定。這本質上與單組分測定沒有區(qū)別。 若各組分的吸收曲線互有重疊，則可根據(jù)吸光度的加若各組分的吸收曲線互有重疊，則可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。 A1= a1bca b1bcb A2= a2bca b

57、2bcb 普通分光光度法一般只適于測定微量組分，當待測組分普通分光光度法一般只適于測定微量組分，當待測組分含量較高時，將產生較大的誤差。需采用示差法。即提高入含量較高時，將產生較大的誤差。需采用示差法。即提高入射光強度，并采用濃度稍低于待測溶液濃度的標準溶液作參射光強度，并采用濃度稍低于待測溶液濃度的標準溶液作參比溶液。比溶液。 設：待測溶液濃度為設：待測溶液濃度為c cx x，標準溶液濃度為，標準溶液濃度為c cs s( (c cs s c cx x) )。則：則： Ax= b cx As = b cs x s =b(cx cs ）=bc 二、示差分光光度法（示差法）二、示差分光光度法（示差

58、法） AAx As =b(cx cs ）=bc 測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差溶液的吸光度之差A 。 示差法測得的吸光度與示差法測得的吸光度與c呈直線關系。由標準呈直線關系。由標準曲線上查得相應的曲線上查得相應的c值，則待測溶液濃度值，則待測溶液濃度cx ： cx = cs + c 普通法：普通法： cs的的T=10%；cx的的T=5% 示差法：示差法： cs 做參比，調做參比，調T=100% 則：則： cx的的T=50% ；標尺擴展；標尺擴展10倍倍 不需空白溶液作參比；但需要兩個單色器獲得兩束單色不需空白溶液作參比；但需要兩

59、個單色器獲得兩束單色光光( (1 1和和2 2) )；以參比波長；以參比波長1 1處的吸光度處的吸光度A A11作為參比，來作為參比，來消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復雜試樣時顯示出消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復雜試樣時顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測量精密度等方面都比單很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測量精密度等方面都比單波長法有所提高。波長法有所提高。 A A A22 A A11 ( (22 11) )b cb c 兩波長處測得的吸光度差值兩波長處測得的吸光度差值A與待測組分濃度成正比與待測組分濃度成正比。11和和22分別表示待測組分在分別表示待測組分在1 1和和2 2處

60、的摩爾吸光系處的摩爾吸光系數(shù)。數(shù)。 三、雙波長分光光度法三、雙波長分光光度法 測量波長測量波長2 2和參比波長和參比波長1 1的選擇與組合的選擇與組合 以兩組分以兩組分x x和和y y的雙波長法測定為例：的雙波長法測定為例：設：設：x x為待測組分，為待測組分，y y為干擾組分，二者的吸光度差分別為為干擾組分，二者的吸光度差分別為: : Ax和和Ay，則該體系的總吸光度差，則該體系的總吸光度差Ax+y為：為： Ax+y = A x + A y 如何選擇波長如何選擇波長1 、2有一定的要求。有一定的要求。關鍵問題關鍵問題: : 選定的波長選定的波長1 1和和2 2處干擾組分應具有相同吸光度，處干