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文檔簡介
1、第十章 復(fù)制名詞解釋:半保留復(fù)制:DNA復(fù)制是以DNA的兩條鏈為模板,以dNTP為原料,在DNA聚合酶的作用下按照堿基配對(duì)規(guī)律合成新的互補(bǔ)連,這樣形成的兩個(gè)子代DNA分子與原來的DNA分子完全相同,故稱之為復(fù)制。又因子代DNA分子的雙鏈其中一條來自親代,另一條是新合成的,故名半保留復(fù)制。岡崎片段:DNA復(fù)制時(shí),隨從鏈復(fù)制中的不連續(xù)片段,命名為岡崎片段。端粒:是真核生物染色體線性DNA分子末端的結(jié)構(gòu)。形態(tài)學(xué)上,DNA末端與它的結(jié)合蛋白質(zhì)緊密結(jié)合,像兩頂帽子那樣蓋在染色體兩端,使染色體DNA末端膨大成粒狀??蛞仆蛔儯褐溉?lián)體密碼的閱讀方式改變,造成蛋白質(zhì)氨基酸排列順序發(fā)生改變,其后果是翻譯出的蛋白
2、質(zhì)可能完全不同。切除修復(fù):細(xì)胞內(nèi)最重要的修復(fù)機(jī)制,主要是DNA聚合酶及連接酶執(zhí)行。反轉(zhuǎn)錄:以RNA為模板在反轉(zhuǎn)錄酶作用下合成DNA的過程叫做反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄在病毒致癌過程中起著重要作用;在基因工程中,可用于mRNA為模板合成cDNA的實(shí)驗(yàn)中。引發(fā)體:是復(fù)制起始時(shí)形成的,原核生物DnaB(解螺旋酶)、DnaC、DnaG(引物酶)等蛋白質(zhì)結(jié)合到DNA復(fù)制起始區(qū)域形成的復(fù)合結(jié)構(gòu),稱為引發(fā)體。Klenow片段:是原核生物DNA-polI經(jīng)特異的蛋白質(zhì)酶水解后產(chǎn)生的大片段,具有35核酸外切酶活性和聚合活性,實(shí)驗(yàn)室合成DNA及分子生物學(xué)研究上,常用Klenow片段代替DNA聚合酶。1. 試述參與原核生物DN
3、A復(fù)制過程所需的物質(zhì)及其作用雙鏈DNA:解開成單鏈的兩條鏈都作為模板指導(dǎo)DNA的合成;dNTP:復(fù)制的原料;DNA聚合酶:即依賴于DNA的DNA聚合酶,合成子鏈;原核生物中DNA-pol是真正的復(fù)制酶,DNA-pol的作用是切除引物、填補(bǔ)空隙和修復(fù)。引物:一小段RNA,提供游離的3-OH。其他的一些酶和蛋白因子:解鏈酶,解開DNA雙鏈;DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶、,松弛DNA超螺旋,理順打結(jié)的DNA鏈;引物酶,合成RNA引物;單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB),結(jié)合并穩(wěn)定解開的單鏈;DNA連接酶,連接隨從鏈中兩個(gè)相鄰的DNA片段。2. 原核生物復(fù)制起始的相關(guān)蛋白質(zhì)有哪些?各有何功能?蛋白質(zhì)(基因)通用名功能D
4、naA(dnaA)辨認(rèn)起始點(diǎn)DnaB(dnaB)解螺旋酶解開DNA雙鏈DnaC(dnaC)運(yùn)送和協(xié)同DnaBDnaG(dnaG)引物酶催化RNA引物生成SSB單鏈DNA結(jié)合蛋白穩(wěn)定已解開的單鏈拓?fù)洚悩?gòu)酶(gyrA,B)理順DNA鏈3. 端粒酶的分子組成有何特點(diǎn)?有什么功能? 端粒酶是一種由RNA和蛋白質(zhì)組成的反轉(zhuǎn)錄酶,它能在沒有DNA模板的情況下,以自身的RNA為模板,通過反轉(zhuǎn)錄作用,延伸端粒3-末端的寡聚脫氧核苷酸片段,催化合成端粒DNA,保證染色體復(fù)制的完整性。4.簡述反轉(zhuǎn)錄的基本過程,反轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)在生命科學(xué)研究中有何重大研究價(jià)值? 過程:(1)以RNA為模板,在反轉(zhuǎn)錄酶催化下合成RN
5、A-DNA雜化雙鏈;(2)由RnaseH水解RNA-DNA雜化雙鏈中的RNA鏈。合成的DNA稱cDNA;(3)以新合成的cDNA鏈為模板,由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成cDNA雙鏈。意義(1)補(bǔ)充并完善了中心法則;(2)反轉(zhuǎn)錄病毒中有致癌病毒,人類免疫缺陷病毒(HIV)等;其研究關(guān)系到嚴(yán)重危害人類健康的某些疾病發(fā)病機(jī)制、診斷、治療。(3)反轉(zhuǎn)錄病毒是分子生物學(xué)研究的重要工具,廣泛應(yīng)用于真核基因表達(dá),基因轉(zhuǎn)染等重要研究方法上,是一種基因治療的重要基因載體。5. 復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程異同點(diǎn)(2004)相 異相同或相似復(fù)制 轉(zhuǎn)錄模板2 股鏈均復(fù)制模板鏈轉(zhuǎn)錄DNA原料dNTPNTP核苷三磷酸配對(duì)A-T;G-CA-U;T
6、-A;G-C遵從堿基配對(duì)聚合酶DNA聚合酶RNA聚合酶依賴DNA的聚合酶產(chǎn)物半保留復(fù)制mRNA,tRNA,rRNA多核苷鏈6.討論復(fù)制保真性的機(jī)制復(fù)制的保真性可由以下三種機(jī)制保證:子鏈DNA鏈依照母鏈模板按堿基配對(duì)規(guī)律生成,保證子代DNA與母鏈DNA雙鏈在堿基序列上的一致性,從而保留了親代的全部遺傳信息。這是最基本的機(jī)制。堿基選擇功能:DNA-pol能依據(jù)堿基的化學(xué)構(gòu)型表現(xiàn)不同的親和力,實(shí)現(xiàn)正確的堿基選擇,保證了在各種底物都存在下,能選擇正確配對(duì)的堿基合成子鏈;復(fù)制中如出現(xiàn)錯(cuò)配,DNA-pol有即時(shí)校讀功能,切除錯(cuò)配堿基,使正確配對(duì)的堿基摻入子鏈。7.什么是岡崎片段?合成結(jié)束時(shí),岡崎片段是如何
7、連接的?岡崎片段是隨從鏈上不連續(xù)合成的片段,原核生物長度約1000-2000個(gè)核苷酸,真核生物較短,約數(shù)百個(gè)核苷酸,其合成方向也是53,每個(gè)岡崎片段都帶有1個(gè)RNA引物。 復(fù)制終止時(shí)岡崎片段的連接需要以下三個(gè)步驟:RNA酶水解引物;留下的空缺由DNApolI填補(bǔ);DNA連接酶連接缺口。第十一章轉(zhuǎn)錄練習(xí)題名詞解釋:轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子:位于轉(zhuǎn)錄起始5上游端,由RNA-pol識(shí)別并結(jié)合的DNA序列。不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄:轉(zhuǎn)錄以基因的一條鏈為模板,另一條鏈為編碼鏈(不轉(zhuǎn)錄);染色體DNA的各種基因轉(zhuǎn)錄并不都在同一條鏈上,故稱為不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄。編碼鏈:轉(zhuǎn)錄中與模板鏈互補(bǔ)的DNA鏈,因其堿基序列、走行方向與轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA一致,
8、僅T換為U而已,故名為編碼鏈。內(nèi)含子:DNA及hnRNA分子中的能轉(zhuǎn)錄而不能編碼氨基酸的序列。外顯子:DNA及hnRNA分子中的能轉(zhuǎn)錄又能編碼氨基酸的序列。真核轉(zhuǎn)錄因子:RNA聚合酶啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄時(shí),需要一些稱為轉(zhuǎn)錄因子的蛋白質(zhì),才能形成有活性的轉(zhuǎn)錄復(fù)合體。所有的RNA聚合酶都需要通用轉(zhuǎn)錄因子(general transcription factors),這些通用轉(zhuǎn)錄因子有TFA、TFB、TFD、TFE、TFF、TFH,在真核生物進(jìn)化中高度保守。mRNA splicing:取出初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上的內(nèi)含子,把外顯子連接成為成熟的RNA,稱為剪接。核酶(ribozyme):是一類特殊構(gòu)型的RNA,具有酶的特
9、性,能自我催化分解。TATA盒:大腸桿菌RNA聚合酶與DNA結(jié)合的范圍是從轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的上游約70bp至轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)下游約30bp處,也就是某基因的啟動(dòng)子的區(qū)域是該基因的-70至+30.分析比較了許多種細(xì)菌由最常見的RNA聚合酶全酶(具有70亞基)識(shí)別結(jié)合的啟動(dòng)子序列發(fā)現(xiàn):這些啟動(dòng)子在-10和-35區(qū)域的短序列相似,這種短序列對(duì)70亞基和啟動(dòng)子的識(shí)別與結(jié)合十分重要。-10區(qū)域的共有序列(congsensus sequence)是TATAAT,此序列稱為pribnow box。羧基末端結(jié)構(gòu)域(carboxyl-terminal domain,CTD):RNA聚合酶最大亞基的羧基末端有一段共有序列為T
10、yr(酪)-Ser-Pro-Thr(蘇)-Ser-Pro(脯)-Ser(絲)的重復(fù)片段,稱為羧基末端結(jié)構(gòu)域。RNA聚合酶和沒有CTD。所有真核生物的RNA聚合酶都具有CTD,只是7個(gè)氨基酸共有序列的重復(fù)程度不同。問答題:1.簡述原核生物的轉(zhuǎn)錄過程起始階段:RNA聚合酶在相關(guān)因子協(xié)助下,識(shí)別并結(jié)合于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),DNA局部形成轉(zhuǎn)錄空泡。延長階段:RNA-pol的核心酶催化為主,使RNA53延伸。終止階段:在因子作用下或DNA模板轉(zhuǎn)錄終止區(qū)有特殊序列RNA3端易形成莖環(huán)狀及出現(xiàn)polyU而促使RNA合成終止與DNA分離。2.RNA復(fù)制:以RNA為模板合成RNA。反轉(zhuǎn)錄病毒以外的RNA病毒在宿主細(xì)胞
11、以病毒的單鏈RNA為模板合成RNA,由RNA依賴的RNA聚合酶RNA- dependent RNA polymerase)催化,常見于病毒。3.轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為5-ACGUAU-3,寫出與之對(duì)應(yīng)的模板鏈、編碼鏈(注明其兩端)模板鏈:5-ATACGT-3編碼鏈:5-ACGTAT-34. 試比較DNA聚合酶、RNA聚合酶、反轉(zhuǎn)錄酶和RNA復(fù)制酶在不同核酸生物合成中的作用有哪些異同?酶模板底物引物方向功用DNA聚合酶(DDRP)雙鏈DNAdNTPRNA53復(fù)制RNA聚合酶(RDRP)基因DNA中的一條鏈NTP不需要53轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄酶(RDDP)RNAdNTPtRNA53反轉(zhuǎn)錄RNA復(fù)制酶(RDRP)RNAN
12、TP不需要53RNA復(fù)制引物酶DNA3端序列NTP不需要53合成引物5.試述原核RNA的生物合成主要過程RNA生物合成包括轉(zhuǎn)錄與RNA復(fù)制。原核生物的轉(zhuǎn)錄過程包括:(1)起始階段:RNA聚合酶在相關(guān)因子協(xié)助下,識(shí)別并結(jié)合于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),DNA局部形成轉(zhuǎn)錄空泡。(2)延長階段:RNA聚合酶核心酶催化為主,使RNA53延伸。(3)終止階段:在因子作用下或DNA模板轉(zhuǎn)錄終止區(qū)有特殊序列RNA3端易形成莖環(huán)狀及出現(xiàn)polyU而促使RNA合成終止與DNA分離。 RNA復(fù)制是以RNA為模板合成RNA。反轉(zhuǎn)錄病毒以外的RNA病毒在宿主細(xì)胞以病毒的單鏈RNA為模板合成RNA,由RNA依賴的RNA聚合酶催化,常
13、見于病毒。6.RNA轉(zhuǎn)錄體系中有哪些主要成分,各有何重要功能? DNA的完整轉(zhuǎn)錄單位-啟動(dòng)子與結(jié)構(gòu)基因(雙鏈DNA中一條鏈為模板鏈); NTP:合成RNA的原料; RNA-pol:促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的起始與延長; 因子:促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的終止。7.真核生物RNA轉(zhuǎn)錄后如何加工修飾?mRNA前體:5端加m7Gppp“帽”;3端加polyA尾;去掉內(nèi)含子,拼接外顯子;tRNA前體:(1)剪去5和3端多余堿基; (2)3端加-CCA尾;(3)柄環(huán)結(jié)構(gòu)的一些堿基經(jīng)化學(xué)修飾后形成稀有堿基,如嘌呤甲基化為甲基嘌呤;某些尿嘧啶還原為二氫尿嘧啶(DHU);某些腺嘌呤脫去氨基形成次黃嘌呤核苷酸(I);尿嘧啶核苷變成假尿嘧啶核苷(
14、)等。(4)中間剪接除去內(nèi)含子。rRNA前體:剪切(如45S5.8S、18S、28S)與蛋白質(zhì)結(jié)合。8.預(yù)計(jì)在真核生物RNA轉(zhuǎn)錄物中的5(AAUAAA)序列發(fā)生突變可能造成的影響 5(AAUAAA)為轉(zhuǎn)錄終止修飾點(diǎn),其變異會(huì)引起polyA尾及帽子結(jié)構(gòu)產(chǎn)生異常,會(huì)導(dǎo)致RNA降解。 第十二章 蛋白質(zhì)的生物合成思考題1.AUG為異亮氨酸的遺傳密碼,在tRNA異亮氨酸,其相應(yīng)的反密碼子 A. UAG;B. TAG;C. CAU;D. GAT;E. IAG2.rRNAA.屬于細(xì)胞內(nèi)最小的一種RNA;B.是蛋白質(zhì)生物合成的場(chǎng)所;C.與多種蛋白質(zhì)形成核蛋白體;D.不含有稀有堿基3.tRNA在發(fā)揮其功能時(shí)的兩
15、個(gè)重要部位是A.氨基酸的臂和反密碼子環(huán);B.氨基酸臂和DHU環(huán);C.環(huán)和反密碼子環(huán); D.氨基酸臂和 環(huán);4.tRNA中攜帶氨基酸的部位是A.3-CCA-OH末端;B.5-p端;C.DHC環(huán);D.反密碼子環(huán).5.氨基酰-tRNA合成酶的特點(diǎn)是A.只對(duì)氨基酸的識(shí)別有專一性;B.存在于細(xì)胞核內(nèi);C.只對(duì)tRNA的識(shí)別有專一性;D.對(duì)氨基酸、tRNA的識(shí)別有專一性.6.按照Chargaff規(guī)則,下列關(guān)于DNA堿基組成的敘述,正確的是A.A與C的含量相等; B.A+T=G+C;C.同一生物體,不同組織的DNA堿基組成不同;D.不同生物來源的DNA,堿基組成不同.7.擺動(dòng)配對(duì)指下列堿基之間配對(duì)不嚴(yán)格A.
16、反密碼子第一堿基與密碼子第三亞基;B.反密碼子第三亞基與密碼子第一堿基;C.反密碼子和密碼子的第三個(gè)亞基;D.反密碼子和密碼子的第一個(gè)堿基.8.大腸桿菌的多肽鏈合成中氨基端的氨基酸殘基是A.絲氨酸;B.蛋氨酸;C.N-甲酰蛋氨酸;D.N-甲酰絲氨酸9.蛋白質(zhì)生物合成中氨基酸的活化部位是A.羥基;B.烷基;C.羧基;D.巰基10.蛋白質(zhì)生物合成中多肽鏈的氨基酸排列順序取決于A.相應(yīng)氨基酰-tRNA合成酶的專一性;B.相應(yīng)tRNA的專一性;C.相應(yīng)tRNA上的反密碼子;D.相應(yīng)mRNA中核苷酸的排列順序.11.對(duì)于氨基酸密碼子的描述哪一項(xiàng)是不正確的A.密碼子有種屬特異性,所以不同生物合成不同的蛋白
17、質(zhì);B.密碼子閱讀有方向性,從5端起始,3終止;C.密碼子第1,2位堿基與反密碼子的第3,2位堿基結(jié)合嚴(yán)格按堿基互補(bǔ)原則;D.一種氨基酸可有一組以上的密碼子.12.對(duì)于遺傳密碼的敘述哪一項(xiàng)是恰當(dāng)?shù)腁.由tRNA結(jié)構(gòu)中相鄰的三個(gè)核苷酸組成;B.由DNA鏈中相鄰的三個(gè)核苷酸組成;C.由mRNA上相鄰的三個(gè)核苷酸組成;D.由rRNA中相鄰的三個(gè)核苷酸組成.13.翻譯起始復(fù)合物的組成A.Dna蛋白+開鏈DNA;B.DNA模板+RNA+RNA聚合酶;C.核糖體+蛋氨酰tRNA+mRNA;D.翻譯起始因子+核糖體.14.能出現(xiàn)在蛋白質(zhì)分子中的下列氨基酸,哪一種沒有遺傳密碼A.色氨酸;B.蛋氨酸;C.谷氨酰
18、胺;D.脯氨酸;E.羥脯氨酸15.人體內(nèi)不同細(xì)胞可以合成不同蛋白質(zhì)是因?yàn)锳.各種細(xì)胞的基因不同;B.各種細(xì)胞的基因相同,而表達(dá)基因不同;C.各種細(xì)胞的蛋白激酶活性不同;D.各種細(xì)胞的蛋白質(zhì)活性不同.16.下列關(guān)于氨基酸密碼的描述,哪一項(xiàng)是不正確的A.密碼有種屬特異性,所以不同生物合成不同的蛋白質(zhì);B.密碼閱讀有方向性,5端起始3端終止; C.一個(gè)氨基酸可有一個(gè)以上的密碼;D.一組密碼只代表一種氨基酸;E.密碼第3位(即3端)堿基在決定摻入氨基酸的的特異性方面重要性較小.17.下列關(guān)于核蛋白體的敘述,正確的是A.是遺傳密碼的攜帶者;B.由rRNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成;C.由snRNA與hnRNA構(gòu)成;D
19、.由DNA與蛋白質(zhì)構(gòu)成;E.由引物、DNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成.18.下列關(guān)于tRNA的敘述中,不正確的是A.為RNA分子中最小的;B.分子中含稀有堿基較多;C.分子中含有遺傳密碼子;D.一種tRNA只能轉(zhuǎn)運(yùn)一種氨基酸.19.下列屬于終止密碼子的是A.UCA;B.UCG;C.UAC;D.UAA;E.UGC.20.遺傳密碼的兼并性是指A.蛋氨酸密碼可做起始密碼; B.一個(gè)密碼子可代表多個(gè)氨基酸;C.多個(gè)密碼子可代表同一氨基酸;D.密碼子與反密碼子之間不嚴(yán)格配對(duì);E.所有生物可使用同一套密碼.21.沒有遺傳密碼的氨基酸A.鳥氨酸;B.胱氨酸;C.胍氨酸;D.羥脯氨酸.22.A.肽鍵; B.磷酸二酯鍵; C
20、.N-C糖苷鍵; D.酯鍵;(1)氨基酸之間的連接;(2)核苷酸之間的連接;(3)氨基酸與tRNA連接;(4)堿基與核糖之間1.C(2000)(2007,Chargaff指出不同來源的DNA,堿基組成不同)(1994羥脯氨酸是在合成蛋白質(zhì)后,將組合在蛋白質(zhì)肽鏈中的脯氨酸羥化而成)15.B16.A(1998)17.B(2006)(2003)20.C(2005)21.ABCD(鳥氨酸和胍氨酸不是參與蛋白質(zhì)組成的氨基酸,胱氨酸、羥脯氨酸是翻譯后生成的氨基酸)22.ABDC1.分子伴侶可以協(xié)助蛋白質(zhì)形成正確的空間構(gòu)象。下列分子中,屬于分子伴侶的是: A.胰島素原;B.熱休克蛋白;C.組蛋白;D.DNA
21、結(jié)合蛋白2.關(guān)于核蛋白體上的移位,下列哪種陳述是正確的?A.空載tRNA的脫落發(fā)生在A位上; B.肽鏈rRNA的轉(zhuǎn)位要求EFG和GTP;C.核蛋白體沿mRNA35方向相對(duì)移動(dòng); D.肽酰-tRNA由A位轉(zhuǎn)向P位.3.能識(shí)別終止密碼的是: A. polyA; B.EF-G; C.RF; D.m7GTP4.細(xì)菌蛋白的翻譯過程mRNA,起始因子,核蛋白體亞基的結(jié)合;氨基酸活化;肽鍵的形成;肽酰-tRNA的移位;GTP,延長因子,氨基酰-tRNA結(jié)合在一起等,它們出現(xiàn)的順序是:A.;B. ;C. ;D. .5.合成蛋白質(zhì)后才由前體轉(zhuǎn)變而成的氨基酸A.脯氨酸;B.羥脯氨酸;C.絲氨酸;D.賴氨酸6.干擾
22、素抑制蛋白質(zhì)合成是因?yàn)锳.活化蛋白激酶,使eIF2磷酸化;B.抑制肽鏈延長因子;C.阻礙氨基酰tRNA與小亞基結(jié)合;D.抑制轉(zhuǎn)肽酶7.氯霉素抑制原核生物的蛋白質(zhì)合成,其原因是A.特異性的抑制肽鏈延長因子2( EFT2 )的活性;B.與核蛋白體的大亞基結(jié)合,抑制轉(zhuǎn)肽酶活性,阻斷翻譯延長過程;C.活化一種蛋白激酶,從而影響起始因子磷酸化;D.阻礙氨基酰tRNA與核蛋白體小亞基結(jié)合.8. A.鏈霉素;B.氯霉素;C.嘌呤霉素;D.白喉霉素(1)主要抑制哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)合成的是 ()(2)對(duì)真核及原核生物的蛋白質(zhì)合成都有抑制作用的是()(1998)6.B(1997)7.B(1999)A.特異性的抑制肽鏈
23、延長因子2( EFT2 )的活性-白喉毒素; B.與核蛋白體的大亞基結(jié)合,抑制轉(zhuǎn)肽酶活性,阻斷翻譯延長過程-氯霉素;C.活化一種蛋白激酶,從而影響起始因子磷酸化-干擾素。干擾素還可間接活化一種核酸內(nèi)切酶,使mRNA降解;D.阻礙氨基酰tRNA與核蛋白體小亞基結(jié)合-四環(huán)素類.8.D;C(2001)練習(xí)題l 名詞解釋翻譯:細(xì)胞內(nèi)以mRNA為模板、按照mRNA分子中由核苷酸組成的密碼信息合成蛋白質(zhì),由于mRNA中的核苷酸排列順序與蛋白質(zhì)中的氨基酸排列順序是兩種不同的分子語言,所以將蛋白質(zhì)的生物合成稱為翻譯。密碼子(codon):在mRNA的開放閱讀框架區(qū),以每3個(gè)相鄰的核苷酸為一組,代表一種氨基酸或
24、其他信息,這種三聯(lián)體形式的核苷酸序列稱為密碼子。共有64個(gè)密碼子,密碼子閱讀方向是53。開放閱讀框架(open reading frame,ORF):從mRNA序列5的起始密碼子AUG到3端終止密碼子之間的核苷酸序列,稱為開放閱讀框架,通常的ORF包含500個(gè)以上的密碼子。簡并密碼子(synonymous codon):被同一種氨基酸編碼的各密碼子稱為兼并密碼子或同義密碼子。核蛋白體循環(huán)(ribosomal cycle):在肽鏈合成的延長階段,經(jīng)進(jìn)位、成肽和轉(zhuǎn)位三個(gè)步驟而使氨基酸依次進(jìn)入核蛋白體并聚合成多肽鏈的過程。這一過程在核蛋白體上連續(xù)循環(huán)進(jìn)行,直至終止階段,稱為核蛋白體循環(huán)。每經(jīng)過一次核
25、蛋白體循環(huán),肽鏈中增加一個(gè)氨基酸殘基。廣義的核蛋白體循環(huán)是指翻譯的全過程。多聚核蛋白體(polysome):由多個(gè)核蛋白體結(jié)合在一條mRNA鏈上同時(shí)進(jìn)行多肽鏈的合成(翻譯)所形成的聚合物稱為多聚核蛋白體。分子伴侶(molecular chaperon):分子伴侶是細(xì)胞內(nèi)一類可識(shí)別肽鏈的非天然構(gòu)象、促進(jìn)各功能域和整體蛋白質(zhì)正確折疊的保守蛋白質(zhì)。信號(hào)序列(signal sequence):所有靶向輸送的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中存在分選信號(hào),主要是存在于N-末端的可被細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)識(shí)別的特征性氨基酸序列,可引導(dǎo)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞的適當(dāng)靶部位,這類序列稱為靶序列。問答題1參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些?它們具有什
26、么功能?(1)mRNA:蛋白質(zhì)合成的模板;(2)tRNA:合成蛋白質(zhì)的氨基酸的運(yùn)載工具;(3)核蛋白體:蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所;(4)輔助因子,包括起始因子:參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物的形成;延長因子:延長肽鏈;釋放因子,終止肽鏈合成并使之從核蛋白體上釋放出來。2試述分子伴侶在蛋白質(zhì)折疊中的作用。蛋白質(zhì)在細(xì)胞質(zhì)中合成時(shí),未折疊的肽段有許多疏水集團(tuán)暴露在外,具有分子內(nèi)部或分子間聚集的傾向。而細(xì)胞內(nèi)存在一類稱為分子伴侶的蛋白質(zhì),可識(shí)別肽鏈的非天然構(gòu)象、可逆的與未折疊肽段的疏水部分結(jié)合,促進(jìn)各功能域和整體蛋白質(zhì)正確折疊。3遺傳密碼有哪些特性?方向性:閱讀方向是53;連續(xù)性:密碼子間無標(biāo)點(diǎn),既無間隔又不重疊;
27、簡并性:除色氨酸和蛋氨酸只有1個(gè)密碼子外,其余氨基酸都有2-6個(gè)密碼子為其編碼;通用性:不同生物共有1套密碼,從病毒、原核生物到人類幾乎都使用相同的遺傳密碼;擺動(dòng)性:密碼子的第3位堿基與反密碼子的第1位堿基的配對(duì)不嚴(yán)格遵循堿基互補(bǔ)原則。4試比較原核生物和真核生物翻譯的特點(diǎn)。原核細(xì)胞真核細(xì)胞mRNA一條mRNA編碼幾種蛋白(多順反子)轉(zhuǎn)錄后很少加工轉(zhuǎn)錄、翻譯和mRNA的降解可同時(shí)發(fā)生一條mRNA編碼一種蛋白(單順反子)轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行首尾修飾及剪接mRNA在核內(nèi)合成,加工后進(jìn)入胞液,再作為模板指導(dǎo)翻譯核蛋白體30S小亞基+50S大亞基70S核蛋白體40S小亞基+60S大亞基80S核蛋白體起始階段起始氨
28、基酰-tRNA為fMet-tRNAfMet核蛋白體小亞基先與mRNA結(jié)合,再與fMet-tRNAfMet結(jié)合mRNA中的S-D序列與16SrRNA3端的一段序列結(jié)合有三種起始因子(IF)參與起始復(fù)合物的形成起始氨基酰-tRNA為Met-tRNAiMet核蛋白體小亞基先與Met-tRNAiMet結(jié)合,再與mRNA結(jié)合mRNA中的帽子結(jié)構(gòu)與帽子結(jié)合蛋白復(fù)合物結(jié)合結(jié)合有至少10種起始因子(eIF)參與起始復(fù)合物的形成延長階段延長因子為EF-Tu、EF-TS和EF-G延長因子為eIF-1、eIF-1和eIF-2終止階段釋放因子為RF-1、RF-2和 RF-3釋放因子為eRF5氨基酸在蛋白質(zhì)生物合成過程
29、中是怎樣被活化的?活化:需Mg2+,由ATP供能,由氨基酰、tRNA合成酶催化,生成氨基酰-AMP-酶復(fù)合物。轉(zhuǎn)移:繼續(xù)在氨基酰-tRNA合成酶催化下將氨基酸從氨基酰-AMP-酶復(fù)合物上轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的tRNA分子上,形成氨基酰-tRNA。6試述干擾素抗病毒的作用機(jī)制。干擾素在某些病毒雙鏈RNA存在時(shí),能誘導(dǎo)特異的蛋白激酶活化,該活化的蛋白激酶使真核細(xì)胞的主要起始因子eIF-2磷酸化而失活,從而抑制病毒蛋白質(zhì)合成;干擾素能與雙鏈RNA共同活化特殊的2-5A合成酶,催化ATP聚合,生成單核苷酸間以2-5磷酸二酯鍵連接的2-5寡聚腺苷酸(2-5A),而活化的2-5A可活化一種核酸內(nèi)切酶RNase L,
30、后者可降解病毒mRNA,從而阻斷病毒蛋白質(zhì)合成。7試述多肽鏈合成后一級(jí)結(jié)構(gòu)修飾的主要內(nèi)容。末端修飾;水解修飾,包括信號(hào)肽的切除;個(gè)別氨基酸殘基的共價(jià)修飾。8RNA主要有哪三種?它們?cè)诘鞍踪|(zhì)生物合成過程中各有什么功能?RNA主要有mRNA、rRNA和tRNA3種:mRNA是合成蛋白質(zhì)多肽鏈的直接模板,mRNA開放閱讀框架中每相鄰的三個(gè)核苷酸組成密碼子,它們代表氨基酸或肽鏈合成的起始、終止等信號(hào);rRNA與多種蛋白質(zhì)分子構(gòu)成核蛋白體(包括大亞基和小亞基),是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所。核蛋白體復(fù)合物中有A位和P位,可相應(yīng)結(jié)合氨基酰-tRNA和肽酰-tRNA,并具有生成肽鍵的酶活性部位;tRNA是氨基酸的運(yùn)載
31、體,tRNA既可通過其反密碼子與mRNA序列中的密碼子結(jié)合,又可借助其氨基酸臂與氨基酸結(jié)合,因而能夠按mRNA的遺傳密碼指令將特定的氨基酸運(yùn)載到核蛋白體上合成多肽鏈。.9試述原核生物蛋白質(zhì)合成的主要步驟。氨基酸的活化:游離的氨基酸必須經(jīng)過活化以獲得能量才能參與蛋白質(zhì)合成,由氨基酰-tRNA合成酶催化,消耗兩個(gè)高能磷酸鍵,形成氨基酰-tRNA。肽鏈合成的起始:由起始因子參與,mRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAfMet)形成70S起始復(fù)合物,需要GTP。肽鏈的延長:氨基酰-tRNA結(jié)合到核蛋白體的A位,在轉(zhuǎn)肽酶的催化下,核蛋白體P位上起始氨基酰-t
32、RNA的N-甲酰甲硫氨?;螂孽?tRNA的肽?;D(zhuǎn)移到A位并與A位上氨基酰-tRNA的-氨基結(jié)合形成肽鍵,然后,核蛋白體沿mRNA序列的53方向移動(dòng)一個(gè)密碼子距離,A位上延長了一個(gè)氨基酸單位的肽酰-tRNA轉(zhuǎn)移到P位,需延長因子EF-T、EF-G及GTP參與。肽鏈合成的終止:當(dāng)核蛋白體移至終止密碼子UAA、UAG或UGA時(shí),釋放因子識(shí)別并結(jié)合終止密碼子,將轉(zhuǎn)肽酶活性轉(zhuǎn)變?yōu)轷ッ富钚?,水解新生肽鏈與結(jié)合在P位的tRNA之間的酯鍵,釋放肽鏈,合成終止。10試述蛋白質(zhì)合成過程中如何保證其產(chǎn)物的正確性。(1)氨基酰-tRNA合成酶一方面對(duì)底物氨基酸和tRNA都有高度特異性,另一方面具有校讀功能,可將任
33、何錯(cuò)誤的氨基酰-tRNA的酯鍵水解,再催化形成正確產(chǎn)物,保證tRNA攜帶正確的氨基酸;(2)攜帶氨基酸的tRNA對(duì)mRNA的識(shí)別,mRNA序列上的密碼子與tRNA序列上的反密碼子的相互識(shí)別,保證了遺傳信息被準(zhǔn)確無誤的轉(zhuǎn)譯;(3)起始因子保證了只有起始氨基酰-tRNA能進(jìn)入核蛋白體P位與起始密碼子結(jié)合;(4)延長因子EF-Tu在促進(jìn)氨基酰-tRNA進(jìn)位時(shí)有校讀作用,可以正確的氨基酰-tRNA取代錯(cuò)者,保證了起始氨基酰-tRNA不參與肽鏈延長。(5)部分能量消耗用于翻譯的保真性。11試分析為什么閱讀密碼從5-端到3端,而肽鏈合成是從N端到C端。從mRNA序列的5-端起始密碼子AUG到3-端的終止密
34、碼子之間的序列稱為開放閱讀框架,閱讀方向是從5-端到3端,編碼肽鏈的一級(jí)結(jié)構(gòu)。肽鏈合成時(shí),氨基酸經(jīng)-羧基活化為氨基酰-tRNA,延長過程中處于核蛋白體P位的第一個(gè)氨基酸的?;c處于A位的下一個(gè)氨基形成肽鍵,第一個(gè)氨基酸的氨基保留,成為新生肽鏈的N-末端。如此肽?;俨粩嗪拖乱粋€(gè)氨基酸的氨基以肽鍵結(jié)合,使肽鏈向C-端延伸,直到終止。12 為什么說蛋白質(zhì)靶向輸送的信息存在于其一級(jí)結(jié)構(gòu)中? 所有靶向輸送的蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)中都含有特定氨基酸序列,稱為信號(hào)序列,主要為N-端特異序列,如分泌型蛋白質(zhì)的信號(hào)肽;胞核蛋白質(zhì)的核定位序列可存在于肽鏈的不同部位;它們是決定蛋白質(zhì)靶向輸送的重要元件,可引導(dǎo)蛋白質(zhì)靶向
35、輸送到適當(dāng)部位。因此可以認(rèn)為,蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)中既有決定形成天然空間構(gòu)象的信息,也有決定蛋白質(zhì)靶向輸送到適當(dāng)部位的信息。 第十三章 基因表達(dá)調(diào)控練習(xí)題1.插入序列(IS)是 A.全是相同的; B.具有轉(zhuǎn)位酶基因;C.每代每個(gè)IS轉(zhuǎn)座103;D.旁側(cè)重復(fù)序列2.對(duì)于Alu順序的敘述中,恰當(dāng)?shù)氖?A.Alu順序是由RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的;B.所有Alu順序都是相同的; C.Alu順序永遠(yuǎn)不會(huì)存在于結(jié)構(gòu)基因中;D.Alu順序是靈長類基因組特有的標(biāo)記.3.對(duì)于共有序列的敘述不正確的是 A.啟動(dòng)序列中所有的核苷酸排列順序;B.TTGACA是共有序列;C.啟動(dòng)序列中部分的核苷酸排列順序;D.CAAT盒是共有序
36、列.4.基因組是指 A.以轉(zhuǎn)錄組學(xué)為基礎(chǔ)的研究領(lǐng)域;B.一種生物體具有的所有遺傳信息的總和; C.研究基因的結(jié)構(gòu)、功能及表達(dá)產(chǎn)物的學(xué)科領(lǐng)域;D.包括轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白組學(xué)等內(nèi)容的學(xué)科領(lǐng)域.5.某蛋白質(zhì)有100個(gè)氨基酸殘基,其基因有兩個(gè)外顯子、外顯子之間相隔100bp,其mRNA5和3端分別有70個(gè)和30個(gè)核苷酸的不翻譯區(qū)段,從該成熟mRNA獲得的cDNA大小與哪一項(xiàng)相符 A.500bp;B.400bp;C.100bp;D.300bp6.染色體端粒的結(jié)構(gòu)是下列哪一類物質(zhì)形成的復(fù)合體 A.RNA和DNA的嵌合體;B.RNA和蛋白質(zhì);C.DNA和蛋白質(zhì);D.DNA模板和RNA引物的復(fù)合體7.人類基因組包
37、括 A.核基因組和線粒體基因組;B.核基因組和微粒體基因組;C.溶原態(tài)病毒基因組和核基因組;D.質(zhì)粒基因組和核基因組.8.下列關(guān)于“基因表達(dá)”概念的敘述,不正確的是 A.基因表達(dá)具有組織特異性;B.基因表達(dá)具有階段特異性; C.基因表達(dá)均經(jīng)歷基因轉(zhuǎn)錄和翻譯過程;D.某些基因表達(dá)產(chǎn)物是蛋白質(zhì)分子;E.有些基因表達(dá)水平受環(huán)境變化影響9.下述哪項(xiàng)決定基因表達(dá)的時(shí)間性和空間性 A.特異基因的啟動(dòng)子(序列)和增強(qiáng)子與調(diào)節(jié)蛋白的相互作用; B.DNA聚合酶; C.管家基因; D.RNA聚合酶10.關(guān)于基因啟動(dòng)子的敘述,正確的是 A.開始轉(zhuǎn)錄生成mRNA的那段DNA序列;B.編碼mRNA翻譯起始的那段DNA
38、序列;C.RNA聚合酶最初結(jié)合模板DNA的部位;D.分解(代謝)物基因激活蛋白結(jié)合的DNA部位11.有些基因在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞持續(xù)表達(dá),這類基因稱為 A.可誘導(dǎo)基因;B.可阻遏基因;C.操縱基因;D.啟動(dòng)基因;E.管家基因12.A.順式作用元件;B.反式作用因子;C.操縱子;D.調(diào)節(jié)蛋白(1)增強(qiáng)子屬于();(2)能調(diào)控多個(gè)操縱子的是();(3)沉默子屬于()13.操縱子 A.只在真核生物中存在;B.一定含有結(jié)構(gòu)基因;C.原核、真核生物中均存在;D.只在原核生物中存在14.人類基因組的串聯(lián)重復(fù)序列存在于下列哪些結(jié)構(gòu)中 A.編碼區(qū);B.非編碼區(qū);C.A和B;D.兩者均有15.下列基因表
39、達(dá)具有組織特異性的是 A.磷酸甘油醛脫氫酶;B.血紅蛋白;C.胰島素;D.HMG-CoA裂解酶16.下述蛋白質(zhì)基因表達(dá)具有組織特異性的是 A.磷酸甘油醛脫氫酶;B.血紅蛋白;C.胰島素;D.丙酮酸脫氫酶17.轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)包括 A.轉(zhuǎn)錄激活域;B.DNA結(jié)合域;C.共有序列;D.結(jié)構(gòu)基因18.cAMP與CAP結(jié)合,CAP介導(dǎo)正性調(diào)節(jié)發(fā)生在 A.有葡萄糖及cAMP較低時(shí);B.有葡萄糖及cAMP較高時(shí);C.沒有葡萄糖及cAMP較高時(shí);D.沒有葡萄糖及cAMP較低時(shí)19.乳糖操縱子中的I基因編碼產(chǎn)物是 A.-半乳糖苷酶;B.透酶;C.乙?;D(zhuǎn)移酶;D.一種阻遏蛋白20.下列關(guān)于TATA盒的敘述,正確
40、的是 A.是與RNA-pol穩(wěn)定結(jié)合的序列;B.是蛋白質(zhì)翻譯的起始點(diǎn);C.是DNA復(fù)制的起始點(diǎn);D.是與核蛋白體穩(wěn)定結(jié)合的序列;E.是遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn),增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄活性的序列21.下列哪種乳糖操縱子序列能與RNA聚合酶結(jié)合 A. P序列; B. O序列;C. CAP結(jié)合位點(diǎn);D. I基因;E.Z基因22.共同參與構(gòu)成乳糖操縱子的組分 A.三個(gè)結(jié)構(gòu)基因;B.一個(gè)操縱序列;C.一個(gè)啟動(dòng)序列;D.一個(gè)調(diào)節(jié)序列23.下列選項(xiàng)中,屬于順式作用元件的有 A.啟動(dòng)子;B.增強(qiáng)子;C.沉默子;D.操縱子24.下列屬于基因表達(dá)終產(chǎn)物的是 A.蛋白質(zhì);B.mRNA;C.tRNA;D.rRNA25.小分子RNA對(duì)翻譯的調(diào)
41、節(jié)機(jī)制實(shí)際是A.反義脫氧寡核苷酸的作用;B.在翻譯水平上阻遏基因的表達(dá);C.互補(bǔ)RNA片段與mRNA特定位點(diǎn)的結(jié)合;D.小分子正義RNA與mRNA特定序列的結(jié)合26.真核基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)有 A.基因的不連續(xù)性;B.單順反子;C.含重復(fù)序列;D.一個(gè)啟動(dòng)基因后有幾個(gè)編碼基因(2002)(2003)(2000)20.A(2006)21. A (2006)22.ABCD(2003)23.ABC(2006)24.ACD25.BC(小分子RNA的調(diào)節(jié)作用實(shí)質(zhì)是由于一小段互補(bǔ)RNA(反義RNA)通過堿基互補(bǔ)的方式與mRNA特定位點(diǎn)結(jié)合,從而在翻譯水平上阻遏基因的表達(dá))26.ABC(2007)n 名詞解釋基因
42、表達(dá)gene expression; 管家基因 housekeeping gene;乳糖操縱子lac operon;順式作用元件cis-acting element;反式作用因子trans-acting factor; 單順反子 monocistron基因表達(dá):基因轉(zhuǎn)錄及翻譯的過程,即生成具有生物學(xué)功能產(chǎn)物的過程。管家基因:某些基因產(chǎn)物對(duì)生命全過程都是必需的或必不可少的。這類基因在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá),稱謂管家基因。乳糖操縱子:大腸桿菌中與乳糖代謝相關(guān)的基因成簇的串連在一起共同組成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位即乳糖操縱子,包括:Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因,一個(gè)操縱序列O,一個(gè)啟動(dòng)序列P及一個(gè)調(diào)節(jié)基
43、因I。順式作用元件:指可影響自身基因表達(dá)活性的DNA序列。反式作用因子:真核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子由它的編碼基因表達(dá)后,通過與特異的順式作用元件的識(shí)別、結(jié)合,反式激活另一基因的轉(zhuǎn)錄,故稱為反式作用蛋白或反式作用因子。單順反子:真核基因的一個(gè)編碼基因轉(zhuǎn)錄只生成一個(gè)mRNA分子、經(jīng)翻譯生成一條mRNA分子、經(jīng)翻譯生成一條多肽鏈。n 問答題1.簡述基因表達(dá)的規(guī)律與方式。基因表達(dá)具有嚴(yán)格的規(guī)律性,即時(shí)間和空間特異性。時(shí)間特異性是指基因表達(dá)按一定的時(shí)間順序發(fā)生,空間特異性是指多細(xì)胞生物個(gè)體在某一特定生長發(fā)育階段,同一基因在不同的組織器官表達(dá)不同。有些基因幾乎在所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá),或變化很小,即基本(組成性)表達(dá)。
44、有些基因受到環(huán)境變化的誘導(dǎo)和阻遏,即基因的誘導(dǎo)表達(dá)和阻遏表達(dá)。2.簡述乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)及調(diào)控原理乳糖操縱子含Z、Y及A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因,分別編碼-半乳糖甘酶、透酶和乙?;D(zhuǎn)移酶,一個(gè)操縱序列O、一個(gè)啟動(dòng)序列P及一個(gè)調(diào)節(jié)基因I.I基因具有獨(dú)立的啟動(dòng)序列(PI),編碼一種阻遏蛋白,后者與O序列結(jié)合,使操縱子受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。在啟動(dòng)序列P上游還有一個(gè)分解(代謝)物基因結(jié)合蛋白(CAP)結(jié)合位點(diǎn)。在沒有乳糖存在時(shí),lac操縱子處于阻遏狀態(tài)。當(dāng)有乳糖存在時(shí),乳糖經(jīng)-半乳糖甘酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘牵Y(jié)合阻遏蛋白,使蛋白質(zhì)構(gòu)象變化,lac操縱子即可被誘導(dǎo)。當(dāng)沒有葡萄糖及cAMP濃度較高時(shí),cAMP與CAP結(jié)合,
45、CAP結(jié)合在lac啟動(dòng)序列附近的CAP位點(diǎn),可刺激RNA轉(zhuǎn)錄活性;當(dāng)有葡萄糖存在時(shí),cAMP濃度降低,cAMP與CAP結(jié)合受阻,因此lac操縱子表達(dá)下降。3.轉(zhuǎn)錄激活調(diào)節(jié)的基本要素是什么?特異DNA序列決定基因的轉(zhuǎn)錄活性,在原核生物中包括:啟動(dòng)序列(promoter)、操縱序列(operator)以及其他調(diào)節(jié)序列;真核基因中包括:啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和沉默子等順式作用元件。轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白可以增強(qiáng)或抑制轉(zhuǎn)錄活性,原核生物基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白分為三類:特異因子、阻遏蛋白和激活蛋白;真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白又稱轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子或轉(zhuǎn)錄因子,可分為基本轉(zhuǎn)錄因子和特異轉(zhuǎn)錄因子。DNA元件與調(diào)節(jié)蛋白對(duì)轉(zhuǎn)錄激活的調(diào)節(jié)最終是由RN
46、A聚合酶體現(xiàn)。4.真核基因表達(dá)調(diào)控的特點(diǎn)是什么?真核基因轉(zhuǎn)錄有三種RNA聚合酶,多種轉(zhuǎn)錄因子參與;活性染色體發(fā)生結(jié)構(gòu)變化:核酸酶敏感,堿基修飾變化,組蛋白乙?;?,拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)變化;以正性調(diào)節(jié)為主;轉(zhuǎn)錄和翻譯分開進(jìn)行;在轉(zhuǎn)錄及翻譯后的修飾、加工及運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)均可進(jìn)行調(diào)控。5.簡述真核基因啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和沉默子的概念、結(jié)構(gòu)與功能。真核基因啟動(dòng)子指的是RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)周圍的一組轉(zhuǎn)錄控制組件,包括TATA盒,它的共有序列是TATAAAA。位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游-25 -30bp,控制和轉(zhuǎn)錄起始的準(zhǔn)確性及頻率。TATA盒是基本轉(zhuǎn)錄因子TFD結(jié)合位點(diǎn)。GC盒(GGGCGG)和CAAT盒(GCCAAT,位于轉(zhuǎn)錄起
47、始點(diǎn)上游-30-110bp區(qū)域。)典型的啟動(dòng)子則由TATA盒和(或)GC盒組成,具有一個(gè)轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)及較高的轉(zhuǎn)錄活性。增強(qiáng)子是指遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)(1-30kb)、決定基因的時(shí)間、空間特異性表達(dá)、增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的DNA序列,其發(fā)揮作用的方式通常與方向、距離無關(guān)。增強(qiáng)子和啟動(dòng)子常交錯(cuò)覆蓋或連續(xù)。從功能上講,沒有增強(qiáng)子存在,啟動(dòng)子通常不能表現(xiàn)活性;沒有啟動(dòng)子時(shí),增強(qiáng)子也無法發(fā)揮作用。沉默子是指某些基因含有的負(fù)性調(diào)節(jié)元件,當(dāng)其結(jié)合特異蛋白因子時(shí),對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起阻遏作用。6.RNAi是在什么水平上對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控的?細(xì)胞內(nèi)存在一類雙鏈RNA(doble-stranded RNA,dsRNA),通過一定酶
48、切機(jī)制,轉(zhuǎn)變?yōu)殡p鏈-22個(gè)核苷酸的?。ǚ肿樱└蓴_RNA(siRNA),參與RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RNA-induced silencing complex,RISC)組成。RISC是一種多成分核酸酶,可使特異mRNA降解,阻斷翻譯過程。因此RNAi實(shí)際上是通過降解特異的mRNA,在轉(zhuǎn)錄后/翻譯水平發(fā)生的一種基因表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制。第十四章 基因重組與基因工程1.不能用作克隆載體的DNA是 A.噬菌體DNA; B.質(zhì)粒DNA;C.細(xì)菌基因組DNA;D.腺病毒DNA2.基因工程中,將目的基因與載體DNA拼接的酶是 A.DNA聚合酶;B.DNA聚合酶;C.限制性內(nèi)切核酸酶;D.DNA連接酶; E.反轉(zhuǎn)錄
49、酶3.能識(shí)別DNA特異序列并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類酶是 A.核酸外切酶;B.核酸內(nèi)切酶;C.限制性核酸外切酶;D.限制性核酸內(nèi)切酶;E.核酸末端轉(zhuǎn)移酶4.確切的說,cDNA文庫包含 A.一種物種的全部mRNA信息;B.一種物種的全部遺傳信息;C.一種生物組織或細(xì)胞的全部遺傳信息;D.一種生物體組織或細(xì)胞的全部mRNA信息. 5.下列DNA中,一般不用做克隆載體的是 A.質(zhì)粒DNA;B.大腸桿菌DNA;C.病毒DNA;D.噬菌體DNA;E.酵母人工染色體6.下列關(guān)于限制性內(nèi)切酶的敘述哪一項(xiàng)是不正確的? A.它能識(shí)別DNA特定的堿基順序,并在特定的位點(diǎn)切斷DNA;B.切割點(diǎn)附近的堿
50、基順序一般呈回文結(jié)構(gòu);C.它能專一降解經(jīng)甲基化修飾的DNA;D.是重組DNA的重要工具酶;E.主要從細(xì)菌中獲得7.下述雙鏈DNA序列(僅列出其中一條鏈序列)中,不屬于完全回文結(jié)構(gòu)的是 A.TGAATTCA;B.AGAATTCT;C.GGAATTCC;D.CGTTAAGC.8.已知序列的情況下,獲得目的DNA最常用的方法是 A.篩選cDNA文庫;B.化學(xué)合成法;C.DNA合成儀合成;D.聚合酶鏈反應(yīng).9. A.RNA聚合酶;B.末端轉(zhuǎn)移酶;C.堿性磷酸酶;D.反轉(zhuǎn)錄酶(1)能在DNA3-羥基末端進(jìn)行同聚物加尾的是(2)能切除DNA末端磷酸基的是(3)合成cDNA用的是10.A.轉(zhuǎn)化;B.轉(zhuǎn)導(dǎo);C
51、.轉(zhuǎn)座;D.轉(zhuǎn)染(1)插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因位移或重排(2)將表達(dá)載體導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程(3)通過自動(dòng)獲取或人為供給外源DNA,使細(xì)胞獲得新的表型11.進(jìn)行基因工程實(shí)驗(yàn)時(shí),常用的技術(shù)有 A.分子雜交技術(shù);B.DNA探針技術(shù);C.質(zhì)粒重組技術(shù);D.基因調(diào)控技術(shù)12.可用于基因工程載體的DNA分子有 A.染色體DNA;B.噬菌體DNA;C.細(xì)菌DNA;D.病毒DNA13.下列關(guān)于質(zhì)粒載體的敘述,正確的是 A.具有自我復(fù)制能力;B.有些質(zhì)粒常攜帶抗藥性基因;C.為小分子環(huán)狀DNA;D.含有克隆位點(diǎn)14.重組DNA技術(shù)中常用的工具酶 A.限制性核酸內(nèi)切酶;B.DNA連接酶;C.DNA解鏈酶;D.轉(zhuǎn)
52、轉(zhuǎn)錄酶.15.以同聚物加尾連接法連接目的基因與載體需要 A.限制性核酸內(nèi)切酶;B.DNA連接酶;C.DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶;D.末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶(2002)3.D(2004)(2006)6.C(1993);C;D10.C;D;A11.ABC12.BD13.ABCD(2003)14.ABD(2001)15.BDn 名詞解釋基因工程:在體外,用酶學(xué)方法將各種來源的DNA與載體DNA連接成為重組DNA,繼而通過轉(zhuǎn)化和篩選得到含有目的基因的宿主細(xì)胞,最后進(jìn)行擴(kuò)增得到大量相同重組DNA分子的過程稱為基因工程,又稱基因克隆、DNA克隆和重組DNA等。cDNA文庫:以mRNA為模板,利用反轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補(bǔ)
53、的DNA,即cDNA,再復(fù)制成雙鏈的cDNA片段,與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌。不同的細(xì)菌包含了不同的mRNA為模板的cDNA分子或片段,故生長的全部細(xì)菌所攜帶的各種cDNA分子或片段就代表了整個(gè)組織或細(xì)胞表達(dá)的各種mRNA信息,這就是cDNA文庫?;蚪MDNA文庫:利用限制性核酸內(nèi)切酶將染色體DNA切割成許多一定基因水平的片段,其中即含有人們感興趣的基因片段。將這些片段分子與適當(dāng)?shù)目寺≥d體拼接成重組的DNA分子,繼而轉(zhuǎn)入受體菌,使每個(gè)細(xì)菌內(nèi)都攜帶一種重組的DNA分子。不同細(xì)菌所包含的重組DNA分子可能為不同的染色體DNA片段,這樣全部的轉(zhuǎn)化細(xì)菌所攜帶的各種染色體片段就代表了染色體的整個(gè)基因組。
54、這些存在于轉(zhuǎn)化細(xì)菌內(nèi)、由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA片段的集合稱為基因組DNA文庫?;蚪MDNA文庫涵蓋了基因組的全部基因信息。粘性末端:雙鏈DNA被限制性內(nèi)切酶切割后,形成的兩條鏈錯(cuò)開幾個(gè)堿基,而不是平齊的末端。回文結(jié)構(gòu):大部分限制性核酸內(nèi)切酶屬于類酶,它們識(shí)別DNA位點(diǎn)的核苷酸序列呈二元旋轉(zhuǎn)對(duì)稱,這種特殊的結(jié)構(gòu)順序通常被稱為回文結(jié)構(gòu)。目的基因:應(yīng)用重組DNA技術(shù)為分離、獲得某一感興趣的基因或DNA序列,或者為獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物-蛋白質(zhì)。這些感興趣的基因或DNA序列就是目的基因,又稱目的DNA。有兩種類型的目的DNA,即cDNA和基因組DNA。restriction endonuc
55、lease:限制性核酸內(nèi)切酶,為識(shí)別DNA的特異序列,并能在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類核酸內(nèi)切酶。限制性核酸內(nèi)切酶存在于細(xì)菌體內(nèi),與相伴存在的甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制-修飾體系,能夠限制外源DNA,保護(hù)自身DNA,對(duì)細(xì)菌遺傳性狀的穩(wěn)定遺傳有著重要意義。分為三類,重組DNA技術(shù)中常用的限制性核酸內(nèi)切酶為類酶。vector載體:即基因載體,或克隆載體,是在基因工程中為攜帶感興趣的外源DNA,實(shí)現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或者表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)而采用的一些DNA分子,具有自我復(fù)制和表達(dá)的功能。其中,為使插入的外源DNA序列可以轉(zhuǎn)錄、進(jìn)而翻譯成多肽鏈而特意設(shè)計(jì)的克隆載體又稱為表達(dá)載體。克隆載體有質(zhì)粒DNA、噬菌體DNA和病毒DNA,它們經(jīng)適當(dāng)改造后仍具有自我復(fù)制的能力,或兼有表達(dá)外源基因的能力; plasmid 質(zhì)粒:存在于細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈DNA分子。分子本身有復(fù)制功能的遺傳結(jié)構(gòu),能在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立自主的進(jìn)行復(fù)制,并在細(xì)胞分裂時(shí)恒定的傳給子代細(xì)胞。質(zhì)粒帶有某些遺傳信息,因此會(huì)賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀。因質(zhì)粒DNA有自我復(fù)制功能及攜帶遺傳信息等特性,可作為重組DNA操作的載體。Yac 載體酵母人工染色體,用于大片段的DNA克隆。cosmid(柯斯質(zhì)粒/粘粒);為COS序列與質(zhì)粒
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