鹽酸氨溴索顆粒的藥物動(dòng)力學(xué)及生物等效性研究

1、638 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2007, 38(9 · · 中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志藥理與臨床鹽酸氨溴索顆粒的藥物動(dòng)力學(xué)及生物等效性研究鄧?guó)Q1，張彥玲2，胡玉欽1，侯艷寧1，牛坤1(1. 白求恩國(guó)際和平醫(yī)院臨床藥理室，河北石家莊 050082；2. 石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)(石家莊有限公司，河北石家莊 050051摘要：采用雙周期隨機(jī)交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究了19名健康男性受試者單劑量口服鹽酸氨溴索顆粒(受試制劑與鹽酸氨溴索片(參比制劑的藥動(dòng)學(xué)。采用LC-MS/MS法測(cè)定血漿中氨溴索的濃度。受試制劑與參比制劑的c max 為(69.66

2、7;22.12和(67.89±25.08 ng/ml，t max 為(1.95±0.60和(1.89±0.43 h ，t 1/2為(7.77±0.93和(7.61±1.02 h ，AUC 024h 為(517.9±180.4和(518.3±215.5 ng·h·ml1。鹽酸氨溴索顆粒的相對(duì)生物利用度為(102.7±17.1，雙單側(cè)t 檢驗(yàn)結(jié)果表明兩制劑具有生物等效性。關(guān)鍵詞：鹽酸氨溴索；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；藥物動(dòng)力學(xué)；生物等效性中圖分類號(hào)：R944.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-825

3、5(2007 09-0638-03Pharmacokinetics and Bioequivalence of Ambroxol Hydrochloride GranulesDENG Ming1, ZHANG Yan-ling2, HU Yu-qin1, HOU Yan-ning1, NIU Kun1(1. Dept. of Clinical Pharmacology, Bethune International Peace Hospital, Shijiazhuang 050082;2. Zhongqi Pharmaceutical Technology (Shijiazhuang Co.,

4、 Ltd., Shijiazhuang 050051ABSTRACT : The pharmacokinetics of ambroxol hydrochloride granules and reference tablets were investigated at a single oral dosage of 30mg in 19 healthy male volunteers, according to a randomized crossover design. The concentration of ambroxol in plasma was determined by a

5、LC-MS/MS method. The main pharmacokinetic parameters of test and reference preparations were c max (69.66±22.12 and (67.89±25.08 ng/ml, t max (1.95±0.60 and (1.89±0.43 h, t 1/2(7.77±0.93 and (7.61±1.02 h, AUC 024h(517.9±180.4 and (518.3±215.5 ng·h·ml

6、1. The relative bioavailability of ambroxol hydrochloride granules was(102.7±17.1. The result of two one-side t test showed that the two preparations were bioequivalent.Key Words: ambroxol hydrochloride; LC-MS/MS; pharmacokinetics; bioequivalence氨溴索(a m b r o x o l ，1是溴己新的活性代謝物，系黏液溶解劑，對(duì)呼吸系統(tǒng)有保護(hù)作

7、用，還有促進(jìn)表面活性物質(zhì)合成和分泌等作用，臨床用于治療急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠、咳痰困難等。國(guó)內(nèi)有關(guān)1片劑、膠囊劑、口服液等劑型的藥物動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究已有報(bào)道1-5，但顆粒劑的藥物動(dòng)力學(xué)研究尚未見報(bào)道。本研究以1片為收稿日期：2007-01-24作者簡(jiǎn)介：鄧?guó)Q(1973，女，碩士，主管藥師，從事藥物分析和藥物動(dòng)力學(xué)研究。Tel -mail ：dm322參比制劑，采用LC-MS/MS法測(cè)定人血漿中1的濃度，研究了兩種1制劑的人體藥物動(dòng)力學(xué)和生物等效性，為臨床合理用藥提供了依據(jù)。1儀器與試藥液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)：Agilent 1100型液相色譜儀，包

8、括四元梯度泵、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱；API 4000型三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子化(ESI 源、Analyst 1.4 軟件(美國(guó)ABI 公司。受試制劑(T ：鹽酸1顆粒劑(河北華威得菲爾藥業(yè)有限公司，規(guī)格 含1鹽酸鹽30mg ，批號(hào)060901；參比制劑(R ：鹽酸1片(上海勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司，規(guī)格 含639中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2007, 38(9 · ·1鹽酸鹽30mg ，批號(hào)684069；1鹽酸鹽對(duì)照品(河北省藥品檢驗(yàn)所，含量99.4，批號(hào)040801；維拉帕米(2鹽酸鹽對(duì)照品(

9、內(nèi)標(biāo)，中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量100.0，批號(hào)0223-9601。和10h 后統(tǒng)一進(jìn)餐。受試者于給藥前及給藥后20、40min 和1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10、12、24h 分別從肘靜脈取血2ml 置肝素管中放置1h ，離心(3000r/min 10min ，分離血漿，置-20凍存，備用。1周后交叉給藥。2.2血樣測(cè)定 2. 2. 1測(cè)定條件色譜條件：色譜柱Restek Allure C18柱(4.6mm×50mm ，5µm；流動(dòng)相 甲醇-乙腈-0.5甲酸(55540；流速0.5ml/min；柱溫20；進(jìn)樣量5µl。質(zhì)譜條件：離子源 電噴霧離子

10、化(ESI 源；噴霧電壓5kV ；霧化溫度500；霧化氣流速40L/min；簾氣流速25L/min；碰撞氣流速4L/min；輔助氣流速40L/min；檢測(cè)方式 正離子多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM 。定量分析的離子反應(yīng)m/z 379.1264.1(1 ，m/z 455.5m/z 165.2(2 ，碰撞誘導(dǎo)解離(CID 電壓25V (1和45V (2 ；駐留時(shí)間(dwell time 200ms 。在上述測(cè)定條件下，空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾1和2的測(cè)定，保留時(shí)間分別為1.5min 和1.7min ?？瞻籽獫{、加樣血漿和服藥后血漿的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM 色譜圖見圖1。2方法與結(jié)果2. 1試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)前對(duì)志

11、愿者進(jìn)行病史詢問和體格檢查，包括心電圖、胸透、肝功能、腎功能、血常規(guī)、尿常規(guī)和乙肝表面抗原檢查等，共入選20名男性健康志愿者，19名完成試驗(yàn)(1名退出。19名受試者平均年齡(23.6±2.5歲，平均體重(64.2±5.6 kg ，身高(1.72±0.06 m ；受試者試驗(yàn)前兩周及試驗(yàn)期間未服用其它任何藥物，試驗(yàn)期間禁煙酒及含咖啡因的飲料，并自愿簽署知情同意書。試驗(yàn)方案經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。采用兩制劑雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，20名受試者隨機(jī)分為2組。試驗(yàn)前12h 進(jìn)清淡晚餐后禁食，翌晨8時(shí)空腹口服T 或R 制劑，劑量均為30mg (以1鹽酸鹽計(jì)，用溫開水250ml

12、送服。R 制劑直接吞服，T 制劑先用適量水?dāng)嚢杈鶆蚝蠓?，再用少量水分次沖洗杯中殘留藥物，服下。服藥2h 后統(tǒng)一飲水，40122012012A ：空白血漿，B ：空白血漿+1鹽酸鹽對(duì)照品+2鹽酸鹽對(duì)照品，C ：服藥后4h 血漿，I ：m/z 379.1264.1；II ：m/z 455.5m/z 165.211; 22圖1MRM 色譜圖2. 2. 2血樣預(yù)處理取血樣100µl，加入甲醇100µl和“2.2.3”項(xiàng)下內(nèi)標(biāo)溶液200µl，渦旋20s ，離心(10000r/min 5min ，取上清液進(jìn)樣測(cè)定。640 Chinese Journal of Pharmac

13、euticals 2007, 38(9 · · 中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志表1主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)結(jié)果( ± s，n =19參數(shù)max t max /ht 1/2 /hAUC 024h /ng·h·ml1AUC 0 /ng·h·ml1F/T 制劑1.95±0.607.77±0.93517.9±180.4577.3±200.5102.7±17.1R 制劑1.89±0.437.61±1.02518.3±215.5574.8±236.9AUC 經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)

14、行方差分析，用雙單側(cè)t 檢驗(yàn)進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，T 和R 制劑的t max 、c max 、AUC 024h、AUC 0均無顯著性差異(P 0.05 ；T 制劑圖2平均藥-時(shí)曲線(n = 192. 2. 3標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取1鹽酸鹽對(duì)照品適量，用甲醇溶解配制成1濃度為1mg/ml的貯備液。將該貯備液用空白血漿稀釋成1濃度為2、5、10、25、50、100、200ng/ml的系列血漿。精密稱取2鹽酸鹽對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋成2濃度為100ng/ml的內(nèi)標(biāo)溶液。取上述含1的系列血漿，按“2. 2. 2”項(xiàng)下方法操作，進(jìn)樣測(cè)定。以1濃度(c 為橫坐標(biāo)，1與2的峰面積比(Y 為縱坐標(biāo)，采

15、用加權(quán)(1/c 2最小二乘法進(jìn)行回歸，得回歸方程為Y = 0.0135c +0.00277(r = 0.9993，表明1濃度在2200ng/ml范圍內(nèi)與峰面積比線性關(guān)系良好。定量限為2ng/ml。2. 2. 4精密度與回收率取1低、中、高3個(gè)濃度(分別為5、25、160ng/ml的血漿樣品各6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，分別于日內(nèi)和3d 進(jìn)樣測(cè)定。測(cè)得日內(nèi)和日間RSD 分別為3.8、2.2、1.9(n =6 和5.6、7.7、1.8(n =18，方法回收率分別為101.2、99.9和97.6(n =6。2. 3藥動(dòng)學(xué)參數(shù)和生物等效性評(píng)價(jià)19名健康受試者口服單劑量T 和R 制劑的平均藥-時(shí)

16、曲線見圖2，可見基本相同。將血藥濃度值錄入DAS 1.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)算各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(見表1 ，并進(jìn)行生物等效性統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)T 和R 制劑的t max 進(jìn)行非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，c max 和5 4 3 2c max 的90置信區(qū)間落在R 制劑的70143之間，AUC 的90置信區(qū)間均落在R 制劑的80125之間；以AUC 024h計(jì)算，T 制劑相對(duì)于R 制劑的生物利用度為(102.7±17.1 。結(jié)果表明兩制劑具有生物等效性。3討論人血漿中1測(cè)定多采用HPLC 法2-5，靈敏度較低，樣品處理復(fù)雜。本研究采用甲醇沉淀血漿蛋白后直接進(jìn)樣的LC-MS/MS法，操作簡(jiǎn)捷、特異性好、干擾少，每個(gè)樣品的測(cè)定僅需2min ，且靈敏度提高，定量限2ng/ml。在本研究中，受試者口服1制劑30mg 即可滿足研究需要，服藥劑量?jī)H相當(dāng)于文獻(xiàn)1-5報(bào)道的1/31/2，所有受試者試驗(yàn)期間均未發(fā)生藥物不良反應(yīng)。本研究所得的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)1,3,4報(bào)道基本一致。參考文獻(xiàn)：1徐紅蓉, 汪紅, 陳偉力, 等. 氨溴索分散片在健康志愿者的藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性J . 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志, 2006, 22(3 : 180-183.劉書銘, 周遠(yuǎn)大. 鹽