蛋白質王鏡巖生物化學第三版筆記打印

1、 第四章 蛋白質 提要 一. 概念簡單蛋白、結合蛋白、基本氨基酸、等電點、甲醛滴定法、Edman降解、一級結構、肽鍵、構型與構象、二面角、二級結構、超二級結構、結構域、三級結構、四級結構、亞基、別構蛋白、分子病、水化層、雙電層、蛋白質的變性與復性、鹽析與鹽溶二.氨基酸分類、基本氨基酸的結構、分類、名稱、符號、化學反應、鑒定、蛋白質的水解三.蛋白質的結構一級結構 結構特點、測定步驟、常用方法、酶二級結構 四種 結構特點、數據、超二級結構三級結構 主要靠疏水鍵維持四級結構 變構現象結構與功能的適應、結構變化對功能的影響、典型蛋白質四.蛋白質的性質分子量的測定方法、酸堿性、溶解性、變性、顏色反應第一

2、節(jié) 蛋白質通論一、蛋白質的功能多樣性蛋白質是原生質的主要成分，任何生物都含有蛋白質。自然界中最小、最簡單的生物是病毒，它是由蛋白質和核酸組成的。沒有蛋白質也就沒有生命。自然界的生物多種多樣，因而蛋白質的種類和功能也十分繁多。概括起來，蛋白質主要有以下功能：1.催化功能 生物體內的酶都是由蛋白質構成的，它們有機體新陳代謝的催化劑。沒有酶，生物體內的各種化學反應就無法正常進行。例如，沒有淀粉酶，淀粉就不能被分解利用。2.結構功能 蛋白質可以作為生物體的結構成分。在高等動物里，膠原是主要的細胞外結構蛋白，參與結締組織和骨骼作為身體的支架，占蛋白總量的1/4。細胞里的片層結構，如細胞膜、線粒體、葉綠體

3、和內質網等都是由不溶性蛋白與脂類組成的。動物的毛發(fā)和指甲都是由角蛋白構成的。3.運輸功能 脊椎動物紅細胞中的血紅蛋白和無脊椎動物體內的血藍蛋白在呼吸過程中起著運輸氧氣的作用。血液中的載脂蛋白可運輸脂肪，轉鐵蛋白可轉運鐵。一些脂溶性激素的運輸也需要蛋白，如甲狀腺素要與甲狀腺素結合球蛋白結合才能在血液中運輸。4.貯存功能 某些蛋白質的作用是貯存氨基酸作為生物體的養(yǎng)料和胚胎或幼兒生長發(fā)育的原料。此類蛋白質包括蛋類中的卵清蛋白、奶類中的酪蛋白和小麥種子中的麥醇溶蛋白等。肝臟中的鐵蛋白可將血液中多余的鐵儲存起來，供缺鐵時使用。5.運動功能 肌肉中的肌球蛋白和肌動蛋白是運動系統(tǒng)的必要成分，它們構象的改變引

4、起肌肉的收縮，帶動機體運動。細菌中的鞭毛蛋白有類似的作用，它的收縮引起鞭毛的擺動，從而使細菌在水中游動。6.防御功能 高等動物的免疫反應是機體的一種防御機能，它主要也是通過蛋白質（抗體）來實現的。凝血與纖溶系統(tǒng)的蛋白因子、溶菌酶、干擾素等，也擔負著防御和保護功能。7.調節(jié)功能 某些激素、一切激素受體和許多其他調節(jié)因子都是蛋白質。8.信息傳遞功能 生物體內的信息傳遞過程也離不開蛋白質。例如，視覺信息的傳遞要有視紫紅質參與，感受味道需要味覺蛋白。視桿細胞中的視紫紅質，只需1個光子即可被激發(fā)，產生視覺。9.遺傳調控功能 遺傳信息的儲存和表達都與蛋白質有關。DNA在儲存時是纏繞在蛋白質（組蛋白）上的。

5、有些蛋白質，如阻遏蛋白，與特定基因的表達有關。半乳糖苷酶基因的表達受到一種阻遏蛋白的抑制，當需要合成半乳糖苷酶時經過去阻遏作用才能表達。10.其他功能 某些生物能合成有毒的蛋白質，用以攻擊或自衛(wèi)。如某些植物在被昆蟲咬過以后會產生一種毒蛋白。白喉毒素可抑制生物蛋白質合成。二、蛋白質的分類（一）按分子形狀分類1.球狀蛋白 外形近似球體，多溶于水，大都具有活性，如酶、轉運蛋白、蛋白激素、抗體等。球狀蛋白的長度與直徑之比一般小于10。2.纖維狀蛋白 外形細長，分子量大，大都是結構蛋白，如膠原蛋白，彈性蛋白，角蛋白等。纖維蛋白按溶解性可分為可溶性纖維蛋白與不溶性纖維蛋白。前者如血液中的纖維蛋白原、肌肉中

6、的肌球蛋白等，后者如膠原蛋白，彈性蛋白，角蛋白等結構蛋白。22 / 30（二）按分子組成分類1.簡單蛋白 完全由氨基酸組成，不含非蛋白成分。如血清清蛋白等。根據溶解性的不同，可將簡單蛋白分為以下7類：清蛋白、球蛋白、組蛋白、精蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白和硬蛋白。2.結合蛋白 由蛋白質和非蛋白成分組成，后者稱為輔基。根據輔基的不同，可將結合蛋白分為以下7類：核蛋白、脂蛋白、糖蛋白、磷蛋白、血紅素蛋白、黃素蛋白和金屬蛋白。三、蛋白質的元素組成與分子量1.元素組成 所有的蛋白質都含有碳氫氧氮四種元素，有些蛋白質還含有硫、磷和一些金屬元素。蛋白質平均含碳50，氫7，氧23，氮16。其中氮的含量較為恒定，而

7、且在糖和脂類中不含氮，所以常通過測量樣品中氮的含量來測定蛋白質含量。如常用的凱氏定氮：蛋白質含量蛋白氮×6.25其中6.25是16的倒數。2.蛋白質的分子量 蛋白質的分子量變化范圍很大，從6000到100萬或更大。這個范圍是人為規(guī)定的。一般將分子量小于6000的稱為肽。不過這個界限不是絕對的，如牛胰島素分子量為5700，一般仍認為是蛋白質。蛋白質煮沸凝固，而肽不凝固。較大的蛋白質如煙草花葉病毒，分子量達4000萬。四、蛋白質的水解氨基酸是蛋白質的基本結構單位，這個發(fā)現是從蛋白質的水解得到的。蛋白質的水解主要有三種方法：1.酸水解 用6MHCl或4MH2SO4，105回流20小時即可完

8、全水解。酸水解不引起氨基酸的消旋，但色氨酸完全被破壞，絲氨酸和蘇氨酸部分破壞，天冬酰胺和谷氨酰胺的酰胺基被水解。如樣品含有雜質，在酸水解過程中常產生腐黑質，使水解液變黑。用3mol/L對甲苯磺酸代替鹽酸，得到色氨酸較多，可像絲氨酸和蘇氨酸一樣用外推法求其含量。2.堿水解 用5MNaOH，水解1020小時可水解完全。堿水解使氨基酸消旋，許多氨基酸被破壞，但色氨酸不被破壞。常用于測定色氨酸含量。可加入淀粉以防止氧化。3.酶水解 酶水解既不破壞氨基酸，也不引起消旋。但酶水解時間長，反應不完全。一般用于部分水解，若要完全水解，需要用多種酶協同作用。第二節(jié) 氨基酸 一、氨基酸的結構與分類（一）基本氨基酸

9、組成蛋白質的20種氨基酸稱為基本氨基酸。它們中除脯氨酸外都是-氨基酸，即在-碳原子上有一個氨基。基本氨基酸都符合通式，都有單字母和三字母縮寫符號。按照氨基酸的側鏈結構，可分為三類：脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸和雜環(huán)氨基酸。1.脂肪族氨基酸 共15種。側鏈只是烴鏈：Gly, Ala, Val, Leu, Ile后三種帶有支鏈，人體不能合成，是必需氨基酸。側鏈含有羥基：Ser, Thr許多蛋白酶的活性中心含有絲氨酸，它還在蛋白質與糖類及磷酸的結合中起重要作用。側鏈含硫原子：Cys, Met兩個半胱氨酸可通過形成二硫鍵結合成一個胱氨酸。二硫鍵對維持蛋白質的高級結構有重要意義。半胱氨酸也經常出現在蛋白質

10、的活性中心里。甲硫氨酸的硫原子有時參與形成配位鍵。甲硫氨酸可作為通用甲基供體，參與多種分子的甲基化反應。側鏈含有羧基：Asp（D）, Glu（E）側鏈含酰胺基：Asn（N）, Gln（Q）側鏈顯堿性：Arg（R）, Lys（K）2.芳香族氨基酸 包括苯丙氨酸（Phe,F）和酪氨酸(Tyr,Y)兩種。 酪氨酸是合成甲狀腺素的原料。3.雜環(huán)氨基酸 包括色氨酸(Trp,W)、組氨酸(His)和脯氨酸(Pro)三種。其中的色氨酸與芳香族氨基酸都含苯環(huán)，都有紫外吸收(280nm)。所以可通過測量蛋白質的紫外吸收來測定蛋白質的含量。組氨酸也是堿性氨基酸，但堿性較弱，在生理條件下是否帶電與周圍內環(huán)境有關。它

11、在活性中心常起傳遞電荷的作用。組氨酸能與鐵等金屬離子配位。脯氨酸是唯一的仲氨基酸，是-螺旋的破壞者。B是指Asx，即Asp或Asn；Z是指Glx，即Glu或Gln。基本氨基酸也可按側鏈極性分類：非極性氨基酸：Ala, Val, Leu, Ile, Met, Phe, Trp, Pro共八種極性不帶電荷：Gly, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln, Tyr共七種帶正電荷：Arg, Lys, His帶負電荷：Asp, Glu（二）不常見的蛋白質氨基酸某些蛋白質中含有一些不常見的氨基酸，它們是基本氨基酸在蛋白質合成以后經羥化、羧化、甲基化等修飾衍生而來的。也叫稀有氨基酸或特殊氨基酸。如

12、4-羥脯氨酸、5-羥賴氨酸、鎖鏈素等。其中羥脯氨酸和羥賴氨酸在膠原和彈性蛋白中含量較多。在甲狀腺素中還有3,5-二碘酪氨酸。（三）非蛋白質氨基酸自然界中還有150多種不參與構成蛋白質的氨基酸。它們大多是基本氨基酸的衍生物，也有一些是D-氨基酸或、-氨基酸。這些氨基酸中有些是重要的代謝物前體或中間產物，如瓜氨酸和鳥氨酸是合成精氨酸的中間產物，-丙氨酸是遍多酸（泛酸，輔酶A前體）的前體，-氨基丁酸是傳遞神經沖動的化學介質。二、氨基酸的性質（一）物理性質-氨基酸都是白色晶體，每種氨基酸都有特殊的結晶形狀，可以用來鑒別各種氨基酸。除胱氨酸和酪氨酸外，都能溶于水中。脯氨酸和羥脯氨酸還能溶于乙醇或乙醚中。

13、除甘氨酸外，-氨基酸都有旋光性，-碳原子具有手性。蘇氨酸和異亮氨酸有兩個手性碳原子。從蛋白質水解得到的氨基酸都是L-型。但在生物體內特別是細菌中，D-氨基酸也存在，如細菌的細胞壁和某些抗菌素中都含有D-氨基酸。三個帶苯環(huán)的氨基酸有紫外吸收，F:257nm,=200; Y:275nm,=1400; W:280nm,=5600。通常蛋白質的紫外吸收主要是后兩個氨基酸決定的，一般在280nm。氨基酸分子中既含有氨基又含有羧基，在水溶液中以偶極離子的形式存在。所以氨基酸晶體是離子晶體，熔點在200以上。氨基酸是兩性電解質，各個解離基的表觀解離常數按其酸性強度遞降的順序，分別以K1、K2來表示。當氨基酸

14、分子所帶的凈電荷為零時的pH稱為氨基酸的等電點(pI)。等電點的值是它在等電點前后的兩個pK值的算術平均值。氨基酸完全質子化時可看作多元弱酸，各解離基團的表觀解離常數按酸性減弱的順序，以pK1 、pK2 、pK3表示。氨基酸可作為緩沖溶液，在pK處的緩沖能力最強，pI處的緩沖能力最弱。氨基酸的滴定曲線如圖。（二）化學性質1.氨基的反應（1）酰化氨基可與?；噭?，如酰氯或酸酐在堿性溶液中反應，生成酰胺。該反應在多肽合成中可用于保護氨基。（2）與亞硝酸作用氨基酸在室溫下與亞硝酸反應，脫氨，生成羥基羧酸和氮氣。因為伯胺都有這個反應，所以賴氨酸的側鏈氨基也能反應，但速度較慢。常用于蛋白質的化學修飾、水

15、解程度測定及氨基酸的定量。（3）與醛反應氨基酸的-氨基能與醛類物質反應，生成西佛堿-C=N-。西佛堿是氨基酸作為底物的某些酶促反應的中間物。賴氨酸的側鏈氨基也能反應。氨基還可以與甲醛反應，生成羥甲基化合物。由于氨基酸在溶液中以偶極離子形式存在，所以不能用酸堿滴定測定含量。與甲醛反應后，氨基酸不再是偶極離子，其滴定終點可用一般的酸堿指示劑指示，因而可以滴定，這叫甲醛滴定法，可用于測定氨基酸。（4）與異硫氰酸苯酯(PITC)反應-氨基與PITC在弱堿性條件下形成相應的苯氨基硫甲酰衍生物（PTC-AA），后者在硝基甲烷中與酸作用發(fā)生環(huán)化，生成相應的苯乙內酰硫脲衍生物（PTH-AA）。這些衍生物是無色

16、的，可用層析法加以分離鑒定。這個反應首先為Edman用來鑒定蛋白質的N-末端氨基酸，在蛋白質的氨基酸順序分析方面占有重要地位。（5）磺酰化氨基酸與5-(二甲胺基)萘-1-磺酰氯(DNS-Cl)反應，生成DNS-氨基酸。產物在酸性條件下(6NHCl)100也不破壞，因此可用于氨基酸末端分析。DNS-氨基酸有強熒光，激發(fā)波長在360nm左右，比較靈敏，可用于微量分析。（6）與DNFB反應氨基酸與2,4-二硝基氟苯(DNFB)在弱堿性溶液中作用生成二硝基苯基氨基酸（DNP氨基酸）。這一反應是定量轉變的，產物黃色，可經受酸性100高溫。該反應曾被英國的Sanger用來測定胰島素的氨基酸順序，也叫桑格爾

17、試劑，現在應用于蛋白質N-末端測定。（7）轉氨反應在轉氨酶的催化下，氨基酸可脫去氨基，變成相應的酮酸。2.羧基的反應羧基可與堿作用生成鹽，其中重金屬鹽不溶于水。羧基可與醇生成酯，此反應常用于多肽合成中的羧基保護。某些酯有活化作用，可增加羧基活性，如對硝基苯酯。將氨基保護以后，可與二氯亞砜或五氯化磷作用生成酰氯，在多肽合成中用于活化羧基。在脫羧酶的催化下，可脫去羧基，形成伯胺。3茚三酮反應氨基酸與茚三酮在微酸性溶液中加熱，最后生成藍色物質。而脯氨酸生成黃色化合物。根據這個反應可通過二氧化碳測定氨基酸含量。4.側鏈的反應絲氨酸、蘇氨酸含羥基，能形成酯或苷。半胱氨酸側鏈巰基反應性高：（1）二硫鍵(d

18、isulfide bond)半胱氨酸在堿性溶液中容易被氧化形成二硫鍵，生成胱氨酸。胱氨酸中的二硫鍵在形成蛋白質的構象上起很大的作用。氧化劑和還原劑都可以打開二硫鍵。在研究蛋白質結構時，氧化劑過甲酸可以定量地拆開二硫鍵，生成相應的磺酸。還原劑如巰基乙醇、巰基乙酸也能拆開二硫鍵，生成相應的巰基化合物。由于半胱氨酸中的巰基很不穩(wěn)定，極易氧化，因此利用還原劑拆開二硫鍵時，往往進一步用碘乙酰胺、氯化芐、N-乙基丁烯二亞酰胺和對氯汞苯甲酸等試劑與巰基作用，把它保護起來，防止它重新氧化。（2）烷化半胱氨酸可與烷基試劑，如碘乙酸、碘乙酰胺等發(fā)生烷化反應。半胱氨酸與丫丙啶反應，生成帶正電的側鏈，稱為S-氨乙基半

19、胱氨酸（AECys）。（3）與重金屬反應極微量的某些重金屬離子，如Ag+、Hg2+，就能與巰基反應，生成硫醇鹽，導致含巰基的酶失活。5. 以下反應常用于氨基酸的檢驗：l 酪氨酸、組氨酸能與重氮化合物反應(Pauly反應)，可用于定性、定量測定。組氨酸生成棕紅色的化合物，酪氨酸為桔黃色。l 精氨酸在氫氧化鈉中與1-萘酚和次溴酸鈉反應，生成深紅色，稱為坂口反應。用于胍基的鑒定。l 酪氨酸與硝酸、亞硝酸、硝酸汞和亞硝酸汞反應，生成白色沉淀，加熱后變紅，稱為米倫反應，是鑒定酚基的特性反應。l 色氨酸中加入乙醛酸后再緩慢加入濃硫酸，在界面會出現紫色環(huán)，用于鑒定吲哚基。在蛋白質中，有些側鏈基團被包裹在蛋白

20、質內部，因而反應很慢甚至不反應。三、色譜與氨基酸的分析分離1.色譜（chromatography）的發(fā)展史最早的層析實驗是俄國植物學家在1903年用碳酸鈣分離葉綠素，屬于吸附層析。40年代出現了分配層析，50年代出現了氣相色譜，60年代出現HPLC，80年代出現了超臨界層析，90年代出現的超微量HPLC可分離ng級的樣品。2.色譜的分類：按流動相可分為氣相、液相、超臨界色譜等；按介質可分為紙層析、薄層層析、柱層析等；按分離機制可分為吸附層析、分配層析、分子篩層析等3.色譜的應用可用于分離、制備、純度鑒定等。定性可通過保留值、內標、標準曲線等方法，定量一般用標準曲線法。氨基酸的分析分離是測定蛋白

21、質結構的基礎。在分配層析和離子交換層析法開始應用于氨基酸成分分析之后，蛋白質結構的研究才取得了顯著的成就?，F在這些方法已自動化。氨基酸從強酸型離子交換柱的洗脫順序如下：Asp,Thr,Ser,Glu,Pro,Gly,Ala,Cys,Val,Met,Ile,Leu,Tyr,Phe,Lys,His,(NH3),Arg 第三節(jié) 蛋白質的一級結構 蛋白質是生物大分子，具有明顯的結構層次性，由低層到高層可分為一級結構、二級結構、三級結構和四級結構。一、肽鍵和肽一個氨基酸的羧基與另一個氨基酸的氨基縮水形成的共價鍵，稱為肽鍵。在蛋白質分子中，氨基酸借肽鍵連接起來，形成肽鏈。最簡單的肽由兩個氨基酸組成，稱為二

22、肽。含有三、四、五個氨基酸的肽分別稱為三肽、四肽、五肽等。肽鏈中的氨基酸由于形成肽鍵時脫水，已不是完整的氨基酸，所以稱為殘基。肽的命名是根據組成肽的氨基酸殘基來確定的。一般從肽的氨基端開始，稱為某氨基酰某氨基酰某氨基酸。肽的書寫也是從氨基端開始。肽鍵象酰胺鍵一樣，由于鍵內原子處于共振狀態(tài)而表現出較高的穩(wěn)定性。在肽鍵中CN單鍵具有約40雙鍵性質，而C=O雙鍵具有40單鍵性質。這樣就產生兩個重要結果：（1）肽鍵的亞氨基在pH 0-14的范圍內沒有明顯的解離和質子化的傾向；（2）肽鍵中的CN單鍵不能自由旋轉，使蛋白質能折疊成各種三維構象。除了蛋白質部分水解可以產生各種簡單的多肽以外，自然界中還有長短

23、不等的小肽，它們具有特殊的生理功能。動植物細胞中含有一種三肽，稱為谷胱甘肽，即-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸。因其含有巰基，故常以GSH來表示。它在體內的氧化還原過程中起重要作用。腦啡肽是天然止痛劑。肌肉中的鵝肌肽是一個二肽，即-丙氨酰組氨酸。肌肽可作為肌肉中的緩沖劑，緩沖肌肉產生的乳酸對pH的影響。一種抗菌素叫做短桿菌酪肽，由12種氨基酸組成，其中有幾種是D-氨基酸。這些天然肽中的非蛋白質氨基酸可以使其免遭蛋白酶水解。許多激素也是多肽，如催產素、加壓素、舒緩激肽等。二、肽的理化性質小肽的理化性質與氨基酸類似。許多小肽已經結晶。晶體的熔點很高，說明是離子晶體，在水溶液中以偶極離子存在。肽鍵的亞氨基不解

24、離，所以肽的酸堿性取決于肽的末端氨基、羧基和側鏈上的基團。在長肽或蛋白質中，可解離的基團主要是側鏈上的。肽中末端羧基的pK比自由氨基酸的稍大，而末端氨基的pK則稍小。側鏈基團變化不大。肽的滴定曲線和氨基酸的很相似。肽的等電點也可以根據它的pK值確定。一般小肽的旋光度等于各個氨基酸旋光度的總和，但較大的肽或蛋白質的旋光度不等于其組成氨基酸的旋光度的簡單加和。肽的化學性質和氨基酸一樣，但有一些特殊的反應，如雙縮脲反應。一般含有兩個或兩個以上肽鍵的化合物都能與CuSO4堿性溶液發(fā)生雙縮脲反應而生成紫紅色或藍紫色的復合物。利用這個反應可以測定蛋白質的含量。三、一級結構的測定（一）一級結構蛋白質的一級結

25、構是指肽鏈的氨基酸組成及其排列順序。氨基酸序列是蛋白質分子結構的基礎，它決定蛋白質的高級結構。一級結構可用氨基酸的三字母符號或單字母符號表示，從N-末端向C-末端書寫。采用三字母符號時，氨基酸之間用連字符（）隔開。（二）測定步驟測定蛋白質的一級結構，要求樣品必須是均一的（純度大于97）而且是已知分子量的蛋白質。一般的測定步驟是：1.通過末端分析確定蛋白質分子由幾條肽鏈構成。2.將每條肽鏈分開，并分離提純。3.肽鏈的一部分樣品進行完全水解，測定其氨基酸組成和比例。4.肽鏈的另一部分樣品進行N末端和C末端的鑒定。5.拆開肽鏈內部的二硫鍵。6. 肽鏈用酶促或化學的部分水解方法降解成一套大小不等的肽段

26、，并將各個肽段分離出來。7.測定每個肽段的氨基酸順序。8.從第二步得到的肽鏈樣品再用另一種部分水解方法水解成另一套肽段，其斷裂點與第五步不同。分離肽段并測序。比較兩套肽段的氨基酸順序，根據其重疊部分拼湊出整個肽鏈的氨基酸順序。9. 測定原來的多肽鏈中二硫鍵和酰胺基的位置。（三）常用方法1. 末端分析（1）N末端蛋白質的末端氨基與2,4-二硝基氟苯(DNFB)在弱堿性溶液中作用生成二硝基苯基蛋白質（DNP-蛋白質）。產物黃色，可經受酸性100高溫。水解時，肽鏈斷開，但DNP基并不脫落。DNP-氨基酸能溶于有機溶劑（如乙醚）中，這樣可與其他氨基酸和-DNP賴氨酸分開。再經雙向濾紙層析或柱層析，可以

27、鑒定黃色的DNP氨基酸。丹磺酰氯法是更靈敏的方法。蛋白質的末端氨基與5-(二甲胺基)萘-1-磺酰氯(DNS-Cl)反應，生成DNS-蛋白質。DNS-氨基酸有強熒光，激發(fā)波長在360nm左右，比DNFB法靈敏100倍。目前應用最廣泛的是異硫氰酸苯酯(PITC)法。末端氨基與PITC在弱堿性條件下形成相應的苯氨基硫甲酰衍生物，后者在硝基甲烷中與酸作用發(fā)生環(huán)化，生成相應的苯乙內酰硫脲衍生物而從肽鏈上掉下來。產物可用氣-液色譜法進行鑒定。這個方法最大的優(yōu)點是剩下的肽鏈仍是完整的，可依照此法重復測定新生的N末端氨基酸?，F在已經有全自動的氨基酸順序分析儀，可測定含20個以上氨基酸的肽段的氨基酸順序。缺點是

28、不如丹磺酰氯靈敏，可與之結合使用。N末端氨基酸也可用酶學方法即氨肽酶法測定。（2）C末端a) C末端氨基酸可用硼氫化鋰還原生成相應的氨基醇。肽鏈水解后，再用層析法鑒定。有斷裂干擾。b)另一個方法是肼解法。多肽與肼在無水條件下加熱，可以斷裂所有的肽鍵，除C末端氨基酸外，其他氨基酸都轉變?yōu)橄鄳孽ｋ禄衔?。肼解下來的C末端氨基酸可用紙層析鑒定。精氨酸會變成鳥氨酸，半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺被破壞。c) 也可用羧肽酶法鑒定。將蛋白質在pH 8.0, 30與羧肽酶一起保溫，按一定時間間隔取樣，用紙層析測定釋放出來的氨基酸，根據氨基酸的量與時間的關系，就可以知道C末端氨基酸的排列順序。羧肽酶A水解除精

29、氨酸、賴氨酸和脯氨酸外所有肽鍵，羧肽酶B水解精氨酸和賴氨酸。2.二硫鍵的拆開和肽鏈的分離一般情況下，蛋白質分子中肽鏈的數目應等于N末端氨基酸殘基的數目，可根據末端分析來確定一種蛋白質由幾條肽鏈構成。必須設法把這些肽鏈分離開來，然后測定每條肽鏈的氨基酸順序。如果這些肽鏈之間不是共價交聯的，可用酸、堿、高濃度的鹽或其他變性劑處理蛋白質，把肽鏈分開。如果肽鏈之間以二硫鍵交聯，或肽鏈中含有鏈內二硫鍵，則必須用氧化或還原的方法將二硫鍵拆開。最普遍的方法是用過量的巰基乙醇處理，然后用碘乙酸保護生成的半胱氨酸的巰基，防止重新氧化。二硫鍵拆開后形成的個別肽鏈，可用紙層析、離子交換柱層析、電泳等方法進行分離。3

30、.肽鏈的完全水解和氨基酸組成的測定。在測定氨基酸順序之前，需要知道多肽鏈的氨基酸組成和比例。一般用酸水解，得到氨基酸混合物，再分離測定氨基酸。目前用氨基酸自動分析儀，24小時即可完成。蛋白質的氨基酸組成，一般用每分子蛋白質中所含的氨基酸分子數表示。不同種類的蛋白質，其氨基酸組成相差很大。4.肽鏈的部分水解和肽段的分離當肽鏈的氨基酸組成及N末端和C末端已知后，隨后的步驟是肽鏈的部分水解。這是測序工作的關鍵步驟。這一步通常用專一性很強的蛋白酶來完成。最常用的是胰蛋白酶（trypsin），它專門水解賴氨酸和精氨酸的羧基形成的肽鍵，所以生成的肽段之一的C末端是賴氨酸或精氨酸。用丫丙啶處理，可增加酶切位

31、點（半胱氨酸）；用馬來酸酐（順丁烯二酸酐）保護賴氨酸的側鏈氨基，或用1,2-環(huán)己二酮修飾精氨酸的胍基，可減少酶切位點。經常使用的還有糜蛋白酶，水解苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸等疏水殘基的羧基形成的肽鍵。其他疏水殘基反應較慢。用溴化氰處理，可斷裂甲硫氨酸的羧基形成的肽鍵。水解后甲硫氨酸殘基轉變?yōu)镃末端高絲氨酸殘基。以上三種方法經常使用。胃蛋白酶和嗜熱菌蛋白酶。前者水解疏水殘基之間的肽鍵，后者水解疏水殘基的氨基形成的肽鍵。金葡菌蛋白酶，又稱谷氨酸蛋白酶或V8蛋白酶，水解谷氨酸和天冬氨酸的羧基形成的肽鍵，但受緩沖液影響。在醋酸緩沖液中只水解谷氨酸，在磷酸緩沖液中還可水解天冬氨酸。梭狀芽孢桿菌蛋白酶，水解

32、精氨酸羧基形成的肽鍵，又稱精氨酸蛋白酶。耐變性劑，可經受6M尿素2小時?？捎糜谒獠灰兹芙獾牡鞍住Ｄ?，水解Arg-Gly肽鍵。羥胺可水解Asn-Gly，但Asn-Leu和 Asn-Ala也能部分裂解。以上方法中，酶不能水解脯氨酸參與形成的肽鍵。多肽部分水解后，降解成長短不一的小肽段，可用層析或電泳加以分離提純。經常用雙向層析或電泳分離，再用茚三酮顯色，所得的圖譜稱為肽指紋譜。5.多肽鏈中氨基酸順序的測定從多肽鏈中部分水解得到的肽段可用化學法或酶法測序，然后比較用不同方法獲得的兩套肽段的氨基酸順序，根據它們彼此重疊的部分，確定每個肽段的適當位置，拼湊出整個多肽鏈的氨基酸順序。6.二硫鍵位置的

33、確定一般用蛋白酶水解帶有二硫鍵的蛋白質，從部分水解產物中分離出含二硫鍵的肽段，再拆開二硫鍵，將兩個肽段分別測序，再與整個多肽鏈比較，即可確定二硫鍵的位置。常用胃蛋白酶，因其專一性低，生成的肽段小，容易分離和鑒定，而且可在酸性條件下作用（pH2），此時二硫鍵穩(wěn)定。肽段的分離可用對角線電泳，將混合物點到濾紙的中央，在pH6.5進行第一次電泳，然后用過甲酸蒸汽斷裂二硫鍵，使含二硫鍵的肽段變成一對含半胱氨磺酸的肽段。將濾紙旋轉90度后在相同條件下進行第二次電泳，多數肽段遷移率不變，處于對角線上，而含半胱氨磺酸的肽段因負電荷增加而偏離對角線。用茚三酮顯色，分離，測序，與多肽鏈比較，即可確定二硫鍵位置。四

34、、多肽合成多肽的人工合成有兩種類型，一種是由不同氨基酸按照一定順序排列的控制合成，另一種是由一種或兩種氨基酸聚合或共聚合?？刂坪铣傻囊粋€困難是進行接肽反應所需的試劑，能同時和其他官能團反應。因此在接肽以前必須首先將這些基團加以封閉或保護，肽鍵形成后再除去保護基。這樣每連接一個氨基酸殘基都要經過幾個步驟，要得到較長的肽鏈就必須每步都有較高的產率。如果每一步反應產率都是90%，那么30次反應后總產率只有4.24%。保護基必須在接肽時起保護作用，在接肽后容易除去，又不引起肽鍵斷裂。最常用的氨基保護基Y是芐氧甲酰基，可用催化加氫或用金屬鈉在液氨中處理除去。其他還有三苯甲基、叔丁氧甲?；龋捎孟←}酸或

35、乙酸在室溫下除去。羧基保護基Z通常用烷基，如乙基，可在室溫下皂化除去。如用芐基，可用催化加氫除去。肽鍵不能自發(fā)形成，常用縮合劑促進肽鍵形成。接肽用的縮合劑最有效的是N,N-二環(huán)己基碳二亞胺(DC CI)。DCCI從兩個氨基酸分子中奪取一分子水，自身變?yōu)椴蝗艿腘,N-二環(huán)己基脲，從反應液中沉淀出來，可過濾除去。接肽反應除用縮合劑以外，還可用分別活化參加形成肽鍵的羧基和氨基的方法。羧基活化可用疊氮化物法和活化酯法（對硝基苯酯）等；氨基活化一般不需特殊手段，通常在接肽時加入有機堿，如三乙胺，保證氨基在自由狀態(tài)即可。近年來固相多肽合成迅速發(fā)展。在固相合成中，肽鏈的逐步延長是在不溶的聚苯乙烯樹脂小圓珠上

36、進行的。合成多肽的羧基端先和氯甲基聚苯乙烯樹脂反應，形成芐酯。第二個氨基酸的氨基用叔丁氧甲?；Ｗo后，以DCCI為縮合劑，接在第一個氨基酸的氨基上。重復這個方法，可使肽鏈按一定順序延長。最后把樹脂懸浮在無水三氟乙酸中，通入干燥HBr，使多肽與樹脂分離，同時除去保護基。整個合成過程現在已經可以在自動化固相多肽合成儀上進行。平均合成每個肽鍵只需三小時。此法可用于醫(yī)藥工業(yè)。人工合成的催產素沒有混雜的加壓素，比提取的天然藥品好。已經成功合成含124個殘基的蛋白。第四節(jié) 蛋白質的高級結構 蛋白質的多肽鏈并不是線形伸展的，而是按一定方式折疊盤繞成特有的空間結構。蛋白質的三維構象，也稱空間結構或高級結構，是

37、指蛋白質分子中原子和基團在三維空間上的排列、分布及肽鏈的走向。高級結構是蛋白質表現其生物功能或活性所必須的，包括二級、三級和四級結構。Primary structure, secondary, tertiary, quaternary structure一、有關概念1. 構型configration與構象conformation構型指立體異構體中取代原子或基團在空間的取向，構型的改變必須通過共價鍵的斷裂。構象是指這些取代基團當單鍵旋轉時可能形成的不同的立體結構，構象的改變不涉及共價鍵的改變。2. 二面角因為肽鍵不能自由旋轉，所以肽鍵的四個原子和與之相連的兩個碳原子共處一個平面，稱肽平面。肽平面

38、內的C=O與NH呈反式排列，各原子間的鍵長和鍵角都是固定的。肽鏈可看作由一系列剛性的肽平面通過碳原子連接起來的長鏈，主鏈的構象就是由肽平面之間的角度決定的。主鏈上只有碳原子連接的兩個鍵是單鍵，可自由旋轉。繞CN1旋轉的角稱，而繞CC2旋轉的角稱。這兩個角稱為二面角。規(guī)定當旋轉鍵兩側的肽鏈成順式時為0度。取值范圍是正負180度，當二面角都是180度時肽鏈完全伸展。由于空間位阻，實際的取值范圍是很有限的。二、二級結構（一）二級結構是肽鏈的空間走向蛋白質的二級結構是指肽鏈主鏈的空間走向（折疊和盤繞方式），是有規(guī)則重復的構象。肽鏈主鏈具有重復結構，其中氨基是氫鍵供體，羰基是氫鍵受體。通過形成鏈內或鏈間

39、氫鍵可以使肽鏈卷曲折疊形成各種二級結構單元。復雜的蛋白質分子結構，就由這些比較簡單的二級結構單元進一步組合而成。（二）肽鏈卷曲折疊形成四種二級結構單元1.螺旋(-helix) 螺旋模型是Pauling和Corey等研究-角蛋白時于1951年提出的。角蛋白是動物的不溶性纖維狀蛋白，是由動物的表皮衍生而來的。它包括皮膚的表皮以及毛發(fā)、鱗、羽、甲、蹄、角、絲等。角蛋白可分為兩類，一類是角蛋白，胱氨酸含量豐富，如角、甲、蹄的蛋白胱氨酸含量高達22；另一類是角蛋白，不含胱氨酸，但甘氨酸、丙氨酸和絲氨酸的含量很高，蠶絲絲心蛋白就屬于這一類。角蛋白，如頭發(fā)，暴露于濕熱環(huán)境中幾乎可以伸長一倍，冷卻干燥后又收縮

40、到原來長度。角蛋白則無此變化。角蛋白的X射線衍射圖案極其相似，沿長軸方向都有一個大周期結構或重復單位，其長度為55.5埃。Pauling等考慮到肽平面對多肽鏈構象的限制作用，設計了多肽鏈折疊的各種可能模型，發(fā)現其中一種螺旋模型能很好地說明角蛋白的X射線衍射圖案中的55.5埃重復單位。在這個模型中，每隔3.6個氨基酸殘基螺旋上升一圈，相當于向上平移5.4埃。螺旋的直徑是11埃。螺旋上升時，每個氨基酸殘基沿軸旋轉100°，向上平移1.5埃，比完全伸展的構象壓縮2.4倍。這與衍射圖案中的小周期完全一致。其二面角=-57度，=-48度。在螺旋中氨基酸殘基的側鏈伸向外側，相鄰的螺圈之間形成鏈內

41、氫鍵，氫鍵的取向幾乎與中心軸平行。氫鍵是由肽鍵中氮原子上的氫與其N端第四個羰基上的氧之間形成的。螺旋的結構允許所有的肽鍵都參與鏈內氫鍵的形成，因此相當穩(wěn)定。-螺旋由氫鍵構成一個封閉環(huán)，其中包括三個殘基，共13個原子，稱為3.613（n=3）螺旋。由L型氨基酸構成的多肽鏈可以卷曲成右手螺旋，也可卷曲成左手螺旋，但右手螺旋比較穩(wěn)定。因為在左手螺旋中碳與羰基過于接近，不穩(wěn)定。在天然蛋白質中，幾乎所有螺旋都是右手螺旋。只在嗜熱菌蛋白酶中發(fā)現一圈左手螺旋。在角蛋白中，3或7個螺旋可以互相擰在一起，形成三股或七股的螺旋索，彼此以二硫鍵交聯在一起。螺旋不僅是角蛋白的主要構象，在其他纖維蛋白和球狀蛋白中也廣泛

42、存在，是一種常見的二級結構。螺旋是一種不對稱的分子結構，具有旋光能力。螺旋的比旋不等于其中氨基酸比旋的簡單加和，因為它的旋光性是各個氨基酸的不對稱因素和構象本身不對稱因素的總反映。天然螺旋的不對稱因素引起偏振面向右旋轉。利用螺旋的旋光性，可以測定它的相對含量。一條肽鏈能否形成螺旋，以及螺旋的穩(wěn)定性怎樣，與其一級結構有極大關系。脯氨酸由于其亞氨基少一個氫原子，無法形成氫鍵，而且CN鍵不能旋轉，所以是螺旋的破壞者，肽鏈中出現脯氨酸就中斷螺旋，形成一個“結節(jié)”。此外，側鏈帶電荷及側鏈基團過大的氨基酸不易形成螺旋，甘氨酸由于側鏈太小，構象不穩(wěn)定，也是螺旋的破壞者。根據各種殘基的特性，可以預測蛋白質的二

43、級結構。目前常見的預測方法有Chou-Fasman法、GOR法、Lim法等，都是根據統(tǒng)計信息進行預測的。如果二級結構的預測成功率大于80，就可以用來預測高級結構，但目前只能達到70左右。Chou-Fasman法比較直觀，與二級結構形成的實際過程接近，但成功率不高。Chou-Fasman法根據各個氨基酸在一些已知結構的蛋白質中的表現，按構象參數P(表示形成螺旋的能力) 由大到小將他們分為六組，依次為：最強的形成者(H)：Glu、Met、Ala、Leu中等的形成者(h)：Lys、Phe、Gln、Trp、Ile、Val很弱的形成者(I)：Asp、His中立者(i)：Cys、Ser、Thr、Arg較弱

44、的破壞者(b)：Asn、Tyr最強的破壞者(B)：Gly、Pro如肽鏈中6個連續(xù)的殘基中有4個h即可形成核心，然后向兩側延伸，遇到四肽破壞者時中止。形成螺旋時有協同性，即一旦形成核心，其它殘基就容易加入。2.-折疊（-pleated sheet） -折疊也叫-片層，在-角蛋白如蠶絲絲心蛋白中含量豐富。其X射線衍射圖案與-角蛋白拉伸后的圖案很相似。在此結構中，肽鏈較為伸展，若干條肽鏈或一條肽鏈的若干肽段平行排列，相鄰主鏈骨架之間靠氫鍵維系。氫鍵與鏈的長軸接近垂直。為形成最多的氫鍵，避免相鄰側鏈間的空間障礙，鋸齒狀的主鏈骨架必須作一定的折疊(=139°,=135°)，以形成一個

45、折疊的片層。側鏈交替位于片層的上方和下方，與片層垂直。折疊有兩種類型，一種是平行式，即所有肽鏈的氨基端在同一端；另一種是反平行式，即所有肽鏈的氨基端按正反方向交替排列。從能量上看，反平行式更為穩(wěn)定。絲心蛋白和多聚甘氨酸是反平行，拉伸角蛋白形成的角蛋白是平行式。反平行式的重復距離是7.0埃（兩個殘基），平行式是6.5埃。在絲心蛋白中，每隔一個氨基酸就是甘氨酸，所有在片層的一面都是氫原子；在另一面，側鏈主要是甲基，因為除甘氨酸外，丙氨酸是主要成分。如果肽鏈中側鏈過大，并帶有同種電荷，則不能形成折疊。拉伸后的角蛋白之所以不穩(wěn)定，容易復原，就是因為側鏈體積大，電荷高。3.轉角 轉角使肽鏈形成約180&

46、#176;的回轉，第一個氨基酸的羰基與第四個氨基酸的氨基形成氫鍵。這種結構在球狀蛋白中廣泛存在，可占全部殘基的1/4。多位于球狀蛋白的表面，空間位阻較小處。又分為型、型與III型。4.無規(guī)卷曲 指沒有一定規(guī)律的松散肽鏈結構。此結構看來雜亂無章，但對一種特定蛋白又是確定的，而不是隨意的。在球狀蛋白中含有大量無規(guī)卷曲，傾向于產生球狀構象。這種結構有高度的特異性，與生物活性密切相關，對外界的理化因子極為敏感。酶的活性中心往往位于無規(guī)卷曲中。除以上常見二級結構單元外，還有其他新發(fā)現的結構，如環(huán)，由10個殘基組成，象希臘字母。5.超二級結構相鄰的二級結構單元可組合在一起，相互作用，形成有規(guī)則，在空間上能

47、辨認的二級結構組合體，充當三級結構的構件，稱為超二級結構。常見的有三種：由兩股或三股右手螺旋彼此纏繞形成的左手超螺旋，重復距離約為140埃。由于超螺旋，與獨立的螺旋略有偏差。：折疊之間由螺旋或無規(guī)卷曲連接。：由一級結構上連續(xù)的反平行折疊通過緊湊的轉角連接而成。包括曲折和回形拓撲。三、蛋白質的三級結構三級結構是指多肽鏈中所有原子和基團的構象。它是在二級結構的基礎上進一步盤曲折疊形成的，包括所有主鏈和側鏈的結構。哺乳動物肌肉中的肌紅蛋白整個分子由一條肽鏈盤繞成一個中空的球狀結構，全鏈共有8段螺旋，各段之間以無規(guī)卷曲相連。在螺旋肽段間的空穴中有一個血紅素基團。所有具有高度生物學活性的蛋白質幾乎都是球

48、狀蛋白。三級結構是蛋白質發(fā)揮生物活性所必須的。在三級結構中，多肽鏈的盤曲折疊是由分子中各氨基酸殘基的側鏈相互作用來維持的。二硫鍵是維持三級結構唯一的一種共價鍵，能把肽鏈的不同區(qū)段牢固地連接在一起，而疏水性較強的氨基酸則借疏水力和范德華力聚集成緊密的疏水核，有極性的殘基以氫鍵和鹽鍵相結合。在水溶性蛋白中，極性基團分布在外側，與水形成氫鍵，使蛋白溶于水。這些非共價鍵雖然較微弱，但數目龐大，因此仍然是維持三級結構的主要力量。較大蛋白的三級結構往往由幾個相對獨立的三維實體構成，這些三維實體稱為結構域。結構域是在三級結構與超二級結構之間的一個組織層次。一條長的多肽鏈，可先折疊成幾個相對獨立的結構域，再締

49、合成三級結構。這在動力學上比直接折疊更為合理。結構域在功能上也有其意義。結構域常有相對獨立的生理功能，如一些要分泌到細胞外的蛋白，其信號肽（負責使蛋白通過細胞膜）就構成一個結構域。此外，還有與殘基修飾有關的結構域、與酶原激活有關的結構域等。各結構域之間常常只有一段肽鏈相連，稱為鉸鏈區(qū)。鉸鏈區(qū)柔性較強，使結構域之間容易發(fā)生相對運動，所以酶的活性中心常位于結構域之間。小蛋白多由一個結構域構成，由多個結構域構成的蛋白一般分子量大，結構復雜。四、蛋白質的四級結構由兩條或兩條以上肽鏈通過非共價鍵構成的蛋白質稱為寡聚蛋白。其中每一條多肽鏈稱為亞基，每個亞基都有自己的一、二、三級結構。亞基單獨存在時無生物活

50、性，只有相互聚合成特定構象時才具有完整的生物活性。四級結構就是各個亞基在寡聚蛋白的天然構象中空間上的排列方式。胰島素可形成二、六聚體，但不是其功能單位，所以不是寡聚蛋白。判斷標準是將發(fā)揮生物功能的最小單位作為一個分子。最簡單的寡聚蛋白是血紅蛋白。它是由兩條鏈和兩條鏈構成的四聚體，分子量65000。分子外形近似球狀，每個亞基都和肌紅蛋白類似。血紅蛋白與氧結合時，和鏈都發(fā)生了轉動，引起四個亞基間的接觸點上的變化。兩個亞基相互接近，兩個亞基則離開。當酸、熱或高濃度的尿素、胍等變性因子作用于寡聚蛋白時，后者會發(fā)生構象變化。這種變化可分為兩步：首先是亞基彼此解離，然后分開的亞基伸展而成無規(guī)線團。如小心處

51、理，可將寡聚蛋白的亞基拆開，而不破壞其三級結構。如血紅蛋白可用鹽解離成兩個半分子，即兩個、亞基。當透析除去過量的鹽后，分開的亞基又可重新結合而恢復活性。如果處理條件強烈，則亞基的多肽鏈完全展開。這樣要恢復天然構象雖很困難，但有些寡聚蛋白仍可恢復。如醛縮酶經酸處理后，其4個亞基完全伸展成無規(guī)卷曲，當pH恢復到7左右時，又可恢復如初。這說明一級結構規(guī)定了亞基間的結合方式，四級結構的形成也遵從“自我裝配”的原則。五、結構舉例（一）纖維狀蛋白角蛋白角蛋白是動物的不溶性纖維狀蛋白，是由動物的表皮衍生而來的。它包括皮膚的表皮以及毛發(fā)、鱗、羽、甲、蹄、角、絲等。角蛋白可分為兩類，一類是角蛋白，胱氨酸含量豐富

52、，如角、甲、蹄的蛋白胱氨酸含量高達22；另一類是角蛋白，不含胱氨酸，但甘氨酸、丙氨酸和絲氨酸的含量很高，蠶絲絲心蛋白就屬于這一類。角蛋白，如頭發(fā)，暴露于濕熱環(huán)境中幾乎可以伸長一倍，冷卻干燥后又收縮到原來長度。角蛋白則無此變化。頭發(fā)主要是由角蛋白構成的。三股右手螺旋形成左手超螺旋，稱為原纖維，直徑2納米。原纖維再排列成“92”的電纜式結構，稱為微纖維，直徑8納米。成百根微纖維結合成不規(guī)則的纖維束，稱大纖維，直徑200納米。頭發(fā)周圍是鱗狀細胞，中間是皮層細胞。皮層細胞的直徑是20微米，是由許多大纖維沿軸向平行排列而成的。膠原膠原是動物體內含量最豐富的結構蛋白，構成皮膚、骨胳、軟骨、肌腱、牙齒的主要

53、纖維成分。膠原共有4種，結構相似，都由原膠原構成。其一級結構中甘氨酸占1/3，脯氨酸、羥脯氨酸和羥賴氨酸含量也較高。賴氨酸可用來結合糖基。原膠原是一個三股的螺旋桿，是由三股特殊的左手螺旋構成的右手超螺旋。這種螺旋的形成是由于大量的脯氨酸和甘氨酸造成的。羥脯氨酸和羥賴氨酸的羥基也參與形成氫鍵，起著穩(wěn)定這種結構的作用。羥脯氨酸和羥賴氨酸都是蛋白合成后經羥化酶催化而羥化的。在膠原中每隔2個殘基有一個甘氨酸，只有處于甘氨酸氨基端的脯氨酸才能被羥化。羥化是在脯氨酰羥化酶的催化下進行的，這個酶需要維生素C使其活性中心的鐵原子保持亞鐵狀態(tài)。缺少維生素C會使羥化不完全，膠原熔點低，不能正常形成纖維，造成皮膚損

54、傷和血管脆裂，引起出血、潰爛，即壞血病。所以維生素C又叫抗壞血酸。成纖維細胞合成原膠原的前體，并分泌到結締組織的細胞外空間，形成超螺旋結構，再經酶切，即成原膠原。原膠原之間平行排列，互相錯開1/4，構成膠原的基本結構。一個原膠原的頭和另一個原膠原的尾之間有40納米的空隙，其中填充磷酸鈣，即骨的無機成分。膠原的特殊的結構和組成使它不受一般蛋白酶的水解，但可被膠原酶水解。在變態(tài)的蝌蚪的尾鰭中就含有這種酶。3.彈性蛋白能伸長到原來長度的幾倍，并可很快恢復原來長度。在韌帶、血管壁等處含量較大。含1/3的甘氨酸，脯氨酸和賴氨酸也較多。羥脯氨酸和羥賴氨酸含量很少。彈性蛋白形成的螺旋由兩種區(qū)段組成，一種是富

55、含甘氨酸、脯氨酸和纈氨酸的左手螺旋，一種是富含丙氨酸和賴氨酸的右手螺旋。賴氨酸之間形成鎖鏈素或賴氨酰正亮氨酸，使鏈間發(fā)生交聯，具有很大的彈性。因為鎖鏈素可連接二、三或四條肽鏈，形成網狀結構，所以彈性蛋白可向各個方向作可逆伸展。4.肌球蛋白和肌動蛋白兩種可溶性纖維蛋白，構成肌肉的主要成分。前者構成粗絲，后者構成細絲。細絲沿粗絲的滑動導致肌肉的伸縮，引起肌體動作。這一過程需要其它物質的參與和ATP供能。（二）球狀蛋白1. 肌紅蛋白肌肉中用來儲存氧。海洋哺乳動物的肌肉中含大量肌紅蛋白，因而可長時間潛水。抹香鯨每千克肌肉中含80克肌紅蛋白，比人高10倍，所以其肌肉呈棕色。分子量16700，單結構域。由

56、8段螺旋構成一個球狀結構，親水基團多在外層。血紅素輔基位于一個疏水洞穴中，這樣可避免其亞鐵離子被氧化。亞鐵離子與卟啉形成4個配位鍵，第五個配位鍵與93位組氨酸結合，空余的一個配位鍵可與氧可逆結合。其氧合曲線為雙曲線。2.血紅蛋白由4個亞基構成一個四面體構型，每個亞基的三級結構都與肌紅蛋白相似，但一級結構相差較大。成人主要是HbA，由兩個亞基和兩個亞基構成，兩個亞基之間有一個DPG（二磷酸甘油酸），它與亞基形成6個鹽鍵，對血紅蛋白的四級結構起著穩(wěn)定的作用。因為其結構穩(wěn)定，所以不易與氧結合。當一個亞基與氧結合后，會引起四級結構的變化，使其它亞基對氧的親和力增加，結合加快。反之，一個亞基與氧分離后，

57、其它亞基也易于解離。所以血紅蛋白是變構蛋白，其氧合曲線是S形曲線，只要氧分壓有一個較小的變化即可引起氧飽和度的較大改變。這有利于運輸氧，肺中的氧分壓只需比組織中稍微高一些，血紅蛋白就可以完成運氧工作。第五節(jié) 蛋白質結構與功能的關系 蛋白質多種多樣的生物功能是以其化學組成和極其復雜的結構為基礎的。這不僅需要一定的結構還需要一定的空間構象。蛋白質的空間構象取決于其一級結構和周圍環(huán)境，因此研究一級結構與功能的關系是十分重要的。一、蛋白質一級結構與功能的關系（一）種屬差異對不同機體中表現同一功能的蛋白質的一級結構進行詳細比較，發(fā)現種屬差異十分明顯。例如比較各種哺乳動物、鳥類和魚類等胰島素的一級結構，發(fā)現它們都是由51個氨基酸組成的，其排列順序大體相同但有細微差別。不同種屬的胰島素其差異在A鏈小環(huán)的8、9、10和B鏈30位氨基酸殘基。說明這四個氨基酸殘基對生物活性并不起決定作用。起決定作用的是其一級結構中不變的部分。有24個氨基酸始終不變，為不同種屬所共有。如兩條鏈中的6個半胱氨酸殘基的位置始終不變，說明不同種屬的胰島素分子中AB鏈之間有共同的連接方式，三對二硫鍵對維持高級結構起著重要作用。其他一些