2、色譜導(dǎo)論-PPT課件

1、色譜導(dǎo)論色譜導(dǎo)論 色譜概述及分類色譜概述及分類 色譜分離過(guò)程和色譜圖色譜分離過(guò)程和色譜圖 柱色譜法的定性定量分析方法柱色譜法的定性定量分析方法第一節(jié)第一節(jié) 概述及分類概述及分類一、色譜法的由來(lái)一、色譜法的由來(lái) 19061906年由俄國(guó)植年由俄國(guó)植物學(xué)家物學(xué)家TsweetTsweet創(chuàng)立創(chuàng)立植物色素分離植物色素分離 固定相固定相CaCOCaCO3 3顆粒顆粒流動(dòng)相流動(dòng)相石油醚石油醚 色譜柱：玻璃管色譜柱：玻璃管 二二 色譜法的發(fā)展歷史色譜法的發(fā)展歷史A.J. P. MARTIN 和R.L.M. Synge A.J. P. MARTIN. (1910-2002) of the British Na

2、tional Institute for Medical Research shared with fellow countryman R. L. M Synge the Nobel Prize in Chemistry (1952) for the invention of partition chromatography.R.L.M. Synge born Oct. 28, 1914, Liverpool, Eng.died Aug. 18, 1994, Norwich, Norfolk. Synge studied at Winchester College, Cambridge, an

3、d received his Ph.D. at Trinity College there in 1941. 19061906TswettTswett用碳酸鈣作吸附劑分離植物色素。最先提出色譜概念。用碳酸鈣作吸附劑分離植物色素。最先提出色譜概念。19311931Kuhn, LedererKuhn, Lederer用氧化鋁和碳酸鈣分離用氧化鋁和碳酸鈣分離a-a-、b-b-和和g-g-胡蘿卜素胡蘿卜素。使色譜法開(kāi)始。使色譜法開(kāi)始為人們所重視。為人們所重視。19381938IzmailovIzmailov, , ShraiberShraiber最先使用最先使用薄層薄層色譜法。色譜法。19381938

4、Taylor, UrayTaylor, Uray用用離子交換色譜法離子交換色譜法分離了鋰和鉀的同位素。分離了鋰和鉀的同位素。19411941Martin, SyngeMartin, Synge提出色譜塔板理論；發(fā)明液提出色譜塔板理論；發(fā)明液- -液分配色譜；預(yù)言了氣體可作液分配色譜；預(yù)言了氣體可作為流動(dòng)相（即氣相色譜）。為流動(dòng)相（即氣相色譜）。19441944ConsdenConsden等等發(fā)明了發(fā)明了紙色譜紙色譜。19491949MaclleanMacllean在氧化鋁中加入淀粉黏合劑制作薄層板使薄層色譜進(jìn)入實(shí)用在氧化鋁中加入淀粉黏合劑制作薄層板使薄層色譜進(jìn)入實(shí)用階段。階段。19521952

5、Martin, JamesMartin, James從理論和實(shí)踐方面完善了氣從理論和實(shí)踐方面完善了氣- -液分配色譜法。液分配色譜法。19561956Van DeemterVan Deemter等等提出色譜提出色譜速率速率理論，并應(yīng)用于氣相色譜。理論，并應(yīng)用于氣相色譜。19571957基于離子交換色譜的基于離子交換色譜的氨基酸分析專用儀器氨基酸分析專用儀器問(wèn)世。問(wèn)世。19581958GolayGolay發(fā)明發(fā)明毛細(xì)管柱氣相色譜毛細(xì)管柱氣相色譜。19591959PorathPorath, Flodin, Flodin發(fā)表發(fā)表凝膠過(guò)濾色譜凝膠過(guò)濾色譜的報(bào)告。的報(bào)告。19641964MooreMoo

6、re發(fā)明凝膠滲透色譜。發(fā)明凝膠滲透色譜。19651965GiddingsGiddings發(fā)展了色譜理論，為色譜學(xué)的發(fā)展奠定了理論基礎(chǔ)。發(fā)展了色譜理論，為色譜學(xué)的發(fā)展奠定了理論基礎(chǔ)。19751975SmallSmall發(fā)明了以離子交換劑為固定相、強(qiáng)電解質(zhì)為流動(dòng)相，采用抑發(fā)明了以離子交換劑為固定相、強(qiáng)電解質(zhì)為流動(dòng)相，采用抑制型電導(dǎo)檢測(cè)的新型離子色譜法。制型電導(dǎo)檢測(cè)的新型離子色譜法。19811981JorgensonJorgenson等等創(chuàng)立了創(chuàng)立了毛細(xì)管電泳法毛細(xì)管電泳法。三三 色譜法起過(guò)關(guān)鍵作用的諾貝爾獎(jiǎng)研究工作色譜法起過(guò)關(guān)鍵作用的諾貝爾獎(jiǎng)研究工作年代年代獲獎(jiǎng)學(xué)科獲獎(jiǎng)學(xué)科獲獎(jiǎng)研究工作獲獎(jiǎng)研究工作

7、19371937化學(xué)化學(xué)類胡蘿卜素化學(xué)，維生素類胡蘿卜素化學(xué)，維生素A A和和B B19381938化學(xué)化學(xué)類胡蘿卜素化學(xué)類胡蘿卜素化學(xué)19391939化學(xué)化學(xué)聚甲烯和高萜烯化學(xué)聚甲烯和高萜烯化學(xué)19501950生理學(xué)、醫(yī)學(xué)生理學(xué)、醫(yī)學(xué)性激素化學(xué)及其分離、腎皮素化學(xué)及其分離性激素化學(xué)及其分離、腎皮素化學(xué)及其分離19511951化學(xué)化學(xué)超鈾元素的發(fā)現(xiàn)超鈾元素的發(fā)現(xiàn)19551955化學(xué)化學(xué)腦下腺激素的研究和第一次合成聚肽激素腦下腺激素的研究和第一次合成聚肽激素19581958化學(xué)化學(xué)胰島素的結(jié)構(gòu)胰島素的結(jié)構(gòu)19611961化學(xué)化學(xué)光合作用時(shí)發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)的確認(rèn)光合作用時(shí)發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)的確認(rèn)1970

8、1970生理學(xué)、醫(yī)學(xué)生理學(xué)、醫(yī)學(xué)關(guān)于神經(jīng)元觸處遷移物質(zhì)的研究關(guān)于神經(jīng)元觸處遷移物質(zhì)的研究19701970化學(xué)化學(xué)糖核苷酸的發(fā)現(xiàn)及其在生物合成碳水化合物糖核苷酸的發(fā)現(xiàn)及其在生物合成碳水化合物中的作用中的作用19721972化學(xué)化學(xué)核糖核酸化學(xué)酶結(jié)構(gòu)的研究核糖核酸化學(xué)酶結(jié)構(gòu)的研究19721972生理學(xué)、醫(yī)學(xué)生理學(xué)、醫(yī)學(xué)抗體結(jié)構(gòu)的研究抗體結(jié)構(gòu)的研究定義：利用物質(zhì)的定義：利用物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)物理化學(xué)性質(zhì)建立的建立的分離、分析方法分離、分析方法實(shí)質(zhì)：分離實(shí)質(zhì)：分離目的：定性分析或定量分析目的：定性分析或定量分析五五 分類：分類：1 1按按兩相分子的聚集狀態(tài)兩相分子的聚集狀態(tài)分：分：2 2按按固定相的外

9、形固定相的外形分分六六 色譜法的特點(diǎn)色譜法的特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：第二節(jié)第二節(jié) 色譜分離過(guò)程和色譜圖色譜分離過(guò)程和色譜圖一一 色譜過(guò)程：被分離組分在兩相中的色譜過(guò)程：被分離組分在兩相中的“分配分配”平衡過(guò)程平衡過(guò)程 以分配色譜為例：以分配色譜為例： 進(jìn)入固定相進(jìn)入固定相返回流動(dòng)相返回流動(dòng)相再進(jìn)入固定相再進(jìn)入固定相再返回流動(dòng)相再返回流動(dòng)相反復(fù)多次分配反復(fù)多次分配被測(cè)組分被測(cè)組分分配系數(shù)不同分配系數(shù)不同 差速遷移差速遷移 分離分離 微小差異積累微小差異積累較大差異較大差異吸附能力弱的吸附能力弱的組分先流出；吸附能力強(qiáng)的組分后流出組分先流出；吸附能力強(qiáng)的組分后流出二二 色譜流出曲線和色譜峰色譜流出曲線和色

10、譜峰1 1流出曲線和色譜峰流出曲線和色譜峰 由檢測(cè)器輸出的由檢測(cè)器輸出的電信號(hào)強(qiáng)度電信號(hào)強(qiáng)度對(duì)對(duì)時(shí)間時(shí)間作圖，作圖，所得曲線稱為色譜流出曲線。曲線上突起部分所得曲線稱為色譜流出曲線。曲線上突起部分就是色譜峰就是色譜峰2. 2. 基線基線 色譜柱后僅有純流動(dòng)相進(jìn)入檢測(cè)器時(shí)的流色譜柱后僅有純流動(dòng)相進(jìn)入檢測(cè)器時(shí)的流出曲線稱為基線，出曲線稱為基線，S/NS/N大、穩(wěn)定的基線為水平直大、穩(wěn)定的基線為水平直線線 3. 3. 峰高峰高 色譜峰色譜峰頂點(diǎn)頂點(diǎn)與與基線基線之間的垂直距離，以之間的垂直距離，以h h表示表示 4. 4. 保留值保留值 保留值是試樣中各組分在色譜柱內(nèi)滯留時(shí)間的數(shù)值，保留值是試樣中各組

11、分在色譜柱內(nèi)滯留時(shí)間的數(shù)值，反映了反映了組分分子組分分子與與固定相分子間作用力的大小，是固定相分子間作用力的大小，是組分的色譜行為。組分的色譜行為。(1)(1)死時(shí)間死時(shí)間 t tM M 不被固定相保留的組分不被固定相保留的組分（如空氣、甲烷）進(jìn)入色（如空氣、甲烷）進(jìn)入色譜柱時(shí)，從進(jìn)樣到出現(xiàn)色譜峰極大值所需的時(shí)間稱譜柱時(shí)，從進(jìn)樣到出現(xiàn)色譜峰極大值所需的時(shí)間稱為死時(shí)間。死時(shí)間也是為死時(shí)間。死時(shí)間也是流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱所需要的流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱所需要的時(shí)間，時(shí)間，流動(dòng)相平均線速度可表示為：流動(dòng)相平均線速度可表示為： (2) (2) 保留時(shí)間保留時(shí)間t tR R：試樣：試樣組分組分從進(jìn)樣從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)

12、濃度最到柱后出現(xiàn)濃度最大值時(shí)的大值時(shí)的時(shí)間。時(shí)間。 保留時(shí)間就是保留時(shí)間就是組分通過(guò)色譜柱的時(shí)組分通過(guò)色譜柱的時(shí)間間，或者說(shuō)，或者說(shuō)組分在柱內(nèi)運(yùn)行的時(shí)間。組分在柱內(nèi)運(yùn)行的時(shí)間。(3) (3) 調(diào)整保留時(shí)間：某組份的保留時(shí)間扣除死時(shí)間后調(diào)整保留時(shí)間：某組份的保留時(shí)間扣除死時(shí)間后的保留時(shí)間，它是組份在固定相中的滯留時(shí)間。即的保留時(shí)間，它是組份在固定相中的滯留時(shí)間。即 t tR R=t=tR R-t-tM M 由于保留時(shí)間為色譜定性依據(jù)。但同一組份的保由于保留時(shí)間為色譜定性依據(jù)。但同一組份的保留時(shí)間與流速有關(guān)，留時(shí)間與流速有關(guān)，流動(dòng)相流速大，保留時(shí)間相應(yīng)流動(dòng)相流速大，保留時(shí)間相應(yīng)降低降低，兩者的乘積

13、仍為常數(shù)；而，兩者的乘積仍為常數(shù)；而保留體積與流速無(wú)保留體積與流速無(wú)關(guān)關(guān)，因此有時(shí)需用保留體積來(lái)表示保留值。，因此有時(shí)需用保留體積來(lái)表示保留值。 （4 4）死體積）死體積V VM M：不被保留的組分通過(guò)色譜柱所消耗的流：不被保留的組分通過(guò)色譜柱所消耗的流動(dòng)相體積，本意指動(dòng)相體積，本意指未被固定相占據(jù)的空隙體積未被固定相占據(jù)的空隙體積，還包括，還包括色譜儀管路色譜儀管路，連接頭間空隙和檢測(cè)器間隙連接頭間空隙和檢測(cè)器間隙。死體積可由。死體積可由死時(shí)間死時(shí)間與與流動(dòng)相體積流速流動(dòng)相體積流速( (F Fo o與溫度和氣壓有關(guān)與溫度和氣壓有關(guān)) )來(lái)計(jì)來(lái)計(jì)算：算： V VM M =t =tM M F F

14、o o（5 5）保留體積）保留體積V VR R：指從進(jìn)樣到：指從進(jìn)樣到待測(cè)物待測(cè)物在柱后出現(xiàn)濃度極在柱后出現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時(shí)所通過(guò)的流動(dòng)相的體積大點(diǎn)時(shí)所通過(guò)的流動(dòng)相的體積 V VR R =t =tR R F Fo o（6 6）調(diào)整保留體積：某組份的保留體積扣除死體積后的）調(diào)整保留體積：某組份的保留體積扣除死體積后的體積體積 V VR R= V= VR R-V-VM M=t=tR R F Fo ol 死體積死體積反映了反映了色譜柱色譜柱和儀器系統(tǒng)和儀器系統(tǒng)的的幾何特性幾何特性，它，它與待與待測(cè)物的性質(zhì)無(wú)關(guān)測(cè)物的性質(zhì)無(wú)關(guān)，故保留體積值中扣除死體積后將更，故保留體積值中扣除死體積后將更加合理的反映被測(cè)組

15、分的保留特性。加合理的反映被測(cè)組分的保留特性。l 保留值保留值: :試樣的各組分在色譜柱中的滯留時(shí)間，通常用試樣的各組分在色譜柱中的滯留時(shí)間，通常用時(shí)間或用將組分帶出色譜柱所需載氣的體積表示。時(shí)間或用將組分帶出色譜柱所需載氣的體積表示。 被分離組分在色譜柱中的被分離組分在色譜柱中的滯留時(shí)間滯留時(shí)間主要取決于它在主要取決于它在兩相間的分配過(guò)程兩相間的分配過(guò)程，保留值是由色譜分離過(guò)程中的，保留值是由色譜分離過(guò)程中的熱熱力學(xué)因素力學(xué)因素所控制的，在一定的所控制的，在一定的固定相和操作條件固定相和操作條件下，下，任何一種物質(zhì)都有確定的保留值。任何一種物質(zhì)都有確定的保留值。l只要只要柱溫柱溫，固定相性質(zhì)

16、固定相性質(zhì)不變，即使不變，即使柱徑，柱徑，柱長(zhǎng)，填充情況及流動(dòng)相流速柱長(zhǎng)，填充情況及流動(dòng)相流速有所變化，有所變化，保留體積和調(diào)整保留體積都不變。同一組保留體積和調(diào)整保留體積都不變。同一組份的份的保留時(shí)間與流速有關(guān)保留時(shí)間與流速有關(guān)；保留體積保留體積V VR R和調(diào)和調(diào)整保留體積整保留體積V VR R與流速無(wú)關(guān)。與流速無(wú)關(guān)。5 5 相對(duì)保留值相對(duì)保留值 r r2,12,1（1 1）組份組份2 2的調(diào)整保留值與組份的調(diào)整保留值與組份1 1的調(diào)整保留值之比的調(diào)整保留值之比（2 2）表示表示固定相的選擇性固定相的選擇性，等于，等于1 1不能分離不能分離（3 3）相對(duì)保留值的優(yōu)點(diǎn)是只要相對(duì)保留值的優(yōu)點(diǎn)是

17、只要柱溫，固定相性質(zhì)柱溫，固定相性質(zhì)不變，不變，即使即使柱徑，柱長(zhǎng)，填充情況級(jí)流動(dòng)相流速柱徑，柱長(zhǎng)，填充情況級(jí)流動(dòng)相流速有所變化，有所變化，相對(duì)保留值仍保持不變，因此它是色譜定性分析的重相對(duì)保留值仍保持不變，因此它是色譜定性分析的重要參數(shù)要參數(shù)相對(duì)保留值相對(duì)保留值絕對(duì)不是絕對(duì)不是兩個(gè)組份兩個(gè)組份保留時(shí)間保留時(shí)間或或保保留體積留體積之比之比6 6 選擇因子選擇因子 在定性分析中，通常固定一個(gè)色譜峰作為標(biāo)準(zhǔn)在定性分析中，通常固定一個(gè)色譜峰作為標(biāo)準(zhǔn)（s s），然后再求其它峰（），然后再求其它峰（i i）對(duì)這個(gè)峰的）對(duì)這個(gè)峰的相對(duì)保留相對(duì)保留值值，以，以表示：表示：式中式中t tr r(i(i)為后出

18、峰的調(diào)整保留時(shí)為后出峰的調(diào)整保留時(shí)間，所以這時(shí)間，所以這時(shí)總是大于總是大于1 1的的7 7 區(qū)域?qū)挾葏^(qū)域?qū)挾?色譜峰的區(qū)域?qū)挾仁墙M份在色譜柱中色譜峰的區(qū)域?qū)挾仁墙M份在色譜柱中譜帶擴(kuò)張譜帶擴(kuò)張的函的函數(shù)，它反映了色譜操作條件的數(shù)，它反映了色譜操作條件的動(dòng)力學(xué)動(dòng)力學(xué)因素度量色譜峰因素度量色譜峰區(qū)域?qū)挾韧ǔＳ腥N方法：區(qū)域?qū)挾韧ǔＳ腥N方法：1. 1. 標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差 即即0.6070.607倍峰高處色譜峰寬的一半倍峰高處色譜峰寬的一半 EFEF距離的一半距離的一半2. 2. 半峰寬半峰寬W W1/2 1/2 即即峰高一半處對(duì)應(yīng)的峰寬峰高一半處對(duì)應(yīng)的峰寬， GHGH間的距離間的距離W W1/21/

19、2 = 2.354 = 2.3543. 3. 基線寬度基線寬度W W 即色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)上的切線在基線上即色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)上的切線在基線上的截距，如圖的截距，如圖18183 3中中IJIJ的距離它與標(biāo)準(zhǔn)的距離它與標(biāo)準(zhǔn)偏差偏差的關(guān)系是：的關(guān)系是： W = 4W = 4 色譜流出曲線得到的重要信息色譜流出曲線得到的重要信息 ( (l)l)根據(jù)根據(jù)色譜峰的個(gè)數(shù)色譜峰的個(gè)數(shù)，可以判斷樣品中所含，可以判斷樣品中所含組份的最組份的最少個(gè)數(shù)少個(gè)數(shù) (2)(2)根據(jù)色譜峰的根據(jù)色譜峰的保留值保留值( (或位置），可以進(jìn)行或位置），可以進(jìn)行定性分定性分析析 (3)(3)根據(jù)色譜峰下的根據(jù)色譜峰下的面積或峰高面積或峰

20、高，可以進(jìn)行，可以進(jìn)行定量分析定量分析 (4)(4)色譜峰的色譜峰的保留值及其區(qū)域?qū)挾缺Ａ糁导捌鋮^(qū)域?qū)挾?，是評(píng)價(jià)，是評(píng)價(jià)色譜柱分離色譜柱分離效能效能的依據(jù)的依據(jù) (5)(5)色譜峰色譜峰兩峰間的距離兩峰間的距離，是評(píng)價(jià)固定相，是評(píng)價(jià)固定相( (和流動(dòng)相和流動(dòng)相) )選選擇是否合適的依據(jù)擇是否合適的依據(jù)三三 色譜分析理論基礎(chǔ)色譜分析理論基礎(chǔ) 兩組分兩組分峰間距峰間距足夠遠(yuǎn)：由各組分在兩相間的足夠遠(yuǎn)：由各組分在兩相間的分配系數(shù)分配系數(shù)決決定，即由色譜過(guò)程的定，即由色譜過(guò)程的熱力學(xué)熱力學(xué)性質(zhì)決定。性質(zhì)決定。 每個(gè)組分每個(gè)組分峰寬峰寬足夠?。河山M分在色譜柱中的足夠?。河山M分在色譜柱中的傳質(zhì)和擴(kuò)散傳質(zhì)和

21、擴(kuò)散決定，即由色譜過(guò)程決定，即由色譜過(guò)程動(dòng)力學(xué)動(dòng)力學(xué)性質(zhì)決定。性質(zhì)決定。 因此因此, ,研究、解釋色譜分離行為應(yīng)從熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)兩方研究、解釋色譜分離行為應(yīng)從熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)兩方面進(jìn)行。面進(jìn)行。 一一 描述分配過(guò)程的參數(shù)描述分配過(guò)程的參數(shù) 1 1 分配系數(shù)（平衡常數(shù)）分配系數(shù)（平衡常數(shù)） 在一定的在一定的壓力和溫度壓力和溫度下，組分在兩相間達(dá)到分配下，組分在兩相間達(dá)到分配平衡時(shí)，組分在固定相中的平衡時(shí)，組分在固定相中的濃度濃度CsCs與在流動(dòng)相中的與在流動(dòng)相中的濃濃度度CmCm之比。之比。 K K與與組分，組分，固定相，固定相，流動(dòng)相性質(zhì)，溫度和壓力流動(dòng)相性質(zhì)，溫度和壓力有關(guān)，有關(guān)，與兩相與兩相

22、體積、柱管特性和所用儀器體積、柱管特性和所用儀器無(wú)關(guān)；分配系數(shù)無(wú)關(guān)；分配系數(shù)K K越越大，越晚流出色譜柱；分配系數(shù)大，越晚流出色譜柱；分配系數(shù)K K越小，越早流出色譜越小，越早流出色譜柱，柱，組分在柱中移動(dòng)速度與其分配系數(shù)成反比。組分在柱中移動(dòng)速度與其分配系數(shù)成反比。 2 2 分配比（容量因子，容量比）分配比（容量因子，容量比） 在一定在一定溫度和壓力溫度和壓力下，組份在兩相間的分配達(dá)平衡下，組份在兩相間的分配達(dá)平衡時(shí)，分配在固定相和流動(dòng)相中的時(shí)，分配在固定相和流動(dòng)相中的質(zhì)量比質(zhì)量比，反映了組分，反映了組分在柱中的在柱中的遷移速率。遷移速率。 k值決定于值決定于組分，兩相熱力學(xué)性質(zhì)組分，兩相熱

23、力學(xué)性質(zhì)，隨，隨柱溫、柱壓柱溫、柱壓變變化而變化，還與流動(dòng)相及固定相的化而變化，還與流動(dòng)相及固定相的體積體積有關(guān)，有關(guān)，VmVm為柱中為柱中流動(dòng)相的體積，色譜柱固定相顆粒間的空隙體積流動(dòng)相的體積，色譜柱固定相顆粒間的空隙體積，VsVs為為柱中柱中固定相的體積固定相的體積。3 3 分配系數(shù)分配系數(shù)K K與分配比與分配比k的關(guān)系的關(guān)系（1 1）稱為稱為相比率相比率，它也是反映，它也是反映色譜柱柱型特點(diǎn)色譜柱柱型特點(diǎn)的參數(shù)。對(duì)填充的參數(shù)。對(duì)填充柱，柱，=6=63535；對(duì)毛細(xì)管柱，；對(duì)毛細(xì)管柱，=60=6015001500。（2 2）分配系數(shù)分配系數(shù)K K只決定于只決定于組分和兩相性質(zhì)組分和兩相性質(zhì)

24、，與兩相體積無(wú)關(guān)；，與兩相體積無(wú)關(guān)；分分配比配比k k不僅取決于不僅取決于組分和兩相的性質(zhì)組分和兩相的性質(zhì)，且與，且與相比相比有關(guān)，即組分的有關(guān)，即組分的分分配比隨固定相的量而改變。配比隨固定相的量而改變。（3 3）二者在表征組分的分離行為時(shí)是完全等效的。二者在表征組分的分離行為時(shí)是完全等效的。 4 4、 保留值與分配比保留值與分配比k的關(guān)系的關(guān)系VR = VM +K Vsk = VR， /VM= tR， /tM分配比分配比是調(diào)整保留時(shí)間（體積）與死時(shí)間（體積）之比，是調(diào)整保留時(shí)間（體積）與死時(shí)間（體積）之比，表示表示組分分子花費(fèi)在固定相中的時(shí)間比在流動(dòng)相中長(zhǎng)多少組分分子花費(fèi)在固定相中的時(shí)間比

25、在流動(dòng)相中長(zhǎng)多少倍；也說(shuō)明調(diào)整保留值與分配比成正比。倍；也說(shuō)明調(diào)整保留值與分配比成正比。5 5、分配系數(shù)、分配系數(shù)K K及分配比及分配比k與選擇因子與選擇因子的關(guān)系的關(guān)系K K或或k反映的是反映的是某一組分在兩相間的分配情況某一組分在兩相間的分配情況；而；而是是反映反映兩組分間的分離兩組分間的分離情況！當(dāng)兩組分情況！當(dāng)兩組分K K或或k k相同時(shí)，相同時(shí)，=1=1時(shí)，時(shí)，兩組分不能分開(kāi)；當(dāng)兩組分兩組分不能分開(kāi)；當(dāng)兩組分K K或或k k相差越大時(shí)，相差越大時(shí)，越大，分越大，分離得越好。也就是說(shuō)，兩組分在兩相間的離得越好。也就是說(shuō)，兩組分在兩相間的分配系數(shù)不同分配系數(shù)不同，是是色譜分離的先決條件。

26、色譜分離的先決條件。 二二 塔板理論塔板理論 最早由最早由MartinMartin等人提出塔板理論，把色譜柱比作一個(gè)精餾等人提出塔板理論，把色譜柱比作一個(gè)精餾塔，用精餾塔中塔，用精餾塔中塔板塔板的概念來(lái)描述組分在的概念來(lái)描述組分在兩相間的分配兩相間的分配行為，行為，同時(shí)引入同時(shí)引入理論塔板數(shù)理論塔板數(shù)(n)(n)作為衡量柱效率的指標(biāo)，即色譜柱是由作為衡量柱效率的指標(biāo)，即色譜柱是由一系列連續(xù)的、相等水平的塔板組成。每一塊塔板的高度用一系列連續(xù)的、相等水平的塔板組成。每一塊塔板的高度用H H表表示，稱為塔板高度。示，稱為塔板高度。塔板理論假設(shè)：塔板理論假設(shè)：1.1.在柱內(nèi)一小段長(zhǎng)度在柱內(nèi)一小段長(zhǎng)度

27、H H內(nèi)，組分可以在兩相間內(nèi)，組分可以在兩相間迅速達(dá)到平衡迅速達(dá)到平衡，這，這一小段柱長(zhǎng)稱為一小段柱長(zhǎng)稱為理論塔板高度理論塔板高度H H。2.2.以氣相色譜為例，載氣進(jìn)入色譜柱不是連續(xù)進(jìn)行的，而是以氣相色譜為例，載氣進(jìn)入色譜柱不是連續(xù)進(jìn)行的，而是脈脈動(dòng)式動(dòng)式，每次進(jìn)氣為一個(gè)塔板體積（，每次進(jìn)氣為一個(gè)塔板體積（VVm m）。）。3. 3. 所有組分開(kāi)始時(shí)存在于第所有組分開(kāi)始時(shí)存在于第0 0號(hào)塔板上，而且試樣沿號(hào)塔板上，而且試樣沿軸（縱）軸（縱）向擴(kuò)散可忽略。向擴(kuò)散可忽略。4. 4. 分配系數(shù)分配系數(shù)在所有塔板上是在所有塔板上是常數(shù)常數(shù)，與組分在某一塔板上的量無(wú)，與組分在某一塔板上的量無(wú)關(guān)。關(guān)。

28、可以理解為：每一塊塔板上，溶質(zhì)在兩相間快速形成分配可以理解為：每一塊塔板上，溶質(zhì)在兩相間快速形成分配平衡，而隨著流動(dòng)相按一個(gè)一個(gè)塔板的方式向前移動(dòng)。對(duì)平衡，而隨著流動(dòng)相按一個(gè)一個(gè)塔板的方式向前移動(dòng)。對(duì)于一根長(zhǎng)為于一根長(zhǎng)為L(zhǎng) L的色譜柱，溶質(zhì)平衡的次數(shù)應(yīng)為：的色譜柱，溶質(zhì)平衡的次數(shù)應(yīng)為： n = L/Hn = L/H。 n n稱為理論塔板數(shù)稱為理論塔板數(shù), ,與精餾塔一樣，色譜柱的與精餾塔一樣，色譜柱的柱效柱效隨理論塔隨理論塔板數(shù)板數(shù)n n的增加而增加，隨板高的增加而增加，隨板高H H的增大而減小。的增大而減小。 為簡(jiǎn)化起見(jiàn)，假設(shè)色譜柱由為簡(jiǎn)化起見(jiàn)，假設(shè)色譜柱由5 5塊塊塔板（塔板（n n5 5

29、）組成，以）組成，以r r表示塔表示塔板編號(hào)，板編號(hào)，0,10,1，2 2；某組分的；某組分的分配比分配比k=1=1。 在色譜分離過(guò)程中，該組分的分布可計(jì)算如下：在色譜分離過(guò)程中，該組分的分布可計(jì)算如下： 開(kāi)始時(shí)，若有單位質(zhì)量，即開(kāi)始時(shí)，若有單位質(zhì)量，即m=1m=1（例（例1mg1mg或或1g1g）的該組分）的該組分加到第加到第0 0號(hào)塔板上，分配平衡后，由于號(hào)塔板上，分配平衡后，由于k=1=1，故，故p=q=0.5p=q=0.5。以此。以此類推。類推。 每當(dāng)一個(gè)新的板體積載氣以脈動(dòng)式進(jìn)入色譜柱時(shí)，上述過(guò)每當(dāng)一個(gè)新的板體積載氣以脈動(dòng)式進(jìn)入色譜柱時(shí)，上述過(guò)程就重復(fù)一次程就重復(fù)一次( (見(jiàn)下表見(jiàn)下

30、表) )。 塔板理論得出：塔板理論得出： 第一，當(dāng)溶質(zhì)在柱中的平衡次數(shù)，即理論塔板數(shù)第一，當(dāng)溶質(zhì)在柱中的平衡次數(shù)，即理論塔板數(shù)n n大于大于5050時(shí)，時(shí)，可得到基本對(duì)稱的可得到基本對(duì)稱的峰形曲線峰形曲線。通常填充色譜柱的通常填充色譜柱的n n約為約為10103 3 10106 6 ，H H1mm1mm。而毛細(xì)管柱。而毛細(xì)管柱 n=10n=105 5-10-106 6，H H0.5mm0.5mm 。 第二，當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后，只要各組分在兩相間的第二，當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后，只要各組分在兩相間的分配系數(shù)分配系數(shù)有微小差異有微小差異，經(jīng)過(guò)多次的分配平衡后，可獲得，經(jīng)過(guò)多次的分配平衡后，可獲得良好的分

31、離。良好的分離。 第三，第三，n n與半峰寬及峰底寬的關(guān)系式為：與半峰寬及峰底寬的關(guān)系式為： n = 5.54(tn = 5.54(tr r/W/W1/21/2) )2 2 = 16 (t = 16 (tr r/W)/W)2 2 若扣除死時(shí)間若扣除死時(shí)間t tM M，用有效塔板數(shù)，用有效塔板數(shù)n n有效有效表示柱效表示柱效: : n n有效有效= 5.54(= 5.54(t tr r /W/W1/21/2) )2 2=16(t=16(tr r /W)/W)2 2 色譜峰色譜峰W W越小，越小，n n就越大，而就越大，而H H就越小，柱效能越高，因就越小，柱效能越高，因此，此，n n和和H H是

32、描述柱效能的指標(biāo)。是描述柱效能的指標(biāo)。 塔板理論用塔板理論用熱力學(xué)熱力學(xué)觀點(diǎn)形象地描述了溶質(zhì)在色觀點(diǎn)形象地描述了溶質(zhì)在色譜柱中的譜柱中的分配平衡和分離過(guò)程分配平衡和分離過(guò)程，導(dǎo)出，導(dǎo)出流出曲線流出曲線的數(shù)學(xué)模型的數(shù)學(xué)模型，并成功地解釋了，并成功地解釋了流出曲線的形狀流出曲線的形狀及濃度極大值的位置及濃度極大值的位置，還提出了，還提出了計(jì)算和評(píng)價(jià)柱計(jì)算和評(píng)價(jià)柱效效的參數(shù)。的參數(shù)。 譜帶會(huì)為什么擴(kuò)張？譜帶會(huì)為什么擴(kuò)張？ 影響柱效的因素以及提高柱效的途徑？影響柱效的因素以及提高柱效的途徑？ 載氣流速對(duì)柱效有沒(méi)有影響載氣流速對(duì)柱效有沒(méi)有影響? ?塔板理論的特點(diǎn)和不足塔板理論的特點(diǎn)和不足三三 速率理論速

33、率理論 1956 1956 年，荷蘭學(xué)者年，荷蘭學(xué)者 Van DeemterVan Deemter 提出了色提出了色譜過(guò)程譜過(guò)程動(dòng)力學(xué)速率理論動(dòng)力學(xué)速率理論。 吸收了塔板理論的概念，考慮了組分在兩吸收了塔板理論的概念，考慮了組分在兩相間的相間的擴(kuò)散和傳質(zhì)擴(kuò)散和傳質(zhì)過(guò)程，給出了過(guò)程，給出了 van Deemtervan Deemter 方程方程 ： H = A + B / u + C uH = A + B / u + C u u u為流動(dòng)相的線速度；為流動(dòng)相的線速度；A A、渦流擴(kuò)散項(xiàng)；渦流擴(kuò)散項(xiàng)； B B、分子擴(kuò)散項(xiàng)系數(shù)、分子擴(kuò)散項(xiàng)系數(shù)、 C C、傳質(zhì)阻力項(xiàng)系數(shù)。傳質(zhì)阻力項(xiàng)系數(shù)。1 1 渦流擴(kuò)

34、散項(xiàng)渦流擴(kuò)散項(xiàng) (A)(A) 在填充柱中，由于受到固在填充柱中，由于受到固定相定相顆粒顆粒的阻礙，組份在遷的阻礙，組份在遷移過(guò)程中隨流動(dòng)相不斷改變移過(guò)程中隨流動(dòng)相不斷改變方向，形成方向，形成紊亂的紊亂的“渦流渦流”： 從圖中可見(jiàn)，因填充物從圖中可見(jiàn)，因填充物顆顆粒大小粒大小及填充的及填充的不均勻性不均勻性：同一組分運(yùn)行路線長(zhǎng)短不同一組分運(yùn)行路線長(zhǎng)短不同同流出時(shí)間不同流出時(shí)間不同（形成（形成一個(gè)統(tǒng)計(jì)分布）一個(gè)統(tǒng)計(jì)分布） 峰形展峰形展寬。寬。 A=2dp A=2dp dp dp 填充物平均直徑填充物平均直徑；填充不規(guī)則因子填充不規(guī)則因子 上式表明，上式表明，A A與填充物的平均直徑與填充物的平均直

35、徑dpdp的大小和填的大小和填充不規(guī)則因子充不規(guī)則因子有關(guān)，與有關(guān)，與流動(dòng)相的性質(zhì)、線速和組流動(dòng)相的性質(zhì)、線速和組分性質(zhì)無(wú)關(guān)分性質(zhì)無(wú)關(guān)。為了減少渦流擴(kuò)散，提高柱效，使用。為了減少渦流擴(kuò)散，提高柱效，使用細(xì)而均勻的顆粒細(xì)而均勻的顆粒，并且，并且填充均勻填充均勻是十分必要的。是十分必要的。 對(duì)于空心毛細(xì)管，不存在渦流擴(kuò)散，因此對(duì)于空心毛細(xì)管，不存在渦流擴(kuò)散，因此A A0 02 2 分子擴(kuò)散項(xiàng)分子擴(kuò)散項(xiàng) (B/u) (B/u) 縱向分子擴(kuò)散是由于縱向分子擴(kuò)散是由于色譜柱軸向上的色譜柱軸向上的濃度梯度濃度梯度引引起的。當(dāng)樣品被注入色譜柱起的。當(dāng)樣品被注入色譜柱時(shí)，它呈時(shí)，它呈“塞子塞子”狀分布。狀分布

36、。隨著流動(dòng)相的推進(jìn)，隨著流動(dòng)相的推進(jìn)，“塞子塞子”因濃度梯度而向因濃度梯度而向“塞子塞子”前前后后自發(fā)地?cái)U(kuò)散自發(fā)地?cái)U(kuò)散，組分分子從，組分分子從高濃度處向低濃度處擴(kuò)散，高濃度處向低濃度處擴(kuò)散，引起譜峰展寬。引起譜峰展寬。 B B2D2Dg g ：彎曲因子，填充柱色譜，：彎曲因子，填充柱色譜，11.51.5， R R增加不大增加不大) )。 改變改變的方法有：的方法有：降低柱溫、改變流動(dòng)相及降低柱溫、改變流動(dòng)相及固定相的性質(zhì)和組成。固定相的性質(zhì)和組成。 3 ) 3 ) 分離度分離度R R與分配比與分配比k的關(guān)系的關(guān)系 k與與兩組分的性質(zhì)和柱子兩組分的性質(zhì)和柱子都有關(guān)。都有關(guān)。k增加，增加，分離度分

37、離度R R增加，但當(dāng)增加，但當(dāng)k1010，則，則R R的增加不明的增加不明顯。通常顯。通常k在在2 21010之間之間 改變改變k的方法有：適當(dāng)?shù)姆椒ㄓ校哼m當(dāng)增加柱溫增加柱溫(GC)(GC)、改變、改變流動(dòng)相性質(zhì)流動(dòng)相性質(zhì)和和組成組成(LC)(LC)以及以及固定相含量固定相含量 例：兩組分在例：兩組分在1m1m長(zhǎng)柱子上的分離度為長(zhǎng)柱子上的分離度為0.750.75，問(wèn)使用，問(wèn)使用 多長(zhǎng)柱子可以使它們完全分離？多長(zhǎng)柱子可以使它們完全分離？LRnR2121LLRR215 . 175. 0LmL42解：解： 例：已知物質(zhì)例：已知物質(zhì)A A和和B B在一根在一根30.0cm30.0cm長(zhǎng)的柱上的保留時(shí)長(zhǎng)

38、的柱上的保留時(shí)間分別為間分別為16.4016.40和和17.63min17.63min，不被保留組分通過(guò)該柱，不被保留組分通過(guò)該柱的時(shí)間為的時(shí)間為1.30min1.30min，峰底寬為，峰底寬為1.111.11和和1.21min1.21min，試計(jì)，試計(jì)算（算（1 1）柱的分離度（）柱的分離度（2 2）柱的平均塔板數(shù)（）柱的平均塔板數(shù)（3 3）塔板）塔板高度（高度（4 4）達(dá)）達(dá)1.51.5分離所需柱長(zhǎng)分離所需柱長(zhǎng)解：解：06. 121. 111. 1)40.1663.17(2)(22112WWttRRR2)(16WtnR3493)11. 140.16(1621 n3397)21. 163.1

39、7(1622n34452)33973493(221nnnmmnLH3107 . 83445300LRnRcmL6022121LLRR2305 . 106. 1L第三節(jié)第三節(jié) 色譜法的定性定量方法色譜法的定性定量方法一一 定性分析定性分析1 1、利用、利用保留值保留值定性定性 1 1）已知對(duì)照物定性：定性）已知對(duì)照物定性：定性專屬性差專屬性差 不同組分如在某一色譜條件下保留值相同，應(yīng)更改色譜柱再不同組分如在某一色譜條件下保留值相同，應(yīng)更改色譜柱再檢測(cè)，粗步判斷是否為一個(gè)純物質(zhì)。檢測(cè)，粗步判斷是否為一個(gè)純物質(zhì)。 2 2）相對(duì)保留值相對(duì)保留值定性定性 在樣品和標(biāo)準(zhǔn)中分別加入同一種基準(zhǔn)物在樣品和標(biāo)準(zhǔn)中

40、分別加入同一種基準(zhǔn)物s s ，將樣品的，將樣品的ri,s 和標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)物的準(zhǔn)物的ri,s 相比較來(lái)確定樣品中是否含有相比較來(lái)確定樣品中是否含有i i組分。組分。 3 3 利用利用保留指數(shù)保留指數(shù)定性定性 保留指數(shù)是把保留指數(shù)是把物質(zhì)的保留行為物質(zhì)的保留行為用兩個(gè)緊靠它的用兩個(gè)緊靠它的標(biāo)準(zhǔn)物標(biāo)準(zhǔn)物（一般是（一般是兩個(gè)正構(gòu)烷烴兩個(gè)正構(gòu)烷烴）來(lái)標(biāo)定，設(shè)正構(gòu)烷烴的保留指）來(lái)標(biāo)定，設(shè)正構(gòu)烷烴的保留指數(shù)為數(shù)為碳數(shù)碳數(shù)100100；測(cè)定時(shí)，將碳數(shù)為；測(cè)定時(shí)，將碳數(shù)為Z Z和和Z+1Z+1的正構(gòu)烷烴的正構(gòu)烷烴加入到樣品加入到樣品x x中進(jìn)行色譜分析，測(cè)得這三個(gè)物質(zhì)的調(diào)整中進(jìn)行色譜分析，測(cè)得這三個(gè)物質(zhì)的調(diào)整保留值

41、分別為：保留值分別為：t tR R（i i) ) ，t tR R （Z Z) ) 和和t tR R (z+1)(z+1)，且待，且待測(cè)物測(cè)物x x的調(diào)整保留值需要介于兩個(gè)烷烴之間。的調(diào)整保留值需要介于兩個(gè)烷烴之間。 保留指數(shù)保留指數(shù)僅與僅與固定相的性質(zhì)、柱溫固定相的性質(zhì)、柱溫有關(guān)，與其有關(guān)，與其它實(shí)驗(yàn)條件無(wú)關(guān)它實(shí)驗(yàn)條件無(wú)關(guān)；其準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性都很好其準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性都很好, ,只只要柱溫與固定相相同，就可應(yīng)用文獻(xiàn)值進(jìn)行鑒要柱溫與固定相相同，就可應(yīng)用文獻(xiàn)值進(jìn)行鑒定，而不必用純物質(zhì)相對(duì)照定，而不必用純物質(zhì)相對(duì)照。2 2利用利用化學(xué)反應(yīng)化學(xué)反應(yīng)定性：收集柱后組分，官能定性：收集柱后組分，官能團(tuán)反應(yīng)定性鑒

42、別（非在線）。團(tuán)反應(yīng)定性鑒別（非在線）。3 3利用利用兩譜聯(lián)用兩譜聯(lián)用定性：定性：GC-MSGC-MS，GC-FTIRGC-FTIR。二二 定量分析定量分析 色譜定量的色譜定量的依據(jù)依據(jù)是當(dāng)操作條件一致時(shí)，被測(cè)組分的是當(dāng)操作條件一致時(shí)，被測(cè)組分的質(zhì)質(zhì)量（或濃度）與檢測(cè)器給出的響應(yīng)信號(hào)成正比量（或濃度）與檢測(cè)器給出的響應(yīng)信號(hào)成正比，即：，即： i i = f = fi i A Ai i 式中式中 i i為被測(cè)組分為被測(cè)組分i i的質(zhì)量；的質(zhì)量； A Ai i為被測(cè)組分為被測(cè)組分i i的峰的峰面積；面積； f fi i為被測(cè)組分為被測(cè)組分i i的的校正因子。校正因子。進(jìn)行色譜定量分析時(shí)需要：進(jìn)行色

43、譜定量分析時(shí)需要：（1 1）準(zhǔn)確測(cè)量檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào)）準(zhǔn)確測(cè)量檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào) 峰面積或峰高峰面積或峰高；（2 2）準(zhǔn)確求得比例常數(shù)）準(zhǔn)確求得比例常數(shù) 校正因子校正因子；（3 3）正確選擇合適的）正確選擇合適的定量計(jì)算方法定量計(jì)算方法，將測(cè)得的峰面積，將測(cè)得的峰面積或峰高換算為組分的百分含量?；蚍甯邠Q算為組分的百分含量。 (W0.15+W0.85)（二）定量校正因子（二）定量校正因子為了使峰面積能真實(shí)反映出物質(zhì)的質(zhì)量，就要對(duì)峰為了使峰面積能真實(shí)反映出物質(zhì)的質(zhì)量，就要對(duì)峰面積進(jìn)行校正，即在定量計(jì)算中引入面積進(jìn)行校正，即在定量計(jì)算中引入校正因子校正因子f fi i = m = mi i / A /

44、 Ai i 式中式中f fi i值與組分值與組分i i質(zhì)量絕對(duì)值成正比，稱為質(zhì)量絕對(duì)值成正比，稱為絕對(duì)校絕對(duì)校正因子正因子。在定量分析時(shí)要精確求出。在定量分析時(shí)要精確求出f fi i值是比較困難的：值是比較困難的：一方面由于一方面由于精確測(cè)量絕對(duì)進(jìn)樣量精確測(cè)量絕對(duì)進(jìn)樣量困難；另一方面峰面積困難；另一方面峰面積與與色譜條件色譜條件有關(guān)，要保持測(cè)定有關(guān)，要保持測(cè)定f fi i值時(shí)的色譜條件相同，值時(shí)的色譜條件相同，既不可能又不方便。既不可能又不方便。1 1 相對(duì)校正因子相對(duì)校正因子 相對(duì)校正因子相對(duì)校正因子f fi i 為為組分組分i i與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)s s的絕對(duì)校正的絕對(duì)校正因子之比因子之

45、比 f fi i =f =fi i/f/fs s = =（m mi i /A/Ai i）/ /（m ms s/A/As s）= =（m mi i/m/ms s） （A As s/A/Ai i） 相對(duì)校正因子相對(duì)校正因子f fi i 是當(dāng)組分是當(dāng)組分i i的質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)s s相相等時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積是組分等時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積是組分i i峰面積的倍數(shù)峰面積的倍數(shù)。通過(guò)通過(guò)相對(duì)校正因子，可以把各個(gè)相對(duì)校正因子，可以把各個(gè)組分的峰面積組分的峰面積分別分別換算換算成與成與其質(zhì)量相等的其質(zhì)量相等的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積，于是比較標(biāo)準(zhǔn)就統(tǒng)一，于是比較標(biāo)準(zhǔn)就統(tǒng)一了，這就是歸一化

46、法求算各組分百分含量的基礎(chǔ)了，這就是歸一化法求算各組分百分含量的基礎(chǔ)(2). (2). 相對(duì)校正因子的表示方法相對(duì)校正因子的表示方法 常用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，對(duì)于常用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，對(duì)于熱導(dǎo)檢測(cè)器（熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCDTCD）是是苯苯，對(duì)對(duì)氫氫焰檢測(cè)器（焰檢測(cè)器（FIDFID）是是正庚烷正庚烷相對(duì)相對(duì)質(zhì)量質(zhì)量校正因子校正因子相對(duì)相對(duì)摩爾摩爾校正因子校正因子相對(duì)相對(duì)體積體積校正因子校正因子 1 1歸一化法歸一化法 2 2外標(biāo)法外標(biāo)法 3 3內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法 定義：所有出峰組分含量之和按定義：所有出峰組分含量之和按100%100%計(jì)定量方法計(jì)定量方法依據(jù)：組分依據(jù)：組分含量含量與與峰面積峰面積成成正比正比. 特點(diǎn)：簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，樣品的所有組分必須全部特點(diǎn)：簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，樣品的所有組分必須全部流出，且出峰；某些不需要定量的組分也必須流出，且出峰；某些不需要定量的組分也必須測(cè)出其峰面積及測(cè)出其峰面積及