葉綠素的提取

1、一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握葉綠體色素的提取方法； 掌握紙層析法分離葉綠體色素的原理和步驟； 掌握葉綠體色素的部分理化性質(zhì)。二、實(shí)驗(yàn)原理 1.葉綠體中的色素能溶解在丙酮（有機(jī)溶劑:酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取葉綠體中色素。 2.色素在層析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子隨層析液在濾紙條上的擴(kuò)散得快，溶解度低的色素分子隨層析液在濾紙條上的擴(kuò)散得慢，因而可用層析液將不同的色素分離。 四種色素的化學(xué)性質(zhì) 均為親脂性親水性： 均不溶于水，而溶于有機(jī)溶劑，故可用乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑提取。 極性大?。?葉綠素b葉綠素a葉黃素胡蘿卜素 根據(jù)相似相溶原理，在有機(jī)溶液中的溶解度： 葉綠素b葉綠素a 葉

2、黃素胡蘿卜素三、葉綠素的光學(xué)性質(zhì)n 葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學(xué)活性，表現(xiàn)出一定葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學(xué)活性，表現(xiàn)出一定的吸收光譜，可用分光光度計(jì)精確測(cè)定。的吸收光譜，可用分光光度計(jì)精確測(cè)定。四、實(shí)驗(yàn)材料與試劑 新鮮的菠菜葉片。 95%乙醇 、CaCO3、醋酸銅結(jié)晶、濃鹽酸、汽油。 量筒，濾紙，大培養(yǎng)皿一只，小培養(yǎng)皿一只，長(zhǎng)滴管，剪刀。 五五. .實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1. 提取葉綠素提取葉綠素2、葉綠體色素的分離（紙層析法） 用濾紙條浸色素提取液（用濾紙條浸色素提取液（試管試管1），吹干，反復(fù)多），吹干，反復(fù)多次；將帶色素的濾紙條卷成燈芯，將表面皿放在培養(yǎng)次；將帶色素的濾紙條卷成燈芯，將表面皿

3、放在培養(yǎng)皿內(nèi)，注上汽油，把燈芯浸在汽油內(nèi)，加蓋，色素層皿內(nèi)，注上汽油，把燈芯浸在汽油內(nèi)，加蓋，色素層分清后，取下吹干，即可看到分離的各種色素。分清后，取下吹干，即可看到分離的各種色素。 實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵1.選材時(shí)應(yīng)注意選擇選材時(shí)應(yīng)注意選擇鮮嫩、色濃綠鮮嫩、色濃綠、無(wú)漿汁的、無(wú)漿汁的葉片。如菠菜葉、棉花葉、洋槐葉等。葉片。如菠菜葉、棉花葉、洋槐葉等。2.畫濾液細(xì)線時(shí)應(yīng)以畫濾液細(xì)線時(shí)應(yīng)以細(xì)、齊、直細(xì)、齊、直為標(biāo)準(zhǔn)，重復(fù)為標(biāo)準(zhǔn)，重復(fù)畫線時(shí)必須等上次畫線干燥后再進(jìn)行，重畫線時(shí)必須等上次畫線干燥后再進(jìn)行，重復(fù)復(fù)2-3次。次。3.層析時(shí)不要讓濾液細(xì)線觸及層析液層析時(shí)不要讓濾液細(xì)線觸及層析液。1.因丙酮和層

4、析液都是易揮發(fā)且有一定毒性的因丙酮和層析液都是易揮發(fā)且有一定毒性的有機(jī)溶劑，所以研磨要快，收集的濾液要用有機(jī)溶劑，所以研磨要快，收集的濾液要用棉塞塞住，層析時(shí)要加蓋，盡量減少有機(jī)溶棉塞塞住，層析時(shí)要加蓋，盡量減少有機(jī)溶劑的揮發(fā)。劑的揮發(fā)。2.在研磨時(shí)要加少許二氧化硅，目的是為了研在研磨時(shí)要加少許二氧化硅，目的是為了研磨充分，有利于色素的提取；加少許碳酸鈣磨充分，有利于色素的提取；加少許碳酸鈣的目的是為了防止研磨過(guò)程中，葉綠體中的的目的是為了防止研磨過(guò)程中，葉綠體中的色素受到破壞。色素受到破壞。3.分離色素時(shí)，一定不要讓濾紙條上的濾液細(xì)分離色素時(shí)，一定不要讓濾紙條上的濾液細(xì)線接觸到層析液，這是因

5、為色素易溶解在層線接觸到層析液，這是因?yàn)樯匾兹芙庠趯游鲆褐校瑢?dǎo)致色素帶不清晰，影響實(shí)驗(yàn)效果。析液中，導(dǎo)致色素帶不清晰，影響實(shí)驗(yàn)效果。葉綠體中色素的提取和分離葉綠體中色素的提取和分離 實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果（西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙）（西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙）（寫清姓名、班級(jí)、實(shí)驗(yàn)名稱、日期等）（寫清姓名、班級(jí)、實(shí)驗(yàn)名稱、日期等）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)記錄三、實(shí)驗(yàn)記錄 1.1.講義中的表格（改動(dòng)見下頁(yè)）講義中的表格（改動(dòng)見下頁(yè)） 2.2.畫圖畫圖四、討論及思考題四、討論及思考題 1.1.談?wù)勀阍趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中的成功經(jīng)驗(yàn)，或失敗的教訓(xùn)談?wù)勀阍趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中的成功經(jīng)驗(yàn)，或失敗的教訓(xùn) 2.2.思考題思考題實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告 思考題思考題1.1.研磨時(shí)要使葉綠素能夠提取出來(lái)，要破壞多少研磨時(shí)要使葉綠素能夠提取出來(lái)，要破壞多少層膜？層膜？ 2.2.濾紙剪角