乳與乳制品非常規(guī)理化指標(biāo)檢驗(yàn)維生素AE的檢測(cè)

1、乳與乳制品非常規(guī)理化指標(biāo)檢驗(yàn)維生素AE的檢測(cè)YLNB5.101 .范圍用液相色譜法測(cè)定各種嬰幼兒配方食品和乳粉中的維生素A、E。2 .方法提要樣品中脂溶性維生素在皂化過程中與脂肪分離，經(jīng)（用）乙醍萃取后，用高壓液相色譜，紫外檢測(cè)器定量測(cè)定。3 .試齊I所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純；所有實(shí)驗(yàn)用水，如未注明其他要求，均指三級(jí)水。3.1乙醍：脫醛3.2甲醇：色譜純3.3異丙醇：色譜純3.4無水乙醇：色譜純3.5無水乙醇：分析純3.6氫氧化鉀溶液：質(zhì)量體積比為500g/L3.7抗壞血酸：100g/L3.8無水硫酸鈉：分析純3.9維生素A、E標(biāo)準(zhǔn)溶液3.9.1維生素A標(biāo)準(zhǔn)貯備液，取適量維生素A醋酸

2、酯同5.2處理。3. 9.2維生素E標(biāo)準(zhǔn)貯備液，含維生素E40Oq/mL的乙醇（3.4）溶液。稱取40mg勺a-生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。稱取40mg勺6-生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。稱取40mg勺丫-生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。3. 9.3維生素A、E標(biāo)準(zhǔn)工作液。量取1mL隹生素A標(biāo)準(zhǔn)貯備液（3.9.1）和2.5mL維生素E標(biāo)準(zhǔn)貯備液（3.9.2）于100m喀量瓶中，用乙醇（3.4）溶解，0.45以n膜過濾，濾液作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。按照下表中的波長在紫外分光光度計(jì)上測(cè)定吸收值，并按公式（1）和表中系數(shù)計(jì)算濃度

3、。標(biāo)樣波長（nnj）系數(shù)（S）維生素A(IU/ml)3253.33/1835a-生育酚（以g/ml）294716-生育酚（以g/ml）29891.2Y-生育酚（以29892.8g/ml）公式（1）C（IU/ml或以g/ml）=A'10000S式中：C一標(biāo)樣濃度，IU/ml或以g/mlA一在紫外分光光度計(jì)上測(cè)得的吸光值S一系數(shù)4,儀器及器材常用實(shí)驗(yàn)室儀器及：4. 1圓底燒瓶：250mL4. 2分液漏斗：500mL4. 3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。4. 4搖床水浴鍋。4. 5高壓液相色譜儀：具有可變波長的紫外檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)或記錄儀。4. 6紫外分光光度計(jì)。5.方法5. 1樣品處理精確稱取5,000

4、0g樣品（液態(tài)奶20ml）,置于250mLM口三角瓶中，用水潤濕。5. 2測(cè)定液的制備5.1.1 皂化：于上述處理的樣品中加入50mLz醇溶液（3.5）,充分混勻后加15mLM氧化鉀溶液（3.6）,再加入5m抗壞血酸溶液（3.7）,在90c水浴鍋中連續(xù)回流30min后，立刻冷卻到室溫。5. 2.2轉(zhuǎn)移：將皂化液定量轉(zhuǎn)移到500m份液漏斗中，用少量水分幾次沖洗磨口三角瓶，洗滌液并入分液漏斗中。5. 2.3萃取：于上述分液漏斗中，加入100m"!（3.1）,蓋好瓶塞，倒置分液漏斗并劇烈振搖1min,在振搖過程中，注意釋放瓶內(nèi)壓力。靜置分層，將水相放入另一500m6液漏斗中。重復(fù)上述萃取過

5、程，合并醍液到第一個(gè)分液漏斗中。用蒸儲(chǔ)水洗該醍液至中性（用pH式紙測(cè)定），通過無水硫酸鈉過濾干燥，在50c水浴和氮?dú)饬飨?，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸至近干（絕不允許蒸干），取下，用氮?dú)獯蹈桑脽o水乙醇（3.4）定量轉(zhuǎn)移至50m喀量瓶中，定容，0.45n<膜過濾，濾液作為樣品溶液。5. 3測(cè)定5. 3.1維生素所口E的測(cè)定5. 3.1.1儀器條件色譜柱：Ci8,250mm<4.6mm,OD駐或具等同性能的色譜柱。流動(dòng)相：甲醇：水（98：2）。流速：1.0mL/min。靈敏度：0.005AU/MV。波長：維生素A,325nmj維生素E,290nm5 .3.1.2注射20以L維生素A、E標(biāo)樣（3.9.3）和20以L樣品溶液（5.2.3）,得到標(biāo)樣和樣品溶液中維生素A口E的峰面積。6 .結(jié)果計(jì)算樣品中維生素A（IU/100g）AsCsdV.100Asdm樣品中維生素E（mg/100g）=AsCsdV100Asdm式中：m-一樣品白質(zhì)量，g;A樣品中維生素A或E的峰面積（或峰高）；A5d標(biāo)樣中維生素A或E的峰面積（或峰高）；Csd標(biāo)樣中維生素A或E的濃度，