基因工程的工具課件

1、專題專題1 1 基因工程基因工程現(xiàn)代生物科技專題現(xiàn)代生物科技專題轉(zhuǎn)基因抗蟲棉轉(zhuǎn)基因抗蟲棉普通棉花普通棉花( (無抗蟲特性無抗蟲特性) )蘇云金芽孢桿菌蘇云金芽孢桿菌提取提取抗蟲基因抗蟲基因棉花細胞棉花細胞( (含抗蟲基因含抗蟲基因) )棉花植株棉花植株( (有抗蟲特性有抗蟲特性) )重組重組DNADNA導入導入形成形成基因工程的別名基因工程的別名操作環(huán)境操作環(huán)境操作對象操作對象操作水平操作水平基本過程基本過程結(jié)果結(jié)果基因拼接技術(shù)或基因拼接技術(shù)或DNADNA重組技術(shù)重組技術(shù)生物體外生物體外基因基因DNADNA分子水平分子水平人類需要的基因產(chǎn)物人類需要的基因產(chǎn)物剪切剪切 拼接拼接 導入導入 表達表

2、達基因工程的概念基因工程的概念 準確切割準確切割DNADNA的工具（的工具（“分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀”）限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶 DNADNA片段的連接工具（片段的連接工具（“分子縫合針分子縫合針”）DNADNA連接酶連接酶 基因轉(zhuǎn)移工具（基因轉(zhuǎn)移工具（“分子運輸車分子運輸車”）基因進入受體細胞的載體基因進入受體細胞的載體1.1 DNA1.1 DNA重組技術(shù)的基本工具重組技術(shù)的基本工具黏性末端黏性末端平末端平末端一、限制性核酸內(nèi)切酶一、限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀”12345脫氧核苷酸的結(jié)構(gòu)脫氧核苷酸的結(jié)構(gòu)3端5端3端5端 G1234512345 A3,5-磷磷酸二酯酸二酯鍵鍵磷酸二酯

3、鍵磷酸二酯鍵8限制酶的識別序列限制酶的識別序列限制酶所識別的序列的限制酶所識別的序列的特點是：特點是：呈現(xiàn)堿基互補呈現(xiàn)堿基互補對稱，無論是對稱，無論是6個堿基還個堿基還是是4個堿基，都可以找到個堿基，都可以找到一條中心軸線，中軸線一條中心軸線，中軸線兩側(cè)的雙鏈兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿上的堿基是基是反向?qū)ΨQ重復反向?qū)ΨQ重復排列排列的的 ，稱為，稱為回文序列回文序列中軸線在G與A之間切割EcoRIEcoRI限制酶的作用限制酶的作用大腸桿菌的一種限制酶(EcoR)只能識別GAATTC序列，并在G和A之間切開黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端EcoRIEcoRI限制酶的切割限制酶的切割 被限制酶切開的被限

4、制酶切開的DNA兩條兩條單鏈的切口，帶有幾個單鏈的切口，帶有幾個伸出的伸出的核苷酸核苷酸，他們之間正好互補配他們之間正好互補配對，這樣的切口叫對，這樣的切口叫黏性末端黏性末端。SmaISmaI限制酶的切割限制酶的切割 當限制酶從識別序列的中心軸線處切開當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的時，切開的DNADNA兩條單鏈的切口，是平整兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫的，這樣的切口叫平末端平末端。限制性內(nèi)切酶作用過程限制性內(nèi)切酶作用過程SmaISmaI只能識別CCCGGG序列，并在C和G之間切開。中軸線SmaISmaI限制酶的作用限制酶的作用在G與C之間切割你能推測限制酶存在于原核生物

5、中的你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？作用是什么嗎？原核生物易受自然界外源原核生物易受自然界外源DNA的入侵，的入侵，但生物但生物在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機制，以防止外來病原物的侵害。制，以防止外來病原物的侵害。限制酶限制酶就是細就是細菌的一種菌的一種防御性工具，防御性工具，當外源當外源DNA侵入時，會侵入時，會利用限制酶利用限制酶將外源將外源DNA切割掉，切割掉，以保證自身的以保證自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切切割外源割外源DNA、使之失效，從而達到保護自身的、使之失效，從

6、而達到保護自身的目的。目的。尋根問底尋根問底為什么限制酶不剪切細菌本身的為什么限制酶不剪切細菌本身的DNA？通過長期的進化，細菌中含有某種限制酶通過長期的進化，細菌中含有某種限制酶的細胞，其的細胞，其DNADNA分子中分子中不具備這種限制酶不具備這種限制酶的識別切割序列的識別切割序列，或者，或者通過甲基化酶將甲通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識別序列的堿基上，使限制酶基轉(zhuǎn)移到所識別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開不能將其切開。這樣，盡管細菌中含有某。這樣，盡管細菌中含有某種限制酶也不會使自身的種限制酶也不會使自身的DNADNA被切斷，并被切斷，并且可以防止外源且可以防止外源DNADNA的入侵。的入

7、侵。 基因的針線：基因的針線：DNA連接連接酶酶G A A T T CC T T A A GG A A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C G用同種限制酶用同種限制酶切割切割ATGCATGC連接酶連接連接酶連接磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵DNADNA連接酶的作用過程：連接酶的作用過程：二、二、DNADNA連接酶連接酶“分子縫合針分子縫合針”作用部位：作用部位：（扶手）（扶手）（梯子）（梯子）核苷酸分子的連接：核苷酸分子的連接：ATGCATGCDNADNA聚合聚合酶連接單酶

8、連接單鏈，把單鏈，把單個脫氧核個脫氧核苷酸連接苷酸連接到到DNADNA片片段上段上？DNA聚合酶和聚合酶和DNA連接酶有連接酶有何相同點和不同點？何相同點和不同點？DNA連接酶連接酶DNA聚合酶聚合酶連接連接DNA鏈鏈連接部位連接部位雙鏈雙鏈在兩在兩DNADNA片片斷之間形成斷之間形成磷酸二脂鍵磷酸二脂鍵單鏈單鏈將單個核苷酸加將單個核苷酸加到已存在的核酸到已存在的核酸片斷片斷33末端形成末端形成磷酸二脂鍵磷酸二脂鍵DNA連連接酶接酶DNA聚合酶聚合酶相相同同點點作用作用實質(zhì)實質(zhì)化化學學本本質(zhì)質(zhì)不不同同點點模板模板作用作用對對象象 作用作用結(jié)結(jié)果果用途用途都能催化形成都能催化形成磷酸二酯鍵磷酸二

9、酯鍵都是蛋白質(zhì)都是蛋白質(zhì)不需要不需要需要需要形成完整的重形成完整的重組組DNA分子分子形成形成DNA的一條的一條鏈鏈基因工程基因工程DNA復制復制DNA連接酶與連接酶與DNA聚合酶的比較聚合酶的比較只能將只能將單個核苷單個核苷酸酸連接到已有的連接到已有的DNADNA片段上，形片段上，形成磷酸二酯鍵成磷酸二酯鍵在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵E.coliDNAE.coliDNA連接酶：連接酶：連接黏性末端連接黏性末端T T4 4DNADNA連接酶：連接酶： 連接黏性末端連接黏性末端 平末端平末端DNADNA連接酶種類連接酶種類三、基因進入受體細胞的載體三、基因進入受體細胞的載體“分子運輸車分子

10、運輸車”1.載體的作用載體的作用2.載體的必要條件載體的必要條件3.3.載體的種類載體的種類質(zhì)粒質(zhì)粒病毒：病毒：、動植物病毒等、動植物病毒等 大腸桿菌的質(zhì)粒：大腸桿菌的質(zhì)粒： 最常用的質(zhì)粒是最常用的質(zhì)粒是大腸桿菌的質(zhì)粒，其大腸桿菌的質(zhì)粒，其中常含有抗藥基因。中常含有抗藥基因。質(zhì)粒的存在與否對宿質(zhì)粒的存在與否對宿主細胞生存沒有決定主細胞生存沒有決定性作用，但復制只能性作用，但復制只能在宿主細胞內(nèi)成。在宿主細胞內(nèi)成?；蜻M入受體細胞的載體基因進入受體細胞的載體“分子運輸車分子運輸車”能復制并帶能復制并帶著插入的目著插入的目的基因一起的基因一起復制復制有切割位點有切割位點有標記基因有標記基因的存在，

11、將的存在，將來可用含青來可用含青霉素的培養(yǎng)霉素的培養(yǎng)基鑒別?；b別?；蜻M入受體細胞的載體基因進入受體細胞的載體“分子運輸車分子運輸車”小結(jié)基因工程基因工程的工具的工具限制酶限制酶主要存在于原核生物中主要存在于原核生物中具有專一性具有專一性(識別序列識別序列)切開切開DNA分子的磷酸二酯鍵分子的磷酸二酯鍵DNA連連接酶接酶連接磷酸二酯鍵連接磷酸二酯鍵種類種類E.coliDNA連接酶連接酶T4 DNADNA連接酶連接酶運載運載工具工具具備的具備的條件條件1、2、3、4、5、質(zhì)粒、質(zhì)粒、噬菌體、動植物病毒噬菌體、動植物病毒第二節(jié)第二節(jié) 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序細胞的基因結(jié)構(gòu)細胞

12、的基因結(jié)構(gòu)原核細胞的基因結(jié)構(gòu)原核細胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 啟動子啟動子終止子終止子與與RNARNA聚合酶結(jié)合位點聚合酶結(jié)合位點真核細胞的基因結(jié)構(gòu)真核細胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 啟動子啟動子終止子終止子能夠編碼蛋白質(zhì)的序列能夠編碼蛋白質(zhì)的序列不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：內(nèi)含子： 外顯子：外顯子： 一、目的基因的獲取一、目的基因的獲取 目的基因主要是指目的基因主要是指_ 獲取目的基因的常用方法獲取目的基因的常用方法 從基因文庫

13、中獲取從基因文庫中獲取（基因組文庫，部分基因文庫）（基因組文庫，部分基因文庫） 利用利用PCRPCR技術(shù)擴增目的基因技術(shù)擴增目的基因（變性，復性，延伸）（變性，復性，延伸） 通過通過DNADNA合成儀用化學方法直接人工合成合成儀用化學方法直接人工合成編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因基因文庫基因文庫基因組文庫基因組文庫部分基因文庫（如部分基因文庫（如:cDNA:cDNA文庫）文庫）1. 1.基因文庫基因文庫 將含有某種生物不同基因的許多將含有某種生物不同基因的許多DNADNA片斷，片斷，導入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這導入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，

14、稱為基因文庫種生物的不同基因，稱為基因文庫（一）從基因文庫中獲得目的基因（一）從基因文庫中獲得目的基因2.2.基因文庫的構(gòu)建方法基因文庫的構(gòu)建方法鳥槍法：鳥槍法：供體細胞中的供體細胞中的DNADNA許多許多DNADNA片段片段運載體運載體限制酶限制酶與載體連接載入與載體連接載入受體細胞受體細胞產(chǎn)生特定性狀產(chǎn)生特定性狀導入導入外源外源DNADNA擴增擴增目的基因目的基因分離分離（直接分離法）（直接分離法）（一）從基因文庫中獲得目的基因（一）從基因文庫中獲得目的基因反轉(zhuǎn)錄法：反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)錄成以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使的信使RNARNA為模板，反為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈DN

15、ADNA，然后在酶的作用下合成然后在酶的作用下合成雙鏈雙鏈DNADNA，從而獲得所，從而獲得所需的基因。需的基因。目的基因的目的基因的mRNAmRNA雜交雙鏈雜交雙鏈( (單鏈單鏈RNA/RNA/單鏈單鏈DNA)DNA)單鏈單鏈DNADNA反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶核酸酶核酸酶H H2.2.基因文庫的構(gòu)建方法基因文庫的構(gòu)建方法DNADNA聚合酶聚合酶雙鏈雙鏈DNADNA( (目的基因目的基因) )（一）從基因文庫中獲得目的基因（一）從基因文庫中獲得目的基因（二）利用（二）利用PCRPCR技術(shù)擴增目的基因技術(shù)擴增目的基因 概念：概念：PCRPCR全稱為全稱為_，是一項，是一項 在生物在生物_復制復制_的核

16、酸合成技術(shù)的核酸合成技術(shù) 條件：條件：_、 _、_ (_ (做啟動子做啟動子) )、 _等等原理：原理：_方式：以方式：以_方式擴增，即方式擴增，即_（n n為擴增循為擴增循 環(huán)的次數(shù)）環(huán)的次數(shù)）結(jié)果：結(jié)果：聚合酶鏈式反應聚合酶鏈式反應體外體外特定特定DNADNA片段片段DNADNA復制復制模板模板DNADNA四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸一對引物一對引物DNADNA聚合酶聚合酶指數(shù)指數(shù)2 2n n使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴增使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴增（二）利用（二）利用PCRPCR技術(shù)擴增目的基因技術(shù)擴增目的基因過程：過程：a a、DNADNA變性（變性（90-959

17、0-95）：）：目的基因目的基因DNADNA受熱變性，解鏈受熱變性，解鏈b b、復性（、復性（55-6555-65）：）：引物與單鏈互補結(jié)合引物與單鏈互補結(jié)合c c、延伸（、延伸（70-7570-75）：）：合成鏈在合成鏈在DNADNA聚合酶作用下進行延伸聚合酶作用下進行延伸（二）利用（二）利用PCRPCR技術(shù)擴增目的基因技術(shù)擴增目的基因三、根據(jù)已知的氨基酸序列合成三、根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNADNA法法 ：根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應的酸序列，推測出相應的信使信使RNARNA序列，然后按序列，然后按照堿基互補配對原則，照堿基互補配對原則，推測出它的結(jié)構(gòu)基因的

18、推測出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化核苷酸序列，再通過化學方法，以單核苷酸為學方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。原料合成目的基因。蛋白質(zhì)的氨基酸序列蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNAmRNA的核苷酸序列的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測推測推測推測目的基因目的基因化學合成化學合成1. 1.用一定的用一定的_切割質(zhì)切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切口，露粒，使其出現(xiàn)一個切口，露出出_。2.2.用用_切斷目的切斷目的基因，使其產(chǎn)生基因，使其產(chǎn)生_。3.3.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_處，處，再加入適量再加入適量_，形成了一個重組，形成了一個重組DNADN

19、A分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一種限制酶同一種限制酶切口切口DNADNA連接酶連接酶相同的黏性末端相同的黏性末端二、基因表達載體的構(gòu)建二、基因表達載體的構(gòu)建質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA分子分子限制酶處理限制酶處理一個切口一個切口兩個黏性末端兩個黏性末端兩個切口兩個切口獲得目的基因獲得目的基因DNADNA連接酶連接酶重組重組DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）同一種同一種4.4.過程過程: :二、基因表達載體的構(gòu)建二、基因表達載體的構(gòu)建5.5.基因表達載體的組成：基因表達載體的組成：復制原點復制原點+ +目的基因目的基因+ +啟動子啟動子+ +終止子終止子+ +

20、標記基標記基因因二、基因表達載體的構(gòu)建二、基因表達載體的構(gòu)建基因表達載體的組成：基因表達載體的組成： 目的基因、啟動子、終止子、標記基因目的基因、啟動子、終止子、標記基因啟動子啟動子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的：一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNADNA片段，位于基因的首端，片段，位于基因的首端，是是RNARNA聚合酶識別和結(jié)合的部位聚合酶識別和結(jié)合的部位。終止子終止子：位于基因的尾端，也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的：位于基因的尾端，也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNADNA片段，使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來。片段，使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來。標記基因標記基因：為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因，：為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因，

21、從而將含有目的基因的細胞篩選出來。從而將含有目的基因的細胞篩選出來。二、基因表達載體的構(gòu)建二、基因表達載體的構(gòu)建小結(jié)：小結(jié)：一、獲取目的基因的常用方法一、獲取目的基因的常用方法從基因文庫中獲取從基因文庫中獲取（鳥槍法構(gòu)建基因組文庫，逆轉(zhuǎn)錄法構(gòu)建（鳥槍法構(gòu)建基因組文庫，逆轉(zhuǎn)錄法構(gòu)建部分基因文庫，目的基因在細胞部分基因文庫，目的基因在細胞內(nèi)內(nèi)復制）復制）利用利用PCRPCR技術(shù)擴增目的基因技術(shù)擴增目的基因（目的基因在細胞（目的基因在細胞 外外復制）復制）通過通過DNADNA合成儀用化學方法直接人工合合成儀用化學方法直接人工合成成質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA分子分子限制酶處理限制酶處理一個切口一個切口兩個黏

22、性末端兩個黏性末端兩個切口兩個切口獲得目的基因獲得目的基因DNADNA連接酶連接酶重組重組DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）同一種同一種過程過程: :二、基因表達載體的構(gòu)建二、基因表達載體的構(gòu)建基因表達載體的組成：基因表達載體的組成：復制原點復制原點+ +目的基因目的基因+ +啟動子啟動子+ +終止子終止子+ +標記基標記基因因二、基因表達載體的構(gòu)建二、基因表達載體的構(gòu)建基因工程的基本操作程序第二課時基因工程的基本操作程序第二課時轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化 方法方法將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胫参锛毎参锛毎麑⒛康幕驅(qū)雽⒛康幕驅(qū)雱游锛毎麆游锛毎麑⒛康幕驅(qū)雽⒛康幕驅(qū)胛⑸锛毎⑸锛毎r(nóng)

23、桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞目的基因進入目的基因進入_內(nèi)，并且在內(nèi)，并且在 受體細胞內(nèi)維持受體細胞內(nèi)維持_和和_的過程的過程受體細胞受體細胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達表達三、將目的基因?qū)胧荏w細胞三、將目的基因?qū)胧荏w細胞1 1、將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ǎ骸⒛康幕驅(qū)胫参锛毎姆椒ǎ恨r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（1 1）農(nóng)桿菌介紹）農(nóng)桿菌介紹（2 2）原理及適用范圍）原理及適用范圍三、將目的基因?qū)胧荏w細胞三、將目的基因?qū)胧荏w細胞2 2、將目的基因?qū)雱游锛毎⒛康幕驅(qū)雱游锛毎?、將目的基因?qū)胧荏w細胞三、將目的基因?qū)胧?/p>

24、體細胞 顯顯微注射法：微注射法：轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)基因基因動動物中采用最多，最物中采用最多，最為為有有效的方法效的方法 操作程序：操作程序：表達載體提純表達載體提純從雌性動物體內(nèi)取出卵從雌性動物體內(nèi)取出卵顯微注射顯微注射胚胎早期培養(yǎng)胚胎早期培養(yǎng)胚胎移植胚胎移植顯顯微微注注射射儀儀固定固定吸管吸管微量注微量注射針射針針尖極細（針尖極細（0.10.1至至0.5m0.5m） 3 3、將目的基因?qū)胛⑸锛毎?、將目的基因?qū)胛⑸锛毎? 1）常用大腸桿菌：）常用大腸桿菌： （2 2）大腸桿菌的轉(zhuǎn)化方法）大腸桿菌的轉(zhuǎn)化方法 首先用首先用CaCa2+2+處理細胞，使細胞處于一種能吸收周圍處理細胞，使細胞處于一種能吸收

25、周圍環(huán)境中環(huán)境中DNADNA分子的生理狀態(tài)，這種細胞稱為感受態(tài)分子的生理狀態(tài)，這種細胞稱為感受態(tài)細胞。第二步是將重組表達載體細胞。第二步是將重組表達載體DNADNA分子溶于緩沖分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下促進感受態(tài)液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收細胞吸收DNADNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。分子，完成轉(zhuǎn)化過程。檢測檢測鑒定：鑒定：檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗

26、病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法方法方法方法方法方法DNADNA分子雜交分子雜交分子雜交分子雜交抗原抗體雜交抗原抗體雜交四、目的基因的檢測與鑒定四、目的基因的檢測與鑒定DNA-DNA雜交雙鏈分子雜交雙鏈分子變性變性 復性復性 不同來源的不同來源的DNA分子分子檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因方法方法DNADNA分子雜交分子雜交復性復性RNADNA檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA方法方法檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)方法方法抗原抗體雜交抗原抗體雜交鑒定

27、：鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等1.2 1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序基因工程程序總結(jié)基因工程程序總結(jié)一、獲取目的基因的常用方法一、獲取目的基因的常用方法從基因文庫中獲取從基因文庫中獲取（鳥槍法構(gòu)建基因組文庫，逆轉(zhuǎn)錄法構(gòu)建（鳥槍法構(gòu)建基因組文庫，逆轉(zhuǎn)錄法構(gòu)建部分基因文庫，目的基因在細胞部分基因文庫，目的基因在細胞內(nèi)內(nèi)復制）復制）利用利用PCRPCR技術(shù)擴增目的基因技術(shù)擴增目的基因（目的基因在細胞（目的基因在細胞 外外復制）復制）通過通過DNADNA合成儀用化學方法直接人工合合成儀用化學方法直接人工合成成基因表達載體的組成：基因表達載體的

28、組成：復制原點復制原點+ +目的基因目的基因+ +啟動子啟動子+ +終止子終止子+ +標記基標記基因因二、基因表達載體的構(gòu)建二、基因表達載體的構(gòu)建轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化 方法方法將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胫参锛毎参锛毎麑⒛康幕驅(qū)雽⒛康幕驅(qū)雱游锛毎麆游锛毎麑⒛康幕驅(qū)雽⒛康幕驅(qū)胛⑸锛毎⑸锛毎r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞目的基因進入目的基因進入_內(nèi)，并且在內(nèi)，并且在 受體細胞內(nèi)維持受體細胞內(nèi)維持_和和_的過程的過程受體細胞受體細胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達表達三、將目的基因?qū)胧荏w細胞三、將目的基因?qū)胧荏w細胞檢測檢測鑒定：鑒

29、定：檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法方法方法方法方法方法DNADNA分子雜交分子雜交分子雜交分子雜交抗原抗體雜交抗原抗體雜交四、目的基因的檢測與鑒定四、目的基因的檢測與鑒定1 1）以下說法正確的是）以下說法正確的是 A A、所有的限制酶只能識別一種特定的核苷酸所有的限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列序列B B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運載體質(zhì)粒是基

30、因工程中唯一的運載體 C C、運載體必須具備的條件之一是：具有多個運載體必須具備的條件之一是：具有多個限制酶切點，以便與外源基因連接限制酶切點，以便與外源基因連接D D、基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來C C隨堂練習隨堂練習2 2）不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是）不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是 A A、能復制能復制 B B、有多個限制酶切點有多個限制酶切點 C C、具有標記基因具有標記基因 D D、它是環(huán)狀它是環(huán)狀DNADNAD D隨堂練習隨堂練習3 3）有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是）有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是 A A、DNADNA連接酶將黏性末端的堿基對連接起來連接酶將黏性末端的堿基對連接起來 B B、 限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得 C C、目的基因須由運載體導入受體細胞目的基因須由運載體導入受體細胞 D D、 運載體和目的基因用同一種限制酶處理運載體和目的基因用同一種限制酶處理A A隨堂練習隨堂練習4 4）有關(guān)基因工程的敘述正確的是）有關(guān)基因工程的敘述正確的是 A A、限制酶只在獲得目的基因時才用限制酶只在獲得目的基因時才用 B B、重組質(zhì)粒的形成在細胞內(nèi)完成重組質(zhì)粒的形成在細胞內(nèi)完成C C、質(zhì)粒都可作為運載