動(dòng)物源性食品中抗生素殘留微生物學(xué)檢測(cè)的方法與進(jìn)展

1、職業(yè)與健康 2010年5月第26卷第9期 O ccup and H ealt h Vo. l 26No . 9M ay 2010w it h sep tal perforati on :am od el study . ORL, 2005, 67:142-147. 5Zhang QQ, Zhang J , L iSF , et a. l E ndoscope ass i sted repai r of l arge nas al saptal perforati on us i ng a co m p l ex m ucoperichond ri al fl ap and free ti s

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7、Woolford TJ ,(1:22-2521王?？? 袁俊蒼, 公偉宏, 等. 異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)黏膜組織片修補(bǔ)鼻中隔穿孔J .中國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科雜志, 2008, 15(3:522-524.22Mola F , K esk i n G. 0zturk M, et a. l The co m pari son of aeell u l ar d er m alm atri c (A ll oder m , Dacron, Gore-Tex , and autol ogou s cartilage graft m at eri als i n an experi m en tal an i

8、m almodel for n asal sep t al repair surger y . Am J Rh i no, l 2007, 21:330-334.23Pedroza F, Patroci n i o LG, Arevalo 0. A rev i e w of25 year rxperi en ee ofnas al septal perforation repa i r . 9:12-18.24Spoor P , Grenm an R . B i oactive gl ass and t u rn i nate flaps i n the repa i r ofnas alpt

9、al perf orati ons .Ann0to1Rh i nolLaryngo, l2004,113:655-661.(收稿:2009-11-20(本文編輯:方弘A rch Faci al Plast Su rg ,2007,J on es NS . Repai r of n asal septal p erf orati on s u si ng l ocalmu cos al fl ap s and a co m posite cartilage graft . Laryngol 0t o1, 2001, 115動(dòng)物源性食品中抗生素殘留微生物學(xué)檢測(cè)的方法與進(jìn)展M ethods and

10、Progress ofM icrob i o log ica lDetecti o n for Antibiotic Residue i n Ani m al o ri g i n Food 徐品X U P in關(guān)鍵詞 動(dòng)物源性; 食品; 抗生素; 殘留; 微生物學(xué); 檢測(cè)方法中國(guó)圖書(shū)資料分類號(hào):R 446. 5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1004-1257(2010 09-1057-04 為防治生畜和魚(yú)蝦、貝類等水生生物的各種疾病, 人們大量地使用抗生素。雖然抗生素的使用確實(shí)在很大程度上提高了生畜和水產(chǎn)品的產(chǎn)量, 但是獸藥中使用抗生素導(dǎo)致動(dòng)物源性食品中抗生素殘留, 給攝入這些食品的人們的健康

11、產(chǎn)生了很大影響, 帶來(lái)了潛在威脅1。世界各國(guó)相繼出臺(tái)了法律法規(guī)來(lái)規(guī)范抗生素的使用。2009年6月1日, ! 中華人民共和國(guó)食品安全法正式實(shí)施, 對(duì)食品中抗生素殘留問(wèn)題賦予了法律上的責(zé)任和意義。造成抗生素殘留超標(biāo)的原因主要有以下幾個(gè)方面:首先, 使用抗生素對(duì)各種動(dòng)物進(jìn)行防病治病, 對(duì)動(dòng)物在屠宰前的停藥期的規(guī)定不能夠遵守; 其次, 在動(dòng)物飼料中添加抗生素類添加劑; 再有, 經(jīng)銷商為了保鮮, 防止肉類、奶類產(chǎn)品的腐敗變質(zhì), 人為地綜述將抗生素添加到畜產(chǎn)品中。這些因素均造成了抗生素不同程度的殘留。因此, 建立快速、有效的檢測(cè)技術(shù)對(duì)保證消費(fèi)者的健康, 營(yíng)造一個(gè)安全、放心的飲食環(huán)境是十分必要的, 同時(shí)也是

12、各國(guó)政府非常關(guān)注的問(wèn)題。1 概況目前, 從方法學(xué)上控制性對(duì)策主要建立有3個(gè)步驟:篩選、二級(jí)篩選、最后鑒定。一個(gè)好的篩選方法應(yīng)檢測(cè)到所有等于或低于最大殘留量(m ax i m u m residue li m its , M RL 水平, 且應(yīng)具有快速、簡(jiǎn)單、廣泛、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn), 傳統(tǒng)微生物抑制檢測(cè)法前處理簡(jiǎn)單, 操作方便, 雖然存在著檢出限過(guò)高等問(wèn)題, 但仍可作為篩選方法對(duì)大批量樣品同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)2。篩選步驟通常依據(jù)細(xì)菌抑制試驗(yàn)來(lái)實(shí)現(xiàn)多種物質(zhì)殘留的微生物法檢測(cè), 主要包括2種篩選方法加以區(qū)別:試管實(shí)驗(yàn)和作者簡(jiǎn)介:徐品, 女, 副主任技師, 主要從事微生物檢驗(yàn)工作。作者單位:天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)衛(wèi)生

13、防病站, 3004571058職業(yè)與健康 2010年5月第26卷第9期 O ccup and H ealt h Vo. l 26No . 9M ay 2010(多 平板實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。試管實(shí)驗(yàn)包含一種瓊脂培養(yǎng)基, 針對(duì)某一種敏感的細(xì)菌, 補(bǔ)充以p H 值和氧化還原指示劑, 由顏色變化來(lái)判定抗生素的有無(wú), 主要的菌株為Bacill us stearo t her m oph il us , 之所以選擇此菌是因?yàn)樵摼诟邷叵掠锌焖偕L(zhǎng)的特性使得結(jié)果可在幾小時(shí)內(nèi)獲得。用芽胞代替干燥細(xì)菌可便于保存, 并且方便于商業(yè)化分配, 此類實(shí)驗(yàn)最初由檢測(cè)牛奶發(fā)展而來(lái)(D elvotest 等 , 但是目前也可用于肉、腎

14、臟、魚(yú)、蛋等樣品的檢測(cè)(P rem i T est 和K IS T est 等 3; 但是單一細(xì)菌抑制試驗(yàn)對(duì)篩選抗生素殘留通常是不適合的4。在(多 碟實(shí)驗(yàn)中, 樣品被加入至已接種的瓊脂層的頂部或小孔內(nèi), 來(lái)自于一片組織或浸滿組織液的紙片中含有動(dòng)物組織的抑制性物質(zhì), 此物質(zhì)可擴(kuò)散至瓊脂層抑制接種于平板的敏感菌株的生長(zhǎng), 通過(guò)隔夜培養(yǎng), 以樣品周圍出現(xiàn)抑菌環(huán)來(lái)判定抗生素的存在, 用單一平板或不同平板、不同組合的p H 值、培養(yǎng)基和不同的菌種以提高不同藥物的檢測(cè)水平5。二級(jí)篩選也可通過(guò)微生物法來(lái)實(shí)現(xiàn)。一般針對(duì)多碟實(shí)驗(yàn), 目前, 可用不同的物質(zhì)作為假定性鑒定的抑菌劑針對(duì)不同類型的抗生素, 但目前沒(méi)有單

15、一的物質(zhì)可針對(duì)所有類型的抗生素殘留。篩選試驗(yàn)的目的是為了選擇一些樣品, 這些樣品可經(jīng)過(guò)更高級(jí)的方法進(jìn)一步進(jìn)行鑒定, 包括:酶免法、Char m II 受體分析法和色譜法。一旦經(jīng)常規(guī)抑制試驗(yàn)為陽(yáng)性的樣品需進(jìn)行化學(xué)鑒定和定量測(cè)定。理化檢測(cè)方法因前處理較復(fù)雜, 所需儀器較昂貴, 不適用于屠宰廠的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè), 但因其具有高效、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn), 又因?yàn)榛瘜W(xué)法的極其專一性, 因此, 作為鑒定試驗(yàn)已為大家廣泛應(yīng)用6。進(jìn)一步說(shuō), 微生物法因需要大量的平板而使得實(shí)驗(yàn)變得繁瑣, 但是這并沒(méi)有影響此法的廣泛性, 該法因其價(jià)廉、簡(jiǎn)易、廣譜等特點(diǎn)在檢測(cè)抗生素殘留過(guò)程中發(fā)揮巨大作用, 以下針對(duì)不同類型的微生物法及其發(fā)展過(guò)

16、程作為闡述。2 歐盟各國(guó)的檢測(cè)方法2. 1 單碟法 比利時(shí)用于檢測(cè)屠宰場(chǎng)動(dòng)物的腎組織抗生素殘留的常用方法。用Bac ill us subtili s B GA 作為工作菌, 加入三甲氧芐氨嘧啶能較好地測(cè)定磺胺類抗生素, 加入 葡萄糖苷酸酶7可較好地測(cè)定氯霉素類抗生素殘留。此法被認(rèn)為對(duì)檢測(cè)肉類意義不大, 因?yàn)榇蠖鄶?shù)抗生素會(huì)很快從肌肉組織中釋放出來(lái), K oenen D i er i ck 等8另研究發(fā)現(xiàn)單碟法在檢測(cè)磺胺類藥物方面在p H 值為7. 2時(shí)與四碟法檢出限相似, 可替代歐盟四碟法。2. 2 N ew Dutch K i dney(NKT 法 1988年發(fā)展于荷蘭, 是荷蘭用于屠宰場(chǎng)動(dòng)物

17、新鮮腎的檢測(cè)方法, 實(shí)際上是一種單碟實(shí)驗(yàn)。由standard II 營(yíng)養(yǎng)瓊脂組成, 加上1%N aC 、l 1%葡萄糖、0. 2%KH 2PO 4和0. 28N a 2HPO 4#12H 2O 。將此瓊脂倒入平板, 厚2 2mm, p H 值調(diào)至7. 000. 05。同樣Bac ill us subtilis BGA 作為工作菌。在屠宰場(chǎng)測(cè)定抗生素殘留時(shí), 先將4張紙片放在腎盂中至少30m i n , 將其中2張被腎盂浸濕的紙片于-20%冷凍保存?zhèn)溆? 另2張呈對(duì)角置于實(shí)驗(yàn)平板上。將25m l 三甲氧芐氨嘧啶溶液(含2mg /m lTM P 在10%N aC l 溶液 滴加在2張紙片上, 將平

18、板置于37%培養(yǎng)38h 9。新的荷蘭腎實(shí)驗(yàn)(N ew N etherlands K idney T est , NNKT 對(duì)于磺胺類藥物有較高的靈敏度, 特別是對(duì)于屠宰場(chǎng)豬肉樣品中磺胺類、氯霉素、四環(huán)素、氨基苷類和青霉素類較歐盟四碟法靈10敏度高。Broex 等認(rèn)為NNKT 與NKT 比較, 前者可測(cè)出5 , 。2. 3 德國(guó)三碟法 也是利用B . subtilis 作為工作菌, 3塊板的p H 值分別為6. 0, 8. 0和7. 2, 在最后一塊平板中加入三甲氧芐氨嘧啶能較好地測(cè)定磺胺類抗生素, 30%培養(yǎng)1824h 。肌肉和腎均可作為樣品用冷凍肉和鮮的或冷凍腎樣, 制成直徑為9mm 、2m

19、m 厚的薄片, 置于平板上培養(yǎng)11。如果在2塊組織薄片的邊緣開(kāi)始出現(xiàn)2mm 的抑菌環(huán)即可判定為陽(yáng)性。陽(yáng)性的肌肉試驗(yàn)不適用于整個(gè)動(dòng)物標(biāo)本, 而陽(yáng)性的腎實(shí)驗(yàn)僅能排除器官。在放置豬和馬的腎臟薄片之前, 預(yù)先放置半通透的膜在瓊脂表面, 以避免由于組織細(xì)胞破裂釋放出的溶菌酶而導(dǎo)致的假陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)。此法對(duì)四環(huán)素類、 內(nèi)酰胺類、喹啉類、氨基苷類、磺胺類藥物殘留均可檢出, 但是有些抗生素不符合歐盟規(guī)定的耐受水平, 如土霉素、氨芐青霉素、阿莫西林、磺胺類藥物等, 大環(huán)內(nèi)酯類、多黏菌素等藥物檢測(cè)不夠靈敏。該實(shí)驗(yàn)較N e w Dutch K i dney 法更加繁瑣、費(fèi)用高。2. 4 歐盟四碟法 此法也是微生物抑制

20、法, 其中3塊平板利用B acill us subtilis 在不同的p H 值(6、7. 2、8 制成的培養(yǎng)基, 第4塊平板利用M icro coccus l uteus 作為檢測(cè)用菌。將肌肉樣品或腎樣品保持在冷凍狀態(tài)下, 切成8片, 為直徑8mm 、厚2mm 的圓柱, 每塊平板放置2片, 呈對(duì)稱放置在平板邊緣, 每塊平板可放置6塊肉片。前3塊平板置30%培養(yǎng)2024h , 當(dāng)2塊肉片周圍的抑菌環(huán)大于或等于2mm 時(shí), 結(jié)果可判定為陽(yáng)性。4795份調(diào)查結(jié)果顯示, M. l uteus 在p H 值為8的條件下得出的陽(yáng)性結(jié)果檢測(cè)mac ro lides 和 內(nèi)酰胺類抗生素是不可靠的12; Ba

21、c ill us subtili s 作為工作菌的平板較M. l uteus 作為工作菌的平板結(jié)果可靠。四碟法對(duì)fl uoroqui no l ones 和磺胺類抗生素不夠靈敏。原則上說(shuō), 只有深度冷凍的樣品才適用于此法, 如果采用透析膜和后期的鑒定技術(shù), 那么也可利用腎臟作為樣品。該法檢測(cè)大環(huán)內(nèi)酯類殘留較德國(guó)三碟法檢測(cè)值低, 該法較前2種方法更加繁瑣和昂貴?？傊? N e w Du tch K i dney 法、德國(guó)三碟法、歐盟四碟法在歐盟各國(guó)用于抗生素殘留的篩選。N ew Dutch K i dney 法在檢測(cè)磺胺類藥物中較德國(guó)三碟法和歐盟四碟法靈敏。3 美國(guó)及加拿大地區(qū)的檢測(cè)方法S TO

22、 P (S w ab T est On P re m i ses 法和CA ST (Ca lf Antibiotic and Su lfa T est 法用于加拿大和美國(guó)的屠宰場(chǎng), 后來(lái), 美國(guó)又發(fā)展了FAST (F ast A nti m i crobiol Screen T est 法, STO P 用B . s ubtili s 作為實(shí)驗(yàn)菌, 接種在抗生素5號(hào)培養(yǎng)基上, 2729%培養(yǎng)1624h , 用沾取腎液的棉拭周圍出現(xiàn)抑菌來(lái)判定抗生素的存在。CA ST 法用B . m egater i u m 作為實(shí)驗(yàn)菌13, 接種于M H 培養(yǎng)基中, 4445%培養(yǎng)1624h , 在棉拭周圍出現(xiàn)

23、抑制環(huán)表明樣品中存在抑菌物質(zhì)。FA ST 法的實(shí)驗(yàn)菌和試驗(yàn)溫度與CA S T 法相同, 但是CA S T 法培養(yǎng)基中加入葡萄糖和溴甲酚紫。FA ST 法檢測(cè)細(xì)菌有較快的生長(zhǎng)率, 因而使得培養(yǎng)時(shí)間由16減少為6h 。當(dāng)STO P 法的培養(yǎng)基換成Saskatoon 抗生素培養(yǎng)基時(shí)(p H 值由8. 0到6. 7, 并加入相應(yīng)的中和劑 在標(biāo)準(zhǔn)溶液中用此法進(jìn)行22種抗生素的測(cè)液, 其中有15種靈敏度增加。這3種方法對(duì)氯霉素和磺胺類藥物靈敏度較低。自1967年開(kāi)始, 美國(guó)FSIS 對(duì)大量的肉類和家禽樣品進(jìn)行常規(guī)檢驗(yàn)以避免農(nóng)藥殘留對(duì)人類造成傷害。1979年, 美國(guó)開(kāi)始實(shí)行第1個(gè)快速篩選試驗(yàn), 即STOP

24、(Swab T est On P rem ises 法, Be l 室, 監(jiān)控品職業(yè)與健康 2010年5月第26卷第9期 O ccup and H ealt h Vo. l 26No . 9M ay 20101059中抗生素殘留的檢測(cè), 并可在24h 內(nèi)檢測(cè)出殘留的抗生素, 而在這之前, 需要五六天才能得出實(shí)驗(yàn)室結(jié)果。至20世紀(jì)80年代, 小牛中殘留的磺胺類藥物和抗生素殘留的增加引起了美國(guó)FSIS 的注意, 為了對(duì)這種類型的動(dòng)物進(jìn)行篩選, 1984年Be lsv ille 實(shí)驗(yàn)室又研究出了CA ST 法, 1985年將此法引入屠宰場(chǎng)作為檢測(cè)殘留的篩選方法。至1987年, 小牛中的磺胺和抗生素殘

25、留水平明顯減少。1994年, FA ST 出現(xiàn), 研究表明FA S T 法與前2種方法比較, 樣品陽(yáng)性檢出率高14, 而且該法更適用于針對(duì)磺胺類殘留樣品的檢測(cè), 更加使得此法有優(yōu)勢(shì)的是, FAST 法使用的培養(yǎng)基是紫色的, 在培養(yǎng)基內(nèi)加入糖, 細(xì)菌培養(yǎng)后產(chǎn)酸使得培養(yǎng)基顏色變黃, 如果棉拭周圍有抗生素那么會(huì)阻礙細(xì)菌的生長(zhǎng)而使得顏色保持在紫色, 說(shuō)明有抗生素殘留。4 日本針對(duì)抗生素殘留的檢測(cè)在日本的日常監(jiān)測(cè)中, 廣泛采用平成6年日本原生省所制訂的! 實(shí)用牲畜、水產(chǎn)品中抗生素物質(zhì)殘留的簡(jiǎn)易檢測(cè)法(修訂 作為準(zhǔn)則。該法使用檸檬酸和丙酮緩沖液20m l 再加入5g 樣品均質(zhì)后, 取上清液作為樣液進(jìn)行檢測(cè)

26、。崛江正一等對(duì)此法作了改進(jìn), 將5g 樣品放入聚丙烯制離心管內(nèi), 加入5m l 甲醇, 攪拌1m i n , 在10%的條件下, 用3000r /min 離心10m i n 取上清液作為檢測(cè)樣液進(jìn)行檢測(cè), 利用此法減少了樣品中抗生素的稀釋倍率, 使檢測(cè)靈敏度大大提高, 并檢出各類抗生素125種15。5 我國(guó)近年來(lái)的發(fā)展?fàn)顩r中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫局行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)! 動(dòng)物源性食品中抗生素藥物殘留檢測(cè)方法微生物抑制法規(guī)定了動(dòng)物源性食品中 內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素、氨基苷類藥物殘留檢測(cè)的試樣制備、保存和檢測(cè)方法, 10g 試樣加入至20m l 緩沖液內(nèi)用渦旋振蕩器振蕩3m in , 于7075%水

27、浴20m i n 后, 2000r /mi n 離心15m i n , 取上清液作為樣液, 將濾紙置于檢定平板上, 每塊平板最多不超過(guò)6個(gè), 滴加100 l 樣液在濾紙上, 冷藏30m i n 后, 30%培養(yǎng)18h 后觀察結(jié)果, 根據(jù)抑菌圈的大小判定結(jié)果。王志強(qiáng)等16采用了微生物抑制法快速檢測(cè)了15種抗生素殘留, 與上面不同的是該法在樣液制備時(shí)采用了磷酸鹽-乙腈混合液作為緩沖液。目前, 我國(guó)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中G B /T4789. -2003制定了牛乳中抗生素殘留的檢測(cè)方法。即氯化三苯基四氮唑法(TTC 法 17, 嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)繁殖產(chǎn)生的氫可使無(wú)色TTC 還原成紅色化合物。如果牛奶的顏色不變,

28、 證明有抗生素存在導(dǎo)致菌種不繁殖, 即為陽(yáng)性, 反之變成紅色則為陰性。此法的最低檢出量為青霉素0. 004U /mL,鏈霉素為0. 5U /mL, 慶大霉素0. 4U /mL, 卡那霉素5U /mL。6 國(guó)際上近年來(lái)發(fā)展的方法6. 1 S TAR 法 隨著技術(shù)的不斷改進(jìn), G aud i n 等182004年研究出一種五碟法(Screeni ng T est fo r A nti b i otic R esi dues , S TAR 法 來(lái)篩選乳品中抗生素殘留。5塊平板分別針對(duì)不同類型的抗生素而設(shè)定, 即B . cerues 針對(duì)四環(huán)素, E . co li 針對(duì)喹啉類, B . subti

29、li s 針對(duì)氨基糖苷類, K ocuria var i ans 針對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類, B aci l us stearo t her m oph il us 針對(duì)磺胺類和 內(nèi)酰胺類。該五碟法對(duì)不同類型的抗生素進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè), 最多可檢測(cè)66種抗生素, 且2, 盟實(shí)驗(yàn)室參考標(biāo)準(zhǔn), 已用于牛奶中抗生素測(cè)定, 實(shí)際上此法也可用于肌肉的測(cè)定。6. 2 六碟法 由6塊平板組成。M y ll yn i e m i 19等用微生物六碟法對(duì)腎臟和肌肉樣品進(jìn)行檢測(cè), 并用液相色譜對(duì)陽(yáng)性樣品進(jìn)行鑒定, 得出此法與化學(xué)法有較好的一致性。方法是B . s ubtili s 接種在其中3塊平板, p H 值分別為6. 0、

30、7. 2和8. 0, B . cerues 接種在p H 值為5. 9的培養(yǎng)基中, M. l uteus 接種在p H 值為8的培養(yǎng)基中, E . co li 接種在p H 值為7. 2的培養(yǎng)基中。F eri n i 20等將證實(shí)性溶液(Pase , Paba , M gS O 4 作為二次篩選試驗(yàn)的必要條件引入試驗(yàn), 同時(shí)將分析薄膜插入樣品和瓊脂表面之間放置溶菌酶的反應(yīng)以減少假陽(yáng)性的結(jié)果。具體操作如下:將解凍的樣品用小刀切成直徑8mm &2mm 厚的薄片, 在所有的平皿(除去第3塊板 中置2片樣品, 其中1片樣品滴加20 l 相應(yīng)的中和溶液, 在第3塊板置4片樣品, 在其中的3片樣品

31、上分別滴加Pase , Paba , M gS O 4, 將一片方形纖維分析膜(20mm &20mm 插入組織薄片和瓊脂表面之間。14平板在30%, 平板5和6在37%培養(yǎng), 這個(gè)實(shí)驗(yàn)整個(gè)過(guò)程僅需18h 。6. 3 D e l vo test 法(SP 法 原理是利用嗜熱芽孢菌64%培養(yǎng)后產(chǎn)酸引起指示劑BCP (即溴甲酚紫 變黃, 如果抑制劑不變色, 說(shuō)明抗生素抑制嗜熱芽孢菌生長(zhǎng), 存在抗生素殘留, 反之變黃色。A lthaus 等21于2003年用D e l vo test 光度法對(duì)牛乳中的抗生素的限值檢測(cè)研究表明, 內(nèi)酰胺類、磺胺類等抗生素的檢出限與M RL 水平相當(dāng), 而針對(duì)牛乳

32、中氨基苷類、四環(huán)素類、鏈霉素、氯霉素和三甲氨芐嘧啶殘留的檢測(cè)靈敏度有待提高, 建議用不同類型的微生物建立聯(lián)合殘留物檢測(cè)系統(tǒng)以檢出不同類型的抗生素。6. 4 BY 法 也稱藍(lán)黃檢測(cè)法, 通過(guò)顏色的對(duì)比判斷陽(yáng)性、陰性, 從而檢測(cè)乳制品中抗生素的殘留。L i nage 等22通過(guò)這種方法對(duì) 內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類等25種抗生素進(jìn)行了檢測(cè), 其檢測(cè)限與歐盟規(guī)定的檢測(cè)限很接近。此法操作簡(jiǎn)單, 耗時(shí)短, 檢測(cè)種類多; 但是誤差大, 容易漏檢。6. 5 P rem i T est 此法可用安瓿制成商業(yè)化培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。將絞碎的新鮮肉20g 用25000r /min 離心10m i n 制成肉浸液,

33、將100 l 上清液加入瓊脂表面, 在室溫下20m i n 預(yù)培養(yǎng)后, 加至安瓿中64%培養(yǎng)至陰性對(duì)照出現(xiàn)黃色為止, 大約需要3h 23。近年來(lái)的研究表明, P rem i T est 針對(duì)四環(huán)素、磺胺類藥物、喹啉類、鏈霉素缺乏靈敏度, 用此法可檢出較低水平的青霉素, 對(duì)氯霉素不夠敏感24。較FA S T 相比, Pre m i T est 的假陽(yáng)性率較高, 新霉素用FAST 檢測(cè)有較好的靈敏度, 且對(duì)于腎液樣品均不能檢測(cè)小于5ng /ml 的濃度25。6. 6 NAT (N ou w s anti b i o ti c test 法 用5塊平板進(jìn)行篩選, 將腎盂液接種在紙片上進(jìn)行檢測(cè), 同時(shí)

34、用肉浸液和腎臟浸液作為陽(yáng)性對(duì)照, 5塊平板分別為:B . cerues ATCC1178針對(duì)四環(huán)素, K ocur ia rhizoph ila AT CC9341針對(duì) 內(nèi)酰胺類和大環(huán)內(nèi)酯類, Y ersi n i a rucker iN CI M 13282特異性針對(duì)喹啉類, Bacill us pu m ilus CN 607針對(duì)磺胺類和二氨基嘧啶, Bac ill us subtilis BGA 針對(duì)氨基苷類。方法是將腎從腎的背部邊際向腎盂切割, 然后將紙片插入并快速涂抹切割面, 在0. 5h 的吸收后, 置于事先準(zhǔn)備好的5塊平板上, 隔夜培養(yǎng), 大于15mm 判定為陽(yáng)性。陽(yáng)性的樣品再用

35、肉浸液和腎臟浸液進(jìn)行陽(yáng)性篩選。與P re m i T est 比較26, S TAR 和NAT 法更適用于實(shí)驗(yàn)室, 并需要多一些的培養(yǎng)時(shí)間和不止一種的指示菌, 但是可檢測(cè)4種M RL, 而P rem i T est 不能夠縮小, 入1060職業(yè)與健康 2010年5月第26卷第9期 O ccup and H ealt h Vo. l 26No . 9M ay 2010Practi ca l eval ucati on. T ij d schr d i egeneeskd , 1988, 113:254-259. 11Korsrud GO, Boison J O. Bact eri al I nh

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48、改進(jìn), 在營(yíng)養(yǎng)瓊脂中加入p H 酸性指示劑, 改進(jìn)后的假陽(yáng)性率和假陰性率均小于5%; P ikk m aat 等28認(rèn)為此法可用于半定量, 同時(shí)針對(duì)多種抗生素殘留的樣品可用于其他方法(如P rem i T est 的補(bǔ)充, 用其針對(duì)喹啉類藥物殘留進(jìn)行檢測(cè)。7 展望隨著科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展, 當(dāng)今許多成就致力于發(fā)展液相色譜和氣-質(zhì)聯(lián)用等證實(shí)性方法。但是, 我們應(yīng)該認(rèn)識(shí)到快速監(jiān)測(cè)屠宰場(chǎng)動(dòng)物的篩選方法還是依靠微生物法檢測(cè)抗生素殘留來(lái)實(shí)現(xiàn), 傳統(tǒng)的檢測(cè)方法在食源性食品的抗生素檢測(cè)的過(guò)程中仍然起著很大作用。綜上所述, 食品中抗生素殘留問(wèn)題因涉及人們健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題而越來(lái)越引起各國(guó)重視, 建立健全適合本國(guó)

49、的檢驗(yàn)檢測(cè)方法, 尋求能夠簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地檢出微量的殘留的方法, 盡可能地減少其對(duì)人類的危害, 是我們檢驗(yàn)工作的重中之重。目前, 各類方法的發(fā)展已日趨成熟, 關(guān)鍵是如何在實(shí)際工作中充分發(fā)揮作用, 提高各環(huán)節(jié)人員的意識(shí)水平, 給食品一個(gè)安全、放心的環(huán)境。8 參考文獻(xiàn)1Van dan Bogoard AE, Stoobbri ng EE. E pide m iol ogy of resistance t o an tibiotics . L i nk bet w een an i m al s and hum an s . 2000, 14:327-335.2Ok er m an L , C roubels S ,