液相色譜維護基礎(chǔ)知識

1、11Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited島津公司（大連）綜合技術(shù)交流會島津公司（大連）綜合技術(shù)交流會2013年12月18日 22Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited內(nèi)容介紹內(nèi)容介紹時間時間內(nèi)容內(nèi)容負責(zé)人負責(zé)人8:30-9:008:30-9:00簽到簽到9:00-9:109:00-9:10開場致辭開場致辭 內(nèi)容介紹內(nèi)容介紹陳有新陳有新9:10-10:009:10-10:00氣相色譜基礎(chǔ)理論及氣相色譜分析方法改善氣相色譜基礎(chǔ)理論及氣相色譜分析方法改善王妍王妍1

2、0:05-10:1510:05-10:15休息休息 茶歇茶歇 抽獎抽獎10:15-10:4510:15-10:45氣相色譜柱的維護與選擇氣相色譜柱的維護與選擇鄒敏鄒敏10:45-11:3010:45-11:30液相色譜柱實用技術(shù)液相色譜柱實用技術(shù) 及液相色譜維護保養(yǎng)及液相色譜維護保養(yǎng)陳有新陳有新11:30-11:5011:30-11:50島津公司最新島津公司最新UFMSUFMS產(chǎn)品介紹產(chǎn)品介紹陳有新陳有新11:50-12:0011:50-12:00抽獎抽獎 答疑答疑郭志遠郭志遠12:00-13:3012:00-13:30精美中餐精美中餐中聯(lián)大酒中聯(lián)大酒店店33Shimadzu Internat

3、ional Trading (Shanghai) Co. Limited液相色譜實用技術(shù)液相色譜實用技術(shù)2013年12月17日 丹東44Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited內(nèi)容介紹 液相色譜基礎(chǔ)介紹液相色譜基礎(chǔ)介紹 液相色譜柱種類介紹液相色譜柱種類介紹 液相色譜柱常見問題解決液相色譜柱常見問題解決 液相色譜柱的保養(yǎng)液相色譜柱的保養(yǎng)55Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. LimitedHPLCHPLC工作流程圖工作流程圖66Shimadzu International T

4、rading (Shanghai) Co. Limited色譜柱色譜柱在一個圓筒型管子里，填裝細微顆粒的填料，是整個分析過在一個圓筒型管子里，填裝細微顆粒的填料，是整個分析過程的心臟。有各種類型的填料（分離模式），要根據(jù)分析的程的心臟。有各種類型的填料（分離模式），要根據(jù)分析的目的成分的不同，進行合理的選擇與使用。目的成分的不同，進行合理的選擇與使用。77Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limitedwww.shimadzu-www.shimadzu-色譜柱橫截面色譜柱橫截面（單位：單位：mmmm）HPLCHPLC色譜柱色譜柱 （一般

5、情況一般情況, 20, 20300mm300mm 1 14.6mmI.D.)4.6mmI.D.) （材質(zhì)材質(zhì)：SUSSUS、PEEKPEEK）填料填料（單位：單位：mm） 硅膠硅膠 聚合物聚合物擴大擴大擴大擴大無數(shù)的細孔無數(shù)的細孔（單位：單位：10nm10nm）官能基官能基色譜柱和填料色譜柱和填料788Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limitedwww.shimadzu-www.shimadzu-正相填料（固定相極性流動相極性）反相填料（固定相極性流動相極性）離子交換型填料尺寸排阻型填料其他不同填料對應(yīng)不同的分離模式用途不同的填料分

6、類用途不同的填料分類899Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited9液相色譜柱鍵合相選擇參考液相色譜柱鍵合相選擇參考名稱名稱 別名別名 功能基團功能基團 正相正相 反相反相 離子離子對對 應(yīng)用應(yīng)用 Silica -OH 極性和中等極性以及非離子性有機化合物極性和中等極性以及非離子性有機化合物 Btyl C4 -C4H9 分離肽和蛋白質(zhì)，保留時間比分離肽和蛋白質(zhì)，保留時間比C8和和C18短。短。 MOS C8,Octyl -C8H17 中等極性到強極性化合物，小肽和蛋白質(zhì)，極性藥物、甾族環(huán)境樣中等極性到強極性化合物，小肽和蛋白質(zhì)，

7、極性藥物、甾族環(huán)境樣品。品。 ODS C18 -C18H37 烷基鍵合相中對中等極性化合物保留最強。廣泛用于藥物、甾族化烷基鍵合相中對中等極性化合物保留最強。廣泛用于藥物、甾族化合物、脂肪酸和環(huán)境樣品。合物、脂肪酸和環(huán)境樣品。 CPS CN,Cyano (Propyl nitrile) -(CH2)3CN 對極性化合物有獨特的選擇性，適合正相分離；當(dāng)用于反相系統(tǒng)時，對極性化合物有獨特的選擇性，適合正相分離；當(dāng)用于反相系統(tǒng)時，其選擇性與其選擇性與C8和和C18不同。在藥學(xué)領(lǐng)域和復(fù)雜混合物的分離中應(yīng)用不同。在藥學(xué)領(lǐng)域和復(fù)雜混合物的分離中應(yīng)用廣泛。廣泛。 APS NH2 (Amino propy)

8、-(CH2)3NH2 反相中分析糖類和其他極性化合物；弱陰離子交換分析，陰離子和反相中分析糖類和其他極性化合物；弱陰離子交換分析，陰離子和有機酸則應(yīng)用緩沖劑和有機改性劑做流動相；正相中與硅膠的選擇有機酸則應(yīng)用緩沖劑和有機改性劑做流動相；正相中與硅膠的選擇性不同。性不同。 Phenyl -(CH2)3C6H5 苯環(huán)及芳香族化合物苯環(huán)及芳香族化合物 Diol -(CH2)3OCH2CHOHCH2OH 反相時，分離肽和蛋白質(zhì)。正相時，與硅膠選擇性相似，但極性較反相時，分離肽和蛋白質(zhì)。正相時，與硅膠選擇性相似，但極性較弱弱 SCX 強陽離子次換強陽離子次換 -(CH2)2C6H4 SO3H- 有機堿有

9、機堿 SAX 強陰離子交換強陰離子交換 -(CH2)3N+（(CH3)3 有機酸、核苷和核苷酸有機酸、核苷和核苷酸 1010Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited色譜柱常見問題解決色譜柱常見問題解決1111Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited色譜柱是液相色譜儀的心臟 現(xiàn)代高效液相色譜中, 分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇.但是色譜填料的選擇范圍很寬,要做合適的選擇,必須對此有一定的認識和了解。不要總是首先埋怨色譜柱不要總是首先埋怨色譜柱!1212S

10、himadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited 3.1.1 3.1.1 譜峰分叉譜峰分叉 首先判斷柱頭是否柱頭塌陷? (按色譜柱評價報告的條件評價色譜柱)色譜柱使用過程中易出現(xiàn)的問題及解決辦法1313Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited修補前后現(xiàn)象 1414Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited原因原因: : a.柱頭塌陷 b.柱外死體積 c.柱頭填料污染 d.進樣閥密封問題 e.樣品分解 f.色譜柱

11、填充不實 g.色譜柱受到強烈振動1515Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited 樣品分解1616Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited解決辦法：解決辦法： a.流動相含鹽時,沖洗系統(tǒng)要用20%的甲醇水，不要用純水沖柱,修補色譜柱；b.檢查進樣閥色譜柱檢測器的管路連接有無死體積,更換密封環(huán)(刃環(huán))； c.嚴格過濾流動相和樣品,修補色譜柱； d.檢修進樣閥。 1717Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Lim

12、ited3.1.2 柱壓過高不要認為壓力高就是色譜柱的問題不要認為壓力高就是色譜柱的問題首先判斷是否是色譜系統(tǒng)管路阻塞首先判斷是否是色譜系統(tǒng)管路阻塞? ?方法:(分段檢查泵在線過濾器進樣閥色譜柱檢測器排液管)1818Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited原因原因: a. 在線過濾器阻塞 b. 進樣閥定量管阻塞 c. 管路阻塞 d. 保護柱阻塞 e. 壓力傳感器不準(zhǔn)確 f. 泵流量偏大 e. 色譜柱的問題1919Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited色譜柱問題色

13、譜柱問題 微粒堵塞流動相改變造成粘度變化柱床膨脹樣品在色譜柱上不可逆吸附細菌滋生聯(lián)系色譜柱生產(chǎn)廠家尋求幫助。聯(lián)系色譜柱生產(chǎn)廠家尋求幫助。 2020Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.3 重復(fù)性差實驗的重復(fù)性差實驗的重復(fù)性差色譜柱被污染流動相pH值及組成不合適造成鍵合相流失，如通常的硅膠基質(zhì)色譜柱在堿性條件下使用樣品溶劑不同或樣品本身不穩(wěn)定進樣技術(shù)問題2121Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited原因：原因：色譜柱被污染官能團坍塌色譜柱內(nèi)的死體積流動相

14、pH值及組成不合適造成固定相流失流速急劇變化造成固定相物理損壞機械震動造成固定相產(chǎn)生裂縫柱床收縮或干涸3.1.4 柱效降低2222Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.5 鬼峰或假峰進樣閥或注射器污染樣品溶劑與流動相不同樣品中有空氣流動相中雜質(zhì)引起20%到100%甲醇梯度2323Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.6 柱外效應(yīng)小于3mm內(nèi)徑的色譜柱進樣閥和色譜柱、色譜柱和檢測器之間用短的細內(nèi)徑的連接管用無死體積接頭用較小體積的檢測池進樣體積減

15、小2424Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.7 色譜峰分裂柱外死體積柱頭填料污染部分阻塞進樣閥密封問題化合物一起洗脫2525Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.8 色譜峰展寬所有的色譜峰展寬所有的色譜峰展寬柱效降低進樣體積太大部分色譜峰展寬部分色譜峰展寬上次進樣洗脫的色譜峰蛋白或聚合物等高分子量化合物2626Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.9 色譜峰拖尾部分

16、色譜峰拖尾部分色譜峰拖尾次級保留效應(yīng)次級保留效應(yīng)殘留硅醇殘留硅醇基的作用基的作用在大峰的尾部有小峰在大峰的尾部有小峰所有色譜峰拖尾所有色譜峰拖尾柱外效應(yīng)柱外效應(yīng)柱頭污染柱頭污染重金屬離子重金屬離子色譜柱填充不理想色譜柱填充不理想2727Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.10 峰前伸色譜柱沒有充分平衡在主峰前有小色譜峰流動相的溶劑強度低于溶解樣品的溶劑2828Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited 色譜柱篩板問題 強保留的樣品組分 色譜柱填充不良 壓

17、力影響 化學(xué)影響通常的硅膠基質(zhì)色譜柱，其通常的硅膠基質(zhì)色譜柱，其pHpH使用范圍為使用范圍為2 28 83.1.12 色譜柱壽命色譜柱作為消耗品具有一定的使用壽命，應(yīng)在日常使用過程中注意以上事項，盡量延長色譜柱的壽命。2929Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited養(yǎng)成良好的色譜實驗習(xí)慣拿到一根新色譜柱時，請先檢測柱效；拿到一根新色譜柱時，請先檢測柱效；保存新色譜柱所得結(jié)果及實驗條件；保存新色譜柱所得結(jié)果及實驗條件；定期檢測柱效。定期檢測柱效。2. 色譜柱的使用及保養(yǎng)色譜柱的使用及保養(yǎng)3030Shimadzu Internati

18、onal Trading (Shanghai) Co. Limited2.1 色譜柱的使用及操作流動相的轉(zhuǎn)換流動相的轉(zhuǎn)換 特別是正、反相互換，及使用GPC柱溫度的變化溫度的變化 常規(guī)色譜柱溫度不超過60流速流速( (壓力壓力) )的變化幅度的變化幅度 避免流速(壓力)突然變化特殊色譜柱特殊色譜柱 樣品及溶劑的要求樣品及溶劑的要求切記拿到一支新色譜柱時， 一定要先看其使用說明！3131Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited2.2 色譜柱的保養(yǎng)流動相流動相樣樣 品品其它方面其它方面3232Shimadzu Internationa

19、l Trading (Shanghai) Co. Limited流動相：流動相：使用色譜純?nèi)軇⑴c填料相匹配超純水或二次蒸餾水若使用緩沖液作流動相緩沖液的pH值，在填料的允許范圍內(nèi)緩沖液(鹽)的濃度緩沖鹽過濾流動相對樣品的溶解度流動相對樣品的溶解度3333Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited樣品：樣品：除去樣品中的微粒及雜質(zhì)除去樣品中的微粒及雜質(zhì) SPE或過濾等方法了解樣品在流動相中的溶解度了解樣品在流動相中的溶解度 如樣品溶劑不是流動相，一定要用流動相試溶解度，防止其在流動相中析出了解樣品與色譜柱的基質(zhì)了解樣品與色譜柱的基質(zhì)/填料是否相互作用填料是否相互作用3434Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited其它方面在線過濾器在線過濾器 通常與儀器共同配置通常與儀器共同配置 防止流動相中的顆粒進入管路或色譜柱中防止流動相中的顆粒進入管路或色譜柱中使用保護柱使用保護柱 防止色譜柱被污染3535Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited2.3 色譜柱的清洗再生根據(jù)廠