上?？迫AHBsAgELISA兩步法

1、 醫(yī)院檢驗科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號： 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 頁，共頁1、 檢驗申請 單獨檢驗項目申請：乙型肝炎病毒表面抗原（縮寫HBsAg）測定；組合項目申請：肝炎標志物檢查組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2、 樣本采集與處理2.1 樣本采集 常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中，或采用含分離膠的真空采血管。也可采集血漿，用肝素、EDTA或枸櫞酸鹽抗凝。 檢驗申請單和血樣本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。 急診樣本采集后，在檢驗申請單上填寫樣本采集時間。 樣本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責樣本的接收并記錄樣

2、本的狀態(tài)，對不合格樣本予以拒收。 下列樣本為不合格樣本.1 樣本量不足：少于0.3ml的全血樣本，或少于0.1ml的血清或血漿。.2 對檢測結果可能有干擾的樣本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的樣本。.3 無法確認樣本與申請單對應關系的。.4 其他如標識涂改、樣本試管破裂等。2.2 樣本保存2.2.1接收樣本后放置1-2h后將樣本離心分離出血清或血漿，避免溶血。離心必須達到3000rpm 15min，離心后的血清中不能含有顆粒物和微量纖維蛋白。2.2.2 樣本保存時間：室溫（15-25）下可穩(wěn)定48h，普通冰箱中（2-8）穩(wěn)定7d，在-20最多可保存4周。避免反復凍融。不可使用熱滅活的樣本。2.2.3

3、已完成測試的樣本保持完整的識別號，置4-8冰箱內(nèi)保存7d。2.3 樣本采集的注意事項采血前使受檢者保持平靜、松弛，避免劇烈活動。 醫(yī)院檢驗科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號： 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 頁，共頁3 檢驗原理本試劑盒采用抗-HBs包被反應板，加入待測樣本，經(jīng)孵育后，加入抗-HBs-HRP，當樣本中存在HBsAg時，該HBsAg與包被抗-HBs結合并與抗-HBs-HRP結合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP復合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應，反之則無顯色反應。4試劑及其他用品4.1試劑：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（上

4、?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)），試劑盒藥品批準文號：國藥準字S10910114(48人份)； 國藥準字S10910113(96人份)。未打開的試劑盒保存于2-8，不可凍存。開啟的包被反應板放入干燥劑密封后在2-8保存并盡快使用。4.2 試劑盒組分微孔反應板 HBsAg陰性對照HBsAg陽性對照 酶結合物顯色劑A 顯色劑 B 終止液 洗滌液 （ 蒸餾水1：25稀釋）封片紙 說明書 4.3 其他試劑及用品 加液器： 型號。離心機： 型號。溫箱（或水浴箱）： 型號。洗板機： 型號。 酶標儀： 型號。5 室內(nèi)質控與室內(nèi)質控規(guī)則5.1 質控品：采用衛(wèi)生部臨床檢驗中心臨床免疫室或其他單位提供的免疫質控血

5、清，濃度 IU/ml。 醫(yī)院檢驗科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號： 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 頁，共頁5.2 質控品重建方法：采購來的質控品按每周用量分裝-20凍存，復融后充分顛倒混勻。5.3 質控品測定：在每一次（板）樣本中測定質控血清。5.4 質控規(guī)則：繪制質控圖，求出SD和CV值。6檢測步驟（1） 洗滌液配制： 將濃縮洗滌液用蒸餾水（或去離子水）作1：25稀釋。（2） 加樣 加入75微升待測樣本和陰、陽性對照于反應孔中（共預留陰性對照3孔、陽性對照1孔、建議預留空白對照1孔。），用封片紙覆蓋反應板后，將反應板置37孵育60分鐘。（3）

6、取出反應板，撕去封片，在已加入待測樣本和陰、陽性對照的孔中加入50微升酶結合物；在微孔震蕩器上震蕩10秒鐘，或手工輕輕震蕩10秒鐘; 用封片紙覆蓋反應板后，將反應板置37孵育30分鐘。（4） 洗板手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置30-60秒，甩干，重復5次后，在干凈的吸水紙上拍干。洗板機洗板：采用 洗板機洗板，選擇洗滌5次程序，用配置的工作濃度洗滌液注滿每孔，每次工作濃度洗滌液在反應微孔中的停留時間為30-60秒，并確保每次吸凈無殘留，洗完后在干凈的吸水紙上拍干。（5） 顯色每孔加顯色劑A液、B液各50微升，充分混勻后封板，置37孵育30分鐘。（6） 終止每孔加入50微升終止液，

7、震蕩反應板5秒鐘，使之充分混勻。 醫(yī)院檢驗科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號： 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 頁，共頁（7） 比色使用 酶標儀，波長450nm。（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm或630nm相近的波長。）若需扣除顯色劑空白，則先用顯色劑空白對照孔校零，然后讀取各孔OD值。7結果判斷 Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值 +0.100當S/COV1.0，說明該待測樣本HBsAg結果為陽性。當S/COV1.0，說明該待測樣本HBsAg結果為陰性。8檢驗結果的報告及范圍8.1 結果的報告8.1.1 結果經(jīng)審核后，確

8、認準確無誤后發(fā)出報告。8.1.2 報告單上標明結果的參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的信息。8.1.3 如收到樣本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。8.2臨界值：對臨界值樣本或陽性樣本再以雙孔重復試驗確定它的結果。如果重復檢測都是臨界性結果的樣本建議對其進行跟蹤檢測。9操作性能9.1從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒需平衡至室溫后方可使用，余者應按前述方法保存和使用。在平衡試劑的同時，待測樣本需平衡至室溫后再行測試。9.2 使用前試劑應搖勻。9.3 顯色過程必須封片。所有封片紙不能重復使用。9.4 結果判斷須在反應終止后10分鐘內(nèi)完成。9.5 不同批號的試劑不可

9、混用。9.6 洗板機洗板時應時常檢查加液頭，確保其暢通無堵塞；洗板時所用的吸水紙請勿反復使用。洗板機的管路用純化水沖洗，以防堵塞和腐蝕。 醫(yī)院檢驗科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號： 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 頁，共頁9.7 待測樣本不可用NaN3防腐。9.8 本試劑盒應視為有傳染性物質，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。10參考范圍及醫(yī)學決定水平陰性結果：提示沒有檢測到與乙型肝炎病毒感染相關的HBsAg濃度水平。11臨床意義11.1乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病，據(jù)估計全球范圍內(nèi)目前大約有3億乙型肝炎病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝臟疾病，流行病學研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。11.2感染乙型肝炎病毒后，機體會產(chǎn)生各種不同模式的抗原、抗體血清學免疫應答反應。通過監(jiān)測這些標志物，不僅可以診斷感染，而且還可以判斷疾病的進程和預后。HBsAg是HBV感染后第一個出現(xiàn)的標志物，是提示血清有潛在傳染性的最好的間接指標。12結果審核以及分析與相關項目的聯(lián)系12.1由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。12.2審核者認真審核每一個測定結果，對發(fā)出報告結果的可