種子活力測定

1、種子活力測定第1頁，共18頁。實驗目的 了解測定種子活力和發(fā)芽率的方法。第2頁，共18頁。溴麝香草酚蘭法（溴麝香草酚蘭法（BTB法）法） 實驗原理：凡活細胞必有呼吸作用，吸收空氣中的O2,放出CO2, CO2溶于水成為H2CO3。H2CO3解離為H+和HCO3_,使得種胚周圍環(huán)境的酸度增加。用溴麝香草酚蘭（BTB）來測定酸度的改變。BTB的變色范圍為PH6.07.6,酸性呈黃色，堿性呈藍色中間經過綠色（變色點為H7.1）。色澤差異顯著，易于觀察。 第3頁，共18頁。材料：小麥種子儀器：恒溫箱、培養(yǎng)皿、天平、燒杯、鑷子、漏斗、濾紙試劑：0.1%BTB溶液：稱取BTB0.1g,溶解于煮沸過的自來水

2、中（因配置指示劑的應為微堿性，使溶液呈藍色或藍綠色，而蒸餾水為微酸性不宜用），然后用濾紙去殘渣。濾液若呈黃色，可加數滴稀氨水，使之變?yōu)樗{色或藍綠色。此液可長時期貯存于棕色瓶中。第4頁，共18頁。1%BTB瓊脂凝膠：取0.1%BTB溶液100ml至于燒瓶中，另將1g瓊脂剪碎后加入，用小火加熱并不斷攪拌。待瓊脂完全溶解后，趁熱倒入數個干凈的培養(yǎng)皿中，使成為一均勻的薄層冷卻后備用。 第5頁，共18頁。方法與步驟：方法與步驟：1、 浸種：為了增強種胚的呼吸強度，使BTB反應迅速而鮮明,必須預先充分浸種。取小麥種子50粒，在3050oC條件下，浸種35小時，第6頁，共18頁。2、 播種：將充分吸脹的種子

3、整齊排列于培養(yǎng)皿的中央。種子的間距應大些，使各種子的胚部相互離開（直徑10厘米的培養(yǎng)皿不宜超過50粒）。務必使種子的胚部都向下，腹溝向上，當凝膠溫度降至40oC時，沿玻棒仔細倒入各種子之間，成一均勻薄層（0.2-0.4cm為宜），使種胚埋沒與膠層之中。第7頁，共18頁。3、 觀察及計數：將培養(yǎng)皿放于3050oC條件下小麥1-2小時，就可對光觀察，并初次計數。（觀察時要從透射光下看）。在藍色背景下，凡局限于種胚附近，出現較深的黃暈色圈的是活種子，無黃暈色圈的可能是死種子。結果計數。4、 用沸水殺死吸漲的種子，與正常種子進行對比觀察，方法同上。5、 BTB計數后，可將小麥種子種胚翻轉向上，數日后，

4、測定其真實發(fā)芽率。 第8頁，共18頁。第9頁，共18頁。紅墨水染色法紅墨水染色法 原理：原理：凡生活細胞的原生質膜具選擇性吸收能力，而死的種子細胞原生質膜喪失這種能力，于是染料便進入死細胞而使胚著色。 第10頁，共18頁。儀器、材料與試劑：儀器、材料與試劑：培養(yǎng)皿、鑷子、刀片、5%紅墨水（紅墨水5ml+95ml自來水）、玉米種子。 第11頁，共18頁。方法與步驟：方法與步驟： 1、 浸種：（同BTB法）2、 染色：取已吸脹的種子200粒，沿胚和中線切為兩半，將一半置于培養(yǎng)皿中，加入5%紅墨水（以淹沒種子為度），染色5-10分鐘，（溫度高時時間可短些）。染色后，倒去紅墨水液，用水沖洗多次，至沖洗

5、液為無色止。檢查種子死活。結果凡種胚不著色或著色很淺的為活種子，凡種胚與胚乳著色程度相同的為死種子。可用沸水殺死的種子為對照觀察。3、 計數種胚不著色或著色淺的種子數，算出其發(fā)芽率。 第12頁，共18頁?；罘N子活種子死種子死種子第13頁，共18頁。紙上熒光法紙上熒光法 原理：原理：凡有生活力的種子和已經死亡的種子，它們的種皮對物質的透性是不同的，而許多植物的種子中又都含有熒光物質。利用對熒光物質的不同透性來區(qū)分種子的死活，方法簡單，特別是對十字花科植物的種子，尤為適用。 第14頁，共18頁。儀器、材料與試劑：儀器、材料與試劑：紫外分析儀、培養(yǎng)皿、鑷子、濾紙（無熒光）、油菜種子。第15頁，共18頁。方法與步驟：方法與步驟：1、 將完整無損的種子（油菜、白菜等十字花科植物的種子）100粒，于2530oC水中浸泡2-3小時。2、 把已吸脹的種子，以3-5mm間隔整齊的排列在培養(yǎng)皿中的濕潤濾紙上，濾紙上水分不能太多，以免熒光物質流散。培養(yǎng)皿可以不必加蓋，放置1.5-2小時取出種子，將濾紙陰干。取出的種子仍按原來順序排列在另一皿中（以備驗證） 第16頁，共18頁。3、 將濾紙置于紫外分析儀下進行觀察，觀察如能在暗室中進行，效果更好。4、 結果：有的放過種子的位置上可見一熒