非洲豬瘟病毒快速檢測技術學習總結.非洲豬瘟病毒快速檢測技術學習總結

1、部部 門門: :品管部品管部 報告人報告人: :日日 期期: 17: 17 MAR 2019 MAR 2019敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務

2、實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效臨床特點臨床特點1 1：1 1、特征、特征- -突然死亡突然死亡2 2、以特急性和急性為主、以特急性和急性為主3 3、所有年齡和性別都可能受到影響、所有年齡和性別都可能受到影響4 4、傳染性相當低、傳染性相當低- -發(fā)病率不定發(fā)病率不定5 5、耳、四肢和腹部發(fā)紅至發(fā)紺、耳、四肢和腹部發(fā)紅至發(fā)紺6 6、血腥腹瀉、血腥腹瀉7 7、經常性流產、經常性流產8 8、高熱、出血為主要表現癥狀、高熱、出血為主要表現癥狀敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效臨床特點臨床特點2 2：1 1、脾臟異常腫大

3、、呈紫黑色、質地變脆、易碎、脾臟異常腫大、呈紫黑色、質地變脆、易碎2 2、胃、肝臟、腎臟、腸系膜等淋巴結出血、水腫、質地柔軟、胃、肝臟、腎臟、腸系膜等淋巴結出血、水腫、質地柔軟、包膜緊張包膜緊張敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效消消毒劑種類毒劑種類優(yōu)點優(yōu)點缺點缺點適用范圍適用范圍過氧化物過氧化物作用速度快適用于病毒和細菌具有刺激性預防病毒性疫病、水線消毒、欄舍熏蒸氯化物氯化物起效速度快對病毒和細菌均有效價格低廉具有腐蝕性、遇有機物和硬水失活、持續(xù)效果短、具有刺激性欄舍熏蒸環(huán)境消毒苯酚苯酚活性維持時間長、對金屬無腐

4、蝕性、對病毒和細菌效果好、價格低廉具有毒性、腐蝕橡膠塑料、可能環(huán)境污染水泥地面碘制劑碘制劑安全性高、無毒無味、起效速度快、適用于病毒和細菌價格較貴某些碘制劑具有毒性預防病毒性疫病季銨鹽類季銨鹽類適用水線消毒、細菌消毒效果好、安全性高有機物存在失效、對真菌和芽孢效果不佳、不能和清潔劑混用洗手、水線消毒醛類醛類對病毒和細菌均有效可能具有毒性水泥地面、車輪浸泡堿類堿類起效速度快、對病毒和細菌均有效價格低廉可能具有毒性水泥地面車輪浸泡敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效 靈敏度高，特異性強，對生物學樣本有極強的分辨能力靈敏

5、度高，特異性強，對生物學樣本有極強的分辨能力 醫(yī)療、疾控等多個領域用于確診傳染病的方法醫(yī)療、疾控等多個領域用于確診傳染病的方法檢測方法靈敏度(cfu/mL)檢測時間免疫學方法膠體金100,00015分鐘ELISA10,00090-180分鐘顯微鏡檢驗10,0005-120分鐘核酸檢測(qPCR)1-100小于60分鐘病原體培養(yǎng)1-108-20小時敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效u主機u配件微量移液器 配制反應液 耗材：槍頭金屬浴 暫時保存反應液 樣品前處理 溫控：0-100Mini8 Cube及電腦8樣品孔兩通

6、道：FAM/ROX無需預熱免校準、免維護220V/12V(車載供電）移動電源供電130瓦時可使用4小時支持兩輪實驗手持研磨器固體樣品處理耗材：研磨頭雙電單充迷你離心機樣品前處理配制反應液TS：5000rpm敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效uMini8Mini8 Cube系統(tǒng) 小巧，機動 供電方式靈活 免校準，免維護 軟件友好，操作簡單 人醫(yī)標準：CFDA三類醫(yī)療器械注冊證敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效試劑盒特點：免核酸提取試劑盒特點：免核酸提取1. 操作簡單2. 快速3. 無需專門實驗室4. 結果更準確5. 試劑開放敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實

7、務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效【用法用法】 1. 1. 適用樣本類型適用樣本類型 本試劑盒適用于豬口鼻眼拭子、組織和血液本試劑盒適用于豬口鼻眼拭子、組織和血液或血清等樣本中非洲豬瘟病毒的核酸檢或血清等樣本中非洲豬瘟病毒的核酸檢 測。測。 2. 2. 樣本采集樣本采集 2.1 2.1 口鼻眼口鼻眼拭子樣本的采集：拭子樣本的采集： 采集患病豬口鼻眼拭子樣本，用專用采樣棉簽，適度采集患病豬口鼻眼拭子樣本，用專用采樣棉簽，適度拭抹口腔分泌物和鼻腔分泌物，拭抹口腔分泌物和鼻腔分泌物， 眼分泌物要用拭子在眼瞼下充分擦拭，眼分泌物要用拭子在眼瞼下充分擦拭，迅速將棉簽放入裝有迅速將棉簽放入裝有400400

8、L L樣本稀釋液的采樣本稀釋液的采 樣管中，在靠近頂端處折斷樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥。拭子采樣以溶解棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥。拭子采樣以溶解 到樣本稀釋液中到樣本稀釋液中可以看到組織懸浮物為最佳?？梢钥吹浇M織懸浮物為最佳。 2.2 2.2 組織樣本的采集：組織樣本的采集： 無菌采集病豬組織無菌采集病豬組織樣本約樣本約0.1g0.1g，置于，置于1.5mL 1.5mL 無菌離心管中。無菌離心管中。 2.3 2.3 全血樣本的采集：全血樣本的采集： 抽取抽取豬靜脈血豬靜脈血1mL1mL，置于含有適量抗凝劑的采血管中（抗凝劑建議采用，置于含有適量抗凝劑的采血管

9、中（抗凝劑建議采用EDTA EDTA 或或檸檸 檬酸三鈉，不應采用肝素）；檬酸三鈉，不應采用肝素）； 2.4 2.4 血清樣本的采集：血清樣本的采集： 抽取豬靜脈血抽取豬靜脈血1mL, 1mL, 注入無菌收集管中，室溫不超過注入無菌收集管中，室溫不超過4 4小時（約小時（約30-6030-60分鐘），待樣分鐘），待樣 本本自行析出血清，或直接自行析出血清，或直接1600rpm1600rpm離心離心5 5分鐘分離出血清，轉移至新的滅菌離分鐘分離出血清，轉移至新的滅菌離心管心管 敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效【操作程序操作程序】 1. 1. 擴增試劑準備擴增試劑準備 從

10、試劑盒中取出從試劑盒中取出ASFV-PCRASFV-PCR反應液、反應液、ASFV-ASFV-陰性對照品和陰性對照品和ASFV-ASFV-陽性對照品，待所陽性對照品，待所 有組分完全溶解后，振蕩混勻有組分完全溶解后，振蕩混勻5 5秒，瞬時離心秒，瞬時離心5 5秒。秒。 2. 2. 樣本處理樣本處理 2.1 2.1 口鼻眼拭子樣本處理：口鼻眼拭子樣本處理： 無需樣本處理，即可直接上樣。無需樣本處理，即可直接上樣。 2.2 2.2 組織樣本處理：組織樣本處理： 取約取約黃豆粒大小組織樣本（約黃豆粒大小組織樣本（約0.1g0.1g）置于無菌）置于無菌1.5mL1.5mL離心管中，加入離心管中，加入2

11、00200L L樣本稀樣本稀 釋液，使用釋液，使用手持式組織研磨儀充分研磨至勻漿。另取出一個新的無菌手持式組織研磨儀充分研磨至勻漿。另取出一個新的無菌 1.5mL 1.5mL 離心離心 管，加入管，加入3030L L組組織樣本裂解液，再加入織樣本裂解液，再加入3030L L組織勻漿液，渦旋混勻，置于組織勻漿液，渦旋混勻，置于9595加加 熱熱5min5min后，后，12000rpm12000rpm離離心心2min2min，吸取上清液，吸取上清液5 5L L上樣。上樣。 2.3 2.3 血液樣本處理：血液樣本處理： 全血樣本處理：經樣本稀釋液稀釋全血樣本處理：經樣本稀釋液稀釋1010倍后，即可直

12、接上樣；倍后，即可直接上樣； 血清樣本處理：經樣本稀釋液稀釋血清樣本處理：經樣本稀釋液稀釋5 5倍后，即可直接上樣。倍后，即可直接上樣。 3. 3. 加樣加樣 按下表體系，在按下表體系，在 0.2mL PCR 0.2mL PCR 管中配制反應液。試劑用畢后將剩余試劑立即放入管中配制反應液。試劑用畢后將剩余試劑立即放入-20 -20 55保存。保存。 成分成分 體積體積 ASFV-PCRASFV-PCR反應液反應液 2020L L 經預處理的樣本經預處理的樣本 5 5L L 總體積總體積 2525L L 3.1 3.1 在一個分裝有反應液的在一個分裝有反應液的PCRPCR反應管中加入反應管中加入

13、5 5L L的的ASFV-ASFV-陰性對照品；陰性對照品； 3.2 3.2 將步驟將步驟2.2.樣樣本處理中取得的待檢樣本充分震蕩混勻，然后按照本處理中取得的待檢樣本充分震蕩混勻，然后按照5 5L/L/樣本分別加樣本分別加 入分裝有反應液的入分裝有反應液的PCRPCR反應管中；反應管中； 3.3 3.3 在最后一個分裝有反應液的在最后一個分裝有反應液的PCRPCR反應管中加入反應管中加入5 5L L的的ASFV-ASFV-陽性對照品陽性對照品； 以上操作建議在冰浴條件下進行，操作完畢壓緊管蓋，瞬時離心。以上操作建議在冰浴條件下進行，操作完畢壓緊管蓋，瞬時離心。 注：使用卡尤迪生注：使用卡尤迪

14、生物科技物科技Mini8 Mini8 全系列熒光定量全系列熒光定量PCRPCR儀時，建議使用無色透明的儀時，建議使用無色透明的 0.2mL PCR 0.2mL PCR 管，切勿使用有管，切勿使用有顏色，磨砂的顏色，磨砂的PCRPCR管，因為該儀器熒光讀取方式為側管，因為該儀器熒光讀取方式為側 面激發(fā)和收集熒光信號。面激發(fā)和收集熒光信號。操作程序操作程序敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務實務實 專業(yè)專業(yè) 嚴謹嚴謹 高效高效【注意事項注意事項】 1. 1.開始檢測前請仔細閱讀本說明書，按要求操作。開始檢測前請仔細閱讀本說明書，按要求操作。 2. 2. 各各區(qū)物品均為專用，不得交叉使用，避免污染；實驗后立即清潔

15、工作臺。區(qū)物品均為專用，不得交叉使用，避免污染；實驗后立即清潔工作臺。 3. 3. 擴增產物的污染，很容易出現假陽性結果。因此，臨床實驗室應嚴格擴增產物的污染，很容易出現假陽性結果。因此，臨床實驗室應嚴格按照按照臨床臨床 基因擴增實驗室工作規(guī)范基因擴增實驗室工作規(guī)范配備設備及操作人員。配備設備及操作人員。 4. 4. 本試本試劑盒檢測結果僅供科研使用，對病豬的臨床診治應結合其癥狀劑盒檢測結果僅供科研使用，對病豬的臨床診治應結合其癥狀/ /體征，病體征，病史，史， 其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。 5. 5. 檢測為陰性，并檢測為陰性，并不代表為非感染狀態(tài)，具體診斷結果須結合其他臨床診斷結果判不代表為非感染狀態(tài)，具體診斷結果須結合其他臨床診斷結果判 斷。造斷。造成檢測為陰性的可能是：不合理樣本采集、轉運及處理、樣本中病毒成檢測為陰性的可能是：不合理樣本采集、轉運及處理、樣本中病毒濃度濃度 過低，未經驗證的其他干擾因素如：服用抗病毒藥物等。過低，未經