輸血前相容性試驗(yàn)

1、輸血前相容性試驗(yàn)輸血前相容性試驗(yàn)第一節(jié)第一節(jié) 重視血液標(biāo)本重視血液標(biāo)本一、血標(biāo)本采集要求（一）輸血申請(qǐng)單的正確書寫 必須包含足夠的信息以識(shí)別受血者身份的唯一性，大部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)都是使用受血者姓名及其身份證號(hào)碼（或住院號(hào)）。 當(dāng)輸血科（血庫）的技術(shù)人員在配血過程中遇到問題時(shí)，受血者的診斷、輸血史及妊娠史是非常有意義的。凡資料不全的輸血申請(qǐng)單，尤其是缺乏輸血史、妊娠史和無主治醫(yī)師簽名的，要退回臨床科室補(bǔ)上，不得遷就。 （二）受血者身份識(shí)別 1、采用標(biāo)有受血者全名和住院號(hào)的腕帶來識(shí)別受血者。 2、使用更安全的條形碼系統(tǒng)對(duì)受血者身份進(jìn)行識(shí)別。 在床邊完成采血和粘貼標(biāo)簽后，可用一個(gè)便攜式的條形碼掃描儀進(jìn)行

2、掃描，以確認(rèn)血標(biāo)本試管上的標(biāo)簽信息與受血者腕帶上的身份信息是否相符。 3、使用其他標(biāo)識(shí)方式。 受血者無法戴腕帶，比如大面積燒傷的患者、早產(chǎn)兒以及某些外科手術(shù)中的患者。有些醫(yī)療機(jī)構(gòu)就允許將患者的身份標(biāo)識(shí)符放在患者的踝關(guān)節(jié)或者前額，門診患者除了使用腕帶之外，也可以用駕駛證或其他含本人相片的身份信息來識(shí)別。（三）血標(biāo)本類型的選擇1選擇血清標(biāo)本的情況(1)試管法：血漿標(biāo)本中的纖維蛋白小凝塊可干擾檢測(cè)結(jié)果，而血清標(biāo)本可避免。(2)存在需激活補(bǔ)體才能反應(yīng)的抗體：血漿標(biāo)本因?yàn)槟承┛鼓齽┠茯镶}離子及鎂離子，阻斷補(bǔ)體激活途徑。2選擇血漿標(biāo)本的情況(1)凝血時(shí)間延長(zhǎng)或經(jīng)過肝素化的血液：這種血標(biāo)本可能發(fā)生不完全凝

3、血，如采用其血清進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果可能不準(zhǔn)確。因此，對(duì)于這種情況，可采集抗凝血標(biāo)本分離血漿進(jìn)行檢測(cè)。如要使用其血清，可在這些血標(biāo)本中加入凝血酶或加硫酸魚精蛋白中和肝素。(2)采用微柱凝膠技術(shù)：應(yīng)選擇血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。（四）血標(biāo)本采集部位的選擇1、不能在輸液部位的上段（近心端）靜脈穿刺采血，但可以在下段（遠(yuǎn)心端）采血，最好是在另一個(gè)肢體采血，以防止標(biāo)本稀釋。必須在輸液血管內(nèi)采血，應(yīng)去掉最初的510ml血液。2、新生兒應(yīng)取其臍帶的胎盤血；嬰幼兒采頸靜脈血；重癥休克患者可以采集股靜脈血或在深靜脈插管部位采血。（五）血標(biāo)本的質(zhì)量要求1血標(biāo)本標(biāo)識(shí)的要求(1)血標(biāo)本標(biāo)識(shí)與患者身份的一致性 (2)血標(biāo)本采集者

4、的標(biāo)識(shí)：采血者最好在血標(biāo)本管標(biāo)簽上簽名及記錄采血日期。 (3)血標(biāo)本的識(shí)別信息與輸血申請(qǐng)單上的信息應(yīng)一致2血標(biāo)本外觀的要求(1)避免使用溶血的血標(biāo)本：采集過程中引起的機(jī)械性溶血，應(yīng)當(dāng)重新采集?；颊叽_實(shí)存在血管內(nèi)溶血，而必須使用溶血的血標(biāo)本時(shí)，為了防止對(duì)溶血結(jié)果誤判建議使用的方法是：在反定型及交叉配血的紅細(xì)胞中加入適量EDTA鹽水溶液。由于EDTA能夠螫合補(bǔ)體激活所需的Mg2+和Ca2+，故可阻斷補(bǔ)體活化引起的紅細(xì)胞破壞，即溶血；另一種方法是在試驗(yàn)前后作溶血程度的比較。可用生理鹽水（或6%白蛋白）與患者的紅細(xì)胞混合為陰性對(duì)照，將患者血清與患者的細(xì)胞混合，反應(yīng)后離心，比較兩種細(xì)胞扣( cell b

5、utton)的大小，或者比較實(shí)驗(yàn)管與對(duì)照管的溶血程度，以證實(shí)是否有紅細(xì)胞破壞增加的可能性。(2)避免使用高脂血標(biāo)本：高脂血癥患者禁食12小時(shí)后重新采血。(3)其他要求：試管應(yīng)無破損和滲漏。（六）血標(biāo)本的采集時(shí)間要求1、普通患者 一般用3天內(nèi)的血標(biāo)本做交叉配血試驗(yàn)。2、特殊患者 (1)地中海貧血患者：在每3天一次抗篩及鑒定為陰性時(shí)，血標(biāo)本采集時(shí)間可適當(dāng)放寬。 (2)需要剖宮產(chǎn)的孕婦：免疫抗體產(chǎn)生最可能發(fā)生于最后3個(gè)月。故至少是7天之內(nèi)的標(biāo)本。但盡可能在輸血前采集血標(biāo)本，以利于在發(fā)生輸血不良反應(yīng)時(shí)進(jìn)行回顧性檢查。 (3)需輸注右旋糖酐的患者：右旋糖酐是大分子葡萄糖聚合物，會(huì)覆蓋于紅細(xì)胞膜上，使紅細(xì)

6、胞容易發(fā)生假凝集，應(yīng)在輸注前抽取血標(biāo)本備用。（七）血標(biāo)本采集量的要求1、推薦用EDTA.K2抗凝，血量3ml，抗體鑒定5ml。2、疑難交叉配血 要求送檢2管，一管抗凝，一管不抗凝，血量均 3ml。 綜上所述，對(duì)不符合要求的情況，可遵循血標(biāo)本“八不”接收原則：血標(biāo)本無標(biāo)簽或填寫不清不收；血標(biāo)本與輸血申請(qǐng)單所填項(xiàng)目不符不收；血標(biāo)本量少于3ml不收；血標(biāo)本被稀釋不收；血標(biāo)本溶血不收（溶血性疾病除外）；用肝素治療者的血標(biāo)本未經(jīng)魚精蛋白對(duì)抗使之凝血或未經(jīng)標(biāo)記說明不收；用右旋糖酐、羥乙基淀粉等大分子物質(zhì)治療后采集的血標(biāo)本未作標(biāo)記說明不收；非醫(yī)護(hù)人員或非授權(quán)人員送血標(biāo)本不收。二、血標(biāo)本保存的要求（一）全血標(biāo)

7、本的保存 在輸血后，受血者和獻(xiàn)血者的血標(biāo)本必須密封或?qū)⒃嚬苌w緊，在16保存7天。用于輸血反應(yīng)尤其是遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)（多發(fā)生于輸血后37天）查因。（二）血清或血漿標(biāo)本的保存 可將血標(biāo)本分離血清或血漿，置于-30保存，保存（因許多遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)在輸血后10天未必出現(xiàn)臨床表現(xiàn)）第二節(jié) 堅(jiān)持正反定型 正反定型起到互相驗(yàn)證和質(zhì)量控制的作用，只有正反定型結(jié)果相符才能正確判定ABO血型。除了出生4個(gè)月以內(nèi)的嬰兒和新生兒只做正定型之外，必須堅(jiān)持正反定型。其主要臨床意義有：1、易于發(fā)現(xiàn)和糾正血型鑒定錯(cuò)誤。2、有助于發(fā)現(xiàn)ABO亞型，因?yàn)閬喰突颊呒t細(xì)胞上A或B抗原可能很弱，例如將A2型誤判為A1型，如果這

8、種患者含有抗-A1，輸A型血（含A1抗原）便會(huì)發(fā)生急性溶血性輸血反應(yīng)。一、ABO血型的鑒定（一）對(duì)常規(guī)血標(biāo)本堅(jiān)持正反定型1、人類在出生4個(gè)月后抗體已經(jīng)形成，除了出生4個(gè)月以內(nèi)的嬰兒和新、生兒之外，常規(guī)檢測(cè)受血者和獻(xiàn)血者ABO血型必須正反定型, 并同時(shí)進(jìn)行自身對(duì)照和陰性對(duì)照。為了防止對(duì)溶血結(jié)果誤判, 用于配制反定型試劑紅細(xì)胞的稀釋液應(yīng)含有EDTA。2、方法選擇 不能用玻片法，可用試管法和微柱凝膠法。3、ABO正反定型不一致的原因(1)人為因素：操作中加錯(cuò)標(biāo)本或試劑；離心速度不夠或速度過快；細(xì)胞與血清比例不當(dāng)；結(jié)果判讀錯(cuò)誤等。 (2)客觀因素：因某種疾?。ㄈ绨籽。?dǎo)致抗原減弱，紅細(xì)胞發(fā)生多凝集現(xiàn)

9、象及產(chǎn)生類B物質(zhì)；抗體效價(jià)低，如嬰幼兒、老年人、低丙種球蛋白血癥等；存在不規(guī)則抗體；某些藥物干擾；試劑不標(biāo)準(zhǔn)、試劑失效或污染等。 4ABO正反定型不一致的處理 使用原始標(biāo)本重新配制紅細(xì)胞懸液，采用試管法和洗滌紅細(xì)胞重新檢測(cè)時(shí)，同時(shí)做自身對(duì)照。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果與以往記錄不一致時(shí)，應(yīng)重新采集血標(biāo)本再檢測(cè)一次。 5正反定型不相符時(shí)的輸血 獻(xiàn)血者正反定型不相符，該袋血不能發(fā)出使用；患者正反定型不相符，如遇緊急輸血搶救，可先輸O型紅細(xì)胞（但不能輸O型全血，因全血有近一半的血漿，可能導(dǎo)致溶血反應(yīng)），然后再查找原因。（二）對(duì)出生4個(gè)月內(nèi)的嬰兒及新生兒血標(biāo)本只做正定型二、RhD血型的鑒定 我國(guó)已規(guī)定常規(guī)血型鑒定還應(yīng)

10、包括RhD定型。三、疑難血型鑒定（一）ABO疑難血型的鑒定主要原因：某些慢性疾病致ABH抗原減弱或丟失；老年人、化療或與疾病有關(guān)的免疫抑制致天然抗體丟失。胃腸道腫瘤或梗阻患者出現(xiàn)過量可溶性ABH血型物質(zhì)。多發(fā)性骨髓瘤或其他異常蛋白血癥的患者或靜脈輸注高分子質(zhì)量的液體可形成緡錢狀紅細(xì)胞。高效價(jià)冷自身抗體、臍帶血標(biāo)本中的Wharton膠可引起紅細(xì)胞凝集。細(xì)菌酶、造血組織中體細(xì)胞的突變或遺傳性疾病形成多凝集紅細(xì)胞。多種細(xì)胞群或嵌合現(xiàn)象，如造血干細(xì)胞移植后、輸不同ABO血型的紅細(xì)胞、雙胎紅細(xì)胞生成組織的宮內(nèi)交換，引起混合視野凝集。有結(jié)腸癌或敗血癥病史的患者產(chǎn)生獲得性B抗原。紅細(xì)胞表面存在少量異型血型抗

11、原。存在A2亞型抗原，血漿中存在抗-A1或IgM型同種抗體，如抗-P1、抗-M和抗-Leb等。缺乏ABH抗原，含有抗-H、抗-A和抗-B的盂買表型或類盂買表型的存在等。 為了解決以上ABO疑難血型鑒定的問題，可根據(jù)不同的情況選擇延長(zhǎng)室溫孵育時(shí)間，降低孵育溫度，采用 吸收放散試驗(yàn)、洗滌技術(shù)、生理鹽水稀釋、鹽水替代、ABO血型基因分型、設(shè)自身對(duì)照，或觀察是否出現(xiàn)不同程度的混合視野凝集等方法來解決。（二）其他疑難血型的鑒定 存在自身抗體或異常血清蛋白時(shí)RhD血型的鑒定直接抗球蛋白試驗(yàn)強(qiáng)陽性的致敏紅細(xì)胞極易造成血型鑒定錯(cuò)誤，這些致敏紅細(xì)胞在高蛋白或高分子聚合物介質(zhì)中易發(fā)生自凝，可出現(xiàn)RhD陰性受血者被

12、錯(cuò)誤地鑒定為RhD陽性的情況。為了避免這種情況下血型鑒定的錯(cuò)誤，可采用放散或解離紅細(xì)胞上大多數(shù)自身抗體后再進(jìn)行RhD定型。常用的方法有：56水浴放散法、氯喹放散法、酸洗脫法。 四、緊急情況下ABO和RhD血型鑒定（一）緊急情況的定義 緊急情況是指沒有足夠的時(shí)間采用常規(guī)的方法進(jìn)行ABO血型和RhD血型定型。（二）緊急情況下的ABO和RhD血型鑒定 在緊急情況下進(jìn)行血型鑒定時(shí)，必須包括用抗-A、抗-B和抗-D，并設(shè)立適當(dāng)?shù)膶?duì)照或進(jìn)行反定型試驗(yàn)。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果顯示患者血型為AB型和RhD陽性時(shí)，必須非常小心。 因?yàn)閷?shí)驗(yàn)過程中沒有進(jìn)行嚴(yán)格的對(duì)照試驗(yàn)排除冷凝集等因素。緊急發(fā)血后，繼續(xù)按規(guī)范進(jìn)行ABO和RhD

13、血型鑒定，發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)糾正。 第三節(jié) 做好抗體篩選與鑒定 對(duì)于有輸血史、妊娠史、交叉配血不合或短期內(nèi)需要接受多次輸血者，應(yīng)對(duì)患者的血液進(jìn)行紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選試驗(yàn)，如果篩選結(jié)果為陽性，應(yīng)該讓臨床醫(yī)師知道可能要推遲提供所需的血液，同時(shí)要預(yù)留足夠的時(shí)間，讓技術(shù)人員鑒定抗體的特異性，選擇相合的血液。一、抗體篩選（一）紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選的原理 紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選的原理是用一套商品化的23個(gè)獻(xiàn)血者的O型紅細(xì)胞對(duì)受血者的血清或血漿進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，以篩查出在37有臨床意義的抗體。 每個(gè)篩選紅細(xì)胞的表型或抗原譜已經(jīng)被詳細(xì)篩選過，由23個(gè)人份的O型紅細(xì)胞組成一套試劑，要求盡可能包括更多的抗原，至少需要表達(dá)

14、下列18個(gè)抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P1、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb，而且以純合子基因所表達(dá)的抗原為佳，各組細(xì)胞抗原最好具有互補(bǔ)性。隨機(jī)獲得的O型紅細(xì)胞作為篩選紅細(xì)胞則難以達(dá)到上述要求，易造成漏檢。 （二）紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選的臨床意義 由于輸血或妊娠接觸外來的紅細(xì)胞抗原引起同種免疫產(chǎn)生的抗體通常稱為紅細(xì)胞同種抗體。紅細(xì)胞同種免疫患者中有20%產(chǎn)生多種同種抗體。有臨床意義的紅細(xì)胞同種抗體與溶血性輸血反應(yīng)有關(guān)。通過紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選，可檢出這些抗體。 （三）抗體篩選的基本技術(shù)1、間接抗球蛋白試驗(yàn)：最可靠的方法。(1)鹽水-間接抗球蛋白試驗(yàn)：由于需要較

15、長(zhǎng)的孵育時(shí)間, 一般不做為常規(guī)檢測(cè)方法。(2)白蛋白-間接抗球蛋白試驗(yàn)：可提高靈敏度，縮短孵育時(shí)間至30分鐘。(3)低離子強(qiáng)度溶液-間接抗球蛋白試驗(yàn)：孵育時(shí)間可縮短至10分鐘，是最合適的方法 (4)聚乙二醇-間接抗球蛋白試驗(yàn)：對(duì)IgM型抗體，尤其是ABO和Lewis系統(tǒng)中的IgM抗體呈弱反應(yīng)性，甚至無法被檢測(cè)出來，但能提高有臨床意義的IgG型抗體檢測(cè)的靈敏度。(5)酶-間接抗球蛋白試驗(yàn)：因?yàn)槊笗?huì)破壞某些紅細(xì)胞抗原，如M、N、S、Fya和Fyb，因此，酶法不作為常規(guī)使用方法。但是,酶法在Rh系統(tǒng)和Kidd系統(tǒng)的抗體鑒定中特別有用，經(jīng)常用來提高抗體鑒定靈敏度。 2、凝聚胺試驗(yàn) 是孵育時(shí)間最短的敏感

16、試驗(yàn)。能夠提高對(duì)RhD特異性抗體鑒定的靈敏度，但檢測(cè)抗Kell (K)抗體的靈敏度卻很低。3、凝膠法或微板法 可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化測(cè)試，減少實(shí)驗(yàn)室血標(biāo)本識(shí)別錯(cuò)誤。其中微柱凝膠法簡(jiǎn)單、有效，但無法排除無臨床意義抗體的干擾。（四）紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選的局限性1、低效價(jià)抗體的漏檢 近30%紅細(xì)胞同種抗體在產(chǎn)生后的5年內(nèi)仍然存在于體內(nèi)，有些抗體效價(jià)已降至難以檢出的水平，有可能被漏檢。在輸血后，漏檢的抗體會(huì)再次對(duì)獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞上的特異性抗原發(fā)生回憶反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。因此，即使抗篩陰性，也應(yīng)結(jié)合輸血史、妊娠史進(jìn)行綜合分析，防止發(fā)生遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)。2、低頻率抗原的抗體可能被漏檢 低頻率抗原比如Cw、V、K

17、pa、 Jsa和Wra抗原，在篩選細(xì)胞上是罕見的，篩選細(xì)胞可能不含有這些抗原。因此，如果血清或血漿中存在這些低頻率抗原的抗體，也有可能被漏檢，這對(duì)于有輸血史和妊娠史的患者必須加倍小心。以往的抗體鑒定記錄有重要參考價(jià)值。 二、抗體鑒定（一）紅細(xì)胞不規(guī)則抗體鑒定的原理 紅細(xì)胞不規(guī)則抗體鑒定是利用試劑紅細(xì)胞（譜細(xì)胞）對(duì)受血者血清或血漿中的抗體進(jìn)行檢測(cè)，譜細(xì)胞常包含816種已知血型的O型紅細(xì)胞配套組成，每一種紅細(xì)胞來自一個(gè)O型獻(xiàn)血者。要求含有8個(gè)或8個(gè)以上的譜細(xì)胞數(shù)，至少包括以下抗原：K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb、S、s和M等，應(yīng)能鑒別多種抗體同時(shí)存在的情況。（二）紅細(xì)胞不規(guī)則抗體鑒定的內(nèi)容

18、1、自身抗體和同種抗體檢查 觀察受血者的血清與受血者自身紅細(xì)胞的反應(yīng)情況，確定血清內(nèi)是否有自身抗體，或自身抗體和同種抗體兩者同時(shí)存在。2、抗體特異性檢查 應(yīng)用各種抗體檢查技術(shù)，檢測(cè)受血者的血清，確定其抗體的特異性。 確定抗體特異性時(shí)可以綜合運(yùn)用以下的資料：觀察受檢血清與每個(gè)抗體鑒定譜細(xì)胞的反應(yīng)結(jié)果；觀察受檢血清與其自身細(xì)胞的反應(yīng)結(jié)果；觀察受檢血清與酶處理細(xì)胞的反應(yīng)結(jié)果；觀察反應(yīng)的格局，檢查各個(gè)反應(yīng)相的結(jié)果，包括不同的溫度、懸浮介質(zhì)或酶作用的情況，一些抗體的特異性與反應(yīng)介質(zhì)直接相關(guān)；有否溶血現(xiàn)象；在陽性反應(yīng)的細(xì)胞中，反應(yīng)強(qiáng)度有否不同，是否出現(xiàn)劑量反應(yīng)效應(yīng)；對(duì)自身紅細(xì)胞上的抗原進(jìn)行詳細(xì)檢查，從所缺

19、少的抗原情況，來判斷是否存在相應(yīng)的抗體。 第四節(jié) 嚴(yán)格交叉配血 “嚴(yán)格交叉配血”是指所采用的方法必須能檢出ABO不相容及ABO系統(tǒng)之外的有臨床意義的抗體，主要為IgG類抗體。 一、交叉配血的內(nèi)容（一）用于交叉配血的血液制品血型選擇1、ABO血型的選擇 表2-3血液成分的ABO血型選擇 血液成分ABO血型選擇全血必須與受血者的血型一致紅細(xì)胞必須與受血者的血型一致或與受血者的血漿相容單采粒細(xì)胞必須與受血者的血型一致或與受血者的血漿相容新鮮冰凍血漿應(yīng)該與受血者的紅細(xì)胞相容單采血小板應(yīng)該與受血者的紅細(xì)胞相容冷沉淀應(yīng)該與受血者的紅細(xì)胞相容2、RhD血型的選擇 緊急情況下，如果受血者為RhD陰性的女性，且

20、處于育齡期，輸注RhD陽性的血液，其D抗原產(chǎn)生抗-D的概率約70%，必須輸注RhD陰性血。RhD陰性的男性和超過生育年齡的女性中，如果血清中不存在抗-D時(shí)，可允許輸注RhD陽性的紅細(xì)胞； RhD陰性育齡期女性輸注RhD陽性血液時(shí)，最好根據(jù)輸注紅細(xì)胞量，考慮使用RhD免疫球蛋白，但應(yīng)充分權(quán)衡輸血利益與風(fēng)險(xiǎn)，并充分告知患者及其家屬。 3、其他血型抗原的選擇 當(dāng)存在或以前出現(xiàn)過有臨床意義的紅細(xì)胞不規(guī)則抗體時(shí)，應(yīng)該選擇相應(yīng)抗原陰性紅細(xì)胞進(jìn)行交叉配血。但是，如果抗體鑒定確認(rèn)該抗體是在37以下才起反應(yīng)，則不需要輸抗原陰性的血液。如果有冷反應(yīng)抗體存在，只要在37下進(jìn)行交叉配血是相容的，輸注該袋血液是安全的，

21、但應(yīng)注意保暖，必要時(shí)用輸血加溫器。 （二）交叉配血 交叉配血包括主側(cè)交叉配血和次側(cè)交叉配血。1、主側(cè)交叉配血 可檢出患者當(dāng)前是否存在有臨床意義的抗體，還可以驗(yàn)證血型是否正確。2、次側(cè)交叉配血 在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家，對(duì)這個(gè)試驗(yàn)的需求已經(jīng)逐漸減少，因?yàn)楂I(xiàn)血者的血液都經(jīng)過了紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選。獻(xiàn)血者抗篩陽性，其血液一般不準(zhǔn)入庫。此外，現(xiàn)在大部分的輸血都是輸注只含少量獻(xiàn)血者血漿的紅細(xì)胞，進(jìn)行次側(cè)交叉配血沒有很大價(jià)值。但是，我國(guó)獻(xiàn)血者的血液均未做紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選，在輸注全血和紅細(xì)胞時(shí)仍需做次側(cè)交叉配血。 3、自身對(duì)照 由患者自身血清和自身紅細(xì)胞組成（自身對(duì)照有助于分析交叉配血試驗(yàn)中出現(xiàn)的陽性結(jié)果）。二

22、、常用的交叉配血方法 如果患者過去或現(xiàn)在都沒有紅細(xì)胞不完全抗體的存在，那么鹽水介質(zhì)交叉配血或電子交叉配血是首選的方法。否則，必須選擇能檢出不完全抗體的交叉配血法，如凝聚胺法、酶法或抗球蛋白法等。（一）鹽水介質(zhì)交叉配血法 鹽水法是驗(yàn)證ABO配合性最常用的方法，這種方法只能檢出ABO. P. Lewis. MN等系統(tǒng)的天然IgM類型完全抗體，不能檢出Rh . Kell. Kidd. Duffy等系統(tǒng)的免疫性IgG類不完全抗體。 鹽水介質(zhì)交叉配血法只適用于下列情況：第一、在用非混合的篩選細(xì)胞進(jìn)行的紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選試驗(yàn)中，沒有發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的存在；第二、患者過去沒有檢出紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的歷史

23、記錄。 （二）酶法 能檢出不完全抗體。利用酶消化紅細(xì)胞表面的唾液酸，降低表面電荷，縮小紅細(xì)胞間距，使之得以互相靠攏而顯示出肉眼可見的凝集。 酶法操作時(shí)間較長(zhǎng)、較為費(fèi)力，而且酶能改變某些血型系統(tǒng)的抗原構(gòu)型，破壞其抗原性，加之酶不易保存，故使用受到一定限制。 （三）凝聚胺交叉配血法 凝聚胺溶解后產(chǎn)生很多正電荷，可中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，使紅細(xì)胞間距縮短，引起紅細(xì)胞非特異性凝聚，這種凝聚是可逆的；抗體致敏的紅細(xì)胞在凝聚胺作用下發(fā)生凝集，這種凝集是不可逆的。因而可用帶負(fù)電荷的枸櫞酸鈉中和凝聚胺正電荷，從而把凝聚和凝集區(qū)別開來。 凝聚胺法有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：首先，凝聚胺交叉配血法對(duì)Rh血型系統(tǒng)抗體特別敏感，檢出不

24、完全抗體的靈敏度高，特異性好。其次，因其方法簡(jiǎn)便、快速、價(jià)格不高，易于在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣。因此，盡管凝聚胺對(duì) Kell系統(tǒng)不敏感，但由于漢族人幾乎100%為K抗原陰性，通常不考慮抗-Kell (K)，且在我國(guó)以Rh系統(tǒng)引起的遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)最常見，我國(guó)中小醫(yī)療機(jī)構(gòu)適合用凝聚胺交叉配血法。 （四）抗球蛋白交叉配血法 抗球蛋白是第二抗體(即抗抗體，抗-IgG)，在不完全抗體(IgG)間“搭橋”，延長(zhǎng)了不完全抗體的長(zhǎng)度，從而使紅細(xì)胞互相靠攏顯示凝集反應(yīng)。 白種人中約有9%是K抗原陽性，凝聚胺對(duì)Kell系統(tǒng)不敏感，而抗球蛋白法對(duì)Kell系統(tǒng)抗體敏感性高，是檢測(cè)IgG抗體最可靠的方法，缺點(diǎn)是試驗(yàn)過程

25、費(fèi)時(shí)、費(fèi)力。（五）微柱凝膠交叉配血法 微柱凝膠法的原理是抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合，通過調(diào)節(jié)葡聚糖凝膠的濃度控制分子篩孔徑大小，使分子篩只允許游離紅細(xì)胞通過，不允許凝集紅細(xì)胞通過。 傳統(tǒng)的交叉配血方法雖然所需設(shè)備簡(jiǎn)單，但因影響因素多，時(shí)而出現(xiàn)差錯(cuò)，甚至造成事故。而微柱凝膠法雖價(jià)格昂貴，耗時(shí)長(zhǎng)，可出現(xiàn)假陽性，但其優(yōu)點(diǎn)很多，如靈敏度高，重復(fù)性好，還能自動(dòng)化操作，最大限度地減少了人為誤差，可實(shí)現(xiàn)輸血科（血庫）各種信息的計(jì)算機(jī)管理。經(jīng)過大量的臨床實(shí)踐，這種方法已逐漸成熟，使輸血安全更有保障?，F(xiàn)在歐美國(guó)家以及我國(guó)部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)已將微柱凝膠法作為交叉配血的常規(guī)手段。三、交叉配血不合的解決方案（一）抗

26、篩陰性、主側(cè)陽性、自身對(duì)照陰性情況：1、ABO血型不合 鹽水法主側(cè)陽性提示血型鑒定錯(cuò)誤，另一種情況是受血者的血清中含有從以前輸?shù)难夯蛟陟o脈注射免疫球蛋白治療中獲得的抗-A或抗-B。 2、冷反應(yīng)同種抗體的存在 冷反應(yīng)同種抗體（如抗-M或抗-P）也有可能在室溫下發(fā)生反應(yīng)。仔細(xì)地回顧患者的輸血史，有可能提供依據(jù)。3、直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性的血液 在抗球蛋白試驗(yàn)時(shí)，如果受血者的血清只與一袋血不配合，該袋血可能是直抗陽性，如果證實(shí)，該袋血不能用于輸血。4、受血者存在抗低頻率抗原的抗體 如果獻(xiàn)血者血液是直抗陰性，有可能是受血者的血清里含有低頻率抗原的同種抗體，但卻未能被篩選細(xì)胞檢出。這時(shí)候抗體鑒定試驗(yàn)應(yīng)包

27、括對(duì)盡可能多的低頻率抗原進(jìn)行檢查。5、受血者存在純合子抗原的抗體 另外一種可能的答案是受血者存在只與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞呈劑量依賴關(guān)系的純合子抗原發(fā)生反應(yīng)的抗體。在這種特殊的情況下，篩選細(xì)胞沒有與受血者的抗體發(fā)生反應(yīng)，是因?yàn)榭乖贵w反應(yīng)呈劑量依賴關(guān)系。這時(shí)要采用更高級(jí)的技術(shù)進(jìn)行抗體鑒定以解決這個(gè)問題。（二）抗篩陽性、主側(cè)陽性、自身對(duì)照陰性情況： 這通常是受血者產(chǎn)生了高頻率同種抗體或已經(jīng)用篩選細(xì)胞檢出混合同種抗體，并且獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞中含有相應(yīng)的抗原。這時(shí)應(yīng)對(duì)受血者作抗體鑒定，選擇相應(yīng)抗原陰性的血液進(jìn)行配血試驗(yàn)。如果抗原陰性的血液仍然是不配合的，就要找另一種類型的血液，見表2-4。（三）抗篩陽性、主側(cè)陽性

28、、自身對(duì)照陽性情況：1、自身抗體的存在 大多數(shù)的自身抗體會(huì)與所有的細(xì)胞反應(yīng)，為了確定同種抗體是否被受血者血清中的自身抗體反應(yīng)掩蓋，必須在試驗(yàn)前采用一定的技術(shù)去除自身抗體。 2、同種抗體的存在 受血者最近輸過血，則可能產(chǎn)生了同種抗體，導(dǎo)致了陽性的自身對(duì)照。此時(shí)，自身對(duì)照和直抗試驗(yàn)都會(huì)顯示混合凝集。應(yīng)該進(jìn)行抗體鑒定，以解決配血不合的問題，包括對(duì)輸血前血標(biāo)本的紅細(xì)胞抗原表型的研究。3、緡錢狀細(xì)胞形成 受血者血清白蛋白和丙種球蛋白比例的倒置或使用大分子右旋糖酐或羥乙基淀粉溶液擴(kuò)容時(shí)會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞形成緡錢狀。這種現(xiàn)象與多發(fā)性骨髓瘤和巨球蛋白血癥等疾病有關(guān)。如果有必要區(qū)分很強(qiáng)的緡錢狀形成和抗體介導(dǎo)的凝集，可

29、以使用鹽水替代技術(shù)，見表2-4。 表2-4 交叉配血不合的可能原因及解決方案現(xiàn)象可能原因解決方案主側(cè)： 自身對(duì)照：抗體篩選：a. 受血者或獻(xiàn)血者ABO血型錯(cuò)誤b受血者血清中有紅細(xì)胞不規(guī)則抗體，但篩選細(xì)胞上無相應(yīng)抗原c. 獻(xiàn)血者紅細(xì)胞已被致敏a重新鑒定血型，調(diào)查受血者有無輸血史及移植史b選用抗原譜更廣的篩選細(xì)檢測(cè)受血者紅細(xì)胞不規(guī)則抗體c. 對(duì)獻(xiàn)血者紅細(xì)胞做直接抗球蛋白試驗(yàn)主側(cè)：自身對(duì)照：抗體篩選：受血者血清中的同種抗體與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞上相應(yīng)抗原反應(yīng)鑒定受血者紅細(xì)胞不規(guī)則抗體，選擇無對(duì)應(yīng)抗原的血液進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)主側(cè)： 自身對(duì)照：抗體篩選：a. 受血者血清中可能同時(shí)存在自身抗體和同種抗體b. 白蛋白

30、/球蛋白比例不正常c. 血漿容量擴(kuò)充劑的影響d污染a. 對(duì)受血者血清做自身吸收試驗(yàn)，用吸收后血清鑒定紅細(xì)胞不規(guī)則抗體及交叉配血試驗(yàn)b. 鹽水添加試驗(yàn)解決緡錢狀凝集c. 洗滌細(xì)胞或重新采集血標(biāo)本d使用潔凈器具和符合要求的試劑 四、交叉配血試驗(yàn)的臨床意義 交叉配血試驗(yàn)的目的是檢測(cè)供、受者的血液是否相容，以確保供、受者血液間沒有可測(cè)的不相容的抗原、抗體成分。少數(shù)臨床醫(yī)師發(fā)現(xiàn)血紅蛋白在輸血后反而下降而不查明原因又輕易地再次輸血，導(dǎo)致不完全抗體的效價(jià)急劇升高，出現(xiàn)血紅蛋白尿，甚至急性腎衰竭。在這種情況下，臨床醫(yī)師不要輕易地再次輸血，而是應(yīng)該請(qǐng)輸血科（血庫）技術(shù)人員協(xié)助檢查受血者是否存在不完全抗體。如果檢

31、測(cè)到不完全抗體而無法鑒定其特異性，則要多選幾袋血并采用多種方法（至少應(yīng)包括抗球蛋白試驗(yàn)）進(jìn)行交叉配血，直到有相合的血液進(jìn)行輸注。但是，如果輸血科（血庫）技術(shù)人員在輸血前已采用多種方法進(jìn)行交叉配血仍未檢測(cè)到不完全抗體，遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生，是因?yàn)橐酝斞蛉焉锂a(chǎn)生的紅細(xì)胞不規(guī)則抗體效價(jià)已經(jīng)下降到難以檢測(cè)的水平，而在輸血后引起回憶反應(yīng)，使這種抗體的效價(jià)急劇升高。不過，這種情況極為少見。如在這種遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)發(fā)生后抽取受血者的血液，即可檢測(cè)到這種不完全抗體，從而在下次輸血前多選幾袋血進(jìn)行交叉配血，以選取相合的血液進(jìn)行輸注。 五、交叉配血試驗(yàn)的局限性（一）單種血清學(xué)技術(shù)的局限性：不能檢測(cè)所

32、有的抗體，在意外溶血的調(diào)查中，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)用不同的強(qiáng)化介質(zhì)、延長(zhǎng)孵育時(shí)間、酶處理技術(shù)或增加血清與紅細(xì)胞的比例等技術(shù)手段進(jìn)行試驗(yàn)。（二）不能檢測(cè)效價(jià)下降的同種抗體，這會(huì)導(dǎo)致輸血后回憶反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)抗體。應(yīng)根據(jù)以往的抗體鑒定結(jié)果，選擇對(duì)應(yīng)抗原陰性血液配血。（三）不能檢出對(duì)紅細(xì)胞以外的抗體（如血小板、白細(xì)胞、血清蛋白抗體等）。（四）獻(xiàn)血者紅細(xì)胞抗原的特殊性少數(shù)受血者紅細(xì)胞不規(guī)則抗體不能用血清學(xué)方法鑒別?？蓪?duì)其紅細(xì)胞進(jìn)行Rh、MNSs、Kell、Duffy和Kidd系統(tǒng)抗原表型檢測(cè)。對(duì)于缺乏某種紅細(xì)胞抗原的受血者，選擇這種紅細(xì)胞抗原陰性的血液進(jìn)行輸注。第五節(jié) 認(rèn)真對(duì)待疑難交叉配血一、免疫性溶血性貧血患者

33、 因其自身抗體可與所有紅細(xì)胞發(fā)生凝集，難以找到相容性的血液輸注。應(yīng)遵循以下原則：有溫抗體的受血者在交叉配血不完全相合時(shí)，選擇多份ABO血型相同的血液進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)，采用所含紅細(xì)胞與受血者血清反應(yīng)最弱的獻(xiàn)血者血液輸注；對(duì)于存在冷抗體的受血者，應(yīng)嚴(yán)格在37條件下進(jìn)行交叉配血；如果ABO血型未能確定，在搶救受血者的緊急情況下可立即輸注O型洗滌紅細(xì)胞。（一）溫抗體型自身免疫性溶血性貧血患者1、鑒別患者溶血的原因 采用特異性單克隆抗-IgG試劑和抗-C3d試劑做直接抗球蛋白試驗(yàn)，鑒別患者溶血的原因是IgG還是補(bǔ)體引起的。2、抗-C3d陽性、抗-IgG陰性患者對(duì)獻(xiàn)血者血液的選擇：選擇ABO及RhD血型相

34、容血液，凝聚胺法交叉配血，或用特異性單克隆抗-IgG試劑進(jìn)行抗球蛋白法交叉配血，輸注主側(cè)相合的洗滌紅細(xì)胞。3、抗-IgG陽性患者獻(xiàn)血者血液的選擇：如果抗-IgG陽性（抗-C3d陽性或陰性），則選擇Rh系統(tǒng)D、C、E、c、e抗原，Kidd (Jka，Jkb)系統(tǒng)抗原，Duffy(Fya，F(xiàn)yb)系統(tǒng)抗原相同的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞，或與多名獻(xiàn)血者血液分別進(jìn)行主側(cè)交叉配血。根據(jù)交叉配血結(jié)果選擇主側(cè)交叉配血相合或凝集最弱獻(xiàn)血者的洗滌紅細(xì)胞輸注。成人每次輸注紅細(xì)胞不超過2單位，盡量緩慢輸注并密切觀察。4、其他交叉配血方法 也可對(duì)其抗凝血標(biāo)本的紅細(xì)胞進(jìn)行放散試驗(yàn)，對(duì)其不抗凝血標(biāo)本血清進(jìn)行吸收試驗(yàn)。然后對(duì)放散后的紅

35、細(xì)胞和吸收后的血清復(fù)檢ABO和RhD血型，并與ABO及RhD血型相容的獻(xiàn)血者血液進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)。（二）冷抗體型自身免疫性溶血性貧血患者存在冷抗體的患者在交叉配血時(shí)應(yīng)嚴(yán)格在37條件下進(jìn)行。（三）緊急情況下自身免疫性溶血性貧血患者如果ABO血型一時(shí)難以確定，患者的病情又十分危急，需緊急輸血搶救患者的生命，此時(shí)可立即給予O型洗滌紅細(xì)胞輸注。二、其他特殊情況（一）大量輸血和緊急非同型輸血1、大量輸血(1) 一般情況下的大量輸血：當(dāng)24小時(shí)內(nèi)輸給受血者的血量等于或大于受血者全部的血容量時(shí)，即為大量輸血。大量輸血時(shí)除嚴(yán)格受血者與獻(xiàn)血者之間的交叉配血外，應(yīng)特別注意獻(xiàn)血者之間的血液相容性。 (2)緊急情況下

36、的大量輸血：此時(shí)可簡(jiǎn)化或取消交叉配血試驗(yàn)，在緊急發(fā)血前，進(jìn)行鹽水介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)確定ABO的相容性。如果已知受血者血液中存在有臨床意義的不規(guī)則抗體，應(yīng)當(dāng)選擇相應(yīng)抗原陰性的血液進(jìn)行輸注。如無同型血液或受血者血型未知，可行緊急非同型血液輸注。 2緊急非同型血液輸注 (1)已知受血者ABO血型和RhD血型的情況：當(dāng)發(fā)生急性大量失血時(shí)，需要對(duì)受血者進(jìn)行緊急輸血，但又缺乏ABO或RhD同型的血液，可按表2-5的原則輸血，但不能輸注全血，只能輸注紅細(xì)胞。輸注的紅細(xì)胞只要求主側(cè)配血相合，次側(cè)配血不做要求。血漿和冷沉淀可以相容性輸注。表2-5 緊急非ABO同型血液成分血型選擇原則受血者血型紅細(xì)胞血漿及冷沉淀首

37、選次選三選首選次選AAO無AABBBO無BABOO無無OA、B或ABABABA或BOAB無 (2)未知受血者ABO血型和RhD血型的情況：輸血科（血庫）在接到輸血申請(qǐng)單及血標(biāo)本后，如病情“危急”且不知受血者血型情況下，應(yīng)在1015分鐘以內(nèi)發(fā)出第一袋未經(jīng)交叉配血的O型RhD陽性懸浮紅細(xì)胞（O型紅細(xì)胞必須正反定型相符），并在血袋上標(biāo)明發(fā)血時(shí)尚未完成交叉配血試驗(yàn)。此后，應(yīng)盡快鑒定獻(xiàn)血者和受血者血型，并根據(jù)臨床輸血需要，發(fā)出經(jīng)交叉配血主側(cè)相合的非同型懸浮紅細(xì)胞。在未知受血者RhD血型的情況下，即使是RhD陰性受血者，緊急情況下也可選擇RhD陽性的ABO相容的紅細(xì)胞，但對(duì)于有生育需求的女性或未成年女性不

38、輕易發(fā)給RhD陽性O(shè)型紅細(xì)胞。病情“緊急”應(yīng)在30分鐘內(nèi)完成正反定型及凝聚胺法主側(cè)配血。 新生兒需緊急換血治療時(shí)，首先確定是否為新生兒溶血病患兒，如果為ABO血型不合引起的新生兒溶血病，應(yīng)選擇O型紅細(xì)胞和AB型血漿進(jìn)行換血治療。如果為Rh系統(tǒng)血型不合引起的新生兒溶血病，應(yīng)選擇ABO血型與患兒相同，Rh血型與母親相同的紅細(xì)胞進(jìn)行交叉配血。 若已輸入大量的O型紅細(xì)胞成分后，能否輸注與受血者同型的血液應(yīng)視具體情況而定。當(dāng)受血者原ABO血型的紅細(xì)胞與新采集的受血者血標(biāo)本血清相合時(shí)，可以輸注與受血者原血型相同的血液（在改輸原同型的血液時(shí)，須更換輸血器）。若交叉配血試驗(yàn)由于受血者ABO抗體所致的不合時(shí)，則

39、應(yīng)繼續(xù)輸注O型紅細(xì)胞。 RhD陰性受血者需要輸注血漿和冷沉淀時(shí)，可按ABO同型或相容性輸注，RhD血型可忽略。 （二）凝血時(shí)間延長(zhǎng)血標(biāo)本的處理 由于疾病或藥物的抗凝作用導(dǎo)致受血者凝血時(shí)間延長(zhǎng)，這給交叉配血試驗(yàn)帶來了困難。進(jìn)行肝素治療的受血者其血標(biāo)本可能沒有完全凝固，從凝固不完全的血標(biāo)本中分離的血清可以不斷地產(chǎn)生纖維蛋白，尤其是在37孵育時(shí)?？捎诿?ml血液中加入一滴凝血酶，或使用小玻璃珠在37孵育、離心并回收血清。如果血標(biāo)本不凝是肝素引起的，則可加入一滴魚精蛋白硫酸鹽溶液到4ml全血中，然后在37孵育510分鐘，血標(biāo)本就會(huì)凝固。但魚精蛋白不能過量使用，否則會(huì)促使細(xì)胞的緡錢狀形成并阻止血液凝固。

40、（三）新生兒交叉配血試驗(yàn)與血液的選擇 新生兒首次輸血前，必須確定其ABO血型（只用抗-A和抗-B試劑做正定型）和RhD血型。新生兒或其母親的血清或血漿都可以做紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選。如果初次篩選是陰性，對(duì)于新生兒，也需要與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞進(jìn)行交叉配血，如果選擇輸血的細(xì)胞不是O型，必須檢測(cè)新生兒血清或血漿是否含有從母親被動(dòng)轉(zhuǎn)移過來的抗-A或抗-B的存在，可用已知的試劑A1細(xì)胞、B細(xì)胞或獻(xiàn)血者細(xì)胞進(jìn)行抗球蛋白試驗(yàn)。如果檢測(cè)出抗-A或抗-B。必須輸注ABO血型相容的紅細(xì)胞。還需要對(duì)這些血液進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)，且獻(xiàn)血者血液中血紅蛋白S的檢測(cè)必須為陰性。 當(dāng)證實(shí)受血者的血清或血漿中含有紅細(xì)胞不規(guī)則抗體，或獻(xiàn)血者的血液中含有不相容的血漿時(shí)，例如O型紅細(xì)胞輸給A型受血者，應(yīng)當(dāng)每3天進(jìn)行一次抗體篩選。如果初次篩選證實(shí)存在有臨床意義的紅細(xì)胞不規(guī)則抗體時(shí)，必須選擇抗原陰性的血液，直到新生兒血清中不再存在這種紅細(xì)胞不規(guī)則抗體。當(dāng)選擇宮內(nèi)輸血或換血時(shí)，血液應(yīng)盡可能新鮮儲(chǔ)存期不能超過7天