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文檔簡介

1、多肽體外抗氧化鐵氰化鉀還原法一實驗原理： 樣品（蠅蛆多肽提取物）將鐵氰化鉀（K3Fe(CN)6）還原成亞鐵氰化鉀(K4Fe(CN)6)，亞鐵氰化鉀再與三氯化鐵反應(yīng)生成普魯士藍（亞鐵氰化鐵Fe4Fe(CN)63），在700nm測吸光度值，通過測定吸光度來判斷受試物還原力的強弱。 鐵氰化鉀溶液為黃色，猜測用三氯乙酸（CCL3COOH）與反應(yīng)剩余的鐵氰化鉀生成沉淀，離心除去，排除對吸光度數(shù)值的影響。二查閱文獻以確定多肽濃度1多肽濃度與吸光度完全成直線關(guān)系的2.多肽濃度與吸光度關(guān)系不是成直線的（有一點弧度的）此試驗濃度太小，擔(dān)心結(jié)果出不來因 此實驗濃度梯度太大，槲皮素出現(xiàn)了拋物線式圖形，建議在設(shè)置我們

2、的實驗時濃度梯度大點，可能有助于得到結(jié)果此實驗濃度小，且子實體多肽變化不明顯，即在0.3與0.2相同后有出現(xiàn)上升3.自認(rèn)為有點靠譜的綜上所述，自認(rèn)為多肽濃度暫時設(shè)置成0、1、2、4、8、20、40mg/ml但pH 值對多肽總還原力的影響，酶與底物比對多肽總還原力的影響，溫度對多肽總還原力的影響。以及參考文獻中多肽結(jié)構(gòu)含量等與蠅蛆多肽不一致等因素的影響，此濃度設(shè)置肯定存在不足。三.試劑的配置四.實驗步驟2.5ml樣品+2.5ml1%鐵氰化鉀+2.5mlPH6.6磷酸鹽緩沖液（0.2mol/l）50水浴加熱20min2.5ml10%TCA4000r/min 10min上清液5ml+5ml水+1ml

3、0.1%三氯化鐵于700nm處測吸光度值，Vc作對照注意：配置不同濃度的樣品溶液梯度，依次加入一定量磷酸緩沖液（保證溶液反應(yīng)的PH環(huán)境，如2.5ml pH=6.6）、一定量濃度的鐵氰化鉀溶液（2.5ml 1%），混合均勻，將該體系置于一定溫度下（比如：50,不能過高，不然會使物質(zhì)失活，適當(dāng)加熱可以保證反應(yīng)程度和時間）恒溫水浴放置一定時間（如20min，以反應(yīng)充分為宜），取出加入三氯乙酸溶液混勻，置于離心機內(nèi)3000轉(zhuǎn)離心10min（離心機使用時一定保證對側(cè)樣品等重），取一定量上清液于另一試管中，加入蒸餾水和三氯化鐵溶液（3K4Fe(CN)6 + 4FeCl3 Fe4Fe(CN)63 + 12KCl ，黃色晶體亞鐵氰化鉀放進三氯化鐵的溶液中，產(chǎn)生顏色很鮮艷的藍色沉淀，即普魯士藍，測定吸光度時要搖勻，

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