常用的生化反應(yīng)ppt課件

1、 認(rèn)識(shí)染色方法鑒別細(xì)菌的局限性認(rèn)識(shí)染色方法鑒別細(xì)菌的局限性 掌握幾種常用生化反應(yīng)的原理、方法和結(jié)果判斷掌握幾種常用生化反應(yīng)的原理、方法和結(jié)果判斷 產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌Enterobacter arogenes） 大腸埃希菌大腸埃希菌Escherichia coli） 普通變形桿菌普通變形桿菌Proteus vulgaris） 銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa） 細(xì)菌對(duì)各種糖的分解能力及代謝產(chǎn)物不細(xì)菌對(duì)各種糖的分解能力及代謝產(chǎn)物不同，可借以鑒別細(xì)菌。一般非致病菌能發(fā)同，可借以鑒別細(xì)菌。一般非致病菌能發(fā)酵多種單糖，如大腸埃希菌能分解葡萄糖酵多種單糖，如大腸埃希菌

2、能分解葡萄糖和乳糖，產(chǎn)生甲酸等產(chǎn)物，并有甲酸脫氫和乳糖，產(chǎn)生甲酸等產(chǎn)物，并有甲酸脫氫酶，可將其分解為酶，可將其分解為CO2和和H2，故生化反應(yīng)，故生化反應(yīng)結(jié)果為產(chǎn)酸產(chǎn)氣，以結(jié)果為產(chǎn)酸產(chǎn)氣，以“ ”表示。傷寒沙表示。傷寒沙門菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，但無甲酸脫氫酶，門菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，但無甲酸脫氫酶，故生化結(jié)果為產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，以故生化結(jié)果為產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，以“+”表示。表示。傷寒沙門菌不能分解乳糖，以傷寒沙門菌不能分解乳糖，以“-”表示。表示。 將實(shí)驗(yàn)菌種接種到將實(shí)驗(yàn)菌種接種到2支支O-F管中管中 在其中在其中1支管中加入無菌液體石蠟，厚度支管中加入無菌液體石蠟，厚度0.5cm左右。左右。 35培養(yǎng)培養(yǎng)18-

3、24小時(shí)。小時(shí)。 結(jié)果結(jié)果 開口管開口管 加石蠟管加石蠟管 結(jié)果結(jié)果 黃色黃色 黃色黃色 發(fā)酵型發(fā)酵型F） 黃色黃色 綠色綠色 氧化型氧化型O） 綠色綠色 藍(lán)色藍(lán)色 產(chǎn)堿型產(chǎn)堿型產(chǎn)氣腸桿菌能使丙酮酸脫羧生成中產(chǎn)氣腸桿菌能使丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇被性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇被氧化在堿性溶液中生成二乙酰，氧化在堿性溶液中生成二乙酰，后者可與含胍基的化合物反應(yīng)生成紅后者可與含胍基的化合物反應(yīng)生成紅色化合物，稱色化合物，稱VP試驗(yàn)陽性。大腸埃試驗(yàn)陽性。大腸埃希菌不能生成乙酰甲基甲醇，希菌不能生成乙酰甲基甲醇，VP陰陰性。性。VP甲液：甲液：5%萘酚萘酚VP乙液：乙液：40%

4、KOH產(chǎn)氣腸桿菌使丙酮酸脫羧后形成中性產(chǎn)物，培養(yǎng)液pH5.4，甲基紅指示劑呈桔黃色，為甲基紅試驗(yàn)陰性，大腸埃希菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，培養(yǎng)液呈酸性pH5.4，指示劑甲基紅呈紅色，稱甲基紅試驗(yàn)陽性。 能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源的細(xì)能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源的細(xì)菌如產(chǎn)氣腸桿菌，分解枸櫞酸鹽生成菌如產(chǎn)氣腸桿菌，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，同時(shí)分解培養(yǎng)基的銨鹽生成碳酸鹽，同時(shí)分解培養(yǎng)基的銨鹽生成氨，由此使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使指示氨，由此使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使指示劑溴麝香草酚藍(lán)劑溴麝香草酚藍(lán)BTB由淡綠轉(zhuǎn)為由淡綠轉(zhuǎn)為深藍(lán)，此為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽性。深藍(lán)，此為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽性。 含有色氨酸酶的細(xì)菌如大腸埃希菌

5、、變形桿菌等可分解色氨酸生成吲哚靛基質(zhì)），若加入對(duì)二甲基氨基苯甲醛，與吲哚結(jié)合形成玫瑰吲哚，呈紅色，稱吲哚試驗(yàn)陽性。 變形桿菌、乙型副傷寒沙門菌等能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氫。在有醋酸鉛或硫酸亞鐵存在時(shí)，則生成黑色硫化鉛或硫化亞鐵，可借以鑒別細(xì)菌。 變形桿菌具有尿素酶，可分解尿素產(chǎn)變形桿菌具有尿素酶，可分解尿素產(chǎn)生氨，培養(yǎng)基呈堿性，以酚紅為指示劑檢生氨，培養(yǎng)基呈堿性，以酚紅為指示劑檢測呈紅色。測呈紅色。 吲哚吲哚I）、甲基紅）、甲基紅M）、）、VPV）、）、枸櫞酸鹽利用枸櫞酸鹽利用C四種試驗(yàn)，常用于四種試驗(yàn)，常用于鑒定腸道桿菌，合稱之為鑒定腸道桿菌，合稱之為IMViC試驗(yàn)。

6、試驗(yàn)。大腸埃希菌呈大腸埃希菌呈“+-”，產(chǎn)氣腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌為為“-+”。 原理：硝酸鹽還原反應(yīng)包括兩個(gè)過程：一是在合成過程中，原理：硝酸鹽還原反應(yīng)包括兩個(gè)過程：一是在合成過程中，硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨，再由氨轉(zhuǎn)化為氨基酸和細(xì)胞硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨，再由氨轉(zhuǎn)化為氨基酸和細(xì)胞內(nèi)其他含氮化合物；二是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞內(nèi)其他含氮化合物；二是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的終末受氫體。能使硝酸硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的終末受氫體。能使硝酸鹽還原的細(xì)菌從硝酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其他還鹽還原的細(xì)菌從硝酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其他還原性產(chǎn)物。原性產(chǎn)物

7、。 硝酸鹽還原的過程因細(xì)菌不同而異硝酸鹽還原的過程因細(xì)菌不同而異: 有的細(xì)菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃有的細(xì)菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃希菌；希菌； 有的細(xì)菌則可使其還原為亞硝酸鹽和離子態(tài)的銨；有的細(xì)菌則可使其還原為亞硝酸鹽和離子態(tài)的銨； 有的細(xì)菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如假有的細(xì)菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如假單胞菌等。單胞菌等。 硝酸鹽還原試驗(yàn)系測定還原過程中所產(chǎn)生的亞硝硝酸鹽還原試驗(yàn)系測定還原過程中所產(chǎn)生的亞硝酸。酸。 試劑：甲液試劑：甲液 對(duì)氨基苯磺酸對(duì)氨基苯磺酸 乙液乙液 - -奈胺奈胺 結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性。結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性。 若加入試劑后無顏色反應(yīng)，

8、可能是：硝酸鹽沒有被還原，若加入試劑后無顏色反應(yīng)，可能是：硝酸鹽沒有被還原，試驗(yàn)陰性；硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產(chǎn)物而導(dǎo)致假試驗(yàn)陰性；硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產(chǎn)物而導(dǎo)致假陰性結(jié)果，這時(shí)應(yīng)在試管內(nèi)加入少許鋅粉，如出現(xiàn)紅色則陰性結(jié)果，這時(shí)應(yīng)在試管內(nèi)加入少許鋅粉，如出現(xiàn)紅色則表明試驗(yàn)確實(shí)為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表示試驗(yàn)為假陰表明試驗(yàn)確實(shí)為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表示試驗(yàn)為假陰性。性。 若要檢查是否有氮?dú)猱a(chǎn)生，可在培養(yǎng)基管內(nèi)加一小倒管，若要檢查是否有氮?dú)猱a(chǎn)生，可在培養(yǎng)基管內(nèi)加一小倒管，如有氣泡產(chǎn)生，表示有氮?dú)馍?。如有氣泡產(chǎn)生，表示有氮?dú)馍伞?原理：具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫生成水和原理：

9、具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。 試劑：試劑：3 3過氧化氫溶液。過氧化氫溶液。 方法：取待測菌涂在玻片上，然后加方法：取待測菌涂在玻片上，然后加3 3過氧化氫數(shù)滴立過氧化氫數(shù)滴立即觀察結(jié)果。即觀察結(jié)果。 結(jié)果：有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性。不產(chǎn)生氣泡者為陰性。結(jié)果：有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性。不產(chǎn)生氣泡者為陰性。 原理：氧化酶細(xì)胞色素氧化酶是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的原理：氧化酶細(xì)胞色素氧化酶是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸酶。具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素最終呼吸酶。具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C C氧化，氧化，再由氧化型

10、細(xì)胞色素再由氧化型細(xì)胞色素C C使對(duì)苯二胺氧化，生成有色的醌類化使對(duì)苯二胺氧化，生成有色的醌類化合物。合物。 試劑：試劑：1 1鹽酸四甲基對(duì)苯二胺或鹽酸四甲基對(duì)苯二胺或1 1鹽酸二甲基對(duì)苯二胺。鹽酸二甲基對(duì)苯二胺。 方法：取潔凈濾紙一小塊，沾取菌少許，然后加試劑。方法：取潔凈濾紙一小塊，沾取菌少許，然后加試劑。 結(jié)果：細(xì)菌在與試劑接觸結(jié)果：細(xì)菌在與試劑接觸1010秒內(nèi)呈深紫色，為陽性。秒內(nèi)呈深紫色，為陽性。 葡萄糖葡萄糖 乳糖乳糖1 10 鐵：枸櫞酸鐵銨鐵：枸櫞酸鐵銨 指示劑：酚紅指示劑：酚紅 我們?nèi)藶榈陌迅邔哟砥咸烟?，斜面代表乳糖。我們?nèi)藶榈陌迅邔哟砥咸烟?，斜面代表乳糖。以葡萄糖，乳糖?/p>

11、例葡萄糖是最早利用的單糖，發(fā)酵葡萄糖的中間產(chǎn)物丙酮酸為酸性，酚紅指示劑為黃色。1、斜面生長的菌量多，面積大，跟氧分子接觸的面積也大氧化丙酮酸 CO2H2O中性，PH不變2、斜面蛋白質(zhì)被細(xì)菌利用，氨基酸被利用產(chǎn)生NH3，堿性，酚紅指示劑為紅色。 高層中丙酮酸濃度高，跟氧分子接觸少，在高層中丙酮酸濃度高，跟氧分子接觸少，在2424小時(shí)內(nèi)小時(shí)內(nèi)不會(huì)被氧化，因此仍為黃色。不會(huì)被氧化，因此仍為黃色。 高層黃色斜面紅色高層黃色斜面紅色 如葡萄糖，乳糖，則高層與斜面均為黃色如葡萄糖，乳糖，則高層與斜面均為黃色2424小時(shí)小時(shí)內(nèi)）。內(nèi)）。 如果延長培養(yǎng)時(shí)間，高層中的丙酮酸也會(huì)進(jìn)一步氧化，同如果延長培養(yǎng)時(shí)間，高

12、層中的丙酮酸也會(huì)進(jìn)一步氧化，同時(shí)細(xì)菌利用蛋白質(zhì)后產(chǎn)堿性物質(zhì)越來越多，則高層也會(huì)變時(shí)細(xì)菌利用蛋白質(zhì)后產(chǎn)堿性物質(zhì)越來越多，則高層也會(huì)變?yōu)榧t色。為紅色。 有些細(xì)菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，有些細(xì)菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氫生成硫化氫H2SH2SFeFe 黑色的硫化亞鐵黑色的硫化亞鐵 問：有無葡萄糖，乳糖的情況？為什么？問：有無葡萄糖，乳糖的情況？為什么？ 半固體半固體 M M代表動(dòng)力代表動(dòng)力 I I代表吲哚靛基質(zhì)）代表吲哚靛基質(zhì)） U U代表尿素代表尿素 結(jié)果觀察時(shí)先觀察有無動(dòng)力，試驗(yàn)管有無變紅三分之二結(jié)果觀察時(shí)先觀察有無動(dòng)力，試驗(yàn)管有無變紅三分之二管變紅為尿素陽性），然后加入對(duì)二甲基氨基苯甲醛，觀管變紅為尿素陽性），然后加入對(duì)二甲基氨基苯甲醛，觀察吲哚試驗(yàn)結(jié)果。察吲哚試驗(yàn)結(jié)果。 思考題：思考題： KIA的試驗(yàn)原理的試驗(yàn)原理 1 1、用革蘭染色法觀察四種試驗(yàn)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)特征、用革蘭染色法觀察四種試驗(yàn)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)特征 2 2、將四種試驗(yàn)細(xì)菌接種各種生化反應(yīng)管：、將四種試驗(yàn)細(xì)菌接種各種