植物染色體倍性分析實用文檔

1、應用專家：植物染色體倍性分析、基因組大小分析Partec染色體倍性分析儀在植物研究中的應用精選精選ppt植物學研究中Partec倍體分析儀的應用植物的核DNA含量和倍性水平是植物學研究中的基礎研究指標。對植物種質資源鑒定 、種群進化、物種分類、生態(tài)學研究、多倍體育種、單倍體育種、多倍體誘導等多方面都具有重要意義。精選精選ppt植物學研究中Partec倍體分析儀的應用生物體的單倍體基因組所含DNA總量稱為C值。C值是種群進化、物種分類和生態(tài)學研究的有利分析工具和證據(jù)。由于近緣物種的C值極為相似，因而可以通過C值獲取基因組大小這一特征信息，用于構建物種的系統(tǒng)進化樹，分析親緣關系，同時可以通過測定C

2、值來鑒定雜交物種。借助C值與氣孔保衛(wèi)細胞長度、面積正相關的規(guī)律，通過測量植物化石的氣孔長度和面積，可以用已知參考樣本物種的C值推斷出相應的古植物C值，用于古植物研究。另外，外來入侵種比同域分布的同屬其它種有較小的C值，因此可以預測入侵能力的強弱，并以此作為生態(tài)學評估指標。精選精選ppt植物學研究中Partec倍體分析儀的應用植物染色體組多倍化是促進物種形成的重要因素之一，大部分開花植物的祖先都經(jīng)歷過一輪或者幾輪多倍化。植物類群染色體倍性對研究植物系統(tǒng)進化，澄清植物的物種起源模式有科學研究價值。鑒定染色體倍性是植物單倍體育種的必要環(huán)節(jié)，例如在花藥單倍體育種實驗中，再生組織可能是純單倍體，也可能是

3、混倍體。還可用于多倍體育種，多倍體育種是利用人工誘變或自然變異等，通過細胞染色體組加倍獲得多倍體育種材料，用以選育人們需要的優(yōu)良品種，也需要鑒別是否誘導加倍成功。此外，植物倍性鑒定還可用于分析細胞分裂活動等植物發(fā)育研究。精選精選ppt植物學研究中Partec倍體分析儀的應用在植物細胞研究中還可以分選出活的原生質體，并通過分選出來的原生質體再生出植株，其中最有意義的就是選出由原生質體融合所產生的異核體。對酸橙(Citrus aurantium L)葉肉原生質體和甜橙(C sineniscvShamouti)胚性愈傷組織原生質體電融合后再生的體細胞雜種進行分析，結果表明，所有的體細胞雜種植株熒光強

4、度是二倍體對照的兩倍，這說明兩者的原生質體已經(jīng)融合。精選精選ppt倍體分析的傳統(tǒng)方法染色體計數(shù)與分析 實驗方法與步驟實驗方法與步驟取每個再生株根部剛發(fā)出的小于1 cm的根56條立刻放入飽和對氯二苯溶液中，常溫下放置4 h后，轉入卡諾(Camoy s)固定液固定24 h，取出的根用蒸餾水沖洗兩遍后轉入1 molL鹽酸溶液，60水浴中解離67 min，然后在蒸餾水中浸泡10 min以上。用卡寶品紅染色壓片，奧林巴斯顯微鏡(BH2)400倍下觀察根尖細胞染色體并計數(shù)，每個再生株觀察5條根。熒光顯微數(shù)碼攝像系統(tǒng)即時拍照成像。實驗結果實驗結果精選精選ppt倍性分析與流式細胞術倍性分析與流式細胞術流式細胞

5、分析，又稱流式細胞術（FCM），是以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下被熒光色素染色的單細胞或微粒，測量其產生的散射光和發(fā)射熒光的強度，從而對細胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態(tài)等進行定性或定量檢測的一種現(xiàn)代細胞分析技術。特點：（1）單細胞分析。（2）快速分析。（3）多參數(shù)相關測量。（4）定性或定量分析細胞。（5）統(tǒng)計學意義明顯。 （6）分選。精選精選ppt嵌入性染料嵌入性染料熒光染料DAPI，直接與細胞內的DNA雙螺旋結構中的A-T堿基對結合，從而使細胞在激發(fā)光的照射下發(fā)特定波長的光，通過判斷發(fā)射光的強弱來推算A-T堿基對的多少，從而得知DNA的倍性關系。精選精選

6、ppt信號檢測與分析當細胞攜帶熒光素標記物，通過激光照射區(qū)時，受激光激發(fā)，產生代表細胞內不同物質、不同波長的熒光信號，這些信號以細胞為中心，向空間360度立體角發(fā)射，產生散射光和熒光信號, 下圖是以激發(fā)光光源波長488nm為例的示意圖：精選精選ppt熒光信號的線性測量熒光信號的線性測量線性放大： 即放大器的輸出與輸入是線性關系，細胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質含量等的測量一般選用線性放大測量。在倍體分析實驗中，待測樣本的倍性（熒光強度）為標樣的整數(shù)倍，在測量時一定選擇線性放大。精選精選ppt倍體分析儀數(shù)據(jù)的顯示倍體分析儀數(shù)據(jù)的顯示直方圖直方圖橫坐標，X軸表示光強度，強度高的光信號靠右側顯示

7、?？v坐標，Y軸表示數(shù)量累計，相同強度的光信號在同一橫坐標點（通道）內向Y軸方向累計。DNA-DAPI精選精選ppt倍體分析儀測試流程精選精選ppt倍體分析方法比較染色體計數(shù)法染色體計數(shù)法 實驗操作復雜 耗時長、檢測通量低（不適合大量材料的倍性鑒定）Partec倍體分析儀倍體分析儀 取樣容易，不受取材的時間季節(jié)限制 可以檢測大量樣本，節(jié)約時間，每天可測超過200個樣本，通過改進流程每天可測試1000個樣本 儀器自動識別倍體峰值精選精選pptCyFlow PA簡單快速-DNA倍體標本上機檢測時間小于2分鐘； 采用Partec專利染色技術，無細胞壁標本處理及染色時間小于 2分鐘，有細胞壁標本處理及染

8、色時間小于15分鐘。 操作便捷-無需制備和染色中期染色體。 適用于DAPI和PI（需配備532nm綠色激光器）染色的生物DNA倍體檢測； 用途廣泛-任何植物樣品均可被檢測：葉、秧苗、根莖、花、果實、種子等。 任何動物、海洋及淡水生物均可被檢測。 高精確性-絕大多數(shù)動植物倍體檢測精度可以達到1染色體。 靈活便攜-結構緊湊，便于移動，適用于多種工作場所。 精選精選pptPartec倍性分析儀在植物領域的突出優(yōu)勢 可以實現(xiàn)2分鐘內完成所有植物（花、葉、莖、根、果實、種子、花粉）樣本的染色制備及上機檢測； 最少的樣品處理步驟； 可以實現(xiàn)最為精準的DNA含量檢測； 最簡單的儀器操作程序； 最省時省力且省

9、錢的后期維護保養(yǎng)； 可以為您的論文添加世界上最為完美的DNA峰直方圖； 可以在您的研究領域開創(chuàng)與DNA含量相關的新篇章。精選精選ppt樣本的處理（以植物葉片為例）樣本的處理（以植物葉片為例）所需試劑：Partec DNA二步法試劑其它工具：刀片、培養(yǎng)皿、30um濾網(wǎng)，樣品管、加樣槍等精選精選ppt實驗步驟實驗步驟取待測新鮮植物葉片0.5平方厘米，置于培養(yǎng)皿中。取400ul裂解液加于植物葉片周圍，裂解1分鐘。裂解完成后，用刀片將葉片切碎。向切碎的植物葉片中加入染液1600ul，染色1分鐘。將培養(yǎng)皿中的液體用30um濾網(wǎng)過濾至樣品管中上樣。精選精選ppt注意事項注意事項所取植物葉片需新鮮，易于切碎

10、，不易過大或過小。在切葉片的過程中，盡量切碎植物葉片，避免割植物葉片的情況發(fā)生。不同樣本的染色時間不同，應根據(jù)樣本特性決定染色時間。大多數(shù)植物樣本在裂解和染色的時間只需要一分鐘種。對于某些特殊的樣本，需在研究中摸索最佳的染色時間，適當延長。精選精選ppt上樣過程中的注意事項上樣過程中的注意事項選擇合適的電壓（gain）值，過高的電壓值會放大背景噪聲，電壓值過小則無法采集數(shù)據(jù)。點擊“ ”調節(jié)。隨著染色時間的增長，樣本的信號峰會向右移動，而充分染色的樣本不會發(fā)生信號右移的情況。實驗中如果發(fā)生同一樣本的重復性不好，應考慮此種情況。為了得到最完美的實驗結果，建議適當降低樣本流速，將標樣的位置放到50的

11、位置上。如果畫面左側有大量噪聲信號出現(xiàn)，請適當提高閾值 “ ”精選精選ppt閾閾 值值閾值用來定義能夠被光電倍增管識別的最小或最大信號強度，低于閾值下限或高于閾值上限的信號將不被光電倍增管識別，也不在圖形中顯示。精選精選pptDNA Control UV - UVDArabidopsis thaliana - UVDAllium cepa - UVDCrassostrea gigas (Oyster) - UVD精選精選ppt疑難解答 校正微球不在正確的范圍校正微球不在正確的范圍：l 采用標準的清潔程序 l 修改增益校準平衡珠的位置 l 用LL閾值調整增益 精選精選ppt疑難解答 樣品流動緩慢

12、或者不動，讀數(shù)時間達到五分鐘甚至更長樣品流動緩慢或者不動，讀數(shù)時間達到五分鐘甚至更長： l 樣品池有污物或管道堵塞，執(zhí)行緊急清潔程序。 l 檢查廢物瓶密閉且瓶子沒有裂縫。 l 鞘液、廢液瓶擰緊精選精選ppt疑難解答 如果不能明顯區(qū)分特殊峰或細胞株系與背景信號如果不能明顯區(qū)分特殊峰或細胞株系與背景信號 l 改變鞘液量 l 用校正微球檢查 l 重新分析數(shù)據(jù) l 更換鞘瓶的內置過濾器 精選精選ppt疑難解答 峰很寬且峰相互間很分散或細胞簇不好峰很寬且峰相互間很分散或細胞簇不好 l 檢查樣品（樣品的貯藏，樣品中是否有沉淀，準備過程是否有錯誤等） 精選精選ppt流動室緊急清洗流動室緊急清洗 將1.6ml

13、0.5%次氯酸鈉用一樣品管盛裝后，置于進樣口處，點擊START（開始）按鈕，運行15秒后，卡住鞘液管，點擊STOP停止運行，讓液體在管道內停留15分鐘來潤洗管道；再按START按鈕重新啟動系統(tǒng)，直到樣品測量及自動清洗程序完成。 用1.6ml的清洗液重新洗滌，可以洗劑過夜。 將1.6ml鞘液裝于樣品管置于進樣口處，點擊START按鈕運行系統(tǒng)，直到樣品測量及自動清洗程序完成。 啟動校準微球檢測CyFlow倍性分析儀的運行是否正常。 精選精選ppt倍體分析儀關鍵配置倍體分析儀關鍵配置 1.可以應用的染料：直接影響到樣本處理過程及測試效果 2.激發(fā)光源：需與染料配套，光源的使用壽命至關重要。Parte

14、c提供世界上僅有的LED UV光源，使用壽命超過20000小時，而目前常用的汞弧燈壽命只有200小時左右。Partec老款倍性分析儀也采用汞弧燈光源，目前汞弧燈已被淘汰精選精選ppt名稱特點缺點應用范圍DAPI1.基本無毒2.染料本身粘附性小3.發(fā)光強，對熒光濃度要求低，即低熒光分子結合率下可以獲得相對高熒光強度4.在365nm光源照射下可以獲得完美結果（Partec獨有LED UV光源替代傳統(tǒng)汞弧燈 HBO Lamp）5.分辨率高，通常CV1%6.激光光斑定位不重要7.染色時間短，通常小于2分鐘，出報告時間快，從樣本處理至出結果通常小于5分鐘1.只能對A-T堿基染色2.只能比對同一種屬內的基

15、因組大小，不能進行種屬間的基因組大小鑒定和對比倍體分析最常用的染料細胞周期分析由Partec在全世界推廣使用Partec提供世界上獨有的專用配套DAPI測試試劑，集細胞核萃取和染色于一體，通常樣本染色只需15秒精選精選ppt名稱特點缺點應用范圍PI1.由488nm或532nm光源激發(fā)2.能夠對整個基因組染色3.能夠進行同一種屬或不同種屬間的基因組大小比對和精確鑒定1.劇毒2.染料本身粘附性高 3.發(fā)光弱，對熒光濃度要求高，即高熒光分子結合率下只能獲得相對低的熒光強度4.分辨率低，通常 CV3% 5.激光光斑需要精確定位6.染色時間長，通常需要15-30分鐘，樣本處理復雜，需要洗滌染色后的細胞。出報告時間長，從樣本處理至出結果通常大于1小時。DNA含量分析基因組大小比對細胞周期Partec提供世界上獨有的專用配套PI測試試劑，簡化樣本處理步驟精選精選pptUltraviolet imaging high-resolution technology base on 365nm UV light modulePatent: 1971, DE1919628 UV HBO La