實驗二酶的底物專一性

1、1實驗二實驗二 酶的底物專一性2實驗目的l了解酶的專一性了解酶的專一性l掌握檢查酶專一性的原理和方法掌握檢查酶專一性的原理和方法l學會排除干擾因素，設計酶學實驗學會排除干擾因素，設計酶學實驗3實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容4 酶的專一性是指一種酶只能對一種底物或一類底酶的專一性是指一種酶只能對一種底物或一類底物起催化作用，對其他底物無催化作用。酶的專一性物起催化作用，對其他底物無催化作用。酶的專一性程度分為：程度分為：l鍵專一性：鍵專一性：只要求作用于一定類型的鍵，對鍵兩端基只要求作用于一定類型的鍵，對鍵兩端基團無嚴格要求。如酯酶、核酶團無嚴格要求。如酯酶、核酶l基團專一性：基團專一性：對鍵兩端或一端的基團

2、要求嚴格，如對鍵兩端或一端的基團要求嚴格，如-、-葡萄糖苷酶，轉移酶葡萄糖苷酶，轉移酶l絕對專一性：絕對專一性：只作用于一種底物，如某些核酸工具酶只作用于一種底物，如某些核酸工具酶l立體異構專一性：立體異構專一性：旋光異構專一性和幾何異構專一性旋光異構專一性和幾何異構專一性實驗原理實驗原理-5淀淀 粉粉直鏈淀粉直鏈淀粉: 由由200-300個個-葡萄糖以葡萄糖以-1，4糖苷糖苷鍵相連成一直鏈鍵相連成一直鏈支鏈淀粉支鏈淀粉:有有-1，4糖苷鍵和糖苷鍵和-1，6糖苷鍵，糖苷鍵，在直鏈淀粉的基礎上形成分支在直鏈淀粉的基礎上形成分支6 直鏈淀粉直鏈淀粉的相對分子質(zhì)量比支鏈淀粉小，直鏈淀粉的的相對分子質(zhì)

3、量比支鏈淀粉小，直鏈淀粉的分子是由許多分子是由許多-D-D-葡萄糖經(jīng)過葡萄糖經(jīng)過-1-1，4-4-苷鍵反復連接而成苷鍵反復連接而成的線狀聚合物。的線狀聚合物。OOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHO-1,4-苷 鍵7 直鏈淀粉的形狀并不是伸展狀態(tài)的直鏈，而是有規(guī)律的直鏈淀粉的形狀并不是伸展狀態(tài)的直鏈，而是有規(guī)律的卷曲成螺旋狀，每一螺旋圈約有卷曲成螺旋狀，每一螺旋圈約有 6 6個葡萄糖結構單位。個葡萄糖結構單位。 直鏈淀粉遇碘液顯藍色，加熱煮沸時顏色消失，冷直鏈淀粉遇碘液顯藍色，加熱煮沸時顏色消失，冷卻后又重新顯色。這個反應很靈敏，常用來檢驗淀粉

4、或卻后又重新顯色。這個反應很靈敏，常用來檢驗淀粉或碘的存在。碘的存在。8 支鏈淀粉支鏈淀粉比直鏈淀粉由更多的比直鏈淀粉由更多的D-D-葡萄糖組成，其連接方式也有葡萄糖組成，其連接方式也有所不同。支鏈淀粉中所不同。支鏈淀粉中D-D-葡萄糖之間以葡萄糖之間以-1-1，4 4苷鍵連接成主鏈，每苷鍵連接成主鏈，每隔隔20202525個葡萄糖單位便分枝出個葡萄糖單位便分枝出1 1個支鏈，支鏈上還有分枝，而支個支鏈，支鏈上還有分枝，而支鏈的連接點即分枝處為鏈的連接點即分枝處為-l-l，6 6糖苷鍵。糖苷鍵。OOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OOOHOHCH2OHOOOOHOHC

5、H2OHOOOHOHCH2OHO -1,6-苷鍵 -1,4-苷鍵9支鏈淀粉，平均每支鏈淀粉，平均每2530個單位產(chǎn)生個單位產(chǎn)生1個分支。個分支。糖原，平均每糖原，平均每812個單位產(chǎn)生個單位產(chǎn)生1個分支。個分支。10 由-葡萄糖和-果糖以-1，2糖苷鍵相連而成的雙糖蔗蔗 糖糖11Benedict反應反應 lBenedictBenedict試劑試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定的氧化能力，能與還原性糖的半縮醛羥基半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應，生成氧化亞銅（Cu2O）磚紅色沉淀。l淀粉淀粉和蔗糖蔗糖都不能反應，而它們的水解產(chǎn)物葡萄糖能夠發(fā)生Benedict反應，所以，用顏色反應來觀察淀粉酶、蔗糖酶對淀粉

6、及蔗糖的水解作用。12半縮醛羥基在右邊，即與氧環(huán)同側-D-葡萄糖；半縮醛羥基在左邊，即與氧環(huán)異側-D-葡萄糖。 RCOHHO R+R CHOHOR半縮醛HCOHHHOOHHOHHCH2OHCOHHHHOOHHOHHCH2OHOHOHHCOHHHOOHHHCH2OHHOHOHCOHHHOOHHHCH2OHHOHO-D-葡萄糖-D-葡萄糖13試試 劑劑注：注：Cl-是唾液淀粉酶的激活劑。其它的陰離子，如是唾液淀粉酶的激活劑。其它的陰離子，如Br-、NO3-和和I-對該酶也有激活作用，但較微弱。而對該酶也有激活作用，但較微弱。而Cu2+對唾液對唾液淀粉酶具有抑制作用。淀粉酶具有抑制作用。14試試 劑劑15Benedict試劑l 在在600mL600mL蒸餾水中溶解蒸餾水中溶解173g173g檸檬酸鈉檸檬酸鈉和和100g100g無水無水碳酸鈉碳酸鈉，冷卻后稀釋到，冷卻后稀釋到850mL850mL。l在在100mL熱蒸餾水中溶解熱蒸餾水中溶解17.4g無水硫酸銅無水硫酸銅。冷卻。冷卻后稀釋到后稀釋到150mL。把硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉。把硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉碳酸鈉溶液中，邊加邊攪拌，如產(chǎn)生沉淀。要碳酸鈉溶液中，邊加邊攪拌，如產(chǎn)生沉淀。要過濾，班氏試劑配制后能長期使用。如存放較久過濾，班氏試劑配制后能長期使用。如存放較久而產(chǎn)生沉淀時，可取上