ABI公司7900HT型熒光定量PCR儀中文操作手冊vA

1、美國應用生物系統(tǒng)公司ABI Prism 7900HT型熒光定量PCR儀操作手冊ABI Prism 7900HT中文操作手冊目錄ABI PRISM 7900HT型熒光定量PCR儀簡明手冊快速入門3ABI PRISM 7900HT型熒光定量PCR儀簡明手冊絕對定量4一. 開 機4二. 新建文件4三. 探針設逍4四. 參數(shù)設置5五. 填樣品表6六. 啟動循環(huán)7七. 數(shù)據(jù)分析7八. 查看結果7ABI PRISM 7900HT型熒光定量PCR儀簡明手冊相對定量9一. 開 機9二. 新建文件9三. 探針設置9四. 參數(shù)設置10五. 填樣品表11六. 啟動循環(huán)12七. 數(shù)據(jù)分析12八. 設置Study12九

2、. 查看結果12ABI PRISM 7900HT型熒光定量PCR儀簡明手冊終點讀板.14一. 開 機14二. 新建文件14三. 設置 DETECTOR 和 MARKER 15四. 參數(shù)設置16五. 填樣品表16六. 終點讀板16七. 數(shù)據(jù)分析17查看結果174眞3 BiosyemsABI Prism 7900HT 中文操作手冊ABI Prism 7900HT型熒光定量PCR儀簡明手冊快速入門1. 開 機開電腦顯示屏電源，啟動電腦，進入Windows NT操作系統(tǒng)，以川戶名Administrator 登陸,密碼7900待鼠標沙漏消失,電腦完全啟動后,開7900HT電源,紅橙綠燈 依次閃動2次，然

3、后綠燈點亮。雙擊桌面圖標，打開SDS應用軟件。2. 新建文件菜單File -* New,新建個空白文件。Assay代表試驗類型，實時定晟選Absolute Quantification；終點讀板選 Allelic Discrimination； Container tfi反應板類宅，根扌料 書要選擇96孔板、384孔板或微帚仮應卡；Template項川于調(diào)用書先設置好的模 板文件；Barcode是反應板的條形碼，可以川豹描儀掃入或者F工輸入。設置完畢, 點OK確認。3. 填樣品表i殳定Detector：菜單Tools Detector Manager,點New新建探針，設定名稱、 報告甚團、淬

4、滅阜團等相關參數(shù)：選定探針后點Copy to Plate Document復制到板 文件，指定乞個孔所川探針、樣品名和樣品類熨（未知樣品、標準品和對照，標準 品并輸入拷貝數(shù)），掃描或輸入條形碼。4. 循環(huán)參數(shù)切換到Instrument窗口, & Thermal profile選單下設定、修改PCR循環(huán)的溫度、 時間、反應體積等。其中Add A Dissociation Stage指令儀器進行融解曲線試驗，只 適用于SYBR Green I熒光架料法；5 保存文件設置完畢，保存文件；也可以保存為模板文件，方便以后調(diào)卅。6. 啟動PCRA Instrumental!點擊O pen/Close按鈕，

5、彈出樣站架（在上機的右側）。把樣品板 置入托盤，再單ili Open/Close按鈕，樣品架門動收回并關閉上樣門。按Start開始 實驗，開始時冇樣品架到位、掃描頭到位、熱蓋升溫等工作，等待出現(xiàn)Remain Time 若干時間后即開始止式運行。7. 數(shù)據(jù)分析實驗結束，H動或于匚設置基線和閾值，單擊Analyze分析結果，切換到Result 窗口査看擴增曲線、標準曲線、原始數(shù)據(jù)、實驗報告等試驗結果。保存數(shù)據(jù)，也可 以Export各種數(shù)據(jù)。ABI Prism 7900HT型熒光定量PCR儀簡明手冊絕對定量ABI Prism 7900HT型熒光定最PCR儀支持使川標準曲線法對核酸進行實時絕對 定量。

6、、開機誡嚴格按照順序開機，以便儀器系統(tǒng)能夠止確地初始化，在冬個部分之間建立通訊 聯(lián)絡。實驗開始耐，丄機和機械臂需預熱10分鐘以上。電源打開以后，二機即開始加熱 熱蓋,直到1059。如果熱蓋尚未達到105C就開始實驗，儀器將自動暫停，等待熱 蓋溫度達到后才開始PCRo1. 打開電腦顯示屏的電源；2. 啟動電腦；3. 啟動機械臂，電源開關在背面；4. 啟動7900HT 機，可以看到紅橙綠燈依次閃動2次，然后綠燈點亮，說明儀 器啟動完畢。二、新建文件啟動軟件1. 按照下述路徑啟動 SDS 軟件:Start -* Programs -* Applied Biosystems - SDS 2.1 - S

7、DS 2.1。也可以雙擊桌面上的快捷方式圖標啟動SDS軟件。2. 如果使用的是SDS Enterprise Database,空錄時輸入川八名和密碼，點OK。新建文件3. 選擇菜單File - Newo4. 在 Assay 下拉菜單中選 Absolute Quantification (Standard Curve)(實時定帚模 式，用于孩酸的絕對定最研究)；在Container H拉菜單中根據(jù)需要選擇所川的 反應板類型：96幾板、384孔板或微晟反應卡；在Template卜寸立菜單中選Blank Templateo5. 如果只測 塊板，& Barcode欄打描或者輸入反應板的條形碼。6. 點

8、OK,軟件打開一個空白的反應板文件。三、探針設置新建探針在 SDS 軟件中，選擇菜單 Tools Detector Manager,打開 Detector Manager 窗口。6ABI Prism 7900HT中文操作手冊1. 如果是第-次使川軟件，或者探針（Detector）沒有設置好，在Detector Manager 對話框中點New.新建探針。2. 在Add Detector對話框的Name欄輸入探計的名字，建議使用所研究的圧I人I座 的名稱，如GAPDH、RNase P等。不同探針給以不同的名字。3. （可選）在Description欄，輸入簡短的說明，32個字母以下。4. 指定

9、Reporter Dye 和 Quencher Dye 報告某團通常是 FAM 或者 VIC； TaqMan 探針的淬滅基團選TAMRA, MGB探針的淬滅基團選None。5. 點Color,在彈出的調(diào)色板中任意選擇種顏色，點0K。6. （可選）在Notes欄輸入200字以下說明。7. 設置完成后，點擊OK保存探針并返|n| Detector Manager Mi。該探針即出現(xiàn) 在探針列表中。8. 巫復18,設置更多的探針。復制探針文件1探針設置好后，在Detector Manager頁面，從探針列表中選擇探針，或者按住 Ctrl鍵點擊，選擇多個探針，這些探針即被選黑：再點擊Copy to P

10、late Document 按鈕，探針被SZ制到板文件的Well Inspector中。2. 點 Done 關閉 Detector Manager 窗 n。應用探針1. 在樣品表中，選擇含有第一種探針的所有樣品孔。2. & Well Inspector對話框中探針列表的Use項下的方框中,打鉤選擇要用的一 個或多個探針，該探針即顯示在樣品表的相應孔中。3. 義復仁2,設置梵余樣品所用的探針。設置樣品類型1. 使HI Ctrl和Shift鍵，在樣品農(nóng)中選擇同一類型的所冇樣品孔。2. 在Well Inspector對話框中探針列衣的Task的下拉菜單中選樣樣品類申：空門 對照選NTC；未知樣品選U

11、nknown：已知拷貝數(shù)的標準品選Standard Detector Manager,打開 Detector Manager 窗口。2. 如果是笫次使用軟件，或者探針（Detector）沒冇設置好，在Detector Manager 對話框中點New,新建探針。3. 在Add Detector對話框的Name欄輸入探計的名字，建議使用所研究基因位點 的等位基因名稱,如Allele 1. Allele 2等。4. （可選）在Description欄，輸入簡短的說明，32個字母以下。5. 指定R即orter Dye和Quencher Dye報告族團通常是FAM或者VIC： TaqMan 探針的淬滅

12、基團選TAMRA, MGB探針的淬滅基團選None。6. 點Color,在彈出的調(diào)色板中任意選擇一種顏色，點0K7. （可選）在Notes欄輸入200字以下說明。8. 設還完成后，點擊OK保心探針并返回Detector Manager !；面。該探針即出現(xiàn) 在探針列表中。9. 帝復設置更多的探針。新建Marker1. 在 SDS 軟件中，選擇菜單 Tools - Marker Manager,打開 Marker Manager 窗口。2. 如果Marker沒有設置好，在Marker Manager對話框中點New,新建Marker。3. 在Marker Editor對話框的Name欄輸入Mar

13、ker的名字，建議使川所研究的卑 因位點的名稱，如D3S1169等。設置完成后點OK,該務稱即出現(xiàn)在位點列農(nóng) 中。4. 在左邊的位點列表中選中該名稱，然后在右邊的探針列表中Use項下方框中打 鉤，選擇該Marker所用的Detector。-般每個Marker選兩個Detector, FAM、 VIC 各一。5. 如果潘耍，巫復步驟34設遏更多的Markero注 意：實時定最PCR只要求設置Detector即可，而SNP實驗必須進一步設 置Marker,二者有區(qū)別。應用Marker1. & SDS軟件的Marker Manager頁Mi,在左邊的位點列農(nóng)中選擇所需Marker, 點擊Copy t

14、o Plate Document按鈕，該Marker的信息即分3行出現(xiàn)在Well Inspector窗【I中。根據(jù)需要繼續(xù)選擇兀他所需Marker。2. 點擊 Done 關閉 Marker Manager 窗 I。3. 在樣品農(nóng)中，選擇含有第-種Marker的所有樣品孔。4. 在Marker Inspector對話框中Marker列衣的Use項下的方框中，打鉤選擇要用 的Marker,該Marker即顯示在相應的樣品孔中。5. 根據(jù)需要，遼復步驟34,設置其余Markero設置樣品類型1. 使用Ctrl和Shift鍵,在樣品表中選擇同一類型的所有樣品孔.2. 在Well Inspector對話

15、框中Marker列表的Task卜拉菜單中選擇樣品類熨：空 白對照選NTC；所有樣品選Unknowno3. 設置參比熒光：如果使用的是ABI公司的定最PCR試劑，TaqMan Universal PCR Master Mix 或者 SYBR Green PCR Master Mix,參比熒光(Passive Reference)選ROX：如果所用試劑中沒有參比熒光，請選None。4. 點擊右上角的X按鈕關閉Well Inspector窗口。四、參數(shù)設置1. 切換到SDS軟件的Instrument貝浙。PCR熱循環(huán)程序只冇609 個步驟，不 需要修改。2. 設置反應體積：終點讀板的標準反應體積是：

16、96孔板25 pL, 384孔板5 pL, 微量反應卡2pLo同-塊板上所有孔的反應體積必須一樣大小。五、填樣品表(可選)保存為模板1. 菜單 File -* Save As：對于企業(yè)版軟件，選擇 File -* Save Template to Database o2. 給文件另外取一個名稱。3. 在文件類型下拉菜單中，選SDS Templates (.sdt)o OK。設置樣品名1. 在反應板上選中含有第個樣品的所有反應孔。2. 在Sample Name欄輸入樣品名，回車。3. 重復1和2,命名其余樣品。增加或編輯條形碼、備注1. 在 SDS 軟件中，選擇 Tools Document I

17、nformation92. 在對話框中編輯條形碼或者備注。3. 完成后，點OK。保存到數(shù)據(jù)庫1. 在 File 卜拉菜單選擇 Save Document to Database2. (. Unique Name欄輸入文件名，Barcode欄切描或咅輸入條形碼。3. 在Comment欄，輸入255字以下的說明，點OK。4. 在 Save Document 對話框，點 OK.保存到文件系統(tǒng)1. 在SDS軟件的File下拉菜單中選擇Save As.2. 選好路徑，在File Name欄輸入文件名，也可以掃描或者輸入條形碼。3. 點 Save六、終點讀板準備好反應板并完成PCR循環(huán)。該PCR循環(huán)也nj

18、以在7900HT上進行，方法 20真3 SosymsABI Pnsm 7900HT 中文操作手冊請參照實時定最部分。1. 切換到SDS軟件的Instrument頁面。2. 在PIate-Read /頁面，點0pen/Close,彈出樣品架（在主機的右側）。3. 把樣品板放在托盤上，再單擊Open/Close按鈕，樣品架門動收回進入儀器里面, 并關閉上樣門。5點擊Start按鈕開始終點信號讀取。每塊板約需時10秒鐘。6. 程序結束后保存實驗結果。七、分析數(shù)據(jù)1. 在 SDS 軟件中，選擇 Analysis Analysis Settings ,2. 在Marker下拉菜單中選擇Marker。3. 在Analysis Settings對話屮，選擇是否便用口動分型Auto Caller。如果選擇 口動分型，輸入Quality value或者接受默認設置。4. 點OK接受分析參數(shù)，并退