藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證

1、1第四章第四章 藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證藥物分析教研室藥物分析教研室2內(nèi)容提要內(nèi)容提要第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證3第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)含量測(cè)定常用的方法含量測(cè)定常用的方法 容量分析法容量分析法( (滴定法滴定法) ) 光譜分析法光譜分析法 色譜分析法色譜分析法 4一、容量分析法（滴定法）一、容量分析法（滴定法）方法：方法：特點(diǎn)：特點(diǎn)：l 方法簡(jiǎn)便易行：價(jià)廉、簡(jiǎn)便、快速；方法簡(jiǎn)便易

2、行：價(jià)廉、簡(jiǎn)便、快速；l 方法耐用性高方法耐用性高l 準(zhǔn)確度高準(zhǔn)確度高（RSD0.2%）：適用于對(duì)準(zhǔn)確度要）：適用于對(duì)準(zhǔn)確度要求較高的試樣分析。求較高的試樣分析。l 專屬性差專屬性差適用范圍：適用范圍：化學(xué)原料藥物的含量測(cè)定?；瘜W(xué)原料藥物的含量測(cè)定。第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)5一、容量分析法一、容量分析法有關(guān)計(jì)算有關(guān)計(jì)算滴定度滴定度T （mg/ml）：每：每1 ml規(guī)定濃度的滴定液規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量。所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量。 被測(cè)物被測(cè)物 WA=TVB第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)61、滴定度的計(jì)算、滴定度

3、的計(jì)算滴定反應(yīng)：滴定反應(yīng)：aA (被測(cè)藥物被測(cè)藥物)+bB(滴定劑滴定劑)cC+dD MbamTm:滴定劑摩爾濃度；滴定劑摩爾濃度；M被測(cè)物摩爾質(zhì)量；被測(cè)物摩爾質(zhì)量；a/b:反應(yīng)反應(yīng)摩爾比摩爾比第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)72. 含量測(cè)定含量測(cè)定 直接滴定法直接滴定法 生成物滴定法生成物滴定法 剩余量滴定法剩余量滴定法 (1)(2)(3)第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)8(1) 直接滴定法% 100(%) WTV含量規(guī)定摩爾濃度實(shí)際摩爾濃度F%100%100100%(%) WFTVWTVWTV含量注意掌握滴定反應(yīng)的原理注意掌握滴定

4、反應(yīng)的原理, , 藥物與滴定劑在反應(yīng)藥物與滴定劑在反應(yīng)中的摩爾比中的摩爾比，正確計(jì)算滴定度和百分含量，正確計(jì)算滴定度和百分含量 濃度校正因子濃度校正因子9例：阿司匹林的含量測(cè)定例：阿司匹林的含量測(cè)定 精密稱取本品精密稱取本品0.4018g，加中性乙醇，加中性乙醇20ml溶解后，溶解后，加加3滴酚酞指示劑，用滴酚酞指示劑，用NaOH滴定液（滴定液（0.1002mol/L）滴定，消耗體積為滴定，消耗體積為22.20ml，求阿司匹林的含量？，求阿司匹林的含量？（ch.p每每1ml 0.1mol/L 的的NaOH滴定液相當(dāng)于滴定液相當(dāng)于18.02mg的阿司匹林）的阿司匹林）(1) 直接滴定法10解：精

5、密稱取供試品解：精密稱取供試品Ws=0.4018gNaOH實(shí)際濃度實(shí)際濃度0.1002mol/L，則，則F=0.1002/0.1=1.002消耗的消耗的NaOH滴定液體積：滴定液體積：V樣樣=22.20ml阿司匹林含量阿司匹林含量=100%SVF TW樣322.20 1.002 18.20 10100%0.401899.8%(1) 直接滴定法11(2) 生成物滴定法生成物滴定法%100%100100%(%) WFTVWTVWTV含量注意藥物與生成物注意藥物與生成物B，生成物，生成物B與滴定劑之與滴定劑之間的化學(xué)計(jì)量關(guān)系，正確計(jì)算滴定度。間的化學(xué)計(jì)量關(guān)系，正確計(jì)算滴定度。藥物與藥物與A作用生成作

6、用生成B, 用滴定液滴定用滴定液滴定B百分含量計(jì)算方法與直接滴定法相同百分含量計(jì)算方法與直接滴定法相同 12（3）回滴定（剩余滴定）法）回滴定（剩余滴定）法o（a）不做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算）不做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算%100)V%AAWTFVFBBA（含量VA 定量加入滴定液定量加入滴定液A的體積的體積(ml)VB 滴定液滴定液B在回滴中消耗的體積在回滴中消耗的體積(ml)FA 滴定液滴定液A的濃度校正因數(shù)的濃度校正因數(shù)FB 滴定液滴定液B的濃度校正因數(shù)的濃度校正因數(shù)TA 滴定液滴定液A的滴定度的滴定度W 供試品稱取量供試品稱取量13（3）回滴定（剩余滴定）法）回滴定（剩余滴定）法o （b）

7、做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算）做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算 %100)V%0BWFTVSB（含量VB0 空白實(shí)驗(yàn)消耗滴定液空白實(shí)驗(yàn)消耗滴定液B的體積的體積VBS 樣品實(shí)驗(yàn)消耗滴定液樣品實(shí)驗(yàn)消耗滴定液B的體積的體積FB 滴定液滴定液B的濃度校正因數(shù)的濃度校正因數(shù)TA 滴定液滴定液A的滴定度的滴定度W 供試品稱取量供試品稱取量14 司可巴比妥鈉含量測(cè)定司可巴比妥鈉含量測(cè)定: 本品約本品約0.1g, 加水加水10ml溶溶解解, 精密加溴滴定液精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml, 再加鹽酸再加鹽酸5ml, 放置放置15分鐘分鐘, 加碘化鉀試液加碘化鉀試液10ml, 用硫代硫酸鈉滴定用硫代硫酸鈉滴定液

8、液(0.1mol/L)滴定滴定, 滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正 W=0.1022g; 硫代硫酸鈉滴定液硫代硫酸鈉滴定液 F=1.038; 供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液15.73ml;空白空白23.21ml 15滴定度滴定度(mg/ml) 01.1327.260111 . 0MbamT司可巴比妥鈉司可巴比妥鈉M=260.27, 與溴摩爾比為與溴摩爾比為1:1 %8 .98%10010001022. 001.13038. 1)73.1521.23( %100)(%) 2322322BrOSNaOSNaS0WTFVV司可巴比妥含量16（一）紫外（一）紫外-

9、可見(jiàn)分光光度法可見(jiàn)分光光度法（二）熒光分析法（二）熒光分析法（三）紅外分光光度法（三）紅外分光光度法（四）原子吸收分光光度法（四）原子吸收分光光度法（五）火焰光度法（五）火焰光度法二、光譜分析法二、光譜分析法17（一）紫外（一）紫外可見(jiàn)分光光度法可見(jiàn)分光光度法 根據(jù)物質(zhì)對(duì)波長(zhǎng)為根據(jù)物質(zhì)對(duì)波長(zhǎng)為200200760 nm760 nm這一這一范圍的光吸收特性建立起來(lái)的一種定性、范圍的光吸收特性建立起來(lái)的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析的方法。定量和結(jié)構(gòu)分析的方法。 二、光譜分析法二、光譜分析法181. 1. 基本原理基本原理ECLIITA0lglgLambert -BeerLambert -Beer定律定律

10、百分吸光系數(shù)百分吸光系數(shù)( )：當(dāng)溶液濃度：當(dāng)溶液濃度c為為1%(g/ml)、液層厚度液層厚度(l)為為1cm時(shí)的吸光度時(shí)的吸光度(A)。%11cmE物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)及相應(yīng)的吸收系數(shù)是物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。該物質(zhì)的物理常數(shù)。二、光譜分析法二、光譜分析法192.2.特點(diǎn)與適用范圍特點(diǎn)與適用范圍特點(diǎn)：特點(diǎn)：l簡(jiǎn)便易行：儀器價(jià)格低廉、操作簡(jiǎn)便、易于普及簡(jiǎn)便易行：儀器價(jià)格低廉、操作簡(jiǎn)便、易于普及l(fā)靈敏度高，靈敏度高，1010-4-4 1010-7-7g/mlg/mll準(zhǔn)確度高準(zhǔn)確度高,RSD=2-5%,RSD=2-5%l專屬性較差專屬性較差適用范圍：適用范

11、圍：多用于藥物制劑的定量檢查，如片劑的多用于藥物制劑的定量檢查，如片劑的溶出度或含量均勻度檢查。溶出度或含量均勻度檢查。二、光譜分析法二、光譜分析法20（1 1）波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正）波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正標(biāo)準(zhǔn)汞燈中的較強(qiáng)譜線標(biāo)準(zhǔn)汞燈中的較強(qiáng)譜線237.83237.83、253.65253.65、275.28275.28、296.73296.73、313.16313.16、334.15nm334.15nm等等氘燈中氘燈中:486.03nm,656.10nm:486.03nm,656.10nm3. 3. 儀器的校正和檢定儀器的校正和檢定二、光譜分析法二、光譜分析法21（2 2）吸光度的準(zhǔn)確度校正）吸光度的準(zhǔn)確

12、度校正60mg60mg重鉻酸鉀用重鉻酸鉀用0.005mol/L0.005mol/L的硫酸溶液稀釋至的硫酸溶液稀釋至1000ml1000ml，在規(guī)定波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算吸收系數(shù)，與，在規(guī)定波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算吸收系數(shù)，與規(guī)定值比較。規(guī)定值比較。規(guī)定值：規(guī)定值：235nm 123.0235nm 123.0126.0126.0 257nm 142.8 257nm 142.8146.2146.2 313nm 47.0 313nm 47.050.350.3 350nm 105.5 350nm 105.5108.5108.5二、光譜分析法二、光譜分析法22（3）雜散光檢查）雜散光檢查規(guī)定試劑、濃度及在規(guī)定的波長(zhǎng)處

13、測(cè)定相應(yīng)透光率。規(guī)定試劑、濃度及在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定相應(yīng)透光率。 碘化鈉碘化鈉1.00（1g/ml）220nm 0.8%（透光率）（透光率） 亞硝酸鈉亞硝酸鈉5.00（1g/ml）340nm 0.8（透光率）（透光率）（4）吸收池校正）吸收池校正 兩吸收池測(cè)定的差值小于兩吸收池測(cè)定的差值小于1%二、光譜分析法二、光譜分析法234、測(cè)定條件、測(cè)定條件（1）對(duì)溶劑的要求：注意溶劑的截止波長(zhǎng)。）對(duì)溶劑的要求：注意溶劑的截止波長(zhǎng)。 （2）測(cè)定波長(zhǎng)的確證）測(cè)定波長(zhǎng)的確證（3）供試品溶液濃度）供試品溶液濃度應(yīng)使測(cè)得的吸光度在應(yīng)使測(cè)得的吸光度在0.30.7之間之間二、光譜分析法二、光譜分析法24 5 5、含量

14、測(cè)定、含量測(cè)定(1) 對(duì)照品比較法對(duì)照品比較法RRXXACACCx：供試品溶液的濃度：供試品溶液的濃度Ax：供試品溶液的吸光度：供試品溶液的吸光度CR：對(duì)照品溶液的濃度：對(duì)照品溶液的濃度AR：對(duì)照品溶液的吸光度：對(duì)照品溶液的吸光度A. 待測(cè)物與對(duì)照品在相同條件下測(cè)定待測(cè)物與對(duì)照品在相同條件下測(cè)定(儀器、溶劑、波長(zhǎng)儀器、溶劑、波長(zhǎng))B. 供試品溶液與對(duì)照品溶液濃度相近供試品溶液與對(duì)照品溶液濃度相近二、光譜分析法二、光譜分析法255 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定(1) 對(duì)照品比較法對(duì)照品比較法%100(%)WDCx含量原料藥原料藥百分含量的計(jì)算公式：百分含量的計(jì)算公式：D：稀釋體積：稀釋體積W：供試品取

15、樣量：供試品取樣量二、光譜分析法二、光譜分析法26 5 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定(1) 對(duì)照品比較法對(duì)照品比較法制劑制劑含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式：含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式：D：稀釋體積：稀釋體積W：供試品取樣量：供試品取樣量%100%/100%/gggg每單位實(shí)測(cè)含量標(biāo)示量標(biāo)示量測(cè)得量（ ）平均片重（片）供試品重（ ）標(biāo)示量（片）27 5 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定(1) 對(duì)照品比較法對(duì)照品比較法制劑含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式：制劑含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式：W(V)：平均片重：平均片重(裝量裝量)W：供試品取樣量：供試品取樣量B：制劑的標(biāo)示量：制劑的標(biāo)示量%100%XCD VVB標(biāo)示量%100%XCD WWB

16、標(biāo)示量固體制劑固體制劑液體制劑液體制劑）（VW28 5 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定(2) 吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法100)/(%11cmXXEAmlgCCx：供試品溶液的濃度：供試品溶液的濃度Ax：供試品溶液的吸光度：供試品溶液的吸光度 ：對(duì)照品溶液的濃度：對(duì)照品溶液的濃度A. 用本法測(cè)定時(shí)，吸光系數(shù)通常應(yīng)大用本法測(cè)定時(shí)，吸光系數(shù)通常應(yīng)大于于100；B. 注意儀器的校正與檢定注意儀器的校正與檢定%11cmE29 5 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定(2) 吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法1%1100%100%cmADELW含量原料藥百分含量的計(jì)算公式：原料藥百分含量的計(jì)算公式：30精密稱取貝諾酯精密稱取貝諾酯0.1500g

17、0.1500g，置于，置于100ml100ml的量筒中，加的量筒中，加無(wú)水乙醇適量，振搖微熱溶解后放冷，加無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇適量，振搖微熱溶解后放冷，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度搖勻，過(guò)濾，精密量取稀釋至刻度搖勻，過(guò)濾，精密量取5ml5ml至至1000ml1000ml量量筒中加水至刻度，用紫外分光光度法在筒中加水至刻度，用紫外分光光度法在240nm240nm波長(zhǎng)波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度為處測(cè)定吸收度為0.55850.5585，已知本品，已知本品240nm240nm處標(biāo)準(zhǔn)給處標(biāo)準(zhǔn)給定吸收系數(shù)定吸收系數(shù) 為為745745。求貝諾酯百分含量。求貝諾酯百分含量LCEALCEARcmRXcmX%11%11311%10.5

18、585100 1000100745 1005(%)100%100%99.95%0.1500cmADEW含量32 鹽酸氯丙嗪片劑的含量測(cè)定：取本品鹽酸氯丙嗪片劑的含量測(cè)定：取本品20片，精片，精密稱定為密稱定為8.100g，研細(xì)，精密稱取，研細(xì)，精密稱取0.4800g片粉，置片粉，置于于500ml量瓶中，加酸及水溶解并稀釋至刻度，取上量瓶中，加酸及水溶解并稀釋至刻度，取上清液清液5.00ml，置，置100ml量瓶中，加水至刻度，在量瓶中，加水至刻度，在254nm測(cè)得吸收度為測(cè)得吸收度為0.540，另取鹽酸氯丙嗪對(duì)照品，另取鹽酸氯丙嗪對(duì)照品，配成配成6.0g/ml的對(duì)照品溶液，同法在的對(duì)照品溶液，

19、同法在254nm處測(cè)的吸處測(cè)的吸收度為收度為0.564，標(biāo)示量為，標(biāo)示量為50mg/片，計(jì)算標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)？片，計(jì)算標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)？330.4800Wg8.1000.405020gWg500100100005.00mlD0.5406.05.7450.564XXRRAggCCmlmlA65.745 10000 0.4050 10(%)96.9%0.4800 0.0500CD WWB標(biāo)示量B=50 mg/片=0.050g/片34 維生素維生素B1注射液含量的測(cè)定：精密量取本品（規(guī)注射液含量的測(cè)定：精密量取本品（規(guī)格格2ml：50mg）2ml，置，置200ml量瓶中，加水稀釋至刻量瓶中，加水稀釋至刻度，

20、搖勻，精密量取度，搖勻，精密量取5ml，置，置100ml量瓶中，加鹽酸量瓶中，加鹽酸溶液（溶液（91000）稀釋至刻度，照紫外）稀釋至刻度，照紫外-可見(jiàn)分光光度可見(jiàn)分光光度法（附錄法（附錄 A），在），在246nm的波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度為的波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度為0.521，按維生素，按維生素B1 的吸收系數(shù)（的吸收系數(shù)（ ）為）為421，計(jì)算本，計(jì)算本品相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量品相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量1%1cmE351%1100100%0.521200 1002 1000421 1 1005100%99.0%50 2cmXAD VELCD VVBVB 示量% = 標(biāo)36（二）熒光分析法（二）熒光分析法

21、利用物質(zhì)的熒光特性進(jìn)行定性與定量測(cè)定的方法利用物質(zhì)的熒光特性進(jìn)行定性與定量測(cè)定的方法稱為熒光分析法。稱為熒光分析法。熒光發(fā)射光譜（熒光光譜）熒光發(fā)射光譜（熒光光譜）熒光激發(fā)光譜（熒光激發(fā)光譜（激發(fā)光譜激發(fā)光譜）371.1.特點(diǎn)與適用范圍特點(diǎn)與適用范圍特點(diǎn)：特點(diǎn)：l高靈敏度：高靈敏度：10-12 10-10g/ml，較，較UV-Vis高高l熒光自熄滅：溶液中熒光物質(zhì)濃度太大時(shí)，會(huì)有熒光自熄滅：溶液中熒光物質(zhì)濃度太大時(shí)，會(huì)有“自熄滅自熄滅”作用，因此熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液作用，因此熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行中進(jìn)行l(wèi)易受干擾：干擾因素多，必須做空白試驗(yàn)易受干擾：干擾因素多，必須做空白試驗(yàn)適用范

22、圍：適用范圍：（二）熒光分析法（二）熒光分析法 382.干擾及排除干擾及排除(1)溶劑溶劑空白試驗(yàn)空白試驗(yàn)(2)溶液溶液： l藥物濃度不宜過(guò)高，藥物濃度不宜過(guò)高，l懸浮物懸浮物過(guò)濾，過(guò)濾，l溶氧溶氧通惰性氣體除去通惰性氣體除去l溶液溶液pH。(3)玻璃儀器及測(cè)定池玻璃儀器及測(cè)定池高度潔凈高度潔凈 (4) 溫度：控制測(cè)定溫度溫度：控制測(cè)定溫度（二）熒光分析法（二）熒光分析法 393.測(cè)定方法與含量計(jì)算測(cè)定方法與含量計(jì)算 在一定實(shí)驗(yàn)條件時(shí)，在在一定實(shí)驗(yàn)條件時(shí)，在較稀濃度范較稀濃度范圍圍內(nèi)藥物的熒內(nèi)藥物的熒光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比。光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比。 對(duì)照品比較對(duì)照品比較法法

23、 rbrXbXrXrXrbrXbXRRRRCCCCRRRR（二）熒光分析法（二）熒光分析法 40 利用物質(zhì)在流動(dòng)相與固定相兩相中分配系數(shù)差異利用物質(zhì)在流動(dòng)相與固定相兩相中分配系數(shù)差異而得以分離，并在檢測(cè)中能檢出其信號(hào)，從而達(dá)到而得以分離，并在檢測(cè)中能檢出其信號(hào)，從而達(dá)到分分離、分析離、分析的一類分析方法。的一類分析方法。色譜分析法是分析混合物的最有力手段。色譜分析法是分析混合物的最有力手段。三三 色譜分析法色譜分析法411.1.特點(diǎn)與適用范圍特點(diǎn)與適用范圍特點(diǎn)：特點(diǎn)：l高靈敏度：高靈敏度：10-15 10-12g/ml，l高專屬性：高專屬性：l高效能與高速度：高效能與高速度：適用范圍：適用范圍

24、：廣泛應(yīng)用于藥物制劑的含量測(cè)定，尤其廣泛應(yīng)用于藥物制劑的含量測(cè)定，尤其是復(fù)方制劑含量測(cè)定的首選方法。是復(fù)方制劑含量測(cè)定的首選方法。三三 色譜分析法色譜分析法422.2.分類分類依據(jù)分離原理：依據(jù)分離原理：l吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與分子排阻吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與分子排阻色色譜等。譜等。依據(jù)分離方式：依據(jù)分離方式：lHPLC、GC、TLC等等三三 色譜分析法色譜分析法43Ch.P各品種項(xiàng)下的色譜條件各品種項(xiàng)下的色譜條件固定條件固定條件固定相種類固定相種類流動(dòng)相組成流動(dòng)相組成檢測(cè)器類型檢測(cè)器類型可變條件可變條件色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度流動(dòng)相各組成的比例、流速流動(dòng)相各組成

25、的比例、流速檢測(cè)器的靈敏度檢測(cè)器的靈敏度柱溫、進(jìn)樣量柱溫、進(jìn)樣量系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)441. 對(duì)儀器的一般要求對(duì)儀器的一般要求填充劑填充劑常用十八烷基硅烷鍵合硅膠（常用十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）離子交換色譜離子交換色譜離子交換填充劑離子交換填充劑分子排阻色譜分子排阻色譜凝膠或高分子多微球填充劑凝膠或高分子多微球填充劑檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器最常用。檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器最常用。熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器等。器等。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)451. 對(duì)儀器的一般要求對(duì)儀

26、器的一般要求流動(dòng)相：流動(dòng)相：反相色譜系統(tǒng)首選甲醇反相色譜系統(tǒng)首選甲醇-水系統(tǒng)；采用紫外末水系統(tǒng)；采用紫外末端波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，首選乙腈端波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，首選乙腈-水系統(tǒng)。水系統(tǒng)。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)462. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 指用規(guī)定的對(duì)照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗(yàn)指用規(guī)定的對(duì)照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)符合要求。包括溶液對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)符合要求。包括理論板數(shù)（理論板數(shù)（n）、分離度（）、分離度（R）、拖尾因子（）、拖尾因子（T）和重復(fù)性和重復(fù)性等四個(gè)指標(biāo)。等四個(gè)指標(biāo)。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)472. 系統(tǒng)適

27、用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（1）色譜柱的理論板數(shù)）色譜柱的理論板數(shù)(n)：用于評(píng)價(jià)色譜柱的分離：用于評(píng)價(jià)色譜柱的分離效能。一般為待測(cè)組分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的理論板數(shù)。效能。一般為待測(cè)組分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的理論板數(shù)。2254. 5hRWtn色譜柱的理論板數(shù)越多，柱效越高。色譜柱的理論板數(shù)越多，柱效越高。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)482. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（2）分離度（）分離度（R）：用于評(píng)價(jià)待測(cè)組分與相鄰共存無(wú)）：用于評(píng)價(jià)待測(cè)組分與相鄰共存無(wú)或難分離物質(zhì)之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)效能或難分離物質(zhì)之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)效能的關(guān)鍵指標(biāo)。的關(guān)鍵指標(biāo)。21WW2R12RR

28、tt除另有規(guī)定外，待測(cè)組分與相鄰共存物之間的分離除另有規(guī)定外，待測(cè)組分與相鄰共存物之間的分離度應(yīng)大于度應(yīng)大于1.5。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)492. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)l采用外標(biāo)法時(shí)，取對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣采用外標(biāo)法時(shí)，取對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積次，峰面積RSD應(yīng)應(yīng)2.0%；l采用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，配制相當(dāng)于采用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，配制相當(dāng)于80%、100%、120%的對(duì)的對(duì)照液，加入規(guī)定的內(nèi)標(biāo)，分別進(jìn)樣照液，加入規(guī)定的內(nèi)標(biāo)，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正次，計(jì)算平均校正因子，因子，RSD亦應(yīng)亦應(yīng)2.0%。 （3）重復(fù)性：用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣中，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值）重復(fù)性：用于評(píng)價(jià)

29、連續(xù)進(jìn)樣中，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值的重復(fù)性能。的重復(fù)性能。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)502. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（4）拖尾因子）拖尾因子(T)：用于評(píng)價(jià)色譜峰的對(duì)稱性。：用于評(píng)價(jià)色譜峰的對(duì)稱性。105. 02dWTh除另有規(guī)定外，用峰高定量時(shí)除另有規(guī)定外，用峰高定量時(shí)T應(yīng)在應(yīng)在0.95 1.05之間。之間。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)51 （1）內(nèi)標(biāo)法）內(nèi)標(biāo)法對(duì)照品對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)物內(nèi)標(biāo)物對(duì)照溶液，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算校正因子對(duì)照溶液，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算校正因子 3. 測(cè)定法測(cè)定法RRssCACAf ）校正因子（ 供試品供試品+內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)供試品溶液，進(jìn)樣

30、，測(cè)定供試品和內(nèi)供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定供試品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，計(jì)算含量標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，計(jì)算含量 sSXXCAAfC）含量（%100%XCDW含量（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)52 （2）外標(biāo)法）外標(biāo)法供試品供試品供試品溶液供試品溶液對(duì)照品對(duì)照品對(duì)照品溶液對(duì)照品溶液進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算含量進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算含量 RXRXAACC）含量（ 缺點(diǎn)：不易精確控制缺點(diǎn)：不易精確控制進(jìn)樣量，宜用定量環(huán)或進(jìn)樣量，宜用定量環(huán)或自動(dòng)進(jìn)樣自動(dòng)進(jìn)樣（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)53 HPLCHPLC主要用于抗生素、生化藥品及含雜質(zhì)干擾測(cè)主要用于抗生素、生化藥品及含

31、雜質(zhì)干擾測(cè)定的化學(xué)藥品。廣泛用于藥物制劑及多組分的含量測(cè)定的化學(xué)藥品。廣泛用于藥物制劑及多組分的含量測(cè)定。定。 在藥典中收載率呈大幅度上升趨勢(shì)。在藥典中收載率呈大幅度上升趨勢(shì)。 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)54（二）氣相色譜法（二）氣相色譜法 GC 用于本身具揮發(fā)性，或加熱氣化的供試品的測(cè)用于本身具揮發(fā)性，或加熱氣化的供試品的測(cè)定。如維生素定。如維生素E 1. 對(duì)對(duì)GC儀器一般要求儀器一般要求 l載氣為氮?dú)?；載氣為氮?dú)猓籰色譜柱為填充或毛細(xì)管柱色譜柱為填充或毛細(xì)管柱l固定液：甲基聚硅氧烷、聚乙二醇固定液：甲基聚硅氧烷、聚乙二醇l檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)器：氫火焰離

32、子化檢測(cè)器 l進(jìn)樣方式：溶液直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣。進(jìn)樣方式：溶液直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣。 552. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)除另有規(guī)定外，應(yīng)照除另有規(guī)定外，應(yīng)照HPLC項(xiàng)下的規(guī)定。項(xiàng)下的規(guī)定。3. 測(cè)定方法測(cè)定方法l手動(dòng)進(jìn)樣手動(dòng)進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)法定量?jī)?nèi)標(biāo)法定量l自動(dòng)進(jìn)樣自動(dòng)進(jìn)樣外標(biāo)法定量外標(biāo)法定量l標(biāo)準(zhǔn)加入法標(biāo)準(zhǔn)加入法可消除基質(zhì)效應(yīng)的影響可消除基質(zhì)效應(yīng)的影響（二）氣相色譜法（二）氣相色譜法56小結(jié)小結(jié)o 化學(xué)原料藥的含量測(cè)定化學(xué)原料藥的含量測(cè)定容量分析法；容量分析法；o 制劑的含量測(cè)定制劑的含量測(cè)定色譜分析法；色譜分析法；o 制劑的定量檢查制劑的定量檢查(溶出度、含量均勻度的檢溶出度、含量均勻度的檢查查

33、)光譜分析法；光譜分析法；57第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法概述概述分析前要采用一定的方法，分析前要采用一定的方法，使待測(cè)藥物或待測(cè)元使待測(cè)藥物或待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為適宜的狀態(tài)后再進(jìn)行分析測(cè)定。素轉(zhuǎn)化為適宜的狀態(tài)后再進(jìn)行分析測(cè)定。前處理的目的是前處理的目的是消除干擾，保護(hù)儀器消除干擾，保護(hù)儀器，提高方法，提高方法的準(zhǔn)確度、精密度、選擇性和靈敏度。的準(zhǔn)確度、精密度、選擇性和靈敏度。樣品前處理是分析檢測(cè)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)樣品前處理是分析檢測(cè)的關(guān)鍵環(huán)節(jié) 。58前處理對(duì)象：前處理對(duì)象：1. 含金屬（含金屬（Ca、Fe、Hg、Zn）2. 鹵素（鹵素（F、Cl、Br、I）、）、N、P、S等等 第

34、二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法591.含鹵素有機(jī)藥物含鹵素有機(jī)藥物1）鹵素與脂肪鏈的碳原子相連，結(jié)合不牢固；）鹵素與脂肪鏈的碳原子相連，結(jié)合不牢固； CCl3C(CH3)2OH2)鹵素與芳環(huán)相連，結(jié)合牢固。鹵素與芳環(huán)相連，結(jié)合牢固。 樣品前處理分類樣品前處理分類泛影酸泛影酸第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法60 2.含金屬的藥物含金屬的藥物1)有機(jī)金屬藥物有機(jī)金屬藥物：金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連，：金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連，結(jié)合比較牢固，如結(jié)合比較牢固，如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利 樣品前處理分類樣品前處理分類OCH

35、2COONaCONHCH2CHCH2HgOHOCH3NHCONH2AsOOHHOHgOCOCH3第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法61 2.含金屬的藥物含金屬的藥物2)含金屬的有機(jī)藥物：含金屬的有機(jī)藥物：金屬原子不與碳原子直接相連，金屬原子不與碳原子直接相連，通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物，溶液中通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物，溶液中能直接離解出金屬離子。能直接離解出金屬離子。 如如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵 樣品前處理分類樣品前處理分類CCHCCOOOFeOCCHOCHOOOCOOSbSbOOCOOOCHOCHC2

36、K+ 3H2O第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法62 根據(jù)鹵素或金屬在分子中結(jié)合牢固程度不根據(jù)鹵素或金屬在分子中結(jié)合牢固程度不同處理方法而異。同處理方法而異。不經(jīng)有機(jī)破壞不經(jīng)有機(jī)破壞結(jié)合不牢結(jié)合不牢固固經(jīng)有機(jī)破壞經(jīng)有機(jī)破壞結(jié)合牢固結(jié)合牢固前處理方法前處理方法 樣品前處理方法樣品前處理方法第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法63 1.直接測(cè)定法；直接測(cè)定法； 2.經(jīng)水解后測(cè)定法；經(jīng)水解后測(cè)定法； 3.經(jīng)氧化還原后測(cè)定法。經(jīng)氧化還原后測(cè)定法。 不對(duì)藥物分子的有機(jī)結(jié)構(gòu)部分進(jìn)行完全破壞不對(duì)藥物分子的有機(jī)結(jié)構(gòu)部分進(jìn)行完全破壞通過(guò)選用適當(dāng)溶劑溶解或經(jīng)簡(jiǎn)單回流處理，使待

37、通過(guò)選用適當(dāng)溶劑溶解或經(jīng)簡(jiǎn)單回流處理，使待測(cè)元素電離、離解，轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)離子進(jìn)行測(cè)定，測(cè)元素電離、離解，轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)離子進(jìn)行測(cè)定，適用于含金屬有機(jī)藥物或結(jié)合不牢固的含鹵素藥適用于含金屬有機(jī)藥物或結(jié)合不牢固的含鹵素藥物的分析。物的分析。一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法641.直接測(cè)定法直接測(cè)定法適用于金屬離子藥物溶解后，可直接進(jìn)行滴定適用于金屬離子藥物溶解后，可直接進(jìn)行滴定如：葡萄糖酸鈣的含量測(cè)定如：葡萄糖酸鈣的含量測(cè)定一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法65 2.經(jīng)水解后測(cè)定法經(jīng)水解后測(cè)定法（1）堿水解后測(cè)定法）堿水解后測(cè)定法 適用于鹵素原子與脂肪鏈的碳原子相連

38、，結(jié)合適用于鹵素原子與脂肪鏈的碳原子相連，結(jié)合不牢固的藥物。不牢固的藥物。一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法66CCl3C(CH3)2OH 三氯叔丁醇三氯叔丁醇溶于溶于NaOH溶液加熱回流使其水解，將有機(jī)結(jié)合的溶液加熱回流使其水解，將有機(jī)結(jié)合的鹵素，經(jīng)水解作用轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)的鹵素離子，然后鹵素，經(jīng)水解作用轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)的鹵素離子，然后選用間接銀量法進(jìn)行測(cè)定。選用間接銀量法進(jìn)行測(cè)定。CCl3C(CH3)2OH+NaOH(CH3)2CO+NaCl+HCOONaNaCl+AgNO3AgCl+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3回流回流一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)

39、有機(jī)破壞的分析方法67 2.經(jīng)水解后測(cè)定法經(jīng)水解后測(cè)定法（2）酸水解后測(cè)定法）酸水解后測(cè)定法 將含金屬的有機(jī)藥物與適當(dāng)?shù)乃峁矡?，將不溶將含金屬的有機(jī)藥物與適當(dāng)?shù)乃峁矡幔瑢⒉蝗苄缘慕饘冫}類，水解置換為可溶性鹽，然后用配位性的金屬鹽類，水解置換為可溶性鹽，然后用配位滴定或剩余酸堿滴定法滴定或剩余酸堿滴定法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法68 硬脂酸鎂硬脂酸鎂硬脂酸鎂與定量硫酸共沸，水解生成硬脂酸和硬脂酸鎂與定量硫酸共沸，水解生成硬脂酸和硫酸鎂，剩余的酸以氫氧化鈉滴定硫酸鎂，剩余的酸以氫氧化鈉滴定Mg(C17H35COO)2+H2SO4MgSO4+2C17H35COOHH2SO4

40、+NaOHNa2SO4+H2O回流回流一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法693.氧化還原后測(cè)定法氧化還原后測(cè)定法 鹵素結(jié)合于苯環(huán)，結(jié)合牢固，在堿性鹵素結(jié)合于苯環(huán)，結(jié)合牢固，在堿性(或酸性或酸性) 條件下加還原劑鋅粉，加熱回流。形成無(wú)機(jī)鹵化條件下加還原劑鋅粉，加熱回流。形成無(wú)機(jī)鹵化物后用測(cè)定。物后用測(cè)定。如：泛影酸含量測(cè)定。如：泛影酸含量測(cè)定。一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法70+3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2ONaOH 回流回流 Zn粉粉 加熱加熱 NaI+AgNO3AgI+NaNO3曙紅為吸附指示劑曙紅為吸附指示劑黃色黃色玫瑰紅色

41、玫瑰紅色例：泛影酸的含量測(cè)定例：泛影酸的含量測(cè)定銀量法銀量法71含氮、硫、磷有機(jī)藥物及有機(jī)金屬藥物中待測(cè)離子含氮、硫、磷有機(jī)藥物及有機(jī)金屬藥物中待測(cè)離子與碳原子結(jié)合牢固，用上述方法難以成為無(wú)機(jī)的化與碳原子結(jié)合牢固，用上述方法難以成為無(wú)機(jī)的化合物，此時(shí)必須采用有機(jī)破壞的方法，使之轉(zhuǎn)變?yōu)楹衔?，此時(shí)必須采用有機(jī)破壞的方法，使之轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)化合物，方可進(jìn)行測(cè)定。無(wú)機(jī)化合物，方可進(jìn)行測(cè)定。 二二 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一）濕法破壞法（一）濕法破壞法（二）干法破壞法（二）干法破壞法72（一）濕法破壞法（一）濕法破壞法 主要采用強(qiáng)酸進(jìn)行有機(jī)破壞，將有機(jī)結(jié)合的待測(cè)主要采用強(qiáng)酸進(jìn)行有機(jī)破壞，將

42、有機(jī)結(jié)合的待測(cè)元素轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y(cè)定無(wú)機(jī)化合物。本法可用于生物制元素轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y(cè)定無(wú)機(jī)化合物。本法可用于生物制品中氮、磷或金屬元素的測(cè)定。品中氮、磷或金屬元素的測(cè)定。 根據(jù)所用試劑試劑不同，可分為：根據(jù)所用試劑試劑不同，可分為： 1）硝酸）硝酸高氯酸法高氯酸法 2）硫酸）硫酸硫酸鹽法硫酸鹽法 3）硝酸）硝酸硫酸法硫酸法 4）其他濕法）其他濕法二二 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法73 例：例：凱氏定氮法凱氏定氮法以以硫酸硫酸-硫酸鹽法硫酸鹽法為基礎(chǔ)的為基礎(chǔ)的含氮有機(jī)藥物定量分含氮有機(jī)藥物定量分析方法。析方法。 適用于含氮有機(jī)藥物的前處理。適用于含氮有機(jī)藥物的前處理。二二 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)

43、有機(jī)破壞的分析方法741.原理：原理：供試品供試品NH4HSO4+(NH4)2SO42NaOH+(NH4)2SO4Na2SO4+2NH3+2H2ONH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3 +H2OH2SO4吸收：吸收：2%硼酸溶液吸收液硼酸溶液吸收液凱氏定氮法凱氏定氮法75（1）消解（凱氏燒瓶中進(jìn)行）消解（凱氏燒瓶中進(jìn)行）操作操作將將樣品、樣品、H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凱放入凱氏燒瓶中一起加熱，使被測(cè)有機(jī)物含氮化合物中的氏燒瓶中一起加熱，使被測(cè)有機(jī)物含氮化合物中的N全部轉(zhuǎn)化為銨鹽的形式全部轉(zhuǎn)化為銨鹽的形式 (NH4)2SO4、NH4HSO42.測(cè)定法測(cè)定法分為分為3個(gè)步驟個(gè)步

44、驟消解、蒸餾吸收、滴定消解、蒸餾吸收、滴定凱氏定氮法凱氏定氮法76消解中各試劑作用消解中各試劑作用H2SO4氧化劑和炭化劑，生成氧化劑和炭化劑，生成SO2和和H2OK2SO4提高提高H2SO4沸點(diǎn)縮短消解時(shí)間沸點(diǎn)縮短消解時(shí)間CuSO4催化劑，使消解速度加快催化劑，使消解速度加快消解產(chǎn)物消解產(chǎn)物(NH4)2SO4、NH4HSO4分解完全的依據(jù)是分解液應(yīng)為無(wú)色或綠色分解完全的依據(jù)是分解液應(yīng)為無(wú)色或綠色凱氏定氮法凱氏定氮法77（2）蒸餾與吸收）蒸餾與吸收蒸餾：消解液加入蒸餾：消解液加入40%的的NaOH溶液后蒸餾溶液后蒸餾2NaOH+(NH4)2SO4Na2SO4+2NH3+2H2ONH4HSO4+

45、NaOHNaHSO4+NH3 +H2O吸收：吸收：2%硼酸溶液吸收液硼酸溶液吸收液凱氏定氮法凱氏定氮法78（3）滴定）滴定直接滴定法直接滴定法滴定液：滴定液：H2SO4滴定液（滴定液（0.05mol/L） 每每1ml的的0.05mol/L H2SO4=1.401mg的氮的氮指示劑：甲基紅指示劑：甲基紅溴甲酚綠混合指示劑溴甲酚綠混合指示劑 終點(diǎn)顏色：終點(diǎn)顏色：藍(lán)綠色藍(lán)綠色灰紫色灰紫色NH3+H3BO3NH3H3BO3(NH4)2SO4+2H3BO3NH3H3BO3+H2SO4傳遞作用傳遞作用凱氏定氮法凱氏定氮法79（3）滴定）滴定剩余滴定法剩余滴定法吸收液吸收液 將蒸餾出來(lái)的將蒸餾出來(lái)的NH3用

46、定量、過(guò)量的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或用定量、過(guò)量的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸吸收，過(guò)量的酸用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液滴定。硫酸吸收，過(guò)量的酸用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液滴定。 凱氏定氮法凱氏定氮法8081 凱氏定氮法可分為：凱氏定氮法可分為： 第一法（常量法）第一法（常量法）含氮量含氮量2530mg H2SO4滴定液（滴定液（0.05mol/L） 第二法（半微量法）第二法（半微量法）含氮量含氮量1.02.0mg H2SO4滴定液（滴定液（0.005mol/L）凱氏定氮法凱氏定氮法82（二）干法破壞（二）干法破壞 適用于含鹵素、硫、磷等有機(jī)物的前處理，亦適用于含鹵素、硫、磷等有機(jī)物的前處理，亦可用于含硒、砷鹽藥物的測(cè)定。可用于含硒、砷鹽藥物的測(cè)定。1

47、、高溫?zé)胱品?、高溫?zé)胱品?、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法三三 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法831、高溫?zé)胱品?、高溫?zé)胱品ㄖ饕糜诤u素藥物的鑒別。主要用于含鹵素藥物的鑒別。本法將有機(jī)藥物經(jīng)高溫本法將有機(jī)藥物經(jīng)高溫灼燒灰化灼燒灰化，使有機(jī)結(jié)構(gòu)分，使有機(jī)結(jié)構(gòu)分解而待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)元素或可溶性的無(wú)機(jī)鹽。解而待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)元素或可溶性的無(wú)機(jī)鹽。將適量樣品置坩堝中，常加入無(wú)水將適量樣品置坩堝中，常加入無(wú)水Na2CO3、Mg(NO3)2、Ca(OH)2、ZnO等輔助灰化等輔助灰化，混合均，混合均勻后，先小火加熱，使樣品完全勻后，先小火加熱，使樣品完全炭化炭化，然后放入，然后放入高溫爐中灼燒，使

48、其灰化完全。高溫爐中灼燒，使其灰化完全。（二）干法破壞（二）干法破壞84 （1）原理）原理 將將有機(jī)藥物有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燒瓶中進(jìn)行燃燒，放入充滿氧氣的密閉燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的待測(cè)物質(zhì)吸收在適當(dāng)并將燃燒所產(chǎn)生的待測(cè)物質(zhì)吸收在適當(dāng)吸收液吸收液中，中，然后根據(jù)待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適當(dāng)分析方法進(jìn)行然后根據(jù)待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適當(dāng)分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。鑒別、檢查或含量測(cè)定。 適用于含適用于含鹵素及硫、磷、硒等藥物鹵素及硫、磷、硒等藥物的鑒別、檢查的鑒別、檢查和含量測(cè)定。和含量測(cè)定。2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法85（2 2）儀器裝置）儀器裝置86容量大小隨樣品量而定，一般容

49、量大小隨樣品量而定，一般500ml、1000ml。取樣量通常為取樣量通常為1020 mg，使用，使用500 ml燃燒瓶。燃燒瓶。含氟藥物用石英或聚氯乙烯制成的燃燒瓶。含氟藥物用石英或聚氯乙烯制成的燃燒瓶。硬質(zhì)玻璃碘瓶硬質(zhì)玻璃碘瓶 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法87鉑絲鉑絲瓶塞底部熔封一根鉑絲，鉑絲下端做成螺旋狀，瓶塞底部熔封一根鉑絲，鉑絲下端做成螺旋狀，長(zhǎng)度約為瓶身的長(zhǎng)度約為瓶身的2/3；鉑絲作用鉑絲作用 a.固定樣品固定樣品 b.催化作用催化作用使樣品分解完全使樣品分解完全2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法88無(wú)灰濾紙無(wú)灰濾紙樣品研細(xì)后放中間，樣品研細(xì)后放中間，按照虛線折疊固定于鉑絲按照虛線折疊固定于鉑

50、絲下端螺旋處。下端螺旋處。2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法89 稱樣用材料及稱樣稱樣用材料及稱樣 A. 固體樣品固體樣品 無(wú)灰濾紙無(wú)灰濾紙 B. 液體樣品液體樣品 紙袋紙袋 C. 軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測(cè)成分軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測(cè)成分的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，外層再用無(wú)灰濾紙包裹的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，外層再用無(wú)灰濾紙包裹2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法90（4）操作）操作取樣取樣1020mg，放入濾紙包好，放入濾紙包好樣品樣品燃燒產(chǎn)物燃燒產(chǎn)物吸收液吸收液適宜法測(cè)定適宜法測(cè)定吸收于吸收于燃燒燃燒O2/Pt加吸收液、通氧加吸收液、通氧燃燒燃燒吸收吸收測(cè)定測(cè)定2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法91 （5）注意

51、事項(xiàng)）注意事項(xiàng) 氧氣要充分氧氣要充分使樣品燃燒完全，燃燒完全時(shí)沒(méi)有黑色炭化物。使樣品燃燒完全，燃燒完全時(shí)沒(méi)有黑色炭化物。樣品燃燒時(shí)，溫度很高，燃燒瓶?jī)?nèi)壓力很大，有爆樣品燃燒時(shí)，溫度很高，燃燒瓶?jī)?nèi)壓力很大，有爆炸的可能性，必須采取防護(hù)措施。炸的可能性，必須采取防護(hù)措施。防爆防爆2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法92 吸收液吸收液定量吸收待測(cè)元素各種價(jià)態(tài)并轉(zhuǎn)化為單一定量吸收待測(cè)元素各種價(jià)態(tài)并轉(zhuǎn)化為單一價(jià)態(tài)。價(jià)態(tài)。 根據(jù)被測(cè)物種類及分析方法選擇根據(jù)被測(cè)物種類及分析方法選擇: H2O、H2O-NaOH、H2O-NaOH-H2O2吸收完全吸收完全:一般振搖一般振搖30min，燃燒瓶看不到煙霧。，燃燒瓶看不到煙霧

52、。吸收液選擇吸收液選擇Cl-、F- 白色煙霧白色煙霧Br- 棕色、棕色、I- 紫色紫色2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法93含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物氟化物、氯化物氟化物、氯化物R-XX-+CO2+H2OO2/Pt 氟或氯以離子狀態(tài)存在，可選氟或氯以離子狀態(tài)存在，可選用水或水用水或水-氫氧化鈉氫氧化鈉吸收后可直接測(cè)定。吸收后可直接測(cè)定。2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法94R-BrR-BrBrBr2 2+Br+Br- -+CO+CO2 2+H+H2 2O OO O2 2/Pt/Pt量大量大 量少量少含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物溴化物溴化物 燃燒后以溴化氫和單質(zhì)溴的混合物存在，可在水燃

53、燒后以溴化氫和單質(zhì)溴的混合物存在，可在水-氫氧化鈉吸收液中加氫氧化鈉吸收液中加SO2飽和溶液還原飽和溶液還原Br2Br- 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法95含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物 碘化物碘化物R-IR-II I2 2+I+I- -+IO+IO3 3- -+IO+IO_ _+CO+CO2 2+H+H2 2O OO O2 2/Pt/Pt量大量大 微量微量 量少量少銀量法銀量法 I-+Ag+ AgI 水水-氫氧化鈉氫氧化鈉-SO2飽和溶液飽和溶液碘量法碘量法 I2+2S2O32- S4O62-+2I-水水-氫氧化鈉溶液吸收，用氫氧化鈉溶液吸收，用溴溴-醋酸醋酸溶液氧化為溶液氧化為IO3

54、- 再用再用KI還原為還原為I22、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法96含硫藥物的燃燒產(chǎn)物含硫藥物的燃燒產(chǎn)物R-SSO3+H2O+CO2O2/PtSO3+H2O2+H2O SO42-SO42-+BaCl2 BaSO42、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法97含磷藥物的燃燒產(chǎn)物含磷藥物的燃燒產(chǎn)物R-PP2O5+H2O+CO2O2/PtP2O5+HNO3+H2O H3PO4采用磷鉬藍(lán)比色法測(cè)定含量采用磷鉬藍(lán)比色法測(cè)定含量磷酸磷酸+鉬酸銨鉬酸銨 磷鉬酸磷鉬酸 磷鉬藍(lán)磷鉬藍(lán) 還原劑還原劑2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法98含硒藥物的燃燒產(chǎn)物含硒藥物的燃燒產(chǎn)物R-SeSeO2+SeO3+H2O+CO2O2/PtSeO2+SeO3+

55、HNO3 H2SeO4 與與二氨基萘二氨基萘反應(yīng)生成反應(yīng)生成綠色熒光物質(zhì)綠色熒光物質(zhì) 比色法測(cè)定含量比色法測(cè)定含量2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法99實(shí)例實(shí)例碘苯酯的含量測(cè)定碘苯酯的含量測(cè)定原理：原理：有機(jī)碘化物，用氧瓶燃燒分解為碘化物，再有機(jī)碘化物，用氧瓶燃燒分解為碘化物，再 被氧化為游離碘后被吸收液吸收被氧化為游離碘后被吸收液吸收2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法100燃燒燃燒吸收吸收（NaOH+H2O）R-II2+NaI+NaIO3+CO2+H2O+NaClO加入溴加入溴醋酸氧化醋酸氧化劑劑將將I-、I2氧化為氧化為IO3-2NaI+Br2=2NaBr+I2I2+5Br2+6H2O=2HIO3+10H

56、Br2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法101加入甲酸除去過(guò)量的溴加入甲酸除去過(guò)量的溴Br2+HCOOH2HBr+CO2加加KI還原還原KI+IO3-3I2+H2O滴滴定定I2+2Na2S2O32HNaI+Na2S4O6至淀粉指示劑藍(lán)色消失至淀粉指示劑藍(lán)色消失2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法102第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證分析方法驗(yàn)證目的：證明采用的分析方法準(zhǔn)確、分析方法驗(yàn)證目的：證明采用的分析方法準(zhǔn)確、可靠。（能反應(yīng)真實(shí)測(cè)定結(jié)果）可靠。（能反應(yīng)真實(shí)測(cè)定結(jié)果） 分析方法驗(yàn)證應(yīng)用對(duì)象分析方法驗(yàn)證應(yīng)用對(duì)象1.研究新藥制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證；研究新藥制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需對(duì)分析

57、方法進(jìn)行驗(yàn)證；2.藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑組分變更、原分析方法藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑組分變更、原分析方法修訂時(shí)需對(duì)質(zhì)量分析方法進(jìn)行驗(yàn)證；修訂時(shí)需對(duì)質(zhì)量分析方法進(jìn)行驗(yàn)證；3.發(fā)表研究論文對(duì)建立的分析方法進(jìn)行驗(yàn)證。發(fā)表研究論文對(duì)建立的分析方法進(jìn)行驗(yàn)證。103需驗(yàn)證的項(xiàng)目需驗(yàn)證的項(xiàng)目驗(yàn)證的內(nèi)容驗(yàn)證的內(nèi)容準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 定量限定量限防腐劑防腐劑溶出度溶出度,釋放度釋放度鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查含量測(cè)定含量測(cè)定精密度精密度 專屬性專屬性 檢測(cè)限檢測(cè)限 線性線性 范圍范圍 耐用性耐用性重復(fù)性重復(fù)性中間精密度中間精密度重現(xiàn)性重現(xiàn)性 第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證104一、

58、準(zhǔn)確度（一、準(zhǔn)確度（accuracy） 測(cè)量值與真實(shí)值接近的程度測(cè)量值與真實(shí)值接近的程度 表表 示示: 回收率回收率 測(cè)定方法：回收試驗(yàn)測(cè)定方法：回收試驗(yàn) 加樣回收試驗(yàn)加樣回收試驗(yàn)105（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度 1、原料藥、原料藥 回收試驗(yàn)：回收試驗(yàn)： 空白空白+已知量已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為測(cè)定值為M100%MRA一、準(zhǔn)確度（一、準(zhǔn)確度（accuracy）106加樣回收試驗(yàn)：加樣回收試驗(yàn)：已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品的真實(shí)樣品+已知量已知量A的的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，

59、測(cè)定值為M。100%MPRA（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度 1、原料藥、原料藥一、準(zhǔn)確度（一、準(zhǔn)確度（accuracy）107 原料藥原料藥 （1）可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定）可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定（2）用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法）用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。 %100%加入量測(cè)得量回收率一、準(zhǔn)確度（一、準(zhǔn)確度（accuracy）108 制劑空白輔料加入已知含量的對(duì)照品，加入量制劑空白輔料加入已知含量的對(duì)照品，加入量為已知制劑濃度的為已知制劑濃度的80%、100%、120%；每一；每一濃度測(cè)

60、濃度測(cè)3份份 n=9 2、 制劑制劑（1）模擬處方法）模擬處方法: 即采用在空白輔料中加入原料藥即采用在空白輔料中加入原料藥對(duì)照品的方法。對(duì)照品的方法。%100%加入量測(cè)得量回收率一、準(zhǔn)確度（一、準(zhǔn)確度（accuracy）109%100%加入量本底量測(cè)得量回收率（2）標(biāo)準(zhǔn)添加法）標(biāo)準(zhǔn)添加法: 如不能得到制劑的全部組分，如不能得到制劑的全部組分，可向已知含量制劑定量中加入被測(cè)物對(duì)照品進(jìn)行可向已知含量制劑定量中加入被測(cè)物對(duì)照品進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定。 加入已知純度對(duì)照品量為已知含量制劑濃度的加入已知純度對(duì)照品量為已知含量制劑濃度的80%、100%、120%，每一濃度測(cè)，每一濃度測(cè)3份份 n=9一、準(zhǔn)確度（