趙明明-磁珠純化的原理

1、磁珠純化的原理磁珠純化的原理膠膠回收回收玻璃玻璃奶奶法法玻璃奶的制作1.石英砂磨成325目的玻璃粉（研磨2小時左右）;粉末顆粒的大小，指的是粉末可以通過325目的篩網(wǎng)2. 50克玻璃粉懸于加有200mL蒸餾水的燒杯中,攪拌混勻后,靜置90min;3.將上清轉(zhuǎn)移至離心管中6000g離心10min;4.倒掉上清,將玻璃粉重懸于1.5mL 25%的硝酸中,室溫放置過夜; （新購置的玻璃器皿含有較多的游離堿，需要在酸中浸泡數(shù)小時，浸泡后再沖洗干凈）5. 6000g離心10min,沉淀玻璃粉;6.倒掉上清,將玻璃粉用無菌雙蒸水洗滌4-6次,直至pH值中性;7. 用無菌雙蒸水重懸玻璃粉,配成50%勻漿;8

2、.等分成100l樣品, 貯存于-70;待用的樣品可貯存于-20或4.切取目的DNA條帶溶膠結(jié)合玻璃奶離心沉淀玻璃奶洗脫DNA漂洗玻璃奶操作步驟操作步驟原理原理玻璃奶(Glassmilk) 是一種白色硅顆粒，能結(jié)合0.2kb至50kb大小的DNA（雙鏈、單鏈、線性、環(huán)狀或超螺旋）。 DNA與玻璃奶結(jié)合原理 在高鹽狀態(tài)下，玻璃奶周圍的負(fù)電荷被打破，并允許DNA的磷酸負(fù)電荷與玻璃奶特異性結(jié)合。在低鹽（H2O或1TE）時溶解分離。鹽濃度 DNA100bp:低鹽狀態(tài)下結(jié)合率高。pH值 pH7.0:結(jié)合率高。磁珠種類磁珠：磁珠：超順磁性納米顆粒硅硅磁（磁（Magnetic Silica Particle）

3、：）：磁珠微珠表面包裹一層硅材料，來吸附核酸，其純化原理類型于玻璃奶的純化方式。氧化硅羥基磁珠：氧化硅羥基磁珠：此種微球具有核殼結(jié)構(gòu)，即超順磁性核心及無機氧化硅外殼，表面修飾大量硅烷醇基團。硅烷醇基團（羥基）在chaotropic（如鹽酸胍、異硫氰酸胍等）存在的條件下，能夠和溶液中的核酸通過疏水作用、氫鍵作用和靜電作用等發(fā)生特異性結(jié)合，而不與蛋白和其他雜質(zhì)結(jié)合。氧化硅羧基磁珠：氧化硅羧基磁珠：該磁珠表面修飾有羧基官能團，能夠在特殊化學(xué)試劑（如EDC）的作用下將蛋白、寡聚核苷酸等生物配體共價偶聯(lián)到磁珠表面，可應(yīng)用在蛋白純化、核酸純化、親和層析、細(xì)胞分類篩選、免疫測定分析和臨床診斷等多個生物領(lǐng)域。

4、SA磁珠（磁珠（Fe3O4/SiO2/SA)：利用生物納米表面技術(shù)，使重組Streptavidin高密度定向包被到超順磁性微球表面，其在表面的包被密度高達(dá)9.31013 moleculescm-2，排列均勻，并朝向一致。產(chǎn)品具有較高的生物素結(jié)合效率和較低的蛋白及DNA非特異吸附率，每毫克磁珠結(jié)合游離生物素的量可達(dá)到1200 pmol以上。磁珠品牌Agencourt Bioscience Corporation（Beckman Coulter Company） Agencourt AMPure XP beadsBruker Daltonics GenoPure ds Genopure oligo

5、（single-stranded DNAs）Macherey-Nagel NucleoMag 96 PCROmega Mag bind NGS Clean-IT 96 KitNEB NEBNext Oligo d(T)25 Magnetic Beads NEBNext Protein A Magnetic Beads Agilent Streptavidin T1 magnetic beads磁珠選擇大小樣品起始樣品起始100l，0.55去除大片段后去除大片段后155 l，0.16largetargetWhat plays the role in size selection is not A

6、MPure beads, but its buffer.磁珠選擇大小stock buffer: 20% PEG 8000, 2.5M NaCl, Tris磁珠選擇大小Roche磁珠選擇大小12 l product was mixed with 12 l of 12p XP beads and incubated at RT for 6 minutes. The supernatant was then mixed with 12 l of AMPure XP beads and 5 l of 40% of PEG8000 and eluted with 10 l of nuclease-fre

7、e water, it was then again purified using 12 l of AMPure XP beads and eluted in 30 mL of EB buffer.For size-selection using the SPRI beads, we replaced the stock buffer of AMPure XP beads with a 12% PEG-8000 and 2.5 M NaCl solution (12p XP buffer). One mL of Ampure XP beads were placed on a magnetic stand and left for 10 minutes. Thesupernatant was then removed and the beads w