222動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體

1、2.2.22.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體一、動(dòng)物細(xì)胞融合一、動(dòng)物細(xì)胞融合 細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)兩個(gè)細(xì)胞正在融合兩個(gè)細(xì)胞正在融合 受精作用受精作用概念：概念： 動(dòng)物細(xì)胞融合也稱動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞形成多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞一個(gè)細(xì)胞的過程。的過程。一、動(dòng)物細(xì)胞融合一、動(dòng)物細(xì)胞融合誘導(dǎo)方式誘導(dǎo)方式物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法生物法：生物法：滅活的病毒滅活的病毒滅活的仙臺(tái)病毒滅活的仙臺(tái)病毒喪失感染性喪失感染性（不感染細(xì)胞）（不感染細(xì)胞）保留融合活性保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）方法：方法

2、：動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞融合融合過程過程: :不同不同DNADNA的兩個(gè)細(xì)胞的兩個(gè)細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂動(dòng)物細(xì)胞融合過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程原理：原理： 細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法 去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散

3、后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒用途用途獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體二、單克隆抗體二、單克隆抗體什么是抗體？什么是抗體？ 抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。免疫功能的球蛋白。漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。 抗原抗原刺激刺激漿細(xì)胞漿細(xì)胞 抗體抗體特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反

4、應(yīng)不夠靈敏傳統(tǒng)血清抗體的制備途徑：傳統(tǒng)血清抗體的制備途徑：二、單克隆抗體二、單克隆抗體動(dòng)物體動(dòng)物體傳統(tǒng)血清抗體的制備的缺陷：傳統(tǒng)血清抗體的制備的缺陷：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？ 利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能 利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性 利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞性的雜交瘤細(xì)胞 利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞科勒科勒米爾斯坦米爾斯坦榮獲榮獲19841984年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)

5、學(xué)獎(jiǎng)年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖無限增殖雜種雜種細(xì)胞細(xì)胞二、單克隆抗體二、單克隆抗體單克隆抗體單克隆抗體 由由單個(gè)單個(gè)B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞經(jīng)過經(jīng)過無性繁殖無性繁殖（克隆克隆），），形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。稱為單克隆抗體。 特點(diǎn)：特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高 1. 1. 細(xì)胞兩兩融合后，有哪些類型？細(xì)胞兩兩融合后，有哪些類型？B-B B-B B-B

6、-瘤瘤( (雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞) ) 瘤瘤- -瘤瘤 2 2、如何篩選？、如何篩選？ （1 1）淋巴細(xì)胞合成）淋巴細(xì)胞合成DNADNA有有D D和和S S兩條兩條途徑，其中途徑，其中DD途徑能夠被途徑能夠被氨基蝶呤阻斷氨基蝶呤阻斷。但是一般不分裂增殖。但是一般不分裂增殖。（2 2）骨髓瘤細(xì)胞是特殊選擇的代謝缺）骨髓瘤細(xì)胞是特殊選擇的代謝缺陷型細(xì)胞陷型細(xì)胞，其其DNADNA合成過程只具有合成過程只具有D D途徑，能被途徑，能被氨基蝶呤阻斷氨基蝶呤阻斷。（3 3）雜交瘤細(xì)胞則既可無限增殖，又）雜交瘤細(xì)胞則既可無限增殖，又具備兩條具備兩條DNADNA合成途徑。合成途徑。資料：資料： 單克隆抗體制備

7、過程單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體思考：思考：1 1、本過程利用了哪些原理？、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理2 2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B B細(xì)胞融合？細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承

8、了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B B細(xì)胞分細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。，優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有：應(yīng)用主要有：1 1、臨床診斷、臨床診斷2 2、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療腫治療腫瘤瘤資料資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。：目前世界各國已經(jīng)研

9、制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)體內(nèi)“病灶病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。及心肌梗塞的診斷。 小結(jié)小結(jié)兩個(gè)過程兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個(gè)三個(gè)“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合

10、的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢單克隆抗體特異性一個(gè)優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合( (單克隆抗體制備單克隆抗體制備) )過過程程第第一一步步原生質(zhì)體的原生質(zhì)體的制備制備( (酶解酶解法法) )正常小鼠正常小鼠免疫處理免疫處理第第二二步步原生質(zhì)體融原生質(zhì)體融合合( (物、化物、化法法) )動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合融合第第三三步步雜種細(xì)胞的雜種細(xì)胞的篩選與培養(yǎng)篩選與培養(yǎng)雜交瘤細(xì)雜交瘤細(xì)胞的篩選胞的篩選與培養(yǎng)與培養(yǎng)第第四四步步雜種植株誘雜種植株誘導(dǎo)與鑒定導(dǎo)與

11、鑒定單克隆抗單克隆抗體的提純體的提純意義意義和和用途用途克服遠(yuǎn)緣雜交克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，不親和的障礙，大大擴(kuò)展了可用大大擴(kuò)展了可用于雜交的親本組于雜交的親本組合范圍合范圍突破有性雜交突破有性雜交的母系遺傳，獲的母系遺傳，獲得細(xì)胞質(zhì)基因的得細(xì)胞質(zhì)基因的雜合子，研究細(xì)雜合子，研究細(xì)胞質(zhì)遺傳胞質(zhì)遺傳制備單克隆抗體制備單克隆抗體診斷、治療和預(yù)防疾診斷、治療和預(yù)防疾病，例如：病，例如：a a腫瘤定位診斷，放射腫瘤定位診斷，放射性抗體性抗體腫瘤腫瘤b b生物導(dǎo)彈治療，抗體生物導(dǎo)彈治療，抗體抗癌藥物抗癌藥物腫瘤腫瘤練習(xí)：練習(xí)：1 1在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜

12、交的比較中，正確的是（）確的是（）A A結(jié)果是相同的結(jié)果是相同的B B雜種細(xì)胞的形成過程基本相同雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C C操作過程中酶的作用相同操作過程中酶的作用相同DD誘導(dǎo)融合的手段相同誘導(dǎo)融合的手段相同2. 2. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠

13、骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞A A B BC C DD C3 3下列關(guān)于單克隆抗體制備過程的敘下列關(guān)于單克隆抗體制備過程的敘述，正確的是述，正確的是 ( () )A A制備過程中不需要?jiǎng)游锛?xì)胞培養(yǎng)技制備過程中不需要?jiǎng)游锛?xì)胞培養(yǎng)技術(shù)術(shù)B B雜交瘤細(xì)胞具有漿細(xì)胞與癌細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞具有漿細(xì)胞與癌細(xì)胞的所有特點(diǎn)所有特點(diǎn)C C經(jīng)選擇性培養(yǎng)基篩選出來的雜交瘤經(jīng)選擇性培養(yǎng)基篩選出來的雜交瘤細(xì)胞即可用于單克隆抗體的生產(chǎn)細(xì)胞即可用于單克隆抗體的生產(chǎn)D D單克隆抗體最廣泛的用途是用作體單克隆抗體最廣泛的用途是用作體外診斷試劑外診斷試劑D 4. 4. 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)下圖

14、為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案2 2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4 4、圖中、圖中B B為為_過程，常用過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,_,又能又能_。1 1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_3 3、A A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_5 5、C C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段，其培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中中_代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。代以內(nèi)的的

15、細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體制備單克隆抗體B B細(xì)胞細(xì)胞抗體抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖原代原代傳代傳代5050B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC5.5.已知細(xì)胞合成已知細(xì)胞合成DNADNA有有D D和和S S兩條途徑，兩條途徑，其中其中DD途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩種巴細(xì)胞中有這兩種DNADNA的合成途徑，的合成途徑，但一般不分裂增殖。但一般不分裂增殖。 鼠骨髓瘤細(xì)胞鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有中盡管沒有S S途徑，但能不斷分裂增途徑，但能不斷分裂增殖。將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加殖。將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細(xì)胞。請回聚乙二醇促融，獲得雜種細(xì)胞。請回答：答：（1 1）試管中除融合的雜種細(xì)胞外，還）試管中除融合的雜種細(xì)胞外，還有有_種融合細(xì)胞。種融合細(xì)胞。2（2 2）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細(xì)胞，法），從培養(yǎng)液中分離出雜種