山東省單縣雞大腸桿菌病病原的分離與鑒定及藥敏試驗(yàn)

1、山東省單縣雞大腸桿菌病病山東省單縣雞大腸桿菌病病原的分離與鑒定及藥敏試驗(yàn)原的分離與鑒定及藥敏試驗(yàn) 指導(dǎo)老師：唐建華指導(dǎo)老師：唐建華 （副教授）（副教授）姓名：王亞班級：07級動物醫(yī)學(xué)系1班論文的結(jié)構(gòu)和主要內(nèi)容論文的結(jié)構(gòu)和主要內(nèi)容第一部分第一部分 背景及意義背景及意義第二部分第二部分 技術(shù)路線技術(shù)路線第三部分第三部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果第四部分第四部分 討論與分析討論與分析第五部分第五部分 結(jié)論結(jié)論課題的背景及意義課題的背景及意義l 背景背景 近幾年隨著單縣養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展和集約化程度的大大提高，大近幾年隨著單縣養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展和集約化程度的大大提高，大腸桿菌病流行勢頭愈加迅速。腸桿菌病流行勢頭愈加迅

2、速。 大腸桿菌病是在世界范圍內(nèi)影響?zhàn)B大腸桿菌病是在世界范圍內(nèi)影響?zhàn)B殖業(yè)發(fā)展的主要細(xì)菌病之一，殖業(yè)發(fā)展的主要細(xì)菌病之一， 常招致巨大的經(jīng)濟(jì)損失，有效防治常招致巨大的經(jīng)濟(jì)損失，有效防治大腸桿菌病一直是養(yǎng)殖業(yè)的一項(xiàng)重要課題。大腸桿菌病一直是養(yǎng)殖業(yè)的一項(xiàng)重要課題。l 意義意義 從部分養(yǎng)雞場分離出的細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，通過藥敏試驗(yàn)篩選從部分養(yǎng)雞場分離出的細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，通過藥敏試驗(yàn)篩選出敏感藥物，為山東省單縣治療與預(yù)防雞大腸桿菌病提供理論依出敏感藥物，為山東省單縣治療與預(yù)防雞大腸桿菌病提供理論依據(jù)和實(shí)際應(yīng)用參數(shù)。據(jù)和實(shí)際應(yīng)用參數(shù)。技術(shù)路線技術(shù)路線2.1 病理剖檢病理剖檢 對送檢的對送檢的35只病死雞進(jìn)行

3、了病理剖檢及大體病變的觀察。只病死雞進(jìn)行了病理剖檢及大體病變的觀察。2.2分離與鑒定分離與鑒定 樣品樣品 在各種培養(yǎng)基上劃線分離在各種培養(yǎng)基上劃線分離(置置37培養(yǎng)培養(yǎng)24h) 菌落形成菌落形成 挑取菌落染色鏡檢挑取菌落染色鏡檢 純培養(yǎng)純培養(yǎng) 培養(yǎng)特性檢查培養(yǎng)特性檢查 染色鏡檢染色鏡檢 生化試驗(yàn)生化試驗(yàn) 致病力測定致病力測定 藥敏試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)技術(shù)路線技術(shù)路線2.2.1病料采集病料采集 采集六大雞場病死雞各一只，無菌取心臟和肝臟。采集六大雞場病死雞各一只，無菌取心臟和肝臟。 2.2.2分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 以無菌操作的方法，將采取的病料，分別接種在普通以無菌操作的方法，將采取的病料，分別接種在普通瓊

4、脂平板、麥康凱瓊脂、伊紅美蘭瓊脂瓊脂平板、麥康凱瓊脂、伊紅美蘭瓊脂2.2.3鏡檢鏡檢 挑取光滑、磚紅色的單個菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，挑取光滑、磚紅色的單個菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，觀察記錄菌體形態(tài)和染色特征。觀察記錄菌體形態(tài)和染色特征。2.2.4生化實(shí)驗(yàn)生化實(shí)驗(yàn) 將各株細(xì)菌分別接種到用于鑒定的生化反應(yīng)管中將各株細(xì)菌分別接種到用于鑒定的生化反應(yīng)管中2.2.5致病性試驗(yàn)致病性試驗(yàn) 取健康小白鼠取健康小白鼠6只，只，A組組3只，腹腔接種營養(yǎng)肉湯菌液；只，腹腔接種營養(yǎng)肉湯菌液；B組組3只，腹腔接種等量的滅菌生理鹽水作對照組；取只，腹腔接種等量的滅菌生理鹽水作對照組；取6只只7日齡雛雞，日齡雛雞，健康

5、，也分為健康，也分為C、D兩組，與小白鼠同樣的方法，分別隔離飼養(yǎng)觀察。兩組，與小白鼠同樣的方法，分別隔離飼養(yǎng)觀察。技術(shù)路線技術(shù)路線2.2.6藥敏試驗(yàn)藥敏試驗(yàn) 選取不同地區(qū)的分離株選取不同地區(qū)的分離株6株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。在無菌條件下將培養(yǎng)在無菌條件下將培養(yǎng)24h的肉湯培養(yǎng)物，用滅菌生理鹽水的肉湯培養(yǎng)物，用滅菌生理鹽水作作10倍稀釋，取倍稀釋，取0.2mL滴加在普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，用滴加在普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，用滅菌棒涂勻，平板置室溫下干燥滅菌棒涂勻，平板置室溫下干燥35min，用無菌鑷子將，用無菌鑷子將卡那霉素、新霉素、慶大霉素、呋喃妥因、四環(huán)素、鏈霉卡那霉素、新霉素、慶大霉素、

6、呋喃妥因、四環(huán)素、鏈霉素素6種藥物的含藥紙片緊貼于瓊脂表面，進(jìn)行觀察種藥物的含藥紙片緊貼于瓊脂表面，進(jìn)行觀察結(jié)果結(jié)果3.1分離培養(yǎng)：麥康凱瓊脂上形成紅色、圓形隆起、光滑濕潤、邊緣整齊、分離培養(yǎng)：麥康凱瓊脂上形成紅色、圓形隆起、光滑濕潤、邊緣整齊、直徑為直徑為1.52.5毫米的小菌落（見圖毫米的小菌落（見圖1） 伊紅美藍(lán)瓊脂上形成紫黑色、具有金屬光澤的小菌落伊紅美藍(lán)瓊脂上形成紫黑色、具有金屬光澤的小菌落 （見圖（見圖2） 圖圖1 圖圖23.結(jié)果結(jié)果3.2 形態(tài)學(xué)觀察形態(tài)學(xué)觀察 經(jīng)鏡檢可見到革蘭氏陰性菌，兩端鈍圓，有長約經(jīng)鏡檢可見到革蘭氏陰性菌，兩端鈍圓，有長約1.53.O微米的微米的短小桿菌，偶

7、有短小桿菌，偶有23個菌體相連，無芽孢。（見圖個菌體相連，無芽孢。（見圖3） 圖圖33.結(jié)果結(jié)果3.3生化鑒定生化鑒定 將分離到的菌株，經(jīng)生化試驗(yàn)鑒定，分解葡萄糖、麥芽糖、甘將分離到的菌株，經(jīng)生化試驗(yàn)鑒定，分解葡萄糖、麥芽糖、甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解蔗糖露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解蔗糖,MR試驗(yàn)呈陽性，試驗(yàn)呈陽性，VP試驗(yàn)為陰性，吲哚試驗(yàn)陽性，試驗(yàn)為陰性，吲哚試驗(yàn)陽性，硝酸鹽試驗(yàn)陽性，枸櫞酸鹽試驗(yàn)陰性，硫化氰試驗(yàn)陰性。此結(jié)果符合大腸桿硝酸鹽試驗(yàn)陽性，枸櫞酸鹽試驗(yàn)陰性，硫化氰試驗(yàn)陰性。此結(jié)果符合大腸桿菌的特征，見表菌的特征，見表1： 生化試劑生化試劑乳糖 構(gòu)椽酸鹽 葡萄糖 VP試驗(yàn) 甘露醇 靛基質(zhì) +麥芽

8、糖 MR試驗(yàn) +蔗糖 硫化氫 阿拉伯糖 尿素酶 山梨醇 吲哚 +硝酸鹽 +課題的背景及意義課題的背景及意義3.4 致病性實(shí)驗(yàn)致病性實(shí)驗(yàn) 小白鼠試驗(yàn)結(jié)果：接種小白鼠試驗(yàn)結(jié)果：接種36h內(nèi)內(nèi)A組小白鼠全部死亡，剖組小白鼠全部死亡，剖檢可見肝腫大、表現(xiàn)出點(diǎn)狀出血和灰白色壞死灶，脾臟瘀檢可見肝腫大、表現(xiàn)出點(diǎn)狀出血和灰白色壞死灶，脾臟瘀血，肺臟出血等明顯病理變化，從死亡小白鼠的心、肝、血，肺臟出血等明顯病理變化，從死亡小白鼠的心、肝、脾等病料中均能回收到接種菌；脾等病料中均能回收到接種菌；B組小白鼠飼養(yǎng)組小白鼠飼養(yǎng)1周后全周后全部存活，剖檢無病理變化。部存活，剖檢無病理變化。 雛雞試驗(yàn)結(jié)果：接種雛雞試驗(yàn)

9、結(jié)果：接種1周后，周后，C組雛雞全部死亡，用死組雛雞全部死亡，用死雞的心血、肝、脾接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)雞的心血、肝、脾接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)37培養(yǎng)培養(yǎng)24h后，有菌落生長，革蘭氏染色及生化化鑒定表明：后，有菌落生長，革蘭氏染色及生化化鑒定表明：此菌與接種菌為同種細(xì)菌；此菌與接種菌為同種細(xì)菌；D組雛雞則正常。組雛雞則正常。 動物試驗(yàn)結(jié)果表明：此次分離出的細(xì)菌對小白鼠和雛動物試驗(yàn)結(jié)果表明：此次分離出的細(xì)菌對小白鼠和雛雞均有較強(qiáng)的致病性。雞均有較強(qiáng)的致病性。3.結(jié)果3.5藥敏試驗(yàn)藥敏試驗(yàn) 卡那霉素、新霉素、慶大霉素等藥物為高度敏感；呋喃卡那霉素、新霉素、慶大霉素等藥物為高度敏感；

10、呋喃妥因、四環(huán)素等藥物為中度敏感；鏈霉素不敏感。見表妥因、四環(huán)素等藥物為中度敏感；鏈霉素不敏感。見表2： 表2耐藥性實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)藥敏紙片抑菌圈直徑mm1號菌株2號菌株3號菌株4號菌株5號菌株6號菌株呋喃妥因109111098卡那霉素222020172121慶大霉素181919202019四環(huán)素131012101114新霉素222123202021鏈霉素7997873.討論與分析討論與分析 防治雞大腸桿菌病應(yīng)改善雞舍衛(wèi)生條件，減少發(fā)病防治雞大腸桿菌病應(yīng)改善雞舍衛(wèi)生條件，減少發(fā)病率。良好的環(huán)境對于有效地控制大腸桿菌感染及泛濫十分率。良好的環(huán)境對于有效地控制大腸桿菌感染及泛濫十分重要，對此，可以采取

11、以下措施：重要，對此，可以采取以下措施： 1. 注意種蛋衛(wèi)生注意種蛋衛(wèi)生 2加強(qiáng)衛(wèi)生管理加強(qiáng)衛(wèi)生管理 3適當(dāng)添加維生素和微生態(tài)制劑，增強(qiáng)機(jī)體抵適當(dāng)添加維生素和微生態(tài)制劑，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力抗力 4免疫預(yù)防接種免疫預(yù)防接種5.結(jié)論結(jié)論 本試驗(yàn)從可疑病雞分離到可疑菌經(jīng)形態(tài)學(xué)及培養(yǎng)本試驗(yàn)從可疑病雞分離到可疑菌經(jīng)形態(tài)學(xué)及培養(yǎng)條件觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)分析鑒定，鑒定為雞大條件觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)分析鑒定，鑒定為雞大腸桿菌的感染，由于條件不足沒做大腸桿菌的血腸桿菌的感染，由于條件不足沒做大腸桿菌的血清型鑒定。清型鑒定。 根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，本試驗(yàn)中，可以看出雞大腸根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，本試驗(yàn)中，可以看出雞大腸桿菌對卡那霉

12、素、慶大霉素、新霉素等藥物高度桿菌對卡那霉素、慶大霉素、新霉素等藥物高度敏感；對四環(huán)素、呋喃妥因等藥物中度敏感；對敏感；對四環(huán)素、呋喃妥因等藥物中度敏感；對鏈霉素產(chǎn)生耐藥性鏈霉素產(chǎn)生耐藥性表明該雞場出現(xiàn)了耐藥的致表明該雞場出現(xiàn)了耐藥的致病性大腸桿菌。病性大腸桿菌。致謝致謝 從論文選題到實(shí)驗(yàn)過程，從寫稿到反復(fù)修改，期間經(jīng)歷從論文選題到實(shí)驗(yàn)過程，從寫稿到反復(fù)修改，期間經(jīng)歷了喜悅、聒噪、痛苦和彷徨，在寫作論文的過程中心情是如此了喜悅、聒噪、痛苦和彷徨，在寫作論文的過程中心情是如此復(fù)雜。如今，伴隨著這篇畢業(yè)論文的最終成稿，復(fù)雜的心情煙復(fù)雜。如今，伴隨著這篇畢業(yè)論文的最終成稿，復(fù)雜的心情煙消云散。在這里首先要感謝我的導(dǎo)師唐建華老師。唐老師平日消云散。在這里首先要感謝我的導(dǎo)師唐建華老師。唐老師平日里工作繁多，但他始終認(rèn)真負(fù)責(zé)地給予我深刻而細(xì)致地指導(dǎo)，里工作繁多，但他始終認(rèn)真負(fù)責(zé)地給予我深刻而細(xì)致地指導(dǎo)，幫助我開拓研究思路，精心點(diǎn)撥、熱忱鼓勵。正是老師的無私幫助我開拓研究思路，精心點(diǎn)撥、熱忱鼓勵。正是老