實(shí)驗(yàn)二、靜脈注射氨茶堿血藥濃度及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的檢測(cè)

1、實(shí)驗(yàn)二 靜脈注射氨茶堿血藥濃度測(cè)定及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.掌握紫外雙波長(zhǎng)法測(cè)定氨茶堿血藥濃度的方法；2.熟悉家兔耳緣靜脈注射給藥后藥動(dòng)學(xué)處理原理和方法；3.熟悉血清中藥物提取方法及雙波長(zhǎng)測(cè)定法在血藥濃度測(cè)定中的應(yīng)用。生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件二、基本原理1.氨茶堿氨茶堿氨茶堿又名茶堿乙烯雙胺，由茶堿與乙二胺縮合而成，氨茶堿能抑制氨茶堿又名茶堿乙烯雙胺，由茶堿與乙二胺縮合而成，氨茶堿能抑制體內(nèi)磷酸二酪酶，減慢環(huán)磷酸腺苷（體內(nèi)磷酸二酪酶，減慢環(huán)磷酸腺苷（cAMP）的分解速度，從而增加）的分解速度，從而增加其在細(xì)胞內(nèi)的含量，促使支氣管平滑肌舒張，有擴(kuò)張膽

2、管、冠狀動(dòng)脈其在細(xì)胞內(nèi)的含量，促使支氣管平滑肌舒張，有擴(kuò)張膽管、冠狀動(dòng)脈作用；減少腎小管對(duì)電解質(zhì)的再吸收而呈現(xiàn)強(qiáng)心利尿作用，作用；減少腎小管對(duì)電解質(zhì)的再吸收而呈現(xiàn)強(qiáng)心利尿作用，一般應(yīng)用一般應(yīng)用于支氣管哮喘、膽絞痛、心絞痛等。于支氣管哮喘、膽絞痛、心絞痛等。2. 靜脈注射藥物動(dòng)力學(xué)靜脈注射藥物動(dòng)力學(xué)氨茶堿經(jīng)靜脈進(jìn)入血液，隨血液循環(huán)進(jìn)行組織分布，達(dá)到平衡后轉(zhuǎn)入氨茶堿經(jīng)靜脈進(jìn)入血液，隨血液循環(huán)進(jìn)行組織分布，達(dá)到平衡后轉(zhuǎn)入消除相。血藥濃度消除相。血藥濃度-時(shí)間曲線呈時(shí)間曲線呈二室藥物動(dòng)力學(xué)模型二室藥物動(dòng)力學(xué)模型。3. 氨茶堿血藥濃度的氨茶堿血藥濃度的測(cè)定測(cè)定雙波長(zhǎng)法測(cè)定原理：雙波長(zhǎng)法測(cè)定原理：在酸性條

3、件下，可用有機(jī)溶劑從血清中提取出茶在酸性條件下，可用有機(jī)溶劑從血清中提取出茶堿，并同時(shí)沉淀血清蛋白，再用堿液將茶堿從有機(jī)溶劑中提出，然后堿，并同時(shí)沉淀血清蛋白，再用堿液將茶堿從有機(jī)溶劑中提出，然后采用雙波長(zhǎng)采用雙波長(zhǎng)法法進(jìn)行紫外測(cè)定，即測(cè)定進(jìn)行紫外測(cè)定，即測(cè)定274和和298處的吸光度（處的吸光度（ 274為茶為茶堿和本底，即溶劑、血清的吸收，堿和本底，即溶劑、血清的吸收， 298為本底的吸收為本底的吸收 ），），A= 274 - 298 ，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行濃度換算。，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行濃度換算。生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件家兔耳緣靜脈注射氨茶堿家兔耳緣血管分

4、布生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件二室藥物動(dòng)力學(xué)模型：二室藥物動(dòng)力學(xué)模型：XcXpX0K10K12K21X0：靜脈注射給藥劑量；Xc：中央室的藥量；Xp：周邊室的藥量；K10：藥物從中央室消除的一級(jí)速率常數(shù)；K12：藥物從中央室向周邊室轉(zhuǎn)運(yùn)的一級(jí)速率常數(shù)；K21：藥物從周邊室向中央室轉(zhuǎn)運(yùn)的一級(jí)速率常數(shù)；lgCt分布相消除相藥物動(dòng)力學(xué)公式：藥物動(dòng)力學(xué)公式：dxc/dt = K21*Xp K12*Xc K10*Xcdxp/dt = K12*Xc K21*Xp利用消除相殘數(shù)利用消除相殘數(shù)法求算相關(guān)藥物法求算相關(guān)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。動(dòng)力學(xué)參數(shù)。生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件所用材料所用材料日本大耳白或新西蘭

5、兔日本大耳白或新西蘭兔兔子固定器兔子固定器嬰兒稱嬰兒稱1.5 ml EP管管其它其它:1 ml注射器注射器,1.5 ml EP管離心機(jī)管離心機(jī),漩渦振蕩器漩渦振蕩器,離心機(jī)離心機(jī),紫外檢測(cè)儀紫外檢測(cè)儀,10 ml離心管離心管,三氯醋酸三氯醋酸,氫氫氧化鈉氧化鈉,等等.氨茶堿注射液氨茶堿注射液生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件三、實(shí)驗(yàn)操作1.氨茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：氨茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取5支0.5 ml空白家兔血清，分別加入氨茶堿注射液（2.5 mg/2 ml）使其濃度分別達(dá)到 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml，加0.1mol/L鹽酸0.2ml、5%異丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蝸旋混合

6、后，3000r/min離心10min。吸取下層氯仿液下層氯仿液4 ml至另一試管中，加入0.1mol/L NaOH溶液4ml，蝸旋混合后、3000r/min，離心10min。吸取上層堿液上層堿液，以0.1mol/NaOH溶液做參比，測(cè)定其在274和和298的吸收度（ A274和和A298 ），計(jì)算A，以茶堿濃度為橫坐標(biāo)， A為縱坐標(biāo)描點(diǎn)繪圖，用Excel軟件求直線回歸方程和相關(guān)系數(shù)。2.靜脈注射氨茶堿和血藥濃度的測(cè)定靜脈注射氨茶堿和血藥濃度的測(cè)定取體重2.53.0kg健康雄性家兔1只，于耳緣靜脈（外側(cè)）注射氨茶堿10mg/kg（2min內(nèi)注完），另一耳用銳利刀片切割耳緣靜脈取血。分別在給氨茶堿

7、后5、10、20、30、60、120、180 min取血約1.5ml，室溫下靜置60 min。分離血清：分離血清：等EP管中血液凝固后，10000 r/min離心15 s分離血清，各管均取血清0.5ml于10ml試管中，加0.1mol/L鹽酸0.2ml、5%異丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蝸旋混合后，3000r/min離心10min。吸取下層氯仿液下層氯仿液4 ml至另一試管中，加入0.1mol/L NaOH溶液4ml，蝸旋混合后、3000r/min，離心10min。吸取上層堿液上層堿液，以0.1mol/NaOH溶液做參比，測(cè)定其在274和和298的吸收度（ A274和和A298 ），計(jì)算A。將

8、測(cè)得血清樣品的A代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程，求得相應(yīng)的C，C10即為茶堿的血藥濃度。以時(shí)間（T）為橫坐標(biāo)，濃度對(duì)數(shù)（logC）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行相應(yīng)的藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)處理。生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件3.藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算 作時(shí)間t-濃度C-lgC表，畫lgC t圖，求算Vc、K21、K10、K12（按課本P229例1處理）。4. 本實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)3人一組人一組 每組進(jìn)行家兔耳緣靜脈給藥及家兔氨茶堿血藥濃度藥物動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)的計(jì)算。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件T(min)510203060120180AC(g/ml)二、氨茶堿血藥濃度二、氨茶堿血藥濃度-時(shí)間表時(shí)間表一、氨茶堿血藥濃度與一

9、、氨茶堿血藥濃度與A的標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)曲線C = 1.84*A- 0.00002C單位：mg/ml, r = 12三、藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算結(jié)果三、藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算結(jié)果生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件作時(shí)間t-濃度C-lgC表，畫lgC t圖，求算Vc、K21、K10、K12（按課本P229例1處理）。五、討論與思考1.氨茶堿家兔體內(nèi)的藥時(shí)曲線呈幾室模型，如何解氨茶堿家兔體內(nèi)的藥時(shí)曲線呈幾室模型，如何解釋？有幾種判斷是二室模型的方法，判斷的依據(jù)是釋？有幾種判斷是二室模型的方法，判斷的依據(jù)是什么？什么？2.為什么要測(cè)定兩個(gè)波長(zhǎng)下氨茶堿的吸光度并取其為什么要測(cè)定兩個(gè)波長(zhǎng)下氨茶堿的吸光度并取其差值？差

10、值？生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件二、氨茶堿血藥濃度二、氨茶堿血藥濃度-時(shí)間表時(shí)間表一、氨茶堿血藥濃度與一、氨茶堿血藥濃度與A的標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)曲線六、參考結(jié)果：序號(hào)序號(hào)時(shí)間（時(shí)間（min）不同波長(zhǎng)下吸光度不同波長(zhǎng)下吸光度A濃度濃度（mg/ml）274 nm298 nm150.2740.1740.10.18412100.1680.0980.070.12893200.1390.0750.0640.11784300.1550.0930.0620.11415600.2630.2070.0560.103161200.1480.0920.0560.103171800.2740

11、.1740.10.184182400.1680.0980.070.1289C單位：mg/mlC = 1.84*A- 0.00002生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件T(min)510203060120180240C(mg/ml)1.841.291.1781.1411.0311.0311.8411.289lgC0.2650.1100.0710.0570.01330.0130.2650.110二、氨茶堿靜脈注射后時(shí)間二、氨茶堿靜脈注射后時(shí)間 t C - lgC表表00.20.40.60.811.21.40306090120150180210240lgC家兔氨茶堿耳緣靜脈注射后血藥濃度對(duì)數(shù)家兔氨茶堿耳緣

12、靜脈注射后血藥濃度對(duì)數(shù)-時(shí)間曲線時(shí)間曲線時(shí)間時(shí)間(min)生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件七、注意事項(xiàng)： 一、一、注射時(shí)不宜快速注射，也不宜過(guò)多，否則會(huì)引起兔子心悸死亡。藥液注射入血管時(shí)，原來(lái)紅色的血管充滿無(wú)色的藥液則說(shuō)明注射成功，若藥液未進(jìn)入血管，表現(xiàn)在推注時(shí)阻力較大，且在注射部位藥液會(huì)流出。二、二、血液最好自然滴入EP管中，一般不宜刮取，否則血細(xì)胞將破裂，血清顏色變紅，也不要用注射器抽取、用吸管吸取。三、三、計(jì)算濃度時(shí)，計(jì)算出A后，所求得的C需10，才是真正血清中的藥物濃度，因?yàn)槲覀冊(cè)谔幚順悠窌r(shí)稀釋10倍。四、四、血清樣品要放置1h以上再處理才較好，最好120 min后其充分凝結(jié)，少于1h則離心得到的是血漿，其中纖維蛋白較多，對(duì)樣品的后處理不佳。五、五、用注射器吸取血清0.5ml，最后一個(gè)時(shí)間點(diǎn)最好超過(guò)1h，否則血清中蛋白質(zhì)會(huì)凝固，導(dǎo)致血清移取困難。生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件七、注意事項(xiàng)：六、六、取血時(shí)不要用涼水潤(rùn)濕取血部位。七、七、若離心用10000 r/min離心血清，當(dāng)轉(zhuǎn)速顯示到達(dá)10000r/min后，15s即可。八、八、若血清與氯仿乳化，可用超聲儀超聲破乳。九、九、血清樣品測(cè)定時(shí)，可用空白對(duì)紫外儀調(diào)零，波長(zhǎng)分別用274nm、298