肌紅蛋白測定試劑盒說明書

1、肌紅蛋白（MYO）測定試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法）說明書【產品名稱】通用名稱：肌紅蛋白（MYO）測定試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） 英文名稱：Myoglobin（CLIA）【包裝規(guī)格】2×30 人份/盒、2×50 人份/盒、2×100 人份/盒【預期用途】用于體外定量測定人體血清或（和）血漿中肌紅蛋白的含量。肌紅蛋白（MYO）分子量為 17.8 kD，由一個多肽鏈和一個亞鐵血紅素輔基組成，由人體骨骼肌和心肌細胞合成并貯存，不存在于其它細胞。實驗證明由骨骼肌和心肌來源的兩種肌紅蛋白無免疫學上的差異。肌紅蛋白的主要生理功能為攜帶氧氣供細胞呼吸。肌紅蛋白是檢測急性心肌梗死

2、(AMI) 的早期指標，具有極高的靈敏度但是特異性較差，在 AMI 早期心肌細胞受損，由于 MYO 的分子量小，可以很快從破損的細胞中釋放出來，在 AMI 發(fā)病 13 小時后血中濃度迅速上升，67 小時達峰值，12 小時內幾乎所有 AMI 患者 MYO 都有升高，升高幅度大于各心肌酶，因此可以作為 AMI 的早期診斷標志物。由于 MYO 也存在于骨骼肌中，而且僅從腎臟清除，所以急性肌損傷、急性或慢性腎衰竭、嚴重的充血性心力衰竭、長時間休克及各種原因引起的肌病患者、肌內注射、劇烈的鍛煉、某種毒素和藥物攝入后，MYO 都會升高。因此，采用血清 MYO 水平作為診斷 AMI 的早期指標， 僅限于沒有

3、上述相關疾病的患者。在有急性癥狀的患者中，4 小時內 MYO 水平不升高，AMI 的可能性極低。由于在 AMI 后血中 MYO 很快從腎臟清除，發(fā)病 l830 小時內可完全恢復到正常水平。故 MYO 測定有助于在 AMI 病程中觀察有無再梗塞或者梗塞再擴展。MYO 頻繁出現增高，提示原有心肌梗死仍在延續(xù)。另外，在神經肌肉疾病如肌營養(yǎng)不良、肌萎縮和多肌炎時血清 MYO 水平亦升高。心臟外科手術患者血清 MYO 升高，可以作為判斷心肌損傷程度及愈合情況的一項客觀指標?！緳z驗原理】肌紅蛋白測定采用雙位點夾心化學發(fā)光免疫分析法，其檢測原理如下：第一步：將樣本與包被著抗肌紅蛋白抗體的超順磁性微粒（磁珠）

4、以及抗肌紅蛋白抗體-堿性磷酸酶標記物添加到反應管中，經過孵育，樣本中的肌紅蛋白和包被在磁珠上的抗肌紅蛋白抗體結合，同時抗肌紅蛋白抗體-堿性磷酸酶標記物與樣本中肌紅蛋白另一位點結合。反應完成后，磁場吸住磁珠，洗去未結合的物質。第二步：將化學發(fā)光底物添加到反應管內，發(fā)光底物（3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧環(huán)乙烷，AMPPD）被堿性磷酸酶所分解，脫去一個磷酸基，生成不穩(wěn)定的中間產物，該中間產物通過分子內電子轉移產生間氧苯甲酸甲酯陰離子，處于激發(fā)態(tài)的間氧苯甲酸甲酯陰離子從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時，產生化學發(fā)光，再通過光電倍增管對反應中所產生的光子數進行測量。所產生光

5、子數與樣本內肌紅蛋白的濃度成正比。樣本內分析物的量由校準曲線來確定?！局饕M成成分】試劑組分名稱成分原料及含量裝量2×30 人份/盒2×50 人份/盒2×100 人份/盒磁珠包被物（Ra）包被著抗肌紅蛋白抗體的超順磁性微粒，懸浮于緩沖液，含防腐劑包被著抗肌紅蛋白抗體的超順磁性微粒，0.2 g/L；MES緩沖液，50 mmol/L；ProClin300，0.5 g/L；疊氮鈉，0.9 g/L2×2.7 mL2×3.8 mL2×6.6 mL酶標記物（Rb）抗肌紅蛋白抗體-堿性磷酸酶標記物稀釋于緩沖液，含防腐劑抗肌紅蛋白抗體-堿性磷酸酶標記

6、物，3 mg/L；MES 緩沖液，50 mmol/L；ProClin300，0.5 g/L；疊氮鈉，0.9 g/L2×2.4 mL2×3.5 mL2×6.3 mL樣本處理液（Rc）樣本處理緩沖液，含防腐劑Tris 緩沖液，50 mmol/L；ProClin 300，0.5 g/L；疊氮鈉，0.9 g/L2×5.0 mL2×7.8 mL2×14.8 mL注：不同批號試劑盒中各組分不能互換。各組分位置見試劑瓶主視圖（左）和俯視圖（右）：需要但未提供的配套儀器和材料（邁瑞提供）（1） 校準品：肌紅蛋白校準品；（2） 質控品：心肌標志物復合定

7、值質控品；（3） 全自動免疫檢驗系統(tǒng)用底物液；（4） 清洗液；（5） 邁瑞CL系列全自動化學發(fā)光免疫分析儀；（6） 反應杯。【儲存條件及有效期】28 保存，有效期 18 個月。上機使用后，在28的貯存環(huán)境下有效期為28天。生產日期見包裝或標簽?！具m用儀器】2×30人份/盒適用邁瑞全自動化學發(fā)光免疫分析儀8個機型：CL-900i、CL-920i、CL-960i、CL-980i、CL-1000i、CL-1200i、CL-2600i、CL-2800i。2×50 人份/盒和2×100 人份/盒適用邁瑞全自動化學發(fā)光免疫分析儀系列機型：CL-900i、CL-920i、CL-

8、960i、CL-980i、CL-1000i、CL-1200i、CL-2000i、CL-2200i、 CL-2600i、CL-2800i、CL-5000i、CL-5200i、CL-5600i、CL-5800i、CL-4600i、CL-4800i、CL-3600i、CL-3800i、CL-6000i、CL-6200i、CL-8000i、CL-8200i、CL-9000i、CL-9200i。【樣本要求】推薦使用血清樣本或者 EDTA、肝素類抗凝劑采血管收集的血漿樣本。按照通用的靜脈穿刺措施來收集所有的血液樣本；樣本在檢測前必須按照采血試管生產商建議的方式進行離心，并確保已去除了殘余的細胞類物質；離心

9、前，必須確保血清樣本已經完全凝結，對于正在接受抗凝劑治療的病人樣本，需要延長凝集時間；樣本應沒有氣泡，若存在氣泡推薦使用一次性吸頭吸走氣泡，操作過程中注意防止樣本間的交叉污染；如果離心后的樣本上覆蓋著脂質層，那么需轉移清澈的樣本至新的樣本管，不能轉移脂質層；樣本中若含有纖維蛋白或其它顆粒物質，或者樣本經過凍融，測試前必須進行離心處理；不建議使用嚴重溶血（血紅蛋白500mg/dL）和熱滅活的樣本。樣本應盡可能及時測定，若在 8 小時內無法完成測定，可將樣本置于低溫下保存。樣本在 28 環(huán)境下可穩(wěn)定 3 天；在-20 或低于-20 的環(huán)境下可穩(wěn)定 90 天。樣本應盡量避免反復凍融，反復凍融次數不宜

10、超過 5 次。不同生產商的采血試管，由于原材料和添加劑不同，可能導致不同的結果。邁瑞化學發(fā)光試劑盒沒有對所有可能應用的采血試管類型和生產商進行測試，每個實驗室需自行判斷其使用的采血試管和血清分離產品的適用性。【檢驗方法】檢測程序試劑瓶首次裝載上機，應在封口撕開前輕輕地翻轉 30 次，觀察試劑瓶確保超順磁性微粒已完全懸??；若超順磁性微粒仍附著在試劑瓶底部，繼續(xù)翻轉試劑瓶直至其完全懸浮為止；若仍然無法懸浮，則該瓶試劑不能使用， 請聯系客戶服務。請勿翻轉封口已撕開的試劑瓶。有關試劑裝載的功能和操作方法，參見化學發(fā)光免疫分析儀使用說明書“準備試劑”章節(jié)。必要時，需申請校準。有關申請校準的內容，參見化學

11、發(fā)光免疫分析儀使用說明書“校準測試”章節(jié)。系統(tǒng)每次測定需使用樣本量為 5 L。申請測試前，應準備好測試所需所有材料，并仔細閱讀化學發(fā)光免疫分析儀使用說明書，以獲得系統(tǒng)操作規(guī)程、樣本管理、使用注意事項、維護和保養(yǎng)等相關信息。申請測試的主要步驟如下：（1） 進入樣本申請界面，根據測試需要輸入樣本編號、樣本架編號、位置號、樣本類型、備注等信息；（2） 選中測試項目，在項目選項中選擇樣本杯類型，輸入重復次數等信息；（3） 準備測試樣本并正確放置后，點擊啟動按鈕開始測試?；瘜W發(fā)光免疫分析儀會依次執(zhí)行以下操作：（a） 樣本處理系統(tǒng)將樣本架傳送到吸樣位；（b） 反應杯裝載及調度系統(tǒng)將反應杯從上料區(qū)加載到加樣

12、位；（c） 加樣系統(tǒng)完成樣本的分注及樣本針的清洗；試劑處理系統(tǒng)提供測試所需的試劑，并將每個試劑混勻后送到吸試劑位等待吸??； 加樣系統(tǒng)完成試劑的分注及試劑針的清洗；（d） 反應混合液由反應液混勻系統(tǒng)對其進行混勻，并在反應盤中孵育；（e） 孵育完成后，磁分離系統(tǒng)使用化學發(fā)光分離液對反應混合液進行清洗分離；（f） 底物系統(tǒng)向完成磁分離的反應杯中注入經過預熱的底物液，混勻、孵育、等待光測；（g） 光測反應系統(tǒng)將每個反應杯送至信號采集位采集信號，用以計算發(fā)光值；（h） 計算出樣本中的肌紅蛋白的含量。有關樣本測試的功能和操作方法，參見化學發(fā)光免疫分析儀使用說明書“樣本測試”章節(jié)。校準使用配套的試劑盒和校準

13、品執(zhí)行校準測試。試劑盒開始校準前，應先將試劑盒二維條形碼中的主校準曲線信息以及校準品二維條形碼中的校準品賦值信息掃描導入系統(tǒng)?；瘜W發(fā)光免疫分析儀通過校準品測試的結果調節(jié)主校準曲線，得到當前系統(tǒng)的校準曲線。儀器操作軟件具有校準判斷功能，自動完成校準曲線有效性的檢查。所有測試前均需要有效的校準曲線，以下情況需重新進行校準：（1） 使用新批號的試劑盒；（2） 同一批號的試劑盒在分析儀上使用超過 28 天；（3） 質控值超出規(guī)定范圍。有關校準測試的詳細說明，參見化學發(fā)光免疫分析儀使用說明書“校準測試”章節(jié)。質控為確保測試結果的可靠性，至少每 24 小時對高、低兩個水平的心肌標志物復合定值質控品各檢測一

14、次；此外， 每執(zhí)行完一次校準測試、更換試劑批次、執(zhí)行維護和故障處理操作后，也建議進行質控測試。質控品測試值應該在規(guī)定的范圍內。若超出規(guī)定的范圍，用戶應對系統(tǒng)進行檢查，如：質控品的位置、效期、保存方法，校準過程，儀器的性能、狀態(tài)等，必要時需重新校準。重新測試后若結果仍超出范圍可聯系客戶服務。有關質控測試的詳細說明，參見化學發(fā)光免疫分析儀使用說明書“質控測試”章節(jié)。計算通過所保存的校準數據，系統(tǒng)軟件使用一條加權的四參量對數曲線（4PLC）數學方式，來自動地確定病人的測試結果。結果單位以 ng/mL 的形式給出。【參考區(qū)間】對廣東地區(qū)醫(yī)院 2261 例（其中男性 1150 例、女性 1111 例）外

15、表健康的成年人血清樣本進行測試分析，測試數據采用非參數法進行處理，計算得出 95%參考區(qū)間上限如下：參考區(qū)間分析例數95%參考區(qū)間上限（ng/mL）男性115080女性111165由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間?！緳z驗結果的解釋】在解釋測定結果時，需參照該病人的整體臨床情況，包括：癥狀、病史以及其它相應的數據和信息?！緳z驗方法的局限性】檢測結果僅供臨床參考，不能單獨作為診斷或排除病例的依據。試劑盒檢測范圍為 1.0 ng/mL 3000 ng/mL。對于 Myoglobin 含量低于檢測上限的樣本，可以進行定量測定； 若樣本含量高于檢測上限，那么以大于該值來報

16、告結果（>3000 ng/mL）。由于檢測范圍足夠寬，通常情況下樣本不需要稀釋。當肌紅蛋白抗原濃度達到 100000 ng/mL 時，未出現鉤狀效應。人血清或血漿中的嗜異性抗體可以與試劑盒組份中的免疫球蛋白反應，干擾體外免疫檢測 1。經常與動物有接觸或者使用免疫球蛋白或免疫球蛋白碎片進行治療或診斷的病人，可能會產生此類抗體，從而使檢測結果出現異常值；如接受過小鼠單克隆抗體制劑治療或診斷的病人，其樣本中可能含有人抗小鼠抗體（HAMA），使用含有小鼠單克隆抗體的試劑盒檢測此類樣本時，其檢測值可能會假性升高或假性降低 2, 3。邁瑞化學發(fā)光試劑盒組份中含有抗干擾成份，可以有效降低樣本中 HAM

17、A 造成的影響，但少數樣本依然有可能存在干擾問題。需要借助臨床檢查、病史或其他相關資料才能正確判斷患者病情?！井a品性能指標】最低檢測限不大于 1.0 ng/mL。線性試劑盒在 1.0 ng/mL3000 ng/mL 區(qū)間內，其相關系數（r）不低于 0.9900。重復性變異系數 CV 6%。批間差變異系數 CV 10%。分析特異性當樣品中甘油三酯濃度£ 3000 mg/dL、膽紅素濃度£ 20 mg/dL、血紅蛋白濃度£ 500 mg/dL、總蛋白£ 10 g/dL時，測試結果的干擾偏差在±10% 范圍內。準確度對具有溯源性的兩個濃度水平的正確度

18、控制品進行檢測，檢測結果與標定濃度的相對偏差在±10% 范圍內?！咀⒁馐马棥勘驹噭┖袃H供體外診斷使用；在使用本試劑盒時，必須遵循所有實驗室試劑操作的注意事項；本試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床管理應結合其癥狀/體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮；由于方法學或抗體特異性等原因，使用不同生產商的試劑對同一份樣本進行檢測可能會得到不同的檢測結果， 用不同試劑檢測所得結果不應直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中如果改變試劑類型，則應進行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結果進行平行比較以重新確定基線值；本產品含有動物源性物質，可能存在潛在生物風險。對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待，所有廢棄物必須按照當地法規(guī)進行處置；疊氮鈉可能會與鉛以及銅制的管件發(fā)生反