第五章 植物組織培養(yǎng)中常見問題及解決辦法

1、組培中常見問題及解決辦法一、污染（一）定義 是指在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基或培養(yǎng)材料上滋生細(xì)菌、真菌等微生物，使培養(yǎng)材料不能正常生長導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。（二）常見的菌源 真菌和細(xì)菌1、細(xì)菌污染一般在接種1-2天后即可發(fā)現(xiàn)，表現(xiàn)為培養(yǎng)基表面出現(xiàn)黏液狀菌斑。2、真菌污染一般在接種3天甚至10天以后才表現(xiàn)出來，主要癥狀是培養(yǎng)基上出現(xiàn)絨毛狀菌絲，然后形成不同著色的孢子層。（三）引起污染的原因：1、培養(yǎng)基滅菌不徹底2、外植體消毒不徹底3、操作人員不遵守操作規(guī)程4、無菌室和培養(yǎng)室環(huán)境不清潔5、操作設(shè)備及使用工具消毒不徹底（四）預(yù)防措施1、防止材料帶菌，材料預(yù)培養(yǎng)。2、嚴(yán)格外植體滅菌。3、培養(yǎng)基滅菌徹底。4、嚴(yán)守

2、無菌操作規(guī)程。5、各室保持良好衛(wèi)生。（五）污染原因判斷（五）污染原因判斷 1、若污染菌類是零星分散在培養(yǎng)基中，則可確定是人為引起的污染。若是外植體，菌類從材料培養(yǎng)基以上部分長起，且發(fā)生在5天以后，則說明是材料帶的內(nèi)生菌。若從培養(yǎng)基以下開始長菌，發(fā)生時(shí)間較早，且有從里向外的趨勢，則說明是切口引起的污染。2、真菌污染后，如果已形成孢子，則必須經(jīng)高壓滅菌后扔掉。但若是細(xì)菌污染，因此只要及時(shí)發(fā)現(xiàn)，將材料上部未感菌的部分剪下轉(zhuǎn)接，材料仍可以用。二、褐變二、褐變 （一）定義 在組培過程中，培養(yǎng)材料向培養(yǎng)基中釋放褐色物質(zhì)，致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色，培養(yǎng)材料也隨之變褐死亡的現(xiàn)象。1、品種：由于多酚氧化酶活性上的

3、差異，有些品種的外植體在接種后較易褐變，而有些品種的外植體在接種后不易褐變。2、生理狀態(tài)：一般來說，幼嫩的組織在接種后褐變程度并不明顯，而老熟的組織在接種后褐變程度較為嚴(yán)重。（二）褐化的主要原因（二）褐化的主要原因3、培養(yǎng)基成分：如濃度過高的無機(jī)鹽會(huì)使褐化程度增加，細(xì)胞分裂素的水平過高也會(huì)刺激某些外植體的多酚氧化酶的活性，從而使褐化現(xiàn)象加深。4、培養(yǎng)條件不當(dāng)：例如光照過強(qiáng)、溫度過高、培養(yǎng)時(shí)間過長等，均可使多酚氧化酶的活性提高，從而加速被培養(yǎng)的外植體的褐變程度。（三）防治措施（三）防治措施1、選擇合適的外植體：一般來說，最好選擇生長處于旺盛的外植體。2、合適的培養(yǎng)條件：無機(jī)鹽成分、植物生長物質(zhì)水

4、平、適宜溫度、及時(shí)繼代培養(yǎng)均可以減輕材料的褐變現(xiàn)象。3、使用抗氧化劑：在培養(yǎng)基中，使用半胱氨酸、抗壞血酸等抗氧化劑能夠較為有效地避免或減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。另外使用0105的活性炭對防止褐變也有較為明顯的效果。 4、連續(xù)轉(zhuǎn)移：對容易褐變的材料可間隔1224小時(shí)培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上，這樣經(jīng)過連續(xù)處理710天后，褐變現(xiàn)象便會(huì)得到控制或大為減輕。 三、三、 玻璃化玻璃化（一）定義（一）定義 在組培過程中，葉片和嫩梢呈透明或半透明水浸狀的培養(yǎng)物稱為玻璃苗。（二）玻璃化苗的特點(diǎn)1、玻璃化苗植株矮小腫脹、失綠，葉片皺縮成縱向卷曲，脆弱易碎。2、葉表面缺少角質(zhì)層蠟質(zhì)，沒有功能性氣孔，僅有海綿組織而無柵欄組織。3、體內(nèi)含水量高，但干物質(zhì)、葉綠素、蛋白質(zhì)、纖維素和木質(zhì)素含量低。4、吸收營養(yǎng)與光合功能不全，分化能力大大降低，苗生長緩慢、繁殖系數(shù)大為降低，甚至死亡。5、生根困難，移栽成活率低。（三）防治措施（三）防治措施1、增加培養(yǎng)基中的溶質(zhì)水平，以降低培養(yǎng)基的水勢； 2、減少培養(yǎng)基中含氮化合物的用量；3、增加光照；4、增加容器通風(fēng)，最好進(jìn)行CO2施肥，這對減輕試管苗玻璃