分解纖維素的微生物的分離

1、課題3 分解纖維素的微生物的分離專題二 微生物的培養(yǎng)與應用 纖維素是一種由葡萄糖首位相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。 植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即CX酶、 C1酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維二糖纖維二糖C C1 1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纖維素纖維素取二支取二支20mL20mL的試管的試管3、實驗、實驗：纖維素酶分解纖維素的實驗：纖維素酶分解纖維素的實驗各加入一張濾紙條各加入一張濾

2、紙條各加入各加入pH4.8pH4.8，物質(zhì)量為，物質(zhì)量為0.1mol/L0.1mol/L的醋酸醋酸鈉緩沖液的醋酸醋酸鈉緩沖液11ml11ml和和10ml10ml甲甲 乙乙在乙試管中加入在乙試管中加入1mL1mL纖維素酶纖維素酶兩支試管固定在錐形瓶中，放在兩支試管固定在錐形瓶中，放在140r/min140r/min的搖床上振蕩的搖床上振蕩1h1h結果：乙試管的濾紙條消失結果：乙試管的濾紙條消失 討論討論：乙試管的濾紙條為什么會消失？甲試管的作用是：乙試管的濾紙條為什么會消失？甲試管的作用是什么？什么？土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋將樣品涂布到鑒別將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培

3、纖維素分解菌的培養(yǎng)基上養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透挑選產(chǎn)生透明圈的菌落明圈的菌落 取樣環(huán)境：富含纖維素的環(huán)境中 由于生物與環(huán)境的相互依存關系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。 原因 實例：樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等。 討論:如果找不到合適的環(huán)境，可將濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應埋進土壤中多深？ 1、選擇培養(yǎng)的目的：，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物培養(yǎng)基成分分析培養(yǎng)基成分分析培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成提供提供主要的營養(yǎng)物質(zhì)主要的營養(yǎng)物質(zhì)纖維素纖維素粉粉 5g5g碳碳源（能源）源（能源）N

4、aNO3 NaNO3 1g1g氮氮源、無機鹽源、無機鹽 KClKCl 0.5g 0.5g Na2HPO47H2O 1.2gNa2HPO47H2O 1.2gKH2PO4 0.9g KH2PO4 0.9g MgSO4 MgSO4 7H2O 0.5g7H2O 0.5g無機鹽無機鹽酵母膏酵母膏 0.5g0.5g生長因子生長因子、碳源、氮源、碳源、氮源水解水解酵素酵素 0.5g0.5g氮氮素、生長因子素、生長因子溶解溶解后，蒸餾水定容至后，蒸餾水定容至1000mL1000mL水水2、制備選擇培養(yǎng)基提示：自變量為培養(yǎng)基的種類，即普通培養(yǎng)基和選擇提示：自變量為培養(yǎng)基的種類，即普通培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基?？捎门Ｈ?/p>

5、膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對照培養(yǎng)基。可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對照,或者將纖或者將纖維素改為葡萄糖。維素改為葡萄糖。有選擇作用，本配方中纖維素作為主要碳源，只有能有選擇作用，本配方中纖維素作為主要碳源，只有能分解纖維素的微生物可以大量繁殖。分解纖維素的微生物可以大量繁殖。3、操作方法：將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下振蕩培養(yǎng)12天，直至培養(yǎng)液變渾濁。也可重復選擇培養(yǎng)思考：為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用1

6、011021031041051061、 制備培養(yǎng)基:參照旁欄中的比例2、 涂布平板：將稀釋度為104106的菌懸液各取0.1ml涂布在培養(yǎng)基上，30倒置培養(yǎng)培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na 510g碳源碳源酵母膏酵母膏 1g碳源、氮源、生長因子碳源、氮源、生長因子KH2PO4 0.25g無機鹽無機鹽土豆汁土豆汁 100mL碳源、生長因子碳源、生長因子瓊脂瓊脂 15g凝固劑凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至餾水定容至1000mL氫元素、氧元素氫元素、氧元素鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉水溶性羧甲基纖維素鈉) 在培養(yǎng)基中挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，該菌落即為分解纖維素的菌落。方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應方法二：在倒平板時就加入剛果紅缺點是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用 優(yōu)點是操作簡便，不存在菌落混雜問題缺點一是由于