HPLC法測(cè)定清火梔麥片中穿心蓮內(nèi)酯的含量(精)

1、HPLC法測(cè)定清火梔麥片中穿心蓮內(nèi)酯的含量摘 要 【目的】 建立清火梔麥片中穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定方法。 【方 法】 HPLC法，以甲醇一水（50： 50, pH=4.5）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 225nm。【結(jié)果】加樣回收率為 98.4%, RSD=2.03%【結(jié)論】該法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，精密 度、重現(xiàn)性均好，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞 清火梔麥片 穿心蓮內(nèi)酯 HPLC 法中分類(lèi)號(hào) R284清火梔麥片收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十三冊(cè)1。本品由穿心蓮、梔子、麥冬組成，具有清火，解毒，涼血，消腫之功效，用于咽喉 腫痛，急性扁桃腺炎，頭痛等。穿心蓮內(nèi)酯為穿心蓮的主要有效成分之一，本 文以 HP

2、LC 法測(cè)定其含量，報(bào)告如下。1 儀器與試藥1.1儀器 LC-10A 高效液相色譜儀（日本島津），SPD-10A 紫外檢測(cè)器，威瑪 通用多媒體色譜工作站，賽多利斯 BP211D 型十萬(wàn)分之一分析天平。1.2 試藥 穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所（含量測(cè)定用）。樣品：清 火梔麥片為本所抽驗(yàn)樣品，分別為廣西 A 藥廠（990181）； B 藥廠（991104012）； C 藥廠（991106057）。試劑：甲醇為優(yōu)級(jí)純；乙醇、氯仿、 鹽酸等試劑均為分析純；水為離子交換水。2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：甲醇一水（50 : 50,

3、用鹽酸調(diào)至 pH=4.5）；檢測(cè)波長(zhǎng)為 225nm；流速 0.8ml/min ;理論塔板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯峰計(jì)不低于1000,分離度大于 1.5，色譜見(jiàn) 1。1 清火梔麥片及穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品 HPLC 譜2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱(chēng)取穿心蓮內(nèi)酯 10.13mg,置 25ml 量瓶中，用甲 醇稀釋至刻度，溶解并搖勻，即得穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液適量于 12000r/min 下離心 10min,精密吸取上清液 4 卩 I、8 卩 I、12 卩 I、16 卩 I、20 卩 I 注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，并以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫 坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 結(jié)果得一不通過(guò)原點(diǎn)的直線。 回歸

4、方程為：y=2132488.908x+2318.38,r=0.9997 。結(jié)果表明穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)樣量在 0.324 1.621mg 之間呈良好的線性關(guān)系。2.3供試品溶液的制備 取樣品 10 片，除去糖衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約 0.5g ），置 100ml 三角燒瓶中，加乙醇 25ml,超聲處理 60min,濾 過(guò)，濾液加水使含醇量約為 40%用氯仿萃取 4 次（20ml，15ml，15ml， 10ml），合并氯仿液，水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，濾過(guò)，定容至5ml 的量瓶中，搖勻，即為供試品溶液。用前，取適量，于12000r/min 下離心 10min,取上清液進(jìn)樣分析。2.4精密度試

5、驗(yàn) 取同一穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液，重復(fù)測(cè)定 5 次，測(cè)得峰面積 分別為：1832994, 1880949, 1886427，1823028, 1889505, RSD 為 1.71%。說(shuō) 明精密度良好。2.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液， 每隔 2 小時(shí)測(cè)定一次峰面積， 結(jié)果得： 1778584,1696461, 1744056, 1713420, RSD 為 2.1%,表明供試品溶液在 6 小時(shí) 內(nèi)穩(wěn)定。2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品 5 份，按供試品溶液制備項(xiàng)下方法制備并測(cè)定，測(cè)得每片含量（mg 分別為：0.201,0.218, 0.210, 0.207, 0.211, RSD為 2.96%,

6、表明重現(xiàn)性良好。2.7樣品測(cè)定 精密吸取供試品溶液 10 卩 I 及對(duì)照品溶液 8 卩 I 和 16 卩 I，注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定，按二點(diǎn)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表1：表 1 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）藥廠批號(hào)每片平均含量（mgRSD( %A 藥廠99011810.2090.99B 藥廠 9911040121.2172.05C 藥廠 9911060571.6262.132.8回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的同一樣品一定量 5 份，分別加入穿心蓮 內(nèi)酯對(duì)照品 （精密稱(chēng)取對(duì)照品 4.45mg,配制成 0.089mg/ml， 精密加入 2ml,即 加入 0.178mg） ,按擬定方法配成 5ml，進(jìn)

7、樣 10 卩 I，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收 率，結(jié)果見(jiàn)表 2：表 2 回收率試驗(yàn)結(jié)果1-1樣品量(mg/5ml)加入量(mg/5ml)測(cè)得量(mg/5ml)回收率（%）平均回收率（%） R：D10.1840.36199.420.1850.363100.030.1870.1780.35795.598.42.034J0.1820.360100.0510.1890.36297.23 討論3.1流動(dòng)相調(diào)為弱酸性后，分離效果較好。是否由于穿心蓮為內(nèi)酯類(lèi)化合物， 遇酸后，內(nèi)酯環(huán)閉合而影響其效果，還有待進(jìn)一步研究。4.2提取方法的選擇：穿心蓮內(nèi)酯的提取，文獻(xiàn)報(bào)道有用索氏提取器，先加石油醚回流至無(wú)色，除去部分雜質(zhì)后，再用乙醇回流34 小時(shí)提取；另有用乙醇冷浸，放置過(guò)夜后，再超聲處理一定時(shí)間，濾過(guò)即得2。作者認(rèn)為第一種方法較為繁瑣，第二種方法則對(duì)色譜柱不利。而本法簡(jiǎn)單，快捷，且能充分提取出 穿心蓮內(nèi)酯，同時(shí)又能除去部分雜質(zhì)，對(duì)色譜柱起到保護(hù)作用。4.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同廠家清火梔麥片中穿心蓮內(nèi)酯的含量相差甚遠(yuǎn)，究其 原因與原料的來(lái)源、加工及不同生產(chǎn)廠家的質(zhì)量把關(guān)等有關(guān)，但最為重要的原 因是至今未有控制其含量的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。因此，建議制定以穿心蓮內(nèi)酯作為清火 梔麥片中穿心蓮含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)，以利于更好地