活化部分凝血活酶時間(APTT)測定

1、 深圳市沙井人民醫(yī)院檢驗科文件編號：SJ/QS-26-OP-XY-059版本版次：A/01臨床血液作業(yè)指導書生效日期：第 1 頁 ，共 2 頁活化部分凝血活酶時間測定（APTT）1. 項目名稱: 活化部分凝血活酶時間(Activated Partial Thromboplastin Time,APTT)2.檢驗目的2.1手術(shù)前的檢測2.2 DIC的協(xié)診2.3抗凝藥物治療監(jiān)測2.4凝血因子檢查2.5循環(huán)血液中抗凝物質(zhì)和一些疾病協(xié)診等3.檢驗原理：3.1檢測原理:全自動血凝儀測定,散射光凝固法檢測確定量的血漿樣本（50l）經(jīng)過一定時間（3min）溫育后，加入部分凝血活酶時間反應試劑（50l），加溫

2、1min，加入0.025MCaCl250l，加溫4min,采用波長660nm的光照射反應物，通過測量散射光光強度的改變來測定凝血過程(纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白)中的濁度變化,從散射光光強度的測定可得凝集曲線，反應物凝固的時間即活化部分凝血活酶時間。3.2反應方法學溯源:37條件下,以鞣花酸激活因子和,以腦磷脂(部分凝血活酶)代替血小板,在Ca2+參與下,觀察貧血小板血漿凝固所需時間,即為活化部分凝血活酶時間,是內(nèi)源凝血系統(tǒng)較敏感和常用的篩選試驗.4.性能參數(shù)4.1重復性:CV2%4.2分析和計算參數(shù):報告單位 秒(S)4.3樣本量:50ul,試劑量:50ul激活劑,50ul CaCl24.4檢

3、驗時間:在最長檢驗時間之內(nèi)測出結(jié)果,標準設置最長檢驗時間:190秒4.5精密度范圍:1.36.0%5原始樣品系統(tǒng):血漿6.容器和添加劑類型容器采用真空負壓專用抗凝管,添加劑類型為0.109M枸櫞酸鈉7.試劑及配套品7.1激活劑:Cephaloplastin試劑(Dade Actin Activated Cephaloplastin Reagent)商標:德靈(DADE BEHRING)7.1.2包裝規(guī)格:10×2ml貨號:B4218-17.1.4成分:腦磷脂(從干燥兔腦粉中提取)加入含有緩沖液、穩(wěn)定劑和防腐劑的1.0×10-4M的鞣花酸溶液7.1.5使用方法:液體試劑,直接

4、使用7.1.6儲存:未開封試劑28貯存到說明書上有效期，開蓋后28有效期7天,不能冰凍。未被污染的試劑穩(wěn)定期是：283年、18251年、372天;7.2氯化鈣溶液(Calcium Chloride Solution)商標:德靈(DADE BEHRING)7.2.2包裝規(guī)格:10×15ml7.2.3貨號:ORHO377.2.4成分:0.025mol/L的氯化鈣溶液7.2.5使用方法:液體試劑,直接使用.7.2.6儲存:沒開蓋試劑放28存放至試劑瓶上有效期.開蓋后28有效期7天.7.3清洗液(Clean I):用于測定過程中的吸樣針沖洗商標:希森美康(Sysmex)7.3.2包裝規(guī)格:5

5、0ml貨號:GSA500A7.3.4成分:1%次氯酸鈉及活性成分7.3.5使用方法;液體試劑,直接使用7.3.6儲存:沒開蓋試劑放28存放至包裝有效期,開蓋后放于儀器內(nèi)有效期僅存4小時7.4校準質(zhì)控血漿(Ci-Trol)商標: 德靈(DADE BEHRING)7.4.2貨號:Level 1(Normai),291070 10×1ml Level 2(Abnormal),291071 10×1ml Level 3(Abnormal),291072 10×1ml7.4.3使用方法:1ml蒸餾水溶解置室溫15分鐘后使用7.4.4儲存:室溫:2h, 28:4h,冷凍分裝保

6、存:-20<2周,-70<6個月8.校準程序:儀器的驗證和光路系統(tǒng)校正 儀器的驗證由生產(chǎn)商、代理商指定工程師和我科共同完成.燈泡大約半年更換一次,光路系統(tǒng)的校正由代理商完成.9.程序步驟:9.1標本采集與要求9.1.1標本采集:抽取靜脈血1.8ml,加入到含0.2ml109mmol/L(1:9)的枸櫞酸鈉溶液抗凝真空試管中,并輕輕顛倒10次使之充分混勻,不得有凝塊、不得形成泡沫,總量不得超過2.0±0.2ml,并在試管上做好標識.采血應避免溶血和脂血,故患者應盡量空腹和避免在輸入脂肪乳過程中或其后8小時內(nèi)采血.采血后2小時內(nèi)送到檢驗科,需要運輸時應在低溫條件下運輸.采集標

7、本時宜“一針見血”,以防止組織損傷,外源性凝血因子進入針管,最好不與其它實驗一起采集,否則由于標本的分配、分裝而使血液停留在針管的時間延長.9.1.2不合格標本的處理 對凝固、有凝塊、嚴重溶血、重度黃疸、脂血、采血量不符合要求、無條碼或無標識等不合格的標本,距采集時間超過2小時并且沒有按要求儲存的標本,按程序文件樣品核收、登記和保存程序處理9.1.3標本保存檢測應在標本采集后2小時內(nèi)完成,28保存不超過4小時,分離后的血漿-20以下密封可保存2周.需長期保存的標本在-70下不超過6個月,且只能凍融1次，分析前在37迅速解凍，以減低凝血因子的消耗，解凍后立即測試。分析后的標本不保存.9.2檢測前

8、準備 采樣后應盡快分離血漿(60分鐘內(nèi)進行),將標本1500×g(3000r/min)離心10分鐘,務使血小板去除;.在進行質(zhì)控物和病人標本分析檢測前,進行儀器狀態(tài)和試劑檢查,確保準備完好后才能進行分析.并將檢查結(jié)果記錄在相應的儀器設備使用記錄表上.9.3病人標本的檢測9.3.1開機:開CA1500儀器左側(cè)電源開機后儀器進行自檢、預熱,當屏幕上顯示Ready時可以進行試驗9.3.2每日針沖洗:在主屏幕上選Rinse Probe,然后按下Execute進行針沖洗9.3.3準備試劑:按照儀器試劑位置設定,把上述每項的試劑準備好,放在相應的位置9.3.4準備反應杯:打開儀器頂部反應杯儲存槽

9、,查看反應杯是否足夠,需及時添加9.3.5準備標本;將離心好的樣本放在相應的樣本架上(一個架子可放10個樣本),準備好放在進樣器上9.3.6輸入試驗項目:按下主菜單上的Work List鍵,在試驗項目鍵點擊APTT,使APTT項目下顯示“-”變?yōu)椤啊?按“”或“”將需要測試標本如上操作選擇;9.3.7輸入樣本號:按下ID No.Entry,按順序輸入樣本的序號或病人的病歷號9.3.8開始檢測:待一切準備工作就緒,按下屏幕右上角START鍵,儀器開始檢測9.3.9查看結(jié)果:返回主屏幕,檢測的項目如果由“”變?yōu)椤啊北砻鞔嗽囼炓呀?jīng)完成,然后按下Stored Date(儲存結(jié)果)鍵,屏幕會換到結(jié)果顯示

10、界面,按下邊第一個菜單Graph,查看凝集曲線、吸光度、結(jié)果等,檢查是否有Error錯誤信息,有錯誤報警的標本需考慮重測9.3.10關(guān)機前沖洗針:關(guān)機前需要洗針,按下Rinse Probe,然后按下Execute9.3.11關(guān)機:回到主屏幕下,切斷儀器電源.10.質(zhì)量控制程序:.10.1質(zhì)控物準備用1ml蒸餾水溶解一瓶Dade Control質(zhì)控血漿,輕輕顛倒混勻約5秒,置于室溫30分鐘,用前搖勻即可,不要劇烈振搖.將未用完的質(zhì)控血漿在室溫保存2小時、284小時、-20以下冰箱中可保存24小時10.2上機檢測將質(zhì)控標本加入樣品杯,上機檢測.具體操作詳見CA1500血液凝固分析儀作業(yè)指導書10.

11、3質(zhì)控規(guī)則10.3.1質(zhì)控圖正常分布規(guī)律各點應分布在均值的兩側(cè),95.45%數(shù)據(jù)落在x±2s內(nèi),99.73%數(shù)據(jù)落在x±3s內(nèi).10.3.2質(zhì)控圖失控規(guī)則a)一個質(zhì)控物的測定結(jié)果超過x±3s(13s規(guī)則)；b) 一個質(zhì)控物的測定結(jié)果連續(xù)2次超過x2s或x-2s(22s規(guī)則)C) 一個質(zhì)控物的測定結(jié)果連續(xù)2次測定其中1次超過x2s另1次超過x-2s(R4s規(guī)則)d) 一個質(zhì)控物的測定結(jié)果連續(xù)4次超過x+1s或x-1s(41s規(guī)則)e)連續(xù)10次質(zhì)控物結(jié)果都在均數(shù)的同一側(cè)（10x規(guī)則）f)連續(xù)5次測定結(jié)果漸增或漸減（5T規(guī)則）10.4室內(nèi)質(zhì)控分析與失控處理10.4.1

12、質(zhì)控結(jié)果分析檢測人員對質(zhì)控結(jié)果進行分析,在發(fā)現(xiàn)質(zhì)控數(shù)據(jù)違背質(zhì)控規(guī)則后,通知組長,協(xié)助處理.組長分析該失控信號的真?zhèn)?并做出是否發(fā)出與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批病人標本檢驗報告的決定,必要時由檢驗科主任處理.檢測人員填寫失控報告.10.4.2失控原因分析極其處理過程失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響,包括操作上的失誤,試劑、校準品或質(zhì)控品的失效,儀器維護不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則、控制限范圍、一次測定的質(zhì)控標本數(shù)等.解凍的質(zhì)控血漿一定要先混勻再吸出至樣品杯中,操作時間嚴格按作業(yè)指導書進行.所以,室內(nèi)質(zhì)控失效時.首先要查明失控原因,然后隨機挑選出一定比例的病人標本進行重新測定,對失控做出恰當?shù)呐袛?失控的處理原

13、則見程序文件內(nèi)部質(zhì)量控制管理程序10.5質(zhì)控標本檢測完畢后,及時將質(zhì)控血漿放回冰箱,-20以下密封保存24小時.11.干擾和交叉反應 多種藥物如雙香豆素、鏈激酶、尿酶、口服避孕藥、雌激素、天門冬酰胺酶、鈉絡酮等可影響PT結(jié)果,如出現(xiàn)異常結(jié)果,需做進一步實驗以確定導致異常的原因,溶血、黃疸、脂血標本或混濁樣本影響結(jié)果,應重新采血.血標本與抗凝劑比例不當也影響檢測結(jié)果.當紅細胞比積過大(>0.55)或過小(<0.20)可影響測定結(jié)果,這時枸櫞酸鈉的用量為V=0.00185×V1×(1.00-)×100 (注:V-枸櫞酸鈉用量, V1-血量ml,-紅細胞比積

14、)有下列濃度的物質(zhì)存在時,對APTT的干擾小于10%標本類型甘油三酯(mg/dL)血色素(mg/dL)結(jié)合膽紅素（mg/dL）正常不正常780605505208361012.結(jié)果計算程序的原理由儀器測定反應物凝固的時間即為活化部分凝血活酶時間13.生物參考區(qū)間: 21.1-36.5 S（患者結(jié)果超過正常對照10S上有臨床意義）14.患者檢驗結(jié)果的可報告區(qū)間21124秒15.警告/危急值APTT：20S 或80S16.實驗室解釋16.1APTT常用于內(nèi)源性凝血系統(tǒng)（、因子）的篩選及肝素抗凝治療的監(jiān)測16.2 APTT延長：見于先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接觸因子、缺乏、VWF等）；多種凝

15、血因子缺乏（如嚴重肝病、維生素K缺乏、DIC、纖溶亢進等）；血液中有抗凝物質(zhì)存在如凝血因子抑制物、狼瘡抗凝物、華法林或肝素水平增高，F(xiàn)、F及F、F缺乏，大量輸入庫血。16.3 APTT縮短：見于DIC高凝期和妊娠高血壓綜合癥等高凝狀態(tài)以及血栓前狀態(tài)、血栓性疾病。16.4 是監(jiān)測肝素治療的首選指標。要注意APTT測定結(jié)果必須與肝素治療范圍的血漿濃度呈線性關(guān)系，否則不宜使用。一般在肝素治療期間，APTT維持在正常對照的1.53.0倍為宜.16.5對內(nèi)源凝血途徑因子(、)缺乏較CT敏感(血小板異常不影響APTT)能檢出:C小于25%的輕型血友病.對凝血酶原、纖維蛋白原缺乏則不夠敏感,故APTT延長的

16、最常見疾病為血友病.此時可進一步做糾正試驗,即于患者血漿中加入1/4量的正常新鮮血漿、硫酸鋇吸附血漿或正常血清(試劑參見凝血酶原消耗試驗的糾正試驗),再做APTT,如正常血漿和吸附血漿能糾正延長的結(jié)果而血清不能糾正,則為因子缺乏;如吸附血漿不能糾正,其余兩者都能糾正,則為因子缺乏;如三者都不能糾正,則為病理性循環(huán)抗凝物質(zhì)。17.安全性防護措施17.1在操作儀器時應按照儀器作業(yè)指導書進行操作,防止受傷、觸電等17.2在進行維護和檢查工作時,請帶上橡膠手套,使用專用的工具和部件,在工作完成后,用消毒液清洗雙手,以免發(fā)生感染17.3在處理血樣時應小心謹慎,應始終戴上橡膠手套,以避免發(fā)生細菌感染,若樣

17、本濺入眼睛或者傷口,須用大量清水沖洗,并立即就診17.4在處理廢液以及裝卸相關(guān)部件時,請勿接觸廢液.如果其中包含血樣,可能導致感染發(fā)生.如果無意接觸血液,首先用消毒液清洗,然后用肥皂清洗17.5在處理試劑時:如果試劑不慎落入眼睛,立即用大量清水沖洗,并接受治療;如果不慎吞入試劑,立即向醫(yī)生求助,喝入大量清水,并盡量嘔出吞入試劑;如果試劑沾上皮膚或者手,用大量清水沖洗;在丟棄廢液和消耗品時,請按照處理醫(yī)療、傳染性、工業(yè)性廢水的步驟進行處理,如果其中含有血樣,可能導致細菌感染.18.變異的潛在來源18.1冷凍血漿可減低APTT對狼瘡抗凝物以及對、HMWK、PK缺乏的靈敏度；室溫下，F(xiàn)易失去活性，因此恰當?shù)臉吮咎幚矸浅Ｖ匾?8.2高脂血癥可使APTT延長18.3抗凝劑：草酸鹽、EDTA、肝素不適用于APTT檢查18.4標本采集處理不當,如血與抗凝劑未充分混勻，出現(xiàn)凝塊，有組織液混入,混勻時過分用力使標本溶血，造成結(jié)果變異。如果抽血過慢或不太順利,可能激活凝血系統(tǒng),試驗結(jié)果將會顯示凝血因子活性增高,如果采血時產(chǎn)生泡沫,可能導致纖維蛋白原和V因子及因子變性.18.5纖溶藥物的影響（如雙香豆素、鏈激酶、尿酶等），超劑量使用肝素。18.6FDP增加使凝固時間延長。