高中生物實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離輔導(dǎo)教案浙科版

1、用心愛(ài)心專心1輔導(dǎo)教案導(dǎo)學(xué)誘思一、大腸桿菌1大腸桿菌屬于革蘭氏 _ 性菌，為_(kāi)型的腸道桿菌。2結(jié)構(gòu)：屬于_ 生物。3用途：是在 _ 技術(shù)中被廣泛采用的工具。4.與人類的關(guān)系：它生活在人類的 _ 中，一般對(duì)人_(“有”還是“無(wú)”)害。有一些菌株對(duì)人體能產(chǎn)生危害，因?yàn)樗鼈兛梢郧治g_并產(chǎn)生_。任何大腸桿菌如果進(jìn)入人的_ 系統(tǒng)，都會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。答案：1.陰兼性厭氧2原核3.基因工程4腸道無(wú)腸黏膜毒素泌尿二、細(xì)菌的培養(yǎng)和分離1細(xì)菌的培養(yǎng)：(1)細(xì)菌的繁殖：細(xì)菌以 _ 的方式繁殖，分裂速度很快，約 _分裂一次。(2)培養(yǎng)細(xì)菌的方法：培養(yǎng)細(xì)菌， 需要將轉(zhuǎn)移到_ 中，一般用 _ 來(lái)轉(zhuǎn)移帶菌的培養(yǎng)物。用不同

2、培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌的差別：接種方法接種 后培 養(yǎng)的時(shí)間(單 位：小時(shí))培養(yǎng)結(jié)果接種環(huán)直接接種培養(yǎng)個(gè)細(xì)菌用心愛(ài)心專心2每毫升培養(yǎng)基中有8 h后用接種環(huán)在培養(yǎng)基上用培養(yǎng)1020 h后一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞會(huì)繁殖成許多個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，的方式接種(該法還可以用于)形成2.細(xì)菌的分離：(1)分離的方法與特點(diǎn)：分離細(xì)菌有和2種。前者方法簡(jiǎn)單，后者操作復(fù)雜，但是更易分開(kāi)。(2)_本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行大腸桿菌分離，是用法，就是在培養(yǎng)基上進(jìn)行細(xì)菌的答案：1. (1)分裂20 min (2)已有細(xì)菌的培養(yǎng)物新的培養(yǎng)基接種環(huán)(3)幾億劃線分離細(xì)菌緊緊聚集在一起菌落2. (1)劃線分離法涂布分離法單菌落(2)劃線分離固體平面劃線培養(yǎng)三、滅菌操作

3、1滅菌操作的原因：為了獲得 _ 的培養(yǎng)物，其關(guān)鍵是防止外來(lái) _ 的入侵污染。因此，在培養(yǎng)微生物時(shí)必須進(jìn)行 _ 操作。2無(wú)菌操作的條件：(1)首要條件是 _ 必須是無(wú)菌的；(2) _必須是無(wú)菌的；_ 的過(guò)程必須是無(wú)菌的等。答案：1.純凈雜菌無(wú)菌2.(1)各種器皿(2)各種培養(yǎng)基(3)菌轉(zhuǎn)移操作四、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1)進(jìn)行大腸桿菌的 _，利用_培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的操作；進(jìn)行大腸桿菌的 _ ，用_ 培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌的 _ 培養(yǎng);(3)說(shuō)明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和操作要求的原理。用心愛(ài)心專心32.實(shí)驗(yàn)步驟(1)滅菌：用 _ 在_壓力下對(duì)LB液體培養(yǎng)基、LB固體培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌_

4、min。(2)自_ 向_中轉(zhuǎn)移并分裝固體培養(yǎng)基：待冷卻至_ 左右，將三角錐形瓶中的 _ 培養(yǎng)基，在_ 上分裝至幾個(gè) _中，制成_培養(yǎng)基。(3)將大腸桿菌自 _ 轉(zhuǎn)移到_中的_ 培養(yǎng)基中培養(yǎng)：將大腸桿菌用_ 在無(wú)菌操作下接種至三角錐形瓶中的 _培養(yǎng)基中，在_ 搖床振蕩培養(yǎng) _ ，完成大腸桿菌的培養(yǎng)。(4)將菌液在_ 培 上進(jìn)行_分離：從前一步培養(yǎng)得到的菌液中獲取菌種，用_以_法接種至第二步所制得的_培養(yǎng)基中，在_C恒溫箱中培養(yǎng) _h后觀察菌落。(5)菌種保存：在無(wú)菌操作下將 _ 用_ 取出，再用 _ 法接種在_上，_ 培養(yǎng)_ 后，_冰箱保存。3分離實(shí)驗(yàn)的結(jié)果及相應(yīng)結(jié)論：觀察中若看到在 _ 的末端

5、出現(xiàn) _ ，則表明菌已被分離了。4._大腸桿菌分離的用途： _ 的通用方法，也是用于的最簡(jiǎn)便方法之一。答案：1.(1)擴(kuò)增 液體(2)分離 固體平面 劃線2.(1)高壓鍋1 kg 15(2)三角瓶 培養(yǎng)皿60C固體超凈臺(tái)培養(yǎng)皿固體平面(3)斜面三角瓶液體接種環(huán)液體37C12 h固體平面劃線接種環(huán)劃線固體平面371224(5)單菌落接種環(huán)劃線斜面37C24 h 4C3劃線不連續(xù)的單個(gè)菌落4消除污染雜菌篩選高表達(dá)量菌株核心解讀HEXINJIEDU1.微生物、細(xì)菌與大腸桿菌之間有怎樣的關(guān)系？(1)概念內(nèi)涵：其關(guān)系圖解見(jiàn)下用心愛(ài)心專心4(2)結(jié)構(gòu)上：三者都是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單， 形體微小的生物，但是從細(xì)胞角度看

6、其結(jié)構(gòu)是不同的,具體如下:由真核細(xì)龜枸成的真檢生樹(shù)既有）醉母藺 單細(xì)胞生物也有多細(xì)胞生物）！S -放線菌藍(lán)細(xì)菌由原核細(xì)胞枸成的原核生物（都是單細(xì)砲生韌） 如細(xì)曹I無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的主韌病專2.培養(yǎng)大腸桿菌的LB培養(yǎng)基中有各種物質(zhì)， 為什么選擇這些物質(zhì)， 這些物質(zhì)有什么作 用呢？（1）人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出了供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)一一培 養(yǎng)基。雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有五大營(yíng)養(yǎng)要素，即水、無(wú)機(jī)鹽、碳源（提供碳元素）、氮源（提供氮元素）和生長(zhǎng)因子（不同的細(xì)菌需要的各不相同，有物種差異， 它主要補(bǔ)充自身不能合成的或合成能力較弱的，但卻是生長(zhǎng)繁殖必需的物質(zhì)）。見(jiàn)下表：微生

7、物的營(yíng)養(yǎng)要素定義功能類型化合物類型常用物質(zhì)碳源凡可構(gòu)成微生物細(xì) 胞和代謝產(chǎn)物中碳 架來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 稱為碳源構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)，供給微生物生長(zhǎng)發(fā)育所需要的能量無(wú)機(jī) 碳（自養(yǎng)型 微生 物用）無(wú)機(jī)物CQNaHCOCaCO等有機(jī) 碳（異養(yǎng)型 微生 物用）蛋白 質(zhì)、核酸類牛肉膏、蛋白胨、花生 粉餅、明 膠、氨基酸 等糖類脂質(zhì)等葡萄糖、蔗 糖、淀粉等氮源凡是構(gòu)成微生物的細(xì)胞物質(zhì)或代謝產(chǎn)主要是提供合成原生質(zhì)和細(xì)胞其他結(jié)無(wú)機(jī)氮銨鹽NH、(NH4)2SQ肺炎取球菌天腸桿菌用心愛(ài)心專心5物中氮素來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)稱為氮源構(gòu)的原料，一般不作能源硝酸鹽KNG2空氣有機(jī)氮牛肉膏、蛋白胨、醇母膏、尿素、明膠等生長(zhǎng)因子一類對(duì)微生物

8、正常 代謝必不可少且又 不能從簡(jiǎn)單的碳、氮源自行合成的所 需極微量的有機(jī)物一般是酶和核酸的組成成分酵母膏、玉米漿、黃豆餅粉、 動(dòng)植物組織液、麥芽汁等， 復(fù)合維生素水作用：組成成分；反應(yīng)介質(zhì)；物質(zhì)運(yùn)輸媒體；熱的良導(dǎo)體無(wú)機(jī)鹽作用：維持滲透壓、pH等(2)大腸桿菌的LB培 養(yǎng)基微生物的營(yíng)養(yǎng)要素本實(shí)驗(yàn)中大腸桿菌LB培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基配方與微生物營(yíng)養(yǎng)要素的對(duì)應(yīng)關(guān)系LB液體培養(yǎng)基LB固體培養(yǎng)基氮源、碳源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水-瓊脂1 g-蛋白胨0.5 g主要提供大腸桿菌的氮源、 碳源需求酵母提取物0.25 g主要提供生長(zhǎng)因子NaCI 0.5 g提供無(wú)機(jī)鹽水50 mL提供水此外配方中還要注意pH等。3.該實(shí)驗(yàn)

9、中這些操作的原因(1)三角錐形瓶中的LB固體培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到60C左右時(shí)，才用來(lái)轉(zhuǎn)移和分裝，制成固體平面培養(yǎng)基，為什么？你用什么簡(jiǎn)易方法快速估計(jì)該溫度？因?yàn)槿清F形瓶中的LB固體培養(yǎng)基中有瓊脂，它在98C以上熔化，在44C以下凝固，當(dāng)冷卻到60C左右時(shí)，不會(huì)因溫度過(guò)高燙手而不易操作；也不會(huì)因?yàn)闇囟冗^(guò)低而使三角錐 形瓶中的培養(yǎng)基凝固，最終無(wú)法轉(zhuǎn)移分裝制成新的平面培養(yǎng)基。簡(jiǎn)易估計(jì)溫度的方法：可以用手觸摸滅菌后的三角錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶由燙手轉(zhuǎn)為剛剛不燙手時(shí)，則說(shuō)明已經(jīng)冷卻到60C左右了。(2)進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí)，為什么要將培養(yǎng)皿倒置？用心愛(ài)心專心6恒溫培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中的水分會(huì)以水蒸氣的形式蒸發(fā)，

10、倒放培養(yǎng)皿則會(huì)使水蒸氣凝結(jié)成水滴留在蓋子上；如果正放培養(yǎng)皿，則水分形成的水滴會(huì)落入培養(yǎng)基表面并且擴(kuò)散開(kāi)。如果培養(yǎng)皿中已形成菌落，則菌落中的菌會(huì)隨水?dāng)U散，菌落間相互影響，很難再分成單菌落，達(dá)不到分離的目的，培養(yǎng)皿中的菌落還有可能被蓋子上掉落的水給污染。(3)將大腸桿菌用接種環(huán)自斜面轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，為什么接種環(huán)必須先深入到斜面冷卻后，才能再取斜面上的菌體？接種環(huán)在取菌體前曾在酒精燈火焰上灼燒滅菌，一直灼燒至紅，溫度很高，若不冷卻就直接用其取斜面上的菌體， 菌體可能因?yàn)榻佑|高溫接種環(huán)而死亡，導(dǎo)致大腸桿菌的轉(zhuǎn)移培養(yǎng)失敗。(4)用劃線法分離大腸桿菌中，第一次和隨后的幾次劃線前都要灼燒接種環(huán)，它

11、們的原因一樣嗎？在劃線結(jié)束后仍然要灼燒接種環(huán)這又是為什么呢？雖然每次灼燒都是為了滅菌，但所滅的菌種和原因卻不一樣。灼燒接種環(huán)的時(shí)間消滅的菌體原因第一次劃線.、八 刖其他雜菌防止其他雜菌的侵入而造成污染隨后的幾次劃線前上次劃線結(jié)束后殘留在接種環(huán)上的實(shí)驗(yàn)菌(本實(shí)驗(yàn)為：大腸桿菌)為了使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌 來(lái)自上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線 次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù) 目逐漸減少，最終獲得單個(gè)菌落，實(shí) 現(xiàn)菌的分離取后一次劃線結(jié)束后為了防止實(shí)驗(yàn)菌殘留于接種環(huán)而污染環(huán)境和感染實(shí)驗(yàn)人員(5)用劃線法分離大腸桿菌時(shí)，每次的劃線是怎么樣的？對(duì)隨后的劃線的起點(diǎn)有什么要 求？為什么這樣要求呢？每一次的劃

12、線依次的2次劃線之間的關(guān)系各次劃線的分布圖形輔助理解e用心愛(ài)心專心7劃線的要求不能出現(xiàn)線條的重疊第二次以及隨后的劃線操作，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連這樣要求的原因使線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少因?yàn)閯澗€后，線條末 端細(xì)菌的數(shù)目比線條 起始處要少，每次從 上一次劃線的末端開(kāi) 始，能使細(xì)菌的數(shù)目 隨著劃線次數(shù)的增加 而逐漸減少，最終得 到有單個(gè)細(xì)菌繁殖而 來(lái)的單菌落若相連，則可能最后 一次劃線末端處的細(xì) 菌與第一次的疊加， 細(xì)菌的數(shù)目不是最少 的，不能使細(xì)菌的數(shù) 目隨著劃線次數(shù)的增 加而逐漸減少，最終 將很難獲得單菌洛4消毒與滅菌一樣嗎?概念常用方法應(yīng)用的范圍消

13、毒使用較為溫和的物理或 化學(xué)方法僅殺死物體表 面或內(nèi)部一部分對(duì)人體 有害的微生物（不包括 芽孢和孢子）煮沸消毒法：在100c煮沸56 min般物品巴氏消毒法：7075C煮30 min或在80C煮15 min對(duì)于一些不耐咼溫的液體，如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等火菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物（包括芽孢和孢子）灼燒火菌：酒精燈火焰接種工具的火菌干熱火菌：160170C下火菌12 h玻璃器皿、金屬工具的滅菌高壓蒸汽滅菌：121C條件下，火菌1530 min培養(yǎng)基及容器的火菌5.本實(shí)驗(yàn)中還需要了解哪些基礎(chǔ)知識(shí)才更便于掌握和理解呢?牛肉膏蛋白胨的知識(shí)牛肉膏和蛋白胨

14、來(lái)源于動(dòng)物原料，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。1 000 mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分提供的主要營(yíng)養(yǎng)用心愛(ài)心專心8牛肉膏5 g碳源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10 g氮源和維生素NaCl 5 g無(wú)機(jī)鹽H2O定容至1 000 mL氫兀素、氧兀素(2)巴氏消毒法的知識(shí)巴氏消毒法也稱做低溫消毒法。日常生活中經(jīng)常用到煮沸消毒法。在100C煮沸56 min可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢。對(duì)于一些不耐高溫的液體，如牛奶，則使用巴氏消毒法，在7075C煮30 min或在80C煮15 min，可以殺死牛奶中的微生物，并且使牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。題例領(lǐng)悟TILILINGWU【例題1】下列操作

15、屬于滅菌的是()A.用酒精擦拭實(shí)驗(yàn)人員的雙手B.用氯氣處理水源C.將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒至紅D.殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物解析：此題考查對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)中滅菌的理解。對(duì)微生物培養(yǎng)來(lái)說(shuō)，滅菌操作十分重要，其目的就是為了獲得純凈的培養(yǎng)物， 其關(guān)鍵是防止外來(lái)一切雜菌的入侵， 不僅僅是對(duì)人體有 害的微生物。滅菌操作一般使用強(qiáng)烈的物化因素(如：灼燒滅菌、高壓蒸汽滅菌等)。而不是 使用較為溫和的物化方法。答案：Cfi思慝甫消毒與滅菌是不同的。兩者除了在物化手段上是否強(qiáng)烈外， 所消滅的微生物內(nèi)容也是不 同的。滅菌是消除一切雜菌， 而消毒僅僅殺死對(duì)人體有害的微生物。 消毒往往無(wú)法消滅微生 物的

16、芽孢和孢子?！纠}2】 下列關(guān)于平板劃線的操作及敘述，正確的是，( )A灼燒接種環(huán)之后，為避免其他雜菌的干擾，應(yīng)立即伸入菌液取菌種B.劃線結(jié)束后，為避免實(shí)驗(yàn)菌污染環(huán)境和感染操作者，所以必須再次灼燒接種環(huán)C.在第一次劃線前灼燒接種環(huán)和每次劃線前灼燒接種環(huán)的目的相同D.劃線時(shí)最后一區(qū)域一定要與第一區(qū)域相連，達(dá)到首尾相接解析：此題考查對(duì)劃線法分離大腸桿菌的掌握。這是本實(shí)驗(yàn)的一大重點(diǎn)和難點(diǎn)。A的操作是錯(cuò)誤的，灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后方能取菌種，以免溫度太高殺死菌種。B的操作完全正確。C的敘述是錯(cuò)誤的，它們的灼燒目的完全不同，第一次劃線前的灼燒是為了殺死其 他雜菌，保證實(shí)用心愛(ài)心專心9驗(yàn)菌的純凈，而隨后的灼燒卻是為了殺死殘留于接種環(huán)上的實(shí)驗(yàn)菌，保證實(shí)驗(yàn)菌隨劃線次數(shù)的增加而減少，每次劃線的菌種來(lái)自上一次劃線的末端。D的操作也是不正確的，不應(yīng)該相連，這樣才能使最后一次劃線不受第一次劃線的干擾。答案：B反思也甫大腸桿菌的分離所采用的就是劃線分離法。這一方法十分重要。具體的操作，還要知其所以然，還要關(guān)注注意事項(xiàng)，避免踏入誤區(qū)。隨堂訓(xùn)練SUITANGXUNLIAN1細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法 依次用于殺滅哪些部位的雜菌（）A.接種針、手、培養(yǎng)基B.咼壓鍋、手、接種針C.培養(yǎng)基、手、接種針D.接種針、手、咼壓鍋答案：C解析：滅菌是微生物培養(yǎng)過(guò)程中的