抗生素類藥物分析

1、抗生素類藥物分析主要內(nèi)容氨基糖苷類抗生素四環(huán)素類抗生素概述-內(nèi)酯胺類抗生素 1928年 弗萊明發(fā)現(xiàn)青霉菌抑制金黃葡萄球菌 1939年 佛羅瑞和芡恩從青霉菌分離青霉素 1945年 佛來(lái)明、佛羅瑞、芡恩獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)一、概述 如今： 抗生素7000種 用于醫(yī)療300種 我國(guó)100種一、概述 抗生素（antibiotics): 指在低微濃度下即可對(duì) 某些生物的生命活動(dòng)有 特異抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱一、概述 抗生素類藥物的特點(diǎn): 化學(xué)純度較低：同系物、異構(gòu)體、降解物 活性組分易變異：菌株、發(fā)酵條件變化 穩(wěn)定性差：活性基團(tuán)往往是活性中心一、概述 抗生素的測(cè)定： 1、微生物檢定法 抗生素對(duì)微生物的效應(yīng)

2、衡量效價(jià) 優(yōu)點(diǎn)：1)與臨床應(yīng)用一致，醫(yī)療價(jià)值 2)靈敏度高、檢品用量少 3)純的、純度差的 4)已知的、新發(fā)現(xiàn)的 5)測(cè)定總效價(jià)一、概述 缺點(diǎn)： 1）操作步驟繁多 2）測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)（1624h） 3）誤差大（10%）一、概述 2、理化方法 特有的物理化學(xué)性質(zhì)及其反應(yīng)進(jìn)行 優(yōu)點(diǎn)：1）操作簡(jiǎn)單 2）省時(shí) 3）方法準(zhǔn)確 4）一定的專屬性一、概述 缺點(diǎn)：1）提純的、化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的 2）測(cè)定結(jié)果是含量一、概述二、-內(nèi)酯胺類抗生素 6-氨基青霉烷酸 7-氨基頭孢菌烷酸6-Aminopenicillanic Acid 7-Aminocephalosporanie acid6-APA 7-ACA甲環(huán)：-內(nèi)酰胺環(huán)

3、乙環(huán)：飽和的噻唑環(huán) 氫化噻嗪環(huán)（一）性質(zhì) 1、旋光性 2、溶解度 堿金屬鹽易溶水 有機(jī)堿鹽難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑二、-內(nèi)酯胺類抗生素 3、吸收光譜特性 青霉素：母核無(wú)紫外吸收，側(cè)鏈有 頭孢菌素：母核260nm、側(cè)鏈有 4、-內(nèi)酰胺環(huán)不穩(wěn)定性 干燥純凈的青霉素穩(wěn)定，對(duì)熱也穩(wěn)定 水溶液不穩(wěn)定，最不穩(wěn)定-內(nèi)酰胺環(huán)二、-內(nèi)酯胺類抗生素（1）酸性或堿性水解：pH58水溶液穩(wěn)定，在酸性或堿性下，產(chǎn)生一系列降解產(chǎn)物。二、-內(nèi)酯胺類抗生素（2）與羥胺作用：生成羥肟酸衍生物，與Fe3+生成紅色絡(luò)合物。二、-內(nèi)酯胺類抗生素（二)鑒別 1、-內(nèi)酰胺胺 （1）羥肟酸鐵反應(yīng) （2）多倫或斐林試劑反應(yīng) （3）雙縮脲和茚

4、三酮反應(yīng) 具有-CONH-結(jié)構(gòu)和-氨基酸結(jié)構(gòu)二、-內(nèi)酯胺類抗生素 2、各種鹽的鑒別 （1）鉀、鈉鹽：火焰反應(yīng) （2）普魯卡因青霉素：重氮化-偶合反應(yīng)二、-內(nèi)酯胺類抗生素（三）含量測(cè)定 碘量法 酸堿滴定法 汞量法 吸收光譜法 HPLC法：除磺芐西林鈉微生物法 其余均為本法二、-內(nèi)酯胺類抗生素 HPLC法 .頭孢克洛 ODS柱 磷酸二氫鉀溶液-乙腈（92:8） 檢測(cè)波長(zhǎng):254nm 按頭孢克洛峰計(jì)理論塔板數(shù)1500 頭孢克洛與頭孢克洛-3異構(gòu)體峰 分離度符合要求 外標(biāo)法定量二、-內(nèi)酯胺類抗生素 2.阿莫西林克拉維酸鉀片 ODS柱 磷酸鹽緩沖液-甲醇（95:5） 檢測(cè)波長(zhǎng):220nm 阿莫西林與克拉

5、維酸鉀分離度3.5 外標(biāo)法定量二、-內(nèi)酯胺類抗生素（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)： 1、結(jié)構(gòu)：鏈霉素（鏈霉素A) 鏈霉胍 鏈霉糖 N-甲基-L-葡萄糖胺三、氨基糖苷類抗生素巴龍霉素:三、氨基糖苷類抗生素立體異構(gòu)體：巴龍霉素I（R1=CH2NH2,R2=H） II(R1=H,R2=CH2NH2)藥用為混合物，以I為主慶大霉素三、氨基糖苷類抗生素絳紅塘胺 2-脫氧鏈霉胺 加洛糖胺 三、氨基糖苷類抗生素組分R1R2R3分子式C1CH3CH3HC21H43N5O7C2CH3HHC20H41N5O7C1aHHHC19H39N5O7C2aHHCH3C20H41N5O7奈替米星： （慶大霉素C1a,絳紅糖胺4，5位雙鍵）

6、 三、氨基糖苷類抗生素 2、性質(zhì) （1）堿性 鏈霉素：胍基（pka11.5） 甲氨基（pka7.7） 巴龍霉素：4個(gè)堿性中心 慶大霉素、奈替米星：5個(gè)堿性中心 （2）水溶性 礦酸或有機(jī)酸鹽三、氨基糖苷類抗生素（3）穩(wěn)定性 鏈霉素：最穩(wěn)定pH57.5 pH8易水解 巴龍霉素：水解生成巴龍（霉）胺 （新霉素D)、巴龍二糖胺 慶大霉素、奈替米星：穩(wěn)定 pH212煮沸30min不分解 慶大霉素：2mol/L NaOH回流2h 效價(jià)不變?nèi)被擒疹惪股?（4）紫外吸收 鏈霉素：230nm 無(wú)紫外吸收： 巴龍霉素 慶大霉素 奈替米星三、氨基糖苷類抗生素 （5）旋光性 硫酸鏈霉素：+83.20 硫酸巴龍

7、霉素：+50+550 硫酸奈替米星：+88+960 硫酸慶大霉素：+107+1210三、氨基糖苷類抗生素（二）鑒別 1、麥芽酚反應(yīng)（Maltol Reaction） 鏈霉素/OH-，H2O鏈霉糖 經(jīng)分子重排成麥芽酚三、氨基糖苷類抗生素max 550nm 2、坂口反應(yīng)（Sakaguchi）三、氨基糖苷類抗生素加入尿素，穩(wěn)定，max520nm 3、茚三酮反應(yīng)三、氨基糖苷類抗生素4、N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（Elson-Morgan反應(yīng)）三、氨基糖苷類抗生素 5、Molisch試驗(yàn) 水解、脫水糠醛 -萘酚或蒽酮呈色 與-萘酚：三、氨基糖苷類抗生素與蒽酮： 三、氨基糖苷類抗生素 5、硫酸鹽的鑒別 6、TL

8、C 中國(guó)藥典、BP硫酸慶大霉素采用三、氨基糖苷類抗生素（三）檢查 慶大霉素：C1、C2、C1a的混合物 毒性：C2C1C1a 有效血濃：410g/ml 12g/ml耳中毒，腎損害三、氨基糖苷類抗生素Ch.P2005采用HPLC法 (1).色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 柱填料：ODS 流動(dòng)相：0.2mol/L 三氟醋酸-甲醇（92:8） 流速：0.6ml/min三、氨基糖苷類抗生素 出峰順序：C1a、C2、小諾霉素、C2a、C1 分離度：小諾霉素和C2a峰分離度符合要求 小諾霉素連續(xù)進(jìn)樣RSD%0.99 本品用流動(dòng)相配成2.5mg/ml，進(jìn)樣 用回歸方程計(jì)算各組分含量三、氨基糖苷類抗生素 Cx為各組

9、分的含量 C1 2550%；C1a 1540%；C2+C2a 2050% 檢測(cè)器：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器三、氨基糖苷類抗生素1221(%)CCCCCxXXXXXcaaX(一）化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 四、四環(huán)素類抗生素OHROHNH2OHOOORHRHN(CH3)2RHOH123456789 101112ABCD四、四環(huán)素類抗生素名稱RRRR鹽酸四環(huán)素HOHCH3H鹽酸金霉素ClOHCH3H鹽酸土霉素HOHCH3OH鹽酸多西環(huán)素HHCH3OH鹽酸美他環(huán)素H=CH2OH鹽酸米諾環(huán)素(Ch.P新增)N(CH3)2HHH鹽酸地美環(huán)素(BP)ClOHHH磺基水楊酸甲氯環(huán)素(USP)Cl=CH2OH1、母核上的官能團(tuán)：

10、（1）A環(huán)C4：二甲胺基（-N（CH3）2）（2）A環(huán)C2：酰氨基（-CONH2）（3）D環(huán)：酚羥基（C10）（4）兩個(gè)酮基和烯醇基的共軛雙鍵系統(tǒng)四、四環(huán)素類抗生素 2、兩性化合物 酸性：酚羥基、烯醇型羥基 堿性：二甲胺基 酸或堿性下均能成鹽 采用鹽酸鹽四、四環(huán)素類抗生素 3、結(jié)晶水 四環(huán)素：6個(gè)結(jié)晶水 土霉素：2個(gè)結(jié)晶水 加熱時(shí)，可失去，失去后有吸濕性四、四環(huán)素類抗生素 4、溶解度 pH4.57.2：難溶于水 pH8：易溶于水四、四環(huán)素類抗生素 5、不穩(wěn)定性 對(duì)各種氧化劑都不穩(wěn)定 堿性性更易氧化 干燥品較穩(wěn)定，遇光可使顏色變深四、四環(huán)素類抗生素 6、旋光性 鹽酸土霉素 -1880-2000

11、鹽酸四環(huán)素 -2400-2580 鹽酸多西環(huán)素 -1050-1200四、四環(huán)素類抗生素（二）化學(xué)反應(yīng) 1、差向異構(gòu)化（差向四環(huán)素） pH2.06.0，A環(huán)C4構(gòu)型改變四、四環(huán)素類抗生素 易差向化：四環(huán)素、金霉素 不易差向化：土霉素、多西霉素、美他環(huán)素 影響因素（1）pH2、pH9，不易差向 （2）高價(jià)酸根存在，易差向 （3）陰離子濃度增加，易差向四、四環(huán)素類抗生素 2、酸性下降解（脫水四環(huán)素類） pH2，C環(huán)C6羥基與C5a上氫脫水四、四環(huán)素類抗生素 可脫水：四環(huán)素、金霉素、土霉素不可脫水：多西霉素、美他環(huán)素（C6無(wú)OH） 3、堿性下降解（異四環(huán)素） 堿性下，C環(huán)打開(kāi)，生成內(nèi)酯結(jié)構(gòu)四、四環(huán)素類

12、抗生素多西環(huán)素、美他環(huán)素：不反應(yīng)，R不是OH 4、與金屬離子絡(luò)合 鋯、釷、鈾、鋅、銅、鋁、鎂、鈰、鈷 形成有色絡(luò)合物四、四環(huán)素類抗生素 （三）鑒別 1與濃H2SO4反應(yīng) 四環(huán)素深紫色 金霉素蘭色、變?yōu)殚蠙炀G，加水成金黃 土霉素朱紅色 多西霉素黃色 美他環(huán)素橙紅色四、四環(huán)素類抗生素 2FeCl3反應(yīng) 四環(huán)素紅棕色 金霉素深褐色 土霉素橙褐色 多西霉素褐色四、四環(huán)素類抗生素 3.TLC法 Ch.P(2005)、BP(2005)采用 4.HPLC法 Ch.P(2005)、USP(30)采用四、四環(huán)素類抗生素 (四)雜質(zhì)檢查 1、有關(guān)物質(zhì) 異構(gòu)雜質(zhì)、降解雜質(zhì) 引起惡心、嘔吐、糖尿 蛋白尿及酸中毒 Ch.P、USP、BP均采用HPLC法檢查四、四環(huán)素類抗生素 2、雜質(zhì)吸收度 脫水物、差向脫水物含量越高 吸收度越大 鹽酸四環(huán)素：10mg/ml（0.8%NaOH溶液） 530nm于4cm比色池 自加0.8%NaOH起5min不得過(guò)0.12四、四環(huán)素類抗生素 (五）含