常規(guī)組織病理技術(shù)2012

1、南開大學(xué)醫(yī)學(xué)院 李玉皓常規(guī)組織病理技術(shù)常規(guī)組織病理技術(shù)v組織的取材和固定方法組織的取材和固定方法v組織切片技術(shù)組織切片技術(shù)v蘇木素蘇木素- -伊紅染色伊紅染色第一章第一章 組織的取材和固定方法組織的取材和固定方法 用不同的方法，如手術(shù)、鉗取、針刺抽用不同的方法，如手術(shù)、鉗取、針刺抽吸和刮取，從患者身體病變部位獲取小塊病吸和刮取，從患者身體病變部位獲取小塊病同變組織作病理檢查，以協(xié)助臨床確定疾病同變組織作病理檢查，以協(xié)助臨床確定疾病診斷，由于檢查的組織取自活體，故稱為活診斷，由于檢查的組織取自活體，故稱為活體組織檢查，又簡稱為活檢體組織檢查，又簡稱為活檢( (biopsy)biopsy)。 一、

2、明確活檢的目的1. 為疾病診斷提供重要的線索為疾病診斷提供重要的線索2. 了解病變范圍，估計結(jié)局及預(yù)后了解病變范圍，估計結(jié)局及預(yù)后3. 制定治療方案，驗證治療效果制定治療方案，驗證治療效果二、可供做活檢的標本1. 手術(shù)切除的部分器官和組織，例如胃、乳手術(shù)切除的部分器官和組織，例如胃、乳腺、淋巴結(jié)等切除標本。腺、淋巴結(jié)等切除標本。2. 切取的小塊病變組織，如皮下小結(jié)節(jié)，內(nèi)切取的小塊病變組織，如皮下小結(jié)節(jié)，內(nèi)窺鏡下鉗取的腫塊組織。隨著內(nèi)窺鏡在臨窺鏡下鉗取的腫塊組織。隨著內(nèi)窺鏡在臨床上的廣泛應(yīng)用，鉗取的小塊組織已成為床上的廣泛應(yīng)用，鉗取的小塊組織已成為活檢組織的主要標本。活檢組織的主要標本。二、可供

3、做活檢的標本3. 刮取的破碎組織，如子宮內(nèi)膜、骨刮取的破碎組織，如子宮內(nèi)膜、骨組織等。組織等。4. 粗針或細針穿刺抽吸的組織，如肝、粗針或細針穿刺抽吸的組織，如肝、腎、甲狀腺穿刺組織等。腎、甲狀腺穿刺組織等。三、活檢組織取材注意事項 1. 選擇恰當?shù)娜〔牟课?。力求切取明顯病選擇恰當?shù)娜〔牟课弧Ａη笄腥∶黠@病變的組織，如為腫瘤組織，一定要帶有變的組織，如為腫瘤組織，一定要帶有其周圍的正常組織。不要只選壞死組織，其周圍的正常組織。不要只選壞死組織，而取周圍沒有壞死的病變組織如為潰瘍而取周圍沒有壞死的病變組織如為潰瘍要取潰瘍的周圍及底部組織送檢。要取潰瘍的周圍及底部組織送檢。2. 采取標本時切忌擠壓

4、，取材刀要鋒利，操采取標本時切忌擠壓，取材刀要鋒利，操作要正確，以免組織過度受擠壓，而導(dǎo)致作要正確，以免組織過度受擠壓，而導(dǎo)致細胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)嚴重變形而影響診斷，甚細胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)嚴重變形而影響診斷，甚至造成不必要的重新取材，給病人造成不至造成不必要的重新取材，給病人造成不必要的痛苦，并且延長診斷時間。必要的痛苦，并且延長診斷時間。三、活檢組織取材注意事項 3. 手術(shù)切除的內(nèi)臟器官或較大腫瘤，最好將手術(shù)切除的內(nèi)臟器官或較大腫瘤，最好將標本全部送檢，并保持原病變的完整性，標本全部送檢，并保持原病變的完整性，如要切開，應(yīng)根據(jù)不同器官病變按一定的如要切開，應(yīng)根據(jù)不同器官病變按一定的方法切開。方法切開。

5、三、活檢組織取材注意事項 四、活檢組織的固定 送做病理檢查的標本必須新鮮，不能自送做病理檢查的標本必須新鮮，不能自溶腐敗，離體的標本應(yīng)立即預(yù)以固定。固定溶腐敗，離體的標本應(yīng)立即預(yù)以固定。固定液的量要充足，至少液的量要充足，至少5 5倍于標本體積，以使倍于標本體積，以使固定液全部淹埋組織為宜。放標本的容器大固定液全部淹埋組織為宜。放標本的容器大小要適當，口徑要大，以便于標本保持原樣小要適當，口徑要大，以便于標本保持原樣固定和便于取出。容器要密封，以免固定液固定和便于取出。容器要密封，以免固定液揮發(fā)濃度不足而影響固定效果。揮發(fā)濃度不足而影響固定效果。 第一節(jié) 取材v取材時對送檢組織的要求取材時對送

6、檢組織的要求v取材取材v取材時的注意事項取材時的注意事項v冰凍切片取材冰凍切片取材v不同組織的取材方法不同組織的取材方法取材的注意事項（一）取材的注意事項（一）v 防止人為因素的影響防止人為因素的影響v 標本大小標本大小v 取材時間取材時間v 注意包埋方向注意包埋方向v 邊緣標記邊緣標記v 小標本的處理方法小標本的處理方法取材的注意事項（二）取材的注意事項（二）v 注意特殊情況注意特殊情況v 取材數(shù)量取材數(shù)量v 清除多余成分清除多余成分v 重復(fù)取材重復(fù)取材v 核對核對v 組織存放組織存放v固定的意義固定的意義 v固定時的注意事項固定時的注意事項 v固定液固定液v組織固定后的洗滌組織固定后的洗滌

7、第二節(jié) 固定固定的意義固定的意義v將組織浸入某些化學(xué)試劑，使細胞內(nèi)的物質(zhì)能將組織浸入某些化學(xué)試劑，使細胞內(nèi)的物質(zhì)能盡量保持其生活狀態(tài)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置。盡量保持其生活狀態(tài)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置。v作用：（作用：（1）保持組織的結(jié)構(gòu)和形態(tài)）保持組織的結(jié)構(gòu)和形態(tài) （2）保持細胞內(nèi)特殊的成分）保持細胞內(nèi)特殊的成分 （3）便于區(qū)別不同組織成分）便于區(qū)別不同組織成分 （4）有利于切片）有利于切片 （5）保存抗原及）保存抗原及DNA、RNA固定劑的不良影響固定劑的不良影響v影響常規(guī)染色影響常規(guī)染色v固定造成物質(zhì)損失固定造成物質(zhì)損失v組織皺縮組織皺縮固定的注意事項（一）固定的注意事項（一）v根據(jù)研究目的選擇合適

8、的固定劑根據(jù)研究目的選擇合適的固定劑v固定液的量固定液的量v固定液的穿透性固定液的穿透性v組織塊的大小組織塊的大小固定的注意事項（二）固定的注意事項（二）v固定時間固定時間v固定溫度固定溫度v加熱加熱v特殊固定特殊固定單純固定液單純固定液v甲醛（甲醛（formaldehyde）v中性甲醛液中性甲醛液v丙酮丙酮v酒精酒精混合固定液混合固定液v乙醇乙醇-甲醛液（甲醛液（A-F液）液）vBouin液液vZenker液液vCarnoy液液v4%多聚甲醛多聚甲醛-磷酸緩沖液磷酸緩沖液第二章第二章 組織切片技術(shù)組織切片技術(shù)第一節(jié) 組織的脫水、透明和浸臘v脫水脫水v透明透明v浸臘（浸透）浸臘（浸透）v骨和含

9、鈣組織脫鈣法骨和含鈣組織脫鈣法脫水脫水v借某些溶媒置換組織內(nèi)水分的過程。借某些溶媒置換組織內(nèi)水分的過程。v最常用脫水劑：酒精最常用脫水劑：酒精透明透明v通過某種溶劑的媒介作用，使石蠟通過某種溶劑的媒介作用，使石蠟浸入組織塊。因組織塊中的水分被浸入組織塊。因組織塊中的水分被溶劑所取代，組織塊變得透亮，稱溶劑所取代，組織塊變得透亮，稱之為透明。之為透明。v最常用脫水劑：二甲苯最常用脫水劑：二甲苯浸蠟浸蠟v組織經(jīng)透明后，在溶化的石蠟內(nèi)浸組織經(jīng)透明后，在溶化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱為浸蠟。漬的過程稱為浸蠟。v用于浸蠟的石蠟熔點為用于浸蠟的石蠟熔點為52-56第二節(jié) 組織的包埋和包埋方法v組織塊經(jīng)過浸蠟，用

10、包埋劑包起組織塊經(jīng)過浸蠟，用包埋劑包起的過程稱包埋。的過程稱包埋。v經(jīng)包埋后，可使組織達到一定的經(jīng)包埋后，可使組織達到一定的硬度和韌度，有利于切成薄片。硬度和韌度，有利于切成薄片。包埋方法v石蠟包埋法石蠟包埋法常規(guī)石蠟包埋法常規(guī)石蠟包埋法快速石蠟包埋法快速石蠟包埋法v火棉膠包埋法火棉膠包埋法v石蠟半薄切片包埋法石蠟半薄切片包埋法v樹脂包埋法樹脂包埋法v塑料包埋法塑料包埋法常規(guī)石蠟包埋法v有無特殊包埋面（如分層組織、皮膚、有無特殊包埋面（如分層組織、皮膚、內(nèi)鏡標本等）內(nèi)鏡標本等）v包埋蠟的溫度與組織塊的溫度接近包埋蠟的溫度與組織塊的溫度接近v包埋完畢，蠟塊稍凝后，移入冷臺加速包埋完畢，蠟塊稍凝后

11、，移入冷臺加速凝固凝固第三節(jié) 組織切片法v石蠟切片法石蠟切片法v冰凍切片法冰凍切片法v組織切片機和切片機的維護組織切片機和切片機的維護石蠟切片法v組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊，用切片組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊，用切片機制成切片的過程稱為石蠟切片法。機制成切片的過程稱為石蠟切片法。v組織塊可長期保存。組織塊可長期保存。v最常用，最普遍的方法。最常用，最普遍的方法。切片前準備v高質(zhì)量的蠟塊和鋒利的切片刀高質(zhì)量的蠟塊和鋒利的切片刀v清潔載玻片清潔載玻片v恒溫烤片裝置恒溫烤片裝置v鉛筆、毛筆、鑷子等鉛筆、毛筆、鑷子等切片制作過程v固定蠟塊，調(diào)整蠟塊與刀至合適位置固定蠟塊，調(diào)整蠟塊與刀至合適位置v切片、展

12、片，冰塊的應(yīng)用切片、展片，冰塊的應(yīng)用v輪轉(zhuǎn)式切片機由下至上切，將脆硬難切的輪轉(zhuǎn)式切片機由下至上切，將脆硬難切的部分放在上面部分放在上面v撈片，注意位置，編號撈片，注意位置，編號v恒溫烤片恒溫烤片切片的注意事項v組織的取材與固定組織的取材與固定v組織的脫水、透明和浸蠟組織的脫水、透明和浸蠟v切片切片v切片機和切片刀切片機和切片刀v特殊要求切片的制作特殊要求切片的制作冰凍切片法v應(yīng)用廣泛應(yīng)用廣泛v對臨床手術(shù)病人的術(shù)中快速診斷具有重對臨床手術(shù)病人的術(shù)中快速診斷具有重要意義要意義v科研應(yīng)用科研應(yīng)用恒冷箱切片v溫度的調(diào)節(jié)溫度的調(diào)節(jié)v包埋機包埋機OCT或羧甲基纖維素或羧甲基纖維素v切片切片v吹干或固定吹干

13、或固定載玻片的處理方法v載玻片載玻片v蓋玻片蓋玻片第三章第三章 蘇木素蘇木素- -伊紅染色方法伊紅染色方法蘇木素-伊紅染色（HE）簡介vHE染色是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的細胞和組染色是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的細胞和組織學(xué)最廣泛應(yīng)用的染色方法，在病理織學(xué)最廣泛應(yīng)用的染色方法，在病理學(xué)實驗室中稱為常規(guī)染色方法?？捎脤W(xué)實驗室中稱為常規(guī)染色方法?？捎糜谟^察、描述正常和病變組織的形態(tài)于觀察、描述正常和病變組織的形態(tài)學(xué)，而且學(xué)，而且HE切片可較長時間保存。切片可較長時間保存。HE染色的基本原理v細胞核染色的原理細胞核染色的原理v細胞漿染色的原理細胞漿染色的原理vHE染色中二甲苯、酒精和水洗作用染色中二甲苯、酒精和水洗作用v分

14、化和藍化作用分化和藍化作用細胞核染色原理v細胞核內(nèi)染色質(zhì)主要是細胞核內(nèi)染色質(zhì)主要是DNA，帶負，帶負電，呈酸性，很容易與帶正電荷的電，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，因此細胞核被染成藍色。呈藍色，因此細胞核被染成藍色。細胞漿染色原理v細胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì)，為兩細胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，等電點性化合物，等電點4.7-5.0。pH在胞在胞漿等電點以下，在染液中加入醋酸漿等電點以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正點荷，就能被帶負電荷使胞漿帶正點荷，就能被帶負電荷的染

15、料染色。的染料染色。細胞漿染色原理v伊紅伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解呈帶負電荷的陰離子，在水中離解呈帶負電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷結(jié)合而使細與蛋白質(zhì)的氨基正電荷結(jié)合而使細胞漿染色，與藍色的細胞核形成鮮胞漿染色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。明的對比。二甲苯的作用v脫蠟，使染料易于進入細胞和組織脫蠟，使染料易于進入細胞和組織v透明，以利于光線的透過透明，以利于光線的透過酒精的作用v蘇木染色前，酒精由高濃度向低濃度逐蘇木染色前，酒精由高濃度向低濃度逐漸下降，目的是洗脫二甲苯，使水分逐漸下降，目的是洗脫二甲苯，使水分逐漸進入切片。漸進入切片。v伊紅染色

16、后，酒精由低濃度向高濃度過伊紅染色后，酒精由低濃度向高濃度過渡，目的是脫水，為二甲苯進入細胞創(chuàng)渡，目的是脫水，為二甲苯進入細胞創(chuàng)造條件。造條件。水洗的作用v在脫蠟經(jīng)酒精處理后：使切片中進入水，以利蘇在脫蠟經(jīng)酒精處理后：使切片中進入水，以利蘇木精染液進入細胞核中。木精染液進入細胞核中。v染色之后：洗去未與切片結(jié)合的染液。染色之后：洗去未與切片結(jié)合的染液。v分化后：除去分化液和脫下的染料，中止分化。分化后：除去分化液和脫下的染料，中止分化。v伊紅染色后：洗去未結(jié)合染液，防止大量伊紅進伊紅染色后：洗去未結(jié)合染液，防止大量伊紅進入脫水的酒精中。入脫水的酒精中。分化作用v常用分化液：常用分化液：1%鹽酸

17、酒精鹽酸酒精v脫去在細胞核中結(jié)合過多的染料和細胞漿脫去在細胞核中結(jié)合過多的染料和細胞漿中吸附的染料，保證核漿染色分明。中吸附的染料，保證核漿染色分明。v酸能破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu)，使色素與組酸能破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu)，使色素與組織織 解離，分化不可過度。解離，分化不可過度。藍化作用v常用液：自來水常用液：自來水/稀氨水稀氨水/溫水溫水v用弱堿性水是蘇木精染上的細胞核變用弱堿性水是蘇木精染上的細胞核變?yōu)樗{色。為藍色。人工操作石蠟切片HE染色方法v二甲苯脫蠟，乙醇由高至低，水洗二甲苯脫蠟，乙醇由高至低，水洗v蘇木素蘇木素1-5 min，水洗，水洗v1%鹽酸酒精分化，水洗鹽酸酒精分化，水洗v稀氨水返藍，

18、水洗稀氨水返藍，水洗v伊紅伊紅20 sec-5minv酒精逐級脫水，二甲苯透明，封片酒精逐級脫水，二甲苯透明，封片HE染色結(jié)果v細胞核呈藍色，細胞漿、肌肉、結(jié)細胞核呈藍色，細胞漿、肌肉、結(jié)締組織、紅細胞和嗜伊紅顆粒呈不締組織、紅細胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物也可染色藍色或紫藍色。也可染色藍色或紫藍色。冰凍切片HE染色方法v切片，固定，水洗切片，固定，水洗v下同石蠟切片下同石蠟切片HE染色中的注意事項v脫蠟脫蠟v染色染色v脫水脫水v透明與封片透明與封片Normal thyroid gland with follicles filled with colloid, medium power microscopicNormal myocardium, medium power microscopic Fatty change, liver, micr