第15章 免疫細(xì)胞標(biāo)志與功能檢測技術(shù)

1、第十五章第十五章 免疫細(xì)胞標(biāo)志和免疫細(xì)胞標(biāo)志和功能檢測技術(shù)功能檢測技術(shù)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院免疫教研室醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院免疫教研室齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫掌握：掌握：免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離; ; 淋巴細(xì)胞功能檢測淋巴細(xì)胞功能檢測熟悉：熟悉：免疫細(xì)胞表面標(biāo)志和功能檢測的臨床免疫細(xì)胞表面標(biāo)志和功能檢測的臨床 應(yīng)用應(yīng)用; ;淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群分類；淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群分類；了解：了解：其他免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)；檢測的其他免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)；檢測的 臨床應(yīng)用。臨床應(yīng)用。齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫一、免疫細(xì)胞的分離一、免疫細(xì)胞的分離二、淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類二、淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類三、抗原提呈細(xì)胞的表面標(biāo)志三、抗原提

2、呈細(xì)胞的表面標(biāo)志四、淋巴細(xì)胞的功能檢測四、淋巴細(xì)胞的功能檢測五、其他免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)五、其他免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)六、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志和功能檢測的臨床六、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志和功能檢測的臨床應(yīng)用應(yīng)用齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分離一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 二、淋巴細(xì)胞的分離二、淋巴細(xì)胞的分離 三、三、T T、B B細(xì)胞和細(xì)胞和T T細(xì)胞亞群的分細(xì)胞亞群的分離離四、不同分離方法的評價(jià)四、不同分離方法的評價(jià) 第一節(jié)第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離掌握掌握齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞( (perpheral blood mononuclear ce

3、lls, PBMC) )：包括淋巴：包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。細(xì)胞和單核細(xì)胞。一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分離一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分離掌握掌握齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫1.1.不同細(xì)胞不同細(xì)胞密度密度不同不同2.2.不同細(xì)胞表面生物學(xué)不同細(xì)胞表面生物學(xué)特性特性不同不同3.3.不同細(xì)胞表面不同細(xì)胞表面分化抗原分化抗原不同不同細(xì)胞分離基本原理細(xì)胞分離基本原理了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度為紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度為1.092-1.092-1.093單個(gè)核細(xì)胞密度為單個(gè)核細(xì)胞密度為1.075-1.0901.075-1.090 選擇比重為選擇比重為1.075-1.090 1.075-1.090 介質(zhì)介質(zhì)分離分離

4、PBMCPBMC不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞密度不同熟悉熟悉齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫對分離介質(zhì)的要求對分離介質(zhì)的要求1.1.對細(xì)胞無毒對細(xì)胞無毒2.2.基本等滲基本等滲3.3.不溶于血漿等分離物質(zhì)不溶于血漿等分離物質(zhì)4.4.有要求的比重有要求的比重2 2份份6%6%聚蔗糖聚蔗糖蒸餾水溶液蒸餾水溶液+1+1份份34%34%泛影葡胺泛影葡胺比重為比重為1.0771.0770.0020.002熟悉熟悉齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫聚蔗糖泛影葡胺聚蔗糖泛影葡胺-FicollFicoll分離液分離液原理：原理：單次單次差速密度梯度離心差速密度梯度離心的分離法的分離法組成：組成：2 2份份6%6%聚蔗糖蒸餾水溶液聚蔗糖蒸餾水溶

5、液+1+1份份34%34%泛影葡胺生理鹽水溶液。泛影葡胺生理鹽水溶液。比重：比重：1.0771.0770.0010.001( (最佳最佳) ) 掌握掌握齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 1.0771.0770.0010.001的分層液可將細(xì)胞分離的分層液可將細(xì)胞分離紅細(xì)胞：紅細(xì)胞：1.0931.093粒細(xì)胞：粒細(xì)胞：1.0921.092單個(gè)核細(xì)胞單個(gè)核細(xì)胞1.0761.0761.0901.090 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 密度梯度離心密度梯度離心(Ficoll)(Ficoll)離心離心細(xì)胞純度細(xì)胞純度95%95%；細(xì)胞收率；細(xì)胞收率80%80%；淋巴細(xì)胞；淋巴細(xì)胞90%-95% 90%-95%

6、齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫1.1.貼壁粘附法貼壁粘附法 2.2.吸附柱過濾法吸附柱過濾法: : 將將PBMCPBMC加入葡聚糖加入葡聚糖凝膠凝膠SephadexG-10SephadexG-10中，從柱上洗脫下中，從柱上洗脫下來的主要是來的主要是淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞。3.Percoll3.Percoll分離液法：分離液法：經(jīng)聚乙烯吡咯烷經(jīng)聚乙烯吡咯烷酮（酮（PVP)PVP)處理的硅膠顆粒。處理的硅膠顆粒。目的目的-去除單核細(xì)胞去除單核細(xì)胞二二 、淋巴細(xì)胞分離、淋巴細(xì)胞分離掌握掌握齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 死細(xì)胞、血小板死細(xì)胞、血小板 單核細(xì)胞單核細(xì)胞 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 粒細(xì)胞粒細(xì)胞 紅細(xì)胞紅細(xì)胞 Percoll

7、Percoll：經(jīng)聚乙烯吡咯烷酮（經(jīng)聚乙烯吡咯烷酮（PVP)PVP)處理的硅膠顆粒處理的硅膠顆粒。齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫( (一一) )磁性微球分離法磁性微球分離法 ( (二二) )熒光激活細(xì)胞分離儀分離法熒光激活細(xì)胞分離儀分離法 三、三、T T、B B細(xì)胞和細(xì)胞和T T細(xì)胞亞群細(xì)胞亞群的分離的分離熟悉熟悉磁珠磁珠高分子高分子材料材料齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫磁珠大小可以選擇磁珠大小可以選擇齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫磁性微球分離法細(xì)胞分選過程磁性微球分離法細(xì)胞分選過程齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫大小免疫磁珠分離細(xì)胞的特點(diǎn)比較大小免疫磁珠分離細(xì)胞的特點(diǎn)比較 比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目大磁珠大磁珠小磁

8、珠小磁珠對細(xì)胞的影響對細(xì)胞造成機(jī)械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分離后培養(yǎng)。對細(xì)胞溫和，不影響分離細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)。對流式細(xì)胞儀的影響對流式細(xì)胞儀的影響阻塞流式細(xì)胞儀的噴嘴，影響散射光。可直接上流式細(xì)胞儀檢測，不影響散射光。分離條件要求技術(shù)簡單，分離可在試管中完成。需要很強(qiáng)的磁場來分離細(xì)胞。 收率得率高。得率高。得率不高。得率不高。純度純度低。純度低。純度高。純度高。分離時(shí)間分離時(shí)間分離速度快。分離速度快。分離速度慢。分離速度慢。分離成本分離成本成本低成本低。需要很強(qiáng)的磁場來分離，需要很強(qiáng)的磁場來分離，需要一次性分離柱，不需要一次性分離柱，不能在普通試管能在普通試管齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫免疫磁珠細(xì)胞

9、分選裝置免疫磁珠細(xì)胞分選裝置齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫全自動(dòng)細(xì)胞分選系統(tǒng)全自動(dòng)細(xì)胞分選系統(tǒng) 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 熒光激活細(xì)胞分離儀分離法熒光激活細(xì)胞分離儀分離法 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫流式細(xì)胞分析儀流式細(xì)胞分析儀齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫四、不同細(xì)胞分離方法的綜合評價(jià)四、不同細(xì)胞分離方法的綜合評價(jià)早期：早期：根據(jù)不同免疫細(xì)胞的物理屬性和根據(jù)不同免疫細(xì)胞的物理屬性和生物學(xué)屬性進(jìn)行分離生物學(xué)屬性進(jìn)行分離近期：近期：利用細(xì)胞表面標(biāo)志進(jìn)行分離利用細(xì)胞表面標(biāo)志進(jìn)行分離了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫1.1.分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，單次差速密度梯度離分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，單次差速密度梯度離 心法常心法常用分層液是（用分層液是（ ）A

10、 A 明膠明膠 B B 右旋糖酐右旋糖酐 C FicollC Ficoll分層液分層液 D PercollD Percoll分層液分層液 E E 葡聚糖葡聚糖2.Ficoll2.Ficoll液單次密度梯度離心后外周血細(xì)胞分布由上至下液單次密度梯度離心后外周血細(xì)胞分布由上至下依次為（依次為（ ）A A 單個(gè)核細(xì)胞、血小板和血漿、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞單個(gè)核細(xì)胞、血小板和血漿、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞B B 血小板和血漿、粒細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞、紅細(xì)胞血小板和血漿、粒細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞、紅細(xì)胞C C 血小板和血漿、單個(gè)核細(xì)胞、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞血小板和血漿、單個(gè)核細(xì)胞、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞D D 血小板和血漿、單個(gè)核細(xì)胞、紅細(xì)胞、

11、粒細(xì)胞血小板和血漿、單個(gè)核細(xì)胞、紅細(xì)胞、粒細(xì)胞E E 血小板和血漿、紅細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞、粒細(xì)胞血小板和血漿、紅細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞、粒細(xì)胞用玻璃纖用玻璃纖3.維或葡聚糖凝膠維或葡聚糖凝膠Sephadex-G10柱分離細(xì)胞時(shí)，從柱上柱分離細(xì)胞時(shí)，從柱上洗脫下的細(xì)胞主要是洗脫下的細(xì)胞主要是( )A粒細(xì)胞粒細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C單核細(xì)胞單核細(xì)胞 DT細(xì)細(xì)胞胞 EB細(xì)胞細(xì)胞 CCB齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫4.4.采用采用FicollFicoll密度梯度分離法分離得到的細(xì)胞主密度梯度分離法分離得到的細(xì)胞主要為（要為（ ）A A 單核細(xì)胞和粒細(xì)胞單核細(xì)胞和粒細(xì)胞 B B 單核細(xì)胞單核細(xì)胞C C 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)

12、胞 D D 淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞E E 淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞 5.Percoll分離液的主要成分是分離液的主要成分是( )A聚蔗糖聚蔗糖 B泛影葡胺泛影葡胺 C聚乙二醇聚乙二醇D聚乙烯吡咯烷酮聚乙烯吡咯烷酮 E經(jīng)聚乙烯吡咯烷酮處經(jīng)聚乙烯吡咯烷酮處理的硅膠顆粒理的硅膠顆粒6.分離人外周血淋巴細(xì)胞分層液的最佳密度為分離人外周血淋巴細(xì)胞分層液的最佳密度為( )A.1.030 B.1.035 C.1.092 D.1.020 E.1.077 7.Ficoll淋巴細(xì)胞分離液的主要成分是淋巴細(xì)胞分離液的主要成分是( ) A聚蔗糖聚蔗糖 B泛影葡胺泛影葡胺 C聚乙二醇聚乙二醇D聚蔗

13、糖聚蔗糖+泛影葡胺泛影葡胺 E聚蔗糖聚蔗糖+聚乙二醇聚乙二醇DEED齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志及淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類亞群分類齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫細(xì)胞表面分化抗原細(xì)胞表面分化抗原(Cluster of differentiation CD)CD1a-CD350CD1a-CD350齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫( (一一)CD3)CD3+ +CD4CD4+ +CD8CD8- -輔助性輔助性T T細(xì)胞細(xì)胞 (Th)(Th) CD3 CD3+ +CD4CD4+ +CD30CD30- - Th1 Th1 CD3 CD3+ +CD4CD4+ +CD30CD30+ + Th2Th2( (二二)CD3+

14、CD4-CD8+)CD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性細(xì)胞毒性T T細(xì)胞細(xì)胞(CTL)(CTL)( (三三) )調(diào)節(jié)性調(diào)節(jié)性T T細(xì)胞細(xì)胞 CD4CD4+ +CD25CD25+ +Foxp3Foxp3+ + Tr1IL-10 Tr1IL-10 Th3TFG- Th3TFG-一、一、T T細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群熟悉熟悉CD4CD4+ + Th Th細(xì)胞亞群分化的調(diào)節(jié)作用細(xì)胞亞群分化的調(diào)節(jié)作用齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫CDCD抗原抗原 CD2CD2CD3CD3CD4 CD4 CD8 CD8 CD25CD25CD28CD28CD40LCD40L特異性特異性 全部全部T T細(xì)胞和部分細(xì)胞和部分NKN

15、K細(xì)胞細(xì)胞( (E E受體受體) ) 成熟成熟T T細(xì)胞細(xì)胞 ( (特征性標(biāo)志特征性標(biāo)志) )輔助性輔助性T T細(xì)胞細(xì)胞 ( (HIVHIV受體受體) )細(xì)胞毒性細(xì)胞毒性T T細(xì)胞細(xì)胞活化活化T T細(xì)胞細(xì)胞( (IL-2RIL-2R) )T T細(xì)胞細(xì)胞活化活化T T細(xì)胞細(xì)胞 T T細(xì)胞表面主要細(xì)胞表面主要CDCD抗原及其特性抗原及其特性齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫mIg(鑒定鑒定B細(xì)胞的指標(biāo)細(xì)胞的指標(biāo))FcFc受體受體補(bǔ)體受體補(bǔ)體受體EBEB病毒受體病毒受體CDCD分子分子: :CD19CD19小鼠紅細(xì)胞受體小鼠紅細(xì)胞受體二、二、B B細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志熟悉熟悉分類分類: :B1(CD19+CD5

16、+)B2(CD19+CD5-) 性性 質(zhì)質(zhì)B - 1B - 2產(chǎn)產(chǎn) 生生 時(shí)時(shí) 間間更更 新新 方方 式式自自 發(fā)發(fā) 性性Ig產(chǎn)產(chǎn) 生生特特 異異 性性分分 泌泌 的的Ig類類 別別體體 細(xì)細(xì) 胞胞 突突 變變 頻頻 率率對對T I抗抗 原原 的的 應(yīng)應(yīng) 答答對對T D抗抗 原原 的的 應(yīng)應(yīng) 答答胎胎 兒兒 期期自自 我我 更更 新新高高低低Ig M為為 主主低低/無無是是可可 能能出出 生生 后后骨骨 髓髓 產(chǎn)產(chǎn) 生生低低高高Ig G為為 主主高高可可 能能是是 性性 質(zhì)質(zhì)B - 1B - 2產(chǎn)產(chǎn) 生生 時(shí)時(shí) 間間更更 新新 方方 式式自自 發(fā)發(fā) 性性Ig產(chǎn)產(chǎn) 生生特特 異異 性性分分 泌泌

17、 的的Ig類類 別別體體 細(xì)細(xì) 胞胞 突突 變變 頻頻 率率對對T I抗抗 原原 的的 應(yīng)應(yīng) 答答對對T D抗抗 原原 的的 應(yīng)應(yīng) 答答胎胎 兒兒 期期自自 我我 更更 新新高高低低I g M為為 主主低低/無無是是可可 能能出出 生生 后后骨骨 髓髓 產(chǎn)產(chǎn) 生生低低高高I g G為為 主主高高可可 能能是是 性性 質(zhì)質(zhì)B -1B -2產(chǎn)產(chǎn) 生生 時(shí)時(shí) 間間更更 新新 方方 式式自自 發(fā)發(fā) 性性Ig產(chǎn)產(chǎn) 生生特特 異異 性性分分 泌泌 的的Ig類類 別別體體 細(xì)細(xì) 胞胞 突突 變變 頻頻 率率對對T I抗抗 原原 的的 應(yīng)應(yīng) 答答對對T D抗抗 原原 的的 應(yīng)應(yīng) 答答胎胎 兒兒 期期自自 我我

18、 更更 新新高高低低Ig M為為 主主低低/無無是是可可 能能出出 生生 后后骨骨 髓髓 產(chǎn)產(chǎn) 生生低低高高Ig G為為 主主高高可可 能能是是B-1細(xì)胞和B-2細(xì)胞的異同齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫CDCD抗原抗原 CD21CD21CD35CD35CD40CD40CD80/86CD80/86CD19/CD5CD19/CD5 特異性特異性 EBEB病毒受體病毒受體 活化活化B B細(xì)胞細(xì)胞 與與CD40LCD40L結(jié)合活化結(jié)合活化B B細(xì)胞細(xì)胞 與與T T細(xì)胞細(xì)胞CD28CD28結(jié)合，活化結(jié)合，活化T T細(xì)胞細(xì)胞 B1B1雙陽；雙陽；B2B2僅為僅為CD19+CD19+ B B細(xì)胞表面主要細(xì)胞表面主要CD

19、CD抗原及其特性抗原及其特性齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫CD3CD3- -CD56CD56+ +CD16CD16+ +三、三、NKNK細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志（nature killer cell,NK)熟悉熟悉復(fù)復(fù) 習(xí)習(xí)1.對細(xì)胞液分離的要求？2.從PBMC中得到淋巴細(xì)胞的方法？3.成熟T細(xì)胞表面主要標(biāo)志？4.B細(xì)胞根據(jù)什么主要標(biāo)志分為何種亞群？齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫抗原提呈類細(xì)胞表面標(biāo)志抗原提呈類細(xì)胞表面標(biāo)志第三節(jié)第三節(jié) 抗原提呈細(xì)胞的表面標(biāo)志抗原提呈細(xì)胞的表面標(biāo)志CD1a,CD11c,CD83CD1a,CD11c,CD83齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫一、單核一、單核- -吞噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬細(xì)胞系統(tǒng)組織部位組織部位

20、 細(xì)胞名稱細(xì)胞名稱 骨髓骨髓 干細(xì)胞干細(xì)胞單核母細(xì)胞單核母細(xì)胞前單核細(xì)胞前單核細(xì)胞 骨髓和血液骨髓和血液 單核細(xì)胞單核細(xì)胞 各種組織各種組織 組織細(xì)胞（結(jié)締組織）組織細(xì)胞（結(jié)締組織）, ,枯否細(xì)胞（肝）枯否細(xì)胞（肝） （巨噬細(xì)胞）（巨噬細(xì)胞） 破骨細(xì)胞（骨）、小膠質(zhì)細(xì)胞（神經(jīng)破骨細(xì)胞（骨）、小膠質(zhì)細(xì)胞（神經(jīng) 組織）、組織）、表面標(biāo)志表面標(biāo)志: :CD14CD14熟悉熟悉齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫二、樹突狀細(xì)胞二、樹突狀細(xì)胞（dendritic cell)抗原提呈能力最強(qiáng)DC的共同特征包括：形態(tài)上呈樹突狀，胞質(zhì)內(nèi)存在特異性形態(tài)上呈樹突狀，胞質(zhì)內(nèi)存在特異性BirbeckBirbeck顆粒顆粒狀結(jié)構(gòu)狀結(jié)構(gòu)表

21、達(dá)表達(dá)CD1aCD1a、高水平、高水平MHC-MHC-類抗原和多種輔助分子類抗原和多種輔助分子吞噬功能較低吞噬功能較低可有效誘導(dǎo)巢居的靜息性幼稚可有效誘導(dǎo)巢居的靜息性幼稚T T細(xì)胞發(fā)生增殖細(xì)胞發(fā)生增殖熟悉熟悉齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫1.1.用抗人用抗人CD3CD3單克隆抗體檢測單克隆抗體檢測T T淋巴細(xì)胞，其結(jié)果淋巴細(xì)胞，其結(jié)果代表（代表（ ）A TA T淋巴細(xì)胞總數(shù)淋巴細(xì)胞總數(shù) B ThB Th細(xì)胞數(shù)細(xì)胞數(shù) C TsC Ts細(xì)胞數(shù)細(xì)胞數(shù)D CD4TD CD4T細(xì)胞數(shù)細(xì)胞數(shù) E CD8TE CD8T細(xì)胞數(shù)細(xì)胞數(shù)2.2.下列指標(biāo)可以評價(jià)下列指標(biāo)可以評價(jià)AIDSAIDS病人的細(xì)胞免疫功能的病人的細(xì)胞免疫

22、功能的是（是（ ）A CD2/CD3A CD2/CD3細(xì)胞比值細(xì)胞比值 B CD3/CD4B CD3/CD4細(xì)胞比值細(xì)胞比值C CD3/CD8C CD3/CD8細(xì)胞比值細(xì)胞比值 D CD4/CD8D CD4/CD8細(xì)胞比值細(xì)胞比值E CD2/CD4E CD2/CD4細(xì)胞比值細(xì)胞比值3.能與能與SRBC結(jié)合形成結(jié)合形成E花環(huán)的細(xì)胞主要是花環(huán)的細(xì)胞主要是( )AT細(xì)胞細(xì)胞 BB細(xì)胞細(xì)胞 C單核細(xì)胞單核細(xì)胞 D粒細(xì)胞粒細(xì)胞 E血小板血小板 ADA齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫4. B4. B細(xì)胞重要表面標(biāo)志不包括（細(xì)胞重要表面標(biāo)志不包括（ ）A A 膜免疫球蛋白（膜免疫球蛋白（SmIgSmIg） B EBB E

23、B病毒受體病毒受體 C EC E受體受體 D D 補(bǔ)體受體補(bǔ)體受體D D 小鼠紅細(xì)胞受體小鼠紅細(xì)胞受體5.5. NK細(xì)胞特有的表面抗原是細(xì)胞特有的表面抗原是( )A.CD2 B.CD16 C.無特異的表面抗原無特異的表面抗原 D.CD23 E.CD56 6.單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞的表面標(biāo)志單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞的表面標(biāo)志( ) ACD2 BCD16 CCD14 DCD16 ECD197.外周成熟的休止外周成熟的休止B細(xì)胞分如下亞群細(xì)胞分如下亞群( )A.CD4+細(xì)胞細(xì)胞 B.CD4-細(xì)胞細(xì)胞 C.CD8+細(xì)胞細(xì)胞 D. CD8-細(xì)胞細(xì)胞 E.B1細(xì)胞和細(xì)胞和B2細(xì)胞細(xì)胞CCCE齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫第

24、四節(jié)第四節(jié) 淋巴細(xì)胞功能檢測淋巴細(xì)胞功能檢測T T細(xì)胞（負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫功能）細(xì)胞（負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫功能）B B細(xì)胞（執(zhí)行體液免疫功能）細(xì)胞（執(zhí)行體液免疫功能）NKNK細(xì)胞（非特異性免疫作用）細(xì)胞（非特異性免疫作用） 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫一、一、T T細(xì)胞功能檢測細(xì)胞功能檢測( (一一)T)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)細(xì)胞增殖試驗(yàn)( (二二) )抗原特異性抗原特異性T T細(xì)胞增值試驗(yàn)細(xì)胞增值試驗(yàn)( (三三)MHC-)MHC-肽四聚體技術(shù)肽四聚體技術(shù)( (四四)T)T細(xì)胞分泌功能測定細(xì)胞分泌功能測定( (五五)T)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)( (六六) )體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫1. 1. 原

25、理原理淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞胞DNADNA合成合成分化分化母細(xì)胞母細(xì)胞刺激物刺激物細(xì)胞變大細(xì)胞變大細(xì)胞漿擴(kuò)大細(xì)胞漿擴(kuò)大空泡空泡核仁明顯核仁明顯核染色質(zhì)疏松核染色質(zhì)疏松（一）（一）T T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) -T-T細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)掌握掌握齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫T T細(xì)胞細(xì)胞外來物質(zhì)外來物質(zhì)細(xì)胞內(nèi)大分子物質(zhì)細(xì)胞內(nèi)大分子物質(zhì)的合成增加的合成增加T T細(xì)胞形態(tài)變化細(xì)胞形態(tài)變化絲裂原：非抗原性刺激物絲裂原：非抗原性刺激物 PHAPHA、ConAConA、PWMPWM抗原性刺激物：抗原性刺激物：PPD(purified protein derivative)同位素法同位素法形態(tài)法形態(tài)法齊齊哈爾醫(yī)

26、學(xué)院免疫標(biāo)本：標(biāo)本：外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞37 72h37 72h+ +取培養(yǎng)細(xì)胞涂片染色鏡檢取培養(yǎng)細(xì)胞涂片染色鏡檢觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變PHAPHA無無PHAPHA刺激物：刺激物：常用常用PHAPHA（1 1）形態(tài)學(xué)檢查法）形態(tài)學(xué)檢查法齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫淋巴細(xì)胞標(biāo)志及功能檢測 龔道科 2002.4齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫%100胞數(shù)轉(zhuǎn)化和未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)轉(zhuǎn)化率正常轉(zhuǎn)化率正常轉(zhuǎn)化率:60%-80%;:60%-80%; 小于小于50%50%為降低為降低齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：形態(tài)學(xué)方法形態(tài)學(xué)方法簡便易行簡便易行，適，適 于

27、基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。于基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：判斷結(jié)果易受主觀因素影判斷結(jié)果易受主觀因素影 響，響，重復(fù)性和準(zhǔn)確性差重復(fù)性和準(zhǔn)確性差。 方法學(xué)評價(jià)：齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞37 56h37 56h +收集培養(yǎng)細(xì)胞收集培養(yǎng)細(xì)胞液體閃爍器計(jì)數(shù)液體閃爍器計(jì)數(shù)cpmcpm加入加入3 3H-TdRH-TdRPHA無無PHA37 16h（2 2）3 3H-TdRH-TdR摻入法摻入法齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：3H-TdR3H-TdR摻入法摻入法敏感性高敏感性高，客觀，客觀 強(qiáng)，重復(fù)性好。強(qiáng)，重復(fù)性好。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：但需一定設(shè)備條件，同時(shí)還存但需一定設(shè)備條件，同時(shí)還存 在放射性在放

28、射性核素污染核素污染問題。問題。SI=刺激指數(shù)刺激指數(shù)PHA刺激管刺激管cpm均值均值 對照管對照管cpm均值均值齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫(3)MTT (3)MTT 比色法比色法 MTTMTT（噻唑鹽）在活細(xì)胞內(nèi)被線粒體琥珀（噻唑鹽）在活細(xì)胞內(nèi)被線粒體琥珀酸脫氫酶還原成酸脫氫酶還原成藍(lán)黑色藍(lán)黑色( (甲臢）甲臢）物質(zhì)，與物質(zhì)，與細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖呈正相關(guān)呈正相關(guān)。均值A(chǔ)對照孔均值A(chǔ)試驗(yàn)孔570nm570mSI 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫方法學(xué)評價(jià)：方法學(xué)評價(jià)：優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，無放射性污染操作簡便，無放射性污染缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：敏感性敏感性不及不及放射性核素法放射性核素法 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 感染性疾病，感染性

29、疾病，T T細(xì)胞會(huì)形成對病原微生物細(xì)胞會(huì)形成對病原微生物的免疫記憶，在體外分離到的免疫記憶，在體外分離到T T細(xì)胞后，培養(yǎng)增細(xì)胞后，培養(yǎng)增殖殖T T細(xì)胞的同時(shí)加入相應(yīng)病原的特異抗原進(jìn)行細(xì)胞的同時(shí)加入相應(yīng)病原的特異抗原進(jìn)行刺激，激活該細(xì)胞的記憶，有記憶的細(xì)胞會(huì)刺激，激活該細(xì)胞的記憶，有記憶的細(xì)胞會(huì)分泌分泌- -干擾素，通過檢測干擾素，通過檢測- -干擾素的量可以干擾素的量可以反映反映T T細(xì)胞情況。細(xì)胞情況。（二）抗原特異性（二）抗原特異性T T細(xì)胞增值試驗(yàn)細(xì)胞增值試驗(yàn)了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 通過通過TCRTCR與與MHC-MHC-肽的特異性相互肽的特異性相互作用，來檢測抗原特異的作用，來檢

30、測抗原特異的T T細(xì)胞，了細(xì)胞，了解機(jī)體的免疫狀況。解機(jī)體的免疫狀況。（三）（三）MHC-MHC-肽四聚體技術(shù)肽四聚體技術(shù)了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及分子生物免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)分別檢測細(xì)胞因子含量、生學(xué)技術(shù)分別檢測細(xì)胞因子含量、生物學(xué)活性或基因表達(dá)水平。物學(xué)活性或基因表達(dá)水平。（四）（四）T T細(xì)胞分泌功能測定細(xì)胞分泌功能測定了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫1.1.原理原理靶細(xì)胞抗原靶細(xì)胞抗原T T細(xì)胞細(xì)胞 觀察殺傷活力觀察殺傷活力致敏致敏CTLCTL靶細(xì)胞靶細(xì)胞（五）（五）T T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)熟悉熟悉齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫形態(tài)學(xué)方法：形態(tài)學(xué)

31、方法：淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞+ +腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞 計(jì)數(shù)殘留腫計(jì)數(shù)殘留腫瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞同位素法：同位素法：淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（CTLCTL）+ +含含5151Cr Cr 的腫瘤細(xì)的腫瘤細(xì)胞胞 腫瘤細(xì)胞破壞腫瘤細(xì)胞破壞 5151Cr Cr 釋放釋放 計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)儀測定儀測定5151CrCr放射活性放射活性意義：意義： 判斷腫瘤患者判斷腫瘤患者CTLCTL殺傷腫瘤細(xì)胞的能力殺傷腫瘤細(xì)胞的能力 2.2.方法方法齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫( (一一) )特異性抗原皮膚試驗(yàn)特異性抗原皮膚試驗(yàn)(OT)(OT)( (二二)PHA)PHA皮膚試驗(yàn)皮膚試驗(yàn) ( (六六) ) 體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫溶血空斑試驗(yàn)溶

32、血空斑試驗(yàn)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)二、二、B B細(xì)胞功能檢測細(xì)胞功能檢測了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫SRBC取出脾細(xì)胞，取出脾細(xì)胞， 加入加入SRBCSRBC及補(bǔ)體及補(bǔ)體4天天37 0.7%37 0.7%瓊脂溶液瓊脂溶液3737 溶血溶血溶血空斑試驗(yàn)溶血空斑試驗(yàn)1.1.原理原理齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫一個(gè)溶血空斑表示一個(gè)抗體形成細(xì)胞。一個(gè)溶血空斑表示一個(gè)抗體形成細(xì)胞。溶血空斑的大小表示抗體形成的量。溶血空斑的大小表示抗體形成的量。齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫測定測定藥物藥物或或手術(shù)手術(shù)對體液免疫功能的影響對體液免疫功能的影響評價(jià)評價(jià)免疫治療免疫治療或或免疫重建免疫重建后機(jī)體體液免后機(jī)體體液免疫狀態(tài)疫狀態(tài)

33、 臨床應(yīng)用與評價(jià)臨床應(yīng)用與評價(jià)齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫染色計(jì)數(shù)染色計(jì)數(shù)離心取上清離心取上清測測LDHLDH形態(tài)學(xué)法形態(tài)學(xué)法酶釋放法酶釋放法放射性核放射性核 素釋放法素釋放法溶溶解解靶靶胞胞細(xì)細(xì)常用靶細(xì)胞常用靶細(xì)胞: :人人K562K562細(xì)胞株細(xì)胞株 鼠鼠YAC-1YAC-1 三、三、NKNK細(xì)胞活性測定細(xì)胞活性測定熟悉熟悉 測放射活性測放射活性齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫方法及原理：方法及原理：靶細(xì)胞靶細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞 靶細(xì)胞死亡靶細(xì)胞死亡可被臺(tái)可被臺(tái) 盼蘭染色盼蘭染色形態(tài)法形態(tài)法釋放胞內(nèi)酶釋放胞內(nèi)酶酶釋法酶釋法乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶 堿性磷酸酶堿性磷酸酶簡便易于操作簡便易于操作 受主觀因素響大受主觀因素

34、響大 無法計(jì)數(shù)輕微損傷的細(xì)胞無法計(jì)數(shù)輕微損傷的細(xì)胞經(jīng)濟(jì)、快速、簡便經(jīng)濟(jì)、快速、簡便敏感度低敏感度低 本底較高本底較高 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 一、中性粒細(xì)胞功能檢測技術(shù)一、中性粒細(xì)胞功能檢測技術(shù) 二、巨噬細(xì)胞功能檢測技術(shù)二、巨噬細(xì)胞功能檢測技術(shù)第五節(jié)第五節(jié) 其他免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)其他免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 趨化趨化 吞噬吞噬 胞內(nèi)殺滅作用胞內(nèi)殺滅作用 吞噬細(xì)胞的功能吞噬細(xì)胞的功能熟悉熟悉齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 趨化功能檢測趨化功能檢測 吞噬和殺菌功能測定吞噬和殺菌功能測定一、中性粒細(xì)胞功能的檢測一、中性粒細(xì)胞功能的檢測了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫1.原理中性粒細(xì)胞趨化因子：中性

35、粒細(xì)胞趨化因子：微生物細(xì)胞成分及其代謝產(chǎn)物微生物細(xì)胞成分及其代謝產(chǎn)物補(bǔ)體活性片段補(bǔ)體活性片段C5aC5a、C3aC3a( (一一) ) 細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能趨化功能檢測趨化功能檢測齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫瓊脂糖平板法瓊脂糖平板法 濾膜滲透法（濾膜滲透法（Boyden Boyden 小室法）小室法）2.2.方法學(xué)方法學(xué)齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 1 1顯微鏡檢查法顯微鏡檢查法100(%)計(jì)數(shù)的白細(xì)胞數(shù)吞噬細(xì)菌的白細(xì)胞數(shù)吞噬率100(%)計(jì)數(shù)的白細(xì)胞數(shù)數(shù)胞內(nèi)含著染菌體的細(xì)胞殺菌率( (二二) )吞噬和殺菌功能測定吞噬和殺菌功能測定齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫100min0min9060301(%)）菌落數(shù)菌落數(shù)或、作

36、用（殺菌率3 3NBTNBT還原試驗(yàn)還原試驗(yàn)6-6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖 戊糖戊糖 NADNAD- -+H+H+ + NADH NADHNBTNBT（硝基藍(lán)四氮唑）（硝基藍(lán)四氮唑） 甲臜顆粒甲臜顆粒2. 2. 溶菌法溶菌法6-6-磷酸葡萄糖脫氫酶磷酸葡萄糖脫氫酶齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫( (一一) )炭粒廓清試驗(yàn)炭粒廓清試驗(yàn)( (二二) )吞噬功能檢測吞噬功能檢測( (三三) )巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測定巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測定( (四四) )細(xì)胞毒作用測定細(xì)胞毒作用測定( (五五) )巨噬細(xì)胞促凝血活性測定巨噬細(xì)胞促凝血活性測定二、巨噬細(xì)胞功能檢測二、巨噬細(xì)胞功能檢測了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫反映機(jī)體反

37、映機(jī)體免疫功能免疫功能狀態(tài)。狀態(tài)。腫瘤、免疫缺陷病等疾病的腫瘤、免疫缺陷病等疾病的診斷和疾診斷和疾 病預(yù)后監(jiān)測病預(yù)后監(jiān)測。組織組織器官移植器官移植后對受者細(xì)胞免疫學(xué)功后對受者細(xì)胞免疫學(xué)功 能監(jiān)測則有利于排斥反應(yīng)早期發(fā)現(xiàn)。能監(jiān)測則有利于排斥反應(yīng)早期發(fā)現(xiàn)。第六節(jié)第六節(jié) 免疫細(xì)胞表面標(biāo)志和功能檢測免疫細(xì)胞表面標(biāo)志和功能檢測的臨床應(yīng)用的臨床應(yīng)用齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫1.1.T T細(xì)胞增殖試驗(yàn)的原理、刺激物及方細(xì)胞增殖試驗(yàn)的原理、刺激物及方法？法？2.2.將細(xì)胞分離的方法有哪些？將細(xì)胞分離的方法有哪些？思考題思考題齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫1.1.評價(jià)人評價(jià)人T T細(xì)胞功能的試驗(yàn)細(xì)胞功能的試驗(yàn)（ ）A.A.血清血清

38、IgIg的測定的測定 B.B.溶血空斑溶血空斑C.C.膜表面免疫球蛋白測定膜表面免疫球蛋白測定D.D.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化 E.EE.E花環(huán)試驗(yàn)花環(huán)試驗(yàn)2.2.吞噬細(xì)胞吞噬的三個(gè)階段是（吞噬細(xì)胞吞噬的三個(gè)階段是（ ）A.A.趨化趨化/ /吸附吸附/ /胞內(nèi)殺滅胞內(nèi)殺滅 B.B.趨化趨化/ /識(shí)別識(shí)別/ /吞噬吞噬 C.C.趨化趨化/ /識(shí)別識(shí)別/ /吸附吸附 D.D.趨化趨化/ /識(shí)別識(shí)別/ /胞內(nèi)殺滅胞內(nèi)殺滅 E.E.趨化趨化/ /吞噬吞噬/ /胞胞內(nèi)殺滅內(nèi)殺滅D DE E齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫3. 3. 將將PBMCPBMC懸液加入尼龍毛柱內(nèi)，充分反應(yīng)后進(jìn)懸液加入尼龍毛柱內(nèi)，充分反應(yīng)后進(jìn)行灌洗，先洗脫下來的細(xì)胞是（行灌洗，先洗脫下來的細(xì)胞是（ ）A.TA.T細(xì)胞細(xì)胞