菠菜色素的提取與分離

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)從植物中提取色素的方法。、學(xué)習(xí)從植物中提取色素的方法。2、學(xué)習(xí)薄層色譜和柱色譜的原理及其操、學(xué)習(xí)薄層色譜和柱色譜的原理及其操作方法。作方法。 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 綠色植物如菠菜葉中含有葉綠素綠色植物如菠菜葉中含有葉綠素(綠綠色色) 、胡蘿卜素、胡蘿卜素(橙黃色橙黃色)和葉黃素和葉黃素(黃色黃色)等等多種天然色素。多種天然色素。 通過柱色譜和薄層色譜對菠菜葉中的上通過柱色譜和薄層色譜對菠菜葉中的上述幾種色素進(jìn)行分離。述幾種色素進(jìn)行分離。 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 薄層色譜，常用薄層色譜，常用TLCTLC表示，屬于固液表示，屬于固液吸附色譜。化合物在薄層板上的吸附劑（吸附色譜?；衔?/p>

2、在薄層板上的吸附劑（固固定相定相）和溶劑展開劑（）和溶劑展開劑（流動相流動相）之間進(jìn)行分）之間進(jìn)行分離，由于各種化合物的吸附能力各不相同，離，由于各種化合物的吸附能力各不相同，在展開劑上移時，它們進(jìn)行不同程度的解吸，在展開劑上移時，它們進(jìn)行不同程度的解吸，從而達(dá)到分離的目的。也就是在反復(fù)的吸附從而達(dá)到分離的目的。也就是在反復(fù)的吸附解析吸附過程中，吸附能力較弱的溶質(zhì)，首解析吸附過程中，吸附能力較弱的溶質(zhì)，首先被展開劑解析下來，隨展開劑推向前去；先被展開劑解析下來，隨展開劑推向前去；而吸附能力強(qiáng)的溶質(zhì)解析較慢，被展開劑推而吸附能力強(qiáng)的溶質(zhì)解析較慢，被展開劑推移不愿，從而達(dá)到分離的目的。移不愿，從而

3、達(dá)到分離的目的。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理展開前展開前展開后展開后吸附吸附解析解析吸附吸附解析解析實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理ab溶劑前沿在色譜法中，展開劑移動的速率與溶質(zhì)移動在色譜法中，展開劑移動的速率與溶質(zhì)移動的速率的比值，常用比移值的速率的比值，常用比移值Rf來來表示表示: : 溶劑的洗脫能力按下列次序遞增：溶劑的洗脫能力按下列次序遞增：石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、甲醇、水、吡啶、乙酸。甲醇、水、吡啶、乙酸。吸附劑吸附劑 常用吸附劑有氧化鋁、硅膠等。吸附劑常用吸附劑有氧化鋁、硅膠等。

4、吸附劑對化合物的吸附能力與分子的極性有關(guān)，極對化合物的吸附能力與分子的極性有關(guān)，極性越強(qiáng)，吸附能力越大，分子中含有極性較性越強(qiáng)，吸附能力越大，分子中含有極性較大的基團(tuán)，其吸附能力也越強(qiáng)。大的基團(tuán)，其吸附能力也越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理前沿線色斑起始線實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理薄層色譜的用途：薄層色譜的用途： 1 1、化合物的定性檢驗(yàn)、化合物的定性檢驗(yàn)2 2、快速分離少量物質(zhì)、快速分離少量物質(zhì)3 3、跟蹤反應(yīng)進(jìn)程、跟蹤反應(yīng)進(jìn)程4 4、化合物純度的檢驗(yàn)、化合物純度的檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 柱色譜是通過色譜柱來實(shí)現(xiàn)分離的。在柱色譜是通過色譜柱來實(shí)現(xiàn)分離的。在色譜柱內(nèi)裝有固體吸附劑色譜柱內(nèi)裝有固體吸附

5、劑( (固定相固定相) )如氧化鋁如氧化鋁或硅膠。液體樣品從柱頂加入，當(dāng)液體流經(jīng)或硅膠。液體樣品從柱頂加入，當(dāng)液體流經(jīng)吸附劑時，由于吸附劑表面對液體中各組分吸附劑時，由于吸附劑表面對液體中各組分吸附能力不同而按一定的順序吸附。然后從吸附能力不同而按一定的順序吸附。然后從柱頂加入洗脫劑柱頂加入洗脫劑( (流動相流動相) )，樣品中的各組分，樣品中的各組分隨洗脫劑按一定的順序從色譜柱下端流出，隨洗脫劑按一定的順序從色譜柱下端流出，根據(jù)不同顏色分段收集。根據(jù)不同顏色分段收集。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)裝置實(shí)驗(yàn)裝置實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1、菠菜色素的提取、菠菜色素的提取 2、薄層層析、薄層層析 3、柱層析、柱層析

6、 菠菜色素的提取菠菜色素的提取1、研磨、研磨 在研缽中放入在研缽中放入10 g新鮮并剪新鮮并剪碎的菠菜葉，加入碎的菠菜葉，加入15 mL3：2(體積比體積比)石油醚一乙醇混合石油醚一乙醇混合液，適當(dāng)研磨液，適當(dāng)研磨(不要研成糊狀，不要研成糊狀，否則會給分離造成困難否則會給分離造成困難)，將，將提取液用滴管轉(zhuǎn)移到分液漏斗提取液用滴管轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。反復(fù)三次，合并提取液。中。反復(fù)三次，合并提取液。2、洗滌和干燥、洗滌和干燥 向提取液中加入向提取液中加入l0 mL飽和飽和NaC1溶液，棄去水層，溶液，棄去水層，再用再用l0 mL蒸餾水洗滌兩次。蒸餾水洗滌兩次。將有機(jī)層轉(zhuǎn)入干燥的小錐將有機(jī)層轉(zhuǎn)入干燥

7、的小錐形瓶中，加無水硫酸鈉干形瓶中，加無水硫酸鈉干燥半小時。燥半小時。菠菜色素的提取菠菜色素的提取3、蒸餾、蒸餾 將干燥后的液體過濾將干燥后的液體過濾至圓底燒瓶中，進(jìn)行蒸餾，至圓底燒瓶中，進(jìn)行蒸餾，直至燒瓶中濃縮液直至燒瓶中濃縮液1mL左左右。右。菠菜色素的提取菠菜色素的提取薄層層析薄層層析1、點(diǎn)樣、點(diǎn)樣 先用鉛筆在距薄層板一端先用鉛筆在距薄層板一端1cm處輕輕劃一橫線作為起始處輕輕劃一橫線作為起始線，然后用毛細(xì)管吸取樣品，線，然后用毛細(xì)管吸取樣品，在起始線上小心點(diǎn)樣，斑點(diǎn)直在起始線上小心點(diǎn)樣，斑點(diǎn)直徑一般不超過徑一般不超過2mm。若在同。若在同一板上點(diǎn)幾個樣，樣點(diǎn)間距離一板上點(diǎn)幾個樣，樣點(diǎn)間

8、距離應(yīng)為應(yīng)為1-1.5cm。2、展開、展開 在層析缸中加入配好的展開劑，在層析缸中加入配好的展開劑，使其高度不超過使其高度不超過1cm。將點(diǎn)好的。將點(diǎn)好的薄層板小心放入層析缸中，點(diǎn)樣薄層板小心放入層析缸中，點(diǎn)樣一端朝下，浸入展開劑中。蓋好一端朝下，浸入展開劑中。蓋好瓶蓋，觀察展開劑前沿上升到一瓶蓋，觀察展開劑前沿上升到一定高度時取出，盡快在板上標(biāo)上定高度時取出，盡快在板上標(biāo)上展開劑前沿位置。展開劑前沿位置。薄層層析薄層層析薄層層析薄層層析色素種類色素種類胡蘿卜素胡蘿卜素葉黃素葉黃素葉綠素葉綠素a a葉綠素葉綠素b b展展開開劑劑1 1a ab bR Rf f展展開開劑劑2 2a ab bR R

9、f f薄層層析結(jié)果薄層層析結(jié)果展開劑：展開劑：（1 1）石油醚）石油醚- -丙酮，體積比為丙酮，體積比為4:1 （2 2）石油醚）石油醚- -乙酸乙酯，體積比為乙酸乙酯，體積比為3:2ab溶劑前沿柱層析柱層析1、裝柱、裝柱 在層析柱中加入在層析柱中加入60mL石油石油醚，稱取醚，稱取30g中性氧化鋁中性氧化鋁緩緩緩緩加入層析柱中。打開下端活加入層析柱中。打開下端活塞，放出溶劑，直至氧化鋁塞，放出溶劑，直至氧化鋁表面剩下表面剩下12mm高，關(guān)閉活高，關(guān)閉活塞。塞。 柱層析柱層析2、過柱、過柱 將菠菜色素的濃縮液用滴管將菠菜色素的濃縮液用滴管小心滴加到層析柱頂部。加完小心滴加到層析柱頂部。加完后打

10、開下端活塞，讓液面下降后打開下端活塞，讓液面下降到柱面以下到柱面以下1mm左右，關(guān)閉活左右，關(guān)閉活塞。加數(shù)滴石油醚，打開活塞，塞。加數(shù)滴石油醚，打開活塞，使液面下降經(jīng)過幾次反復(fù)，使使液面下降經(jīng)過幾次反復(fù)，使色素全部進(jìn)入柱體。色素全部進(jìn)入柱體。 柱層析柱層析3、洗脫、洗脫 從柱頂加入石油醚從柱頂加入石油醚-丙酮溶丙酮溶液（液（9:1），層析即開始進(jìn)行，），層析即開始進(jìn)行，用錐形瓶收集。當(dāng)?shù)谝粋€有色用錐形瓶收集。當(dāng)?shù)谝粋€有色成分即將滴出時，取另一錐形成分即將滴出時，取另一錐形瓶收集。接收完后用石油醚瓶收集。接收完后用石油醚-丙酮溶液（丙酮溶液（ 7:3 ）洗脫，換錐）洗脫，換錐形瓶接收。形瓶接收。 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1、點(diǎn)樣不能戳破薄層板面，各樣點(diǎn)間距、點(diǎn)樣不能戳破薄層板面，各樣點(diǎn)間距1-1.5cm，樣點(diǎn)直徑應(yīng)不超過，樣點(diǎn)直徑應(yīng)不超過2mm。2、展開時，不要讓展開劑前沿上升至底線。、展開時，不要讓展開劑前沿上升至底線。否則，無法確定展開劑上升高度，即無法否則，無法確定展開劑上升高度，即無法求得求得Rf 值和準(zhǔn)確判斷粗產(chǎn)物中各組分在薄值和準(zhǔn)確判斷粗產(chǎn)物中各組分